本发明属于生物领域，具体涉及一种用于美容护肤的干细胞激活素及其制备方法和应用。
背景技术：
皮肤作为人体最外层的组织，起着保护人体不受外部刺激或伤害的作用。随着年龄老化，皮肤在视觉外观、物理特性和生理功能上均发生明显老化，所以护肤被认为是美容学上最重要的篇章。皮肤问题在临床上常表现为粗糙、干燥、敏感性和脆性增加、弹性降低、皱纹增多等。这些都与年龄老化及代谢减慢引起的。
干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，被誉为“不老的源泉”，在再生医学领域有巨大的应用前景。干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。由于伦理学等问题，目前在临床上具有广泛应用前景的是成体干细胞，尤其是脐带来源的间充质干细胞。干细胞生长时，细胞内会分泌大量的细胞因子，其中包含多种生长因子，例如胰岛素生长因子、血管内皮生长因子、转化生长因子、皮肤生长因子、纤维细胞生长因子及一些相关的胶原蛋白物质，而这些因子都会参与不同组织及反应的机制中。已有的研究表明来源于干细胞的分细胞因子具有与干细胞相似的特性，具有多种生物学功能。
生长因子，又称多肤生长因子，具有极高的生物活性，对多种细胞生理功能和代谢活动发挥调节作用，直接或间接地影响多种细胞的生长、分裂、分化、增殖和迁移，在美容护肤、整形外科、烧伤溃疡以及各种皮肤病的伤口修复与愈合中有重要作用。因此，生长因子以一定的有效浓度添加到化妆品中，可以有效地与皮肤细胞发生作用，促进上皮细胞营养代谢，保护皮肤，预防由于各种原因导致的皮肤损伤。并且正常护肤品中添加活性细胞生长因子还可以有效地促进皮下胶原细胞的功能，加速皮肤胶原细胞的生长，使细胞加速分泌胶原，从而达到抗皱及延缓衰老的作用。鉴于干细胞内的细胞因子含有大量的生长因子，因此在生物美容产品中添加一定量的干细胞分泌因子将会发挥美容护肤的作用。
然而现有的制备干细胞生长因子的方法繁琐，成本高，得到的生长因子浓度低，因此急需发明一种新的制备干细胞生长因子的方法。
技术实现要素：
为了解决上述现有技术问题，本发明提供一种用于美容护肤的干细胞激活素及其制备方法和应用。
本发明的具体技术方案如下：
本发明一方面公开了一种用于美容护肤的干细胞激活素的制备方法，包括以下步骤：
s1:体外培养干细胞；
s2：收集干细胞后将细胞裂解得到细胞裂解液，将细胞裂解液低速离心后，去掉细胞碎片，将上清液进行冷冻保存即得到干细胞激活素。
优选的，所述干细胞激活素包括表皮生长因子、成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子。
更优选的，所述表皮生长因子、成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子的浓度分别为0.1-1ng/ml、0.05-1ng/ml和0.1-2ng/ml。
优选的，所述s1包括以下步骤：
s11：将干细胞接种于含10％fbs、2mmglutamine和1％双抗的dmem培养基中培养，所述双抗为青霉素和链霉素；
s12：24-48小时后，更换新的培养基，继续培养2天；
s13：按1：3的比例进行细胞传代至细胞汇合度达到80-90％时再一次进行细胞传代，反复以上操作，直至得到足够数量的干细胞。
优选的，在s1中，所述干细胞为间充质干细胞。
更优选的，所述间充质干细胞的制备方法包括以下步骤：
(1)将新鲜收集的脐带组织用无菌剪刀剪成小段；将小段纵向切开，剔除动脉和静脉，用pbs清洗；
(2)用无菌剪刀将组织剪碎，加入培养基后，加入胰蛋白酶和胶原酶iv进行消化；
(3)加入透明质酸酶继续消化；
(4)终止消化；
(5)用200目无菌滤网将杂质滤去，将滤出的细胞液，离心后弃去上清液即得到间充质干细胞。
通过流式细胞仪鉴定提取的第二代间充质干细胞的纯度，结果显示，提取的间充质干细胞的细胞纯度可以达到99％。同时该分离提取方法步骤简单易操作，得到的间充质干细胞细胞活性好，增殖快，是很好的干细胞种子细胞，可以在液氮中进行长时间的保存。
