本发明涉及一种药品制备方法，尤其是涉及一种荚果蕨黄酮与多糖的分离纯化工艺的制备方法。
背景技术
荚果蕨资源蕴藏量丰富，分布广泛，富含多种活性成分，包含了黄酮、多糖、甾萜等多个有效部位，全株皆可入药，具有抗肿瘤抗病毒、抗氧化保肝、降糖降脂、抑菌消炎等多种功效，药用价值巨大，因此，本文旨在深层开发荚果蕨资源的利用价值，为其提供实验依据。
当今社会，由于生活压力增加和生活方式改变，糖尿病患者急速增加，发病率不断攀升，并且逐渐呈现出年轻化的发展趋势，其主要的临床表现和一系列并发症的出现，已经严重影响了人们的正常生活和生命健康。目前，对于糖尿病的防治主要以西药的药物治疗为主，但是西药对糖尿病的治疗往往作用途径单一，难以对其并发症等进行综合的改善，且随着西药治疗的相关毒副作用的出现，人们发现，天然化学成分中的黄酮类、多糖类、多酚类等都具有一定的改善糖尿病相关症状的功效，且不同种类成分之间的联合用药效果更加显著。因此，利用天然化学成分开发有效且毒副作用小的降糖类药物日益成为人们的需要。
目前，已有大量的实验数据表明，其他植物体中的黄酮类和多糖类成分均具有显著的改善糖尿病相关症状及其并发症的功效，而荚果蕨中含有丰富的黄酮类和多糖类成分，但是现有技术无法实现对荚果蕨黄酮与多糖类有效的分离、提取，特别是获得高纯度或高浓度的黄酮类和多糖类成分。
技术实现要素：
针对前述背景技术指出的问题，本发明旨在提供一种荚果蕨黄酮与多糖的制备方法，对荚果蕨进行有效的分离、提取。
本发明的荚果蕨黄酮与多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
a.原材料的前处理：清洗荚果蕨新鲜材料后自然阴干，粉碎后脱脂晾干，用塑封袋保存；
b.取步骤a得到的物料，加入乙醇提取，使用超声微波双辅助法进行提取，得到荚果蕨黄酮与多糖的混合粗提液；
c.步骤b得到的荚果蕨黄酮与多糖的混合粗提液，加入3-5倍体积的无水乙醇，在3-5℃中放置12小时以上，使得混合粗提液中的多糖类成分得以沉降下来，再经过离心，使得荚果蕨黄酮和荚果蕨多糖得以分离，再用大孔树脂吸附法纯化荚果蕨黄酮，sevage法联合透析法纯化荚果蕨多糖。
优选地，所述步骤a中对荚果蕨新鲜材料进行清洗后自然阴干，粉碎并过60目筛，石油醚脱脂后晾干，用塑封袋保存。
优选地，所述步骤c中加入4倍体积的无水乙醇，在4℃中放置12小时以上。
优选地，所述步骤b中乙醇浓度40-60％。
优选地，所述步骤b中参数为：乙醇浓度50％，料液比1:40g/ml，超声功率300w，超声时间4min，微波功率400w，微波时间4min。
优选地，步骤c所述大孔树脂是ab-8。
进一步优选，大孔树脂的吸附条件为：初始样液浓度1.30mg/ml，样液ph＝5，动态吸附流速1.50ml/min，最大上样量100ml。该条件为最佳吸附参数，可以高效地吸附荚果蕨黄酮。
本发明分离、纯化效果好，可重复性高，稳定性好。同时，该方法操作简单易行，成本较低，洗脱剂为乙醇，无毒易回收。大孔吸附树脂凭其成本低，选择性好，吸附承载量大，交换速度快，易再生等优势，在天然产物分离纯化研究领域颇受欢迎且被广泛应用。
具体实施方式
本发明旨在提供一种荚果蕨黄酮与多糖的制备方法，对荚果蕨中的有效成分进行有效的分离、提取。
本发明的荚果蕨黄酮与多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
a.原材料的前处理：清洗荚果蕨新鲜材料后自然阴干，粉碎后脱脂晾干，用塑封袋保存；
b.取步骤a得到的物料，加入乙醇提取，使用超声微波双辅助法进行提取，得到荚果蕨黄酮与多糖的混合粗提液；
c.步骤b得到的荚果蕨黄酮与多糖的混合粗提液，加入3-5倍体积的无水乙醇，在3-5℃中放置12小时以上，使得混合粗提液中的多糖类成分得以沉降下来，再经过离心，使得荚果蕨黄酮和荚果蕨多糖得以分离，再用大孔树脂吸附法纯化荚果蕨黄酮，sevage法联合透析法纯化荚果蕨多糖。
