本发明属于植物提取物及日化品领域，具体涉及一种复方植物提取物的制备方法及作为sod类化妆品添加剂的应用。
背景技术
白芍(paeonialactiflorapall.)为植物芍药经水煮去皮后晒干使用的根，是一种传统中药材，性苦酸、微寒，具有平肝止痛、养血调经、敛阴止汗之功效。其主要化学成分为挥发油类、单萜类、三萜类及黄酮类化合物等。槐花为豆科植物槐(sophorajaponical.)的干燥花及花蕾，夏季花开放或花蕾形成时采收、干燥，除去枝、梗及杂质，前者习称“槐花”，后者习称“槐米”。其化学成分主要为黄酮、皂苷、脂肪酸等。本发明提供一种利用疏水性离子液体辅助酶解提取白芍和槐花有效成分的方法，并且获得一种白芍和槐花复方提取物，该提取物在自由基清除、酪氨酸酶抑制及sod酶活性等方面均表现出优异的性能，有望被开发用作美白防晒化妆品添加剂。
技术实现要素：
本发明提供一种白芍和槐花复方提取物，其特征在于所述白芍和槐花复方提取物的制备方法包括如下步骤：
(1)按重量份计，取白芍4-5份、槐花1份，将其粉碎混匀，过80目筛，加入含离子液体[bmim]pf6的磷酸盐缓冲溶液(ph5.0)和纤维素酶,加热至40-50℃浸泡提取3-5小时后，过滤，除去滤渣，滤液静置分层后，收集离子液体层；
(2)将步骤(1)得到的离子液体层用等体积的乙酸乙酯萃取2-3次，合并乙酸乙酯相后，依次用水、饱和氯化钠洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液浓缩、干燥即得所述白芍和槐花复方提取物。
步骤(1)中纤维素酶的用量为槐花质量的3％-5％，酶活为10-40u/mg；所述离子液体[bmim]pf6的磷酸盐缓冲溶液的用量为白芍和槐花质量之和的10-15倍，其中离子液体[bmim]pf6的质量分数为15％-20％。
本发明的另一实施方案提供一种白芍和槐花复方提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)按重量份计，取白芍4-5份、槐花1份，将其粉碎混匀，过80目筛，加入含离子液体[bmim]pf6的磷酸盐缓冲溶液(ph5.0)和纤维素酶,加热至40-50℃浸泡提取3-5小时后，过滤，除去滤渣，滤液静置分层后，收集离子液体层；
(2)将步骤(1)得到的离子液体层用等体积的乙酸乙酯萃取2-3次，合并乙酸乙酯相后，依次用水、饱和氯化钠洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液浓缩、干燥即得所述白芍和槐花复方提取物。
步骤(1)中纤维素酶的用量为槐花质量的3％-5％，酶活为10-40u/mg；所述离子液体[bmim]pf6的磷酸盐缓冲溶液的用量为白芍和槐花质量之和的10-15倍，其中离子液体[bmim]pf6的质量分数为15％-20％。
本发明的另一实施方案提供上述白芍和槐花复方提取物作为抗氧剂的应用。
本发明的另一实施方案提供上述白芍和槐花复方提取物在清除自由基方面的应用。所述自由基优选dpph自由基、超氧阴离子自由基。
本发明的另一实施方案提供上述白芍和槐花复方提取物在抑制酪氨酸酶中的应用。
本发明的另一实施方案提供上述白芍和槐花复方提取物在制备预防紫外线损伤的化妆品添加剂中的应用。
本发明的另一实施方案提供上述白芍和槐花复方提取物作为化妆品添加剂的应用。所述化妆品优选美白剂、防晒剂等。
本发明的另一实施方案提供上述白芍和槐花复方提取物在制备化妆品方面的应用。
本发明的另一实施方案提供上述白芍和槐花复方提取物在制备sod类化妆品中的应用。所述sod类化妆品选自sod面膜、sod蜜、sod蛇粉等。
本发明所述离子液体[bmim]pf6的中文名称为1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐；本发明所述磷酸盐缓冲溶液(ph5.0)可由磷酸二氢钠(或钾)、磷酸氢二钠(或钾)、氢氧化钠、磷酸中的两种或几种配置成；例如可用氢氧化钠溶液调节0.2mol/l磷酸二氢钠溶液至ph5.0的方法配置。
与现有技术相比，本发明的优点在于：(1)本发明利用离子液体([bmim]pf6)与酶结合的方法提取白芍与槐花的有效成分，疏水性离子液体[bmim]pf6既作为生物催化介质，又作为提取溶剂，能够有效稳定酶-底物的过渡态，降低反应活化能，使酶表现出较高的催化活性；(2)本发明确定了白芍与槐花的最佳混合比例，比单独提取白芍或槐花，或者其他混合比例(例如1:1)得到的提取物的活性高，这可能是由于植物提取伴生导致的；(3)本发明制备的白芍和槐花复方提取物在自由基清除及酪氨酸酶抑制方面表现出很强的活性；(4)本发明制备的白芍和槐花复方提取物表现出很强的sod酶活性。
具体实施方式
为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。
实施例1
(1)取白芍400g、槐花100g，将其粉碎混匀，过80目筛，加入含离子液体[bmim]pf6的磷酸盐缓冲溶液(ph5.0，5.0kg,其中含1.0kg[bmim]pf6)和纤维素酶(3g,40u/mg),加热至40℃浸泡提取5小时后，过滤，除去滤渣，滤液静置分层后，收集离子液体层；
