本发明涉及有效成分提取
技术领域：
，具体涉及一种球孢虫草提取物及其制备方法。
背景技术：
：球孢虫草(cordycepsbassiana)是安徽农业大学虫生菌研究中心2000年在安徽发现，并在世界上首次报道。球孢虫草的无性型是世界上分布最广和最重要的虫生真菌—球孢白僵菌。野生球孢虫草是寄主感染球孢白僵菌获得的，属于球孢白僵菌的有型世代。虫草作为一种药用真菌，它的活性成分一直是人们关注的热点问题，目前对于虫草活性成分的研究主要集中在冬虫夏草和蛹虫草，关于球孢虫草活性成分的研究很少见有报道。胃溃疡是消化系统常见的疾病，且易复发。随着现代生活节奏加快，精神紧张和工作压力增大，使得胃溃疡的发病率呈上升趋势，危害及人们的身心健康。目前临床上应用较多的抗溃疡西药主要为雷尼替丁、奥美拉唑等药物，虽然西药近期疗效明显，但其存在服药后出现不良反应和毒副作用。因此急需研发高效、低毒的新型的抗溃疡药物。技术实现要素：针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种球孢虫草提取物及其制备方法。本发明制备的球孢虫草提取物可作为质子泵抑制剂，用于制备治疗胃溃疡的药物。为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：本发明的第一方面，提供一种球孢虫草提取物的制备方法，包括以下步骤：(1)将球孢虫草原料干燥至含水量为15-20％，然后进行真空低温膨化处理；(2)向真空低温膨化处理后的球孢虫草原料中加入乙醇溶液，加热提取，提取的液体经浓缩干燥得到乙醇总浸膏；将乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，各个萃取液挥干溶剂，分别得到石油醚部位萃取物和乙酸乙酯部位萃取物，将石油醚部位萃取物和乙酸乙酯部位萃取物混合，即得到球孢虫草提取物。优选的，步骤(1)中，所述球孢虫草原料包括：球孢虫草、球孢虫草子实体或球孢虫草菌丝体。优选的，步骤(1)中，所述真空低温膨化处理的条件为：膨化温度40-50℃；抽放真空次数为8-10次，膨化时间为1-2小时。真空低温膨化是将样品置于压力罐中，通过加热和加压，使样品内部压力和外部压力平衡，然后突然减压放真空，使物料内部水分突然汽化、闪蒸，使样品细胞膨化，通过反复的抽、放真空处理可以使样品内部细胞组织间隙变增大，通透性变好，更易于和提取溶剂相接触，从而提高了有效成分的提取率。而且真空低温膨化的加工温度低、时间短，基本不会对破坏原料中的有效物质。本发明研究发现，在真空低温膨化处理过程中，含水量过低的球孢虫草缺乏柔性，在加压过程中易碎；而水分含量过高时会影响球孢虫草的膨化效果。经多次试验发现，球孢虫草原料含水量为15-20％时膨化效果较为理想。优选的，步骤(2)中，所述乙醇溶液的体积浓度为70-80％。优选的，步骤(2)中，加热提取时温度控制在60-70℃，提取2-4次，每次1-2h。本发明的第二方面，提供上述方法制备的球孢虫草提取物。本发明的第三方面，提供上述球孢虫草提取物作为质子泵抑制剂的应用。本发明的第四方面，提供上述球孢虫草提取物在制备治疗胃溃疡的药物中的应用。本发明的第四方面，提供一种治疗胃溃疡的药物，由上述的球孢虫草提取物和药学上可接受的辅料制成。所述药学上可接受的辅料可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是，淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯毗咯烷酮、聚乙二丙醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯毗咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与构椽酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。本发明的有益效果：本发明意外的发现，球孢虫草原料经过特殊方法提取的提取物可作为质子泵抑制剂，用于制备治疗胃溃疡的药物，具有广阔的应用前景。同时，本发明的球孢虫草提取物的制备方法简单，适合工业化生产。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
技术领域：