在上述步骤b的乙醇提取中，为了获得高的提纯率，优选参数为：乙醇浓度50％，料液比1:40g/ml，超声功率300w，超声时间4min，微波功率400w，微波时间4min。
下面结合具体实施例对本发明进行详细的说明。
实施例1
本实施例的荚果蕨黄酮与多糖的制备方法，具体包括下述步骤：
a.原材料的前处理：清洗荚果蕨新鲜材料后自然阴干，粉碎并过60目筛，石油醚脱脂后晾干，用塑封袋保存；
b.取步骤a得到的物料，加入乙醇提取，使用超声微波双辅助法进行提取，得到荚果蕨黄酮与多糖的混合粗提液；
c.步骤b得到的荚果蕨黄酮与多糖的混合粗提液，加入4倍体积的无水乙醇，在4℃中放置12小时以上，使得混合粗提液中的多糖类成分得以沉降下来，再经过离心，使得荚果蕨黄酮和荚果蕨多糖得以分离，再用大孔树脂ab-8吸附法纯化荚果蕨黄酮，sevage法联合透析法纯化荚果蕨多糖。
在上述步骤b的乙醇提取中，为了获得高的提纯率，最佳参数为：乙醇浓度50％，料液比1:40g/ml，超声功率300w，超声时间4min，微波功率400w，微波时间4min。
通过对ab-8型大孔树脂吸附的荚果蕨黄酮进行解吸，对获得的荚果蕨黄酮和荚果蕨多糖进行分析，荚果蕨黄酮纯度为98.2％，回收率为80.5％，荚果蕨多糖纯度为98.6％，回收率为82.5％。
实施例2
本实施例的荚果蕨黄酮与多糖的制备方法，具体包括下述步骤：
a.原材料的前处理：清洗荚果蕨新鲜材料后自然阴干，粉碎并过60目筛，石油醚脱脂后晾干，用塑封袋保存；
b.取步骤a得到的物料，加入乙醇提取，使用超声微波双辅助法进行提取，得到荚果蕨黄酮与多糖的混合粗提液；
c.步骤b得到的荚果蕨黄酮与多糖的混合粗提液，加入5倍体积的无水乙醇，在5℃中放置12小时以上，使得混合粗提液中的多糖类成分得以沉降下来，再经过离心，使得荚果蕨黄酮和荚果蕨多糖得以分离，再用大孔树脂ab-8吸附法纯化荚果蕨黄酮，sevage法联合透析法纯化荚果蕨多糖。
在上述步骤b的乙醇提取中，为了获得高的提纯率，最佳参数为：乙醇浓度40％，料液比1:40g/ml，超声功率300w，超声时间4min，微波功率400w，微波时间4min。
通过对ab-8型大孔树脂吸附的荚果蕨黄酮进行解吸，对获得的荚果蕨黄酮和荚果蕨多糖进行纯度和回收率分析，荚果蕨黄酮纯度为95.2％，回收率为78.5％，荚果蕨多糖纯度为95.6％，回收率为80.5％。
实施例3
本实施例的荚果蕨黄酮与多糖的制备方法，具体包括下述步骤：
a.原材料的前处理：清洗荚果蕨新鲜材料后自然阴干，粉碎并过60目筛，石油醚脱脂后晾干，用塑封袋保存；
b.取步骤a得到的物料，加入乙醇提取，使用超声微波双辅助法进行提取，得到荚果蕨黄酮与多糖的混合粗提液；
c.步骤b得到的荚果蕨黄酮与多糖的混合粗提液，加入3倍体积的无水乙醇，在4℃中放置12小时以上，使得混合粗提液中的多糖类成分得以沉降下来，再经过离心，使得荚果蕨黄酮和荚果蕨多糖得以分离，再用大孔树脂ab-8吸附法纯化荚果蕨黄酮，sevage法联合透析法纯化荚果蕨多糖。
在上述步骤b的乙醇提取中，为了获得高的提纯率，最佳参数为：乙醇浓度40％，料液比1:40g/ml，超声功率300w，超声时间4min，微波功率400w，微波时间4min。
通过对ab-8型大孔树脂吸附的荚果蕨黄酮进行解吸，对获得的荚果蕨黄酮和荚果蕨多糖进行分析，荚果蕨黄酮纯度为94.2％，回收率为76.5％，荚果蕨多糖纯度为93.6％，回收率为79.5％。
综上所述，本发明的荚果蕨黄酮与多糖的制备方法分离、纯化效果好，荚果蕨黄酮和多糖的含量均高达90％以上，特别是实施例1的制备方法，分离和纯化效果最佳。
本发明的荚果蕨黄酮与多糖的制备方法分离、纯化效果好，可重复性高，稳定性好。同时，该方法操作简单易行，成本较低，洗脱剂为乙醇，无毒易回收。