(2)将步骤(1)得到的离子液体层用等体积的乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯相后，依次用水、饱和氯化钠洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液浓缩、干燥即得所述白芍和槐花复方提取物(8.62g,以下简称产品a)。
实施例2
(1)取白芍500g、槐花100g，将其粉碎混匀，过80目筛，加入含离子液体[bmim]pf6的磷酸盐缓冲溶液(ph5.0，9.0kg,其中含1.35kg[bmim]pf6)和纤维素酶(5g,10u/mg),加热至50℃浸泡提取3小时后，过滤，除去滤渣，滤液静置分层后，收集离子液体层；
(2)将步骤(1)得到的离子液体层用等体积的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯相后，依次用水、饱和氯化钠洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液浓缩、干燥即得所述白芍和槐花复方提取物(9.42g,以下简称产品b)。
实施例3
(1)取白芍100g、槐花100g，将其粉碎混匀，过80目筛，加入含离子液体[bmim]pf6的磷酸盐缓冲溶液(ph5.0，5.0kg,其中含1.0kg[bmim]pf6)和纤维素酶(3g,40u/mg),加热至40℃浸泡提取5小时后，过滤，除去滤渣，滤液静置分层后，收集离子液体层；
(2)将步骤(1)得到的离子液体层用等体积的乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯相后，依次用水、饱和氯化钠洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液浓缩、干燥得白芍和槐花复方提取物(3.79g,以下简称产品c)。
实施例4
(1)取白芍400g，将其粉碎混匀，过80目筛，加入含离子液体[bmim]pf6的磷酸盐缓冲溶液(ph5.0，5.0kg,其中含1.0kg[bmim]pf6)和纤维素酶(3g,40u/mg),加热至40℃浸泡提取5小时后，过滤，除去滤渣，滤液静置分层后，收集离子液体层；
(2)将步骤(1)得到的离子液体层用等体积的乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯相后，依次用水、饱和氯化钠洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液浓缩、干燥得白芍提取物(5.02g,以下简称产品d)。
实施例5
(1)取槐花100g，将其粉碎混匀，过80目筛，加入含离子液体[bmim]pf6的磷酸盐缓冲溶液(ph5.0，5.0kg,其中含1.0kg[bmim]pf6)和纤维素酶(3g,40u/mg),加热至40℃浸泡提取5小时后，过滤，除去滤渣，滤液静置分层后，收集离子液体层；
(2)将步骤(1)得到的离子液体层用等体积的乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯相后，依次用水、饱和氯化钠洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液浓缩、干燥得槐花提取物(1.54g,以下简称产品e)。
实施例6
取白芍400g、槐花100g，将其粉碎混匀，过80目筛，加入磷酸盐缓冲溶液(ph5.0，5.0kg)和纤维素酶(3g,40u/mg),加热至40℃浸泡提取5小时后，过滤，除去滤渣，滤液用等体积的乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯相后，依次用水、饱和氯化钠洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液浓缩、干燥得白芍和槐花复方提取物(5.96g,以下简称产品f)。
实施例7
取白芍400g、槐花100g，将其粉碎混匀，过80目筛，加入5.0kg水,加热至40℃浸泡提取5小时后，过滤，除去滤渣，滤液浓缩、干燥得白芍和槐花复方提取物(3.88g,以下简称产品g)。
实施例8
取适量的产品a-g及产品d+e(质量比1：1)用dmso溶解，配制成质量浓度为1.0mg/ml的溶液，按照先前描述的方法(中国专利申请号：cn201810216275.7)测试产品a-g及产品d+e(质量比1：1)的dpph自由基清除能力、超氧阴离子清除能力及对酪氨酸酶的抑制率，结果见表1。
表1
实施例9超氧化物歧化酶(简称sod)活性测试
按照中国专利申请号：cn201711352387.7中记载的“核黄素-nbt法”测定产品a-g的sod酶活性，结果表明，只有产品a、b的ic50为3.0-3.5μg/ml，其他产品的ic50均大于20μg/ml。