的普通技术人员通常理解的相同含义。为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。本发明实施例和对比例中所用的未进行具体说明试验材料均为本领域常规的试验材料，均可通过商业渠道购买得到。本发明实施例和对比例中所使用的球孢虫草子实体原料为同一产地、同一时间收获的球孢虫草，其有效成分的含量无显著差别。实施例1：(1)以球孢虫草子实体为原料，将原料干燥至含水量为18％，然后进行真空低温膨化处理，所述真空低温膨化处理的条件为：膨化温度45℃；抽放真空次数为8次，膨化时间为1.5小时。(2)向真空低温膨化处理后的球孢虫草原料中加入体积浓度为75％乙醇溶液，65℃，提取3次，每次1.5h，每次提取乙醇溶液的加入量均为真空低温膨化处理后的球孢虫草原料重量的6倍，提取的液体经浓缩干燥得到乙醇总浸膏；将乙醇总浸膏分散于少量水中，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取(石油醚和乙酸乙酯的用量均为乙醇总浸膏重量的4倍)，各个萃取液挥干溶剂，分别得到石油醚部位萃取物和乙酸乙酯部位萃取物，将石油醚部位萃取物和乙酸乙酯部位萃取物混合，即得到球孢虫草提取物。实施例2：(1)以球孢虫草子实体为原料，将原料干燥至含水量为15％，然后进行真空低温膨化处理，所述真空低温膨化处理的条件为：膨化温度40℃；抽放真空次数为10次，膨化时间为2小时。(2)向真空低温膨化处理后的球孢虫草原料中加入体积浓度为70％乙醇溶液，60℃，提取4次，每次2h，每次提取乙醇溶液的加入量均为真空低温膨化处理后的球孢虫草原料重量的6倍，提取的液体经浓缩干燥得到乙醇总浸膏；将乙醇总浸膏分散于少量水中，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取(石油醚和乙酸乙酯的用量均为乙醇总浸膏重量的4倍)，各个萃取液挥干溶剂，分别得到石油醚部位萃取物和乙酸乙酯部位萃取物，将石油醚部位萃取物和乙酸乙酯部位萃取物混合，即得到球孢虫草提取物。实施例3：(1)以球孢虫草子实体为原料，将原料干燥至含水量为20％，然后进行真空低温膨化处理，所述真空低温膨化处理的条件为：膨化温度50℃；抽放真空次数为8次，膨化时间为1小时。(2)向真空低温膨化处理后的球孢虫草原料中加入体积浓度为80％乙醇溶液，70℃，提取2次，每次1h，每次提取乙醇溶液的加入量均为真空低温膨化处理后的球孢虫草原料重量的6倍，提取的液体经浓缩干燥得到乙醇总浸膏；将乙醇总浸膏分散于少量水中，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取(石油醚和乙酸乙酯的用量均为乙醇总浸膏重量的4倍)，各个萃取液挥干溶剂，分别得到石油醚部位萃取物和乙酸乙酯部位萃取物，将石油醚部位萃取物和乙酸乙酯部位萃取物混合，即得到球孢虫草提取物。对比例1：以球孢虫草子实体为原料，加入8倍重量的体积浓度为75％的乙醇溶液进行超声提取，超声提取的条件为：温度65℃，时间60min，功率100w，提取液浓缩、干燥，粉碎，得到球孢虫草提取物a。对比例2：以球孢虫草子实体为原料，加入8倍重量的体积浓度为75％的乙醇溶液，回流提取3次，3次时间分别为2、1、0.5小时，提取液浓缩干燥，得到浸膏，将浸膏溶于少量水中，用浸膏4倍重量的石油醚萃取，萃取液挥干溶剂，得到球孢虫草提取物b。对比例3：以球孢虫草子实体为原料，加入8倍重量的体积浓度为75％的乙醇溶液，回流提取3次，3次时间分别为2、1、0.5小时，提取液浓缩干燥，得到浸膏，将浸膏溶于少量水中，用浸膏4倍重量的乙酸乙酯萃取，萃取液挥干溶剂，得到球孢虫草提取物c。试验例1：不同球孢虫草提取物对胃h+/k+-atp酶活性的影响1.试验方法：h+/k+-atp酶活性测定：将纯化的猪胃黏膜囊泡加缓冲液稀释，分别加入实施例1和对比例1-对比例3制备的球孢虫草提取物，加入量均为5mg/l，加药后在37℃水浴温孵20min，加入20mg/kgatp继续温孵30min，加入10％tca终止反应，6000rpm离心10min。取定量上清液用定磷试剂盒于660nm测定h+/k+-atp酶水解释放的无机磷含量。计算酶活力。2.试验结果：试验结果见表1。表1：不同球孢虫草提取物对猪胃h+/k+-atp酶活性的影响结果表明，本发明制备的球孢虫草提取物对猪胃h+/k+-atp酶活性具有较强的抑制作用。试验例2：不同球孢虫草提取物对幽门结扎致大鼠胃溃疡的保护作用1.试验方法：取禁食48小时的雄性大鼠，随机分为5组。乙醚麻醉下行幽门结扎术，术时经十二指肠分别给予实施例1和对比例1-对比例3制备的球孢虫草提取物，给予量均为250mg/kg；对照组大鼠给予生理盐水。术后20小时处死动物，取出胃，计前胃部溃疡数。结果用one-wayanova进行差异显著性检验。2.试验结果：试验结果见表2。表2：不同球孢虫草提取物对幽门结扎致大鼠胃溃疡的保护作用组别溃疡减少率(％)实施例189对比例121对比例237对比例342结果表明，本发明制备的球孢虫草提取物对幽门结扎溃疡模型有很好的保护作用。以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。当前第1页12