本发明第二个方面公开了上述方法得到的干细胞激活素。本发明得到的干细胞激活素剂型优选为溶液、悬浮液、乳状液、霜剂、膏状、凝胶、奶液、护肤液、粉、香皂、油、干粉、粉底液、湿粉或喷剂。
与化学护肤品相比，本发明的干细胞激活素通过细胞信号调控机理，各种生长因子之间的协同作用，可以促进上皮细胞营养代谢，保护皮肤，预防以及治愈由于各种原因导致的皮肤损伤，还可以加速皮肤胶原细胞的生长，使细胞加速分泌胶原蛋白，从而达到抗皱及延缓衰老的作用，在医学、保健和美容领域具有极佳的应用情景。
本发明第三个方面公开了上述干细胞激活素在制备精华素中的应用。
优选的，所述精华素的制备方法包括以下步骤：
(1)制备基质；
(2)将权利要求7中所述的干细胞激活素加入所述基质中即得到精华素。
更优选的，所述基质包括透明质酸、尿囊素、羟乙基纤维素和甘草酸二钾。
该精华素具有以下积极效果：1、可以治愈皮肤损伤，无任何副作用；2、促使皮肤上皮细胞维持高活性的状态，保持皮肤弹性；3、具有抗衰老除皱的功效；4、避免了直接使用干细胞可能造成的癌变风险。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面通过实施例进一步说明本发明的作用，而非本发明的限制。
实施例1
本实施例公开了一种用于美容护肤的干细胞激活素的制备方法，具体包括以下步骤：
将新鲜收集的脐带组织，至于100cmdish用pbs洗涤2次后，用无菌剪刀剪成3cm的小段；将小段纵向切开，剔除2条动脉和1条静脉，用pbs清洗；用无菌剪刀将组织剪碎，越碎越好，按1:3比例加入dmem后，加入0.05％的胰蛋白酶，200u/ml(或0.2mg/ml)胶原酶iv。置于37度的培养箱，消化3-5小时；然后加入25pg/ml的透明质酸酶，37℃，5-10min；然后用200目无菌滤网将杂质滤去，将滤出的细胞液，1000rpm离心5-10min，弃去上清液；加入fbs或dmem洗涤后，在加入含有10％fbs的dmem悬浮mscs细胞，反复吹打后，制成细胞悬液。然后按照合适的比例加入到75cm的细胞培养瓶，再加入10ml还有10％fbs，2mmglutamine的dmem，1％双抗(p/s)，置于37℃的培养箱内培养。24-48小时后，更换新的培养基，继续培养2天。按1瓶细胞传代3瓶的比例进行传代，2天后等细胞密度达到80-90％时，反复以上操作，以得到足够数量的脐带干细胞。
在脐带间充质干细胞生长最旺盛时(约长满培养瓶70-80％面积)，弃去培养基，pbs或生理盐水清洗2-3次，弃去上清，消化细胞后离心，加入去离子h2o裂解。每2瓶的细胞量(约5×106个细胞)加入2ml去离子h2o裂解，然后低温离心，去掉细胞碎片，即得干细胞激活素。置于-20℃冰箱，长期保存备用。
本实施例得到的干细胞激活素通过细胞信号调控机理，各种生长因子之间的协同作用，可以促进上皮细胞营养代谢，保护皮肤，预防以及治愈由于各种原因导致的皮肤损伤，还可以加速皮肤胶原细胞的生长，使细胞加速分泌胶原蛋白，从而达到抗皱及延缓衰老的作用，在医学、保健和美容领域具有极佳的应用情景。
实施例2
将实施例1得到的干细胞激活素采用elisa试剂盒检测egf(表皮生长因子)、fgf(成纤维细胞生长因子)及vegf(血管内皮生长因子)的含量。采用商业检测试剂盒经酶标仪检测我们发现egf的含量为0.5ng/ml，fgf含量为0.1ng/ml，vegf含量为1ng/ml。
实施例3
本实施例公开了一种精华素的制备方法，包括以下步骤：
(1)精华素基质的配置：0.1％透明质酸，0.2％尿囊素，0.1％羟乙基纤维素，0.1％甘草酸二钾，按照20ml的体积，按比例加入并加入去离子水定容至18ml，搅拌溶解；
(2)取2ml实施例1中得到的干细胞激活素加入步骤(1)得到的基质中，搅拌均匀并过滤除菌。
该精华素具有美容、抗衰老、修复细胞损伤、增强皮肤弹性的功能，具有使皮肤变得更柔嫩、更富有弹性的功效。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。