本发明属于生物技术领域，具体涉及一种泽润芳发酵原浆化妆品及其制备方法与应用。
背景技术：
泽润芳发酵原浆由古方经典《普济方》中的泽润芳改进而来，书中记载选用治粉滓黑干黑曾，皴皰及茸毛黄芪、白术、白蘞、黄精、王瓜根、商陆、鹰矢白、蜀水花、防风、白芷、细辛、青木香、白附子、川芎、杏仁为末，用鸡子白和，阴干，研末，取浆水调，涂在患处，治粉滓黑干黑曾，皴皰及茸毛。
由朱棣领衔和教授滕硕长史刘醇等编辑而成的普济方一书，广泛搜集明初以前各种医学典籍中的有关方剂，被誉为中国古代最大的一部方书，堪称为集15世纪以前方书编辑之大成。普济方重视辨证论治，从脏腑气血辨治皮肤病，美容方药组成中主要是具有健脾补肾益气养血祛风的药物，如白芷白术川芎熟地肉桂等。书中方药载有具体用量制备及使用方法，对于研发新的美容方药剂型等均有较高的临床指导价值及应用前景。该书美容方药的用药规律:一是以植物药为主；二是多为芳香药及甘润之品，味辛甘，辛香甘润；三是不少药具有抗衰老功能，含维生素类物质，具有营养抗皱之效；四是抗菌；五是石灰及灰类药为消靥痣之专品，对美容药剂的制作开发有一定的参考意义。
本发明根据泽润芳配方制作泽润芳发酵原浆，并经过不断的配方调制，最后《2015版已使用化妆品名录》中可用的原料包括将黄芪、白术、白蔹、黄精、川芎、杏仁、防风为原料制得泽润芳发酵原浆。此配方中黄芪富含黄芪多糖，具有营养肌肤，提升皮肤抗病能力，延缓衰老，嫩肤美白，使皮肤健康有光泽，同时对去除黑头白头均有很好的效果。据《医学入门》记载。白术、可以补气益血、美白润肤，适于气血虚寒导致的皮肤粗糙、萎黄、黄褐斑、色素沉着等。此外，白术能有效抑制脂质过氧化作用，降低组织脂质过氧化物的含量。美白、治疗面部雀斑、清热祛风。白蔹对美白肌肤有特效。《药性论》记载：“可治面上疮疱。本发明选用上述原料经发酵制得泽润芳发酵原浆，在兼具以上中草药所具有功效的同时，发酵过程使产物功效性更加出色。
当前人们的生活水平不断提高，越来越多的消费者开始重视既对人体健康无害，又具有美容保健作用的天然护肤化妆品。利用中草药提取物作为美容护肤化妆品的添加剂，具有药效稳定持久，既产生功效又没有毒副作用的优势，深受人们的青睐。目前，中草药所含的各种天然活性成分，被广泛应用于现代化妆品中，并发挥各种作用。
随着基因工程、细胞工程、酶工程技术的不断发展和完善，微生物发酵技术有了突飞猛进的发展，在天然活性物质的研究开发中发挥着越来越重要的作用。发酵过程所需条件非常温和，而且反应产物单纯和能耗少，是一个与环境友善的绿色化学过程。
北京工商大学理学院的赵丹、许丹妮、王冬冬、张佳婵、李萌、王昌涛在《日用化学工业》杂志2016年04期上发表论文《灵芝发酵液的成分检测及美白与抗衰老功效评价》，文章中提出，为开发灵芝发酵液在化妆品领域的应用，使用葡萄酒酵母发酵灵芝并测定发酵液中所含有的多糖、多酚、黄酮和多肽含量。通过dpph自由基清除实验和羟自由基清除实验对灵芝发酵液的抗氧化能力进行检测，并测定其对成纤维细胞存活率的影响以评估其可能在抗衰老方面发挥的作用。最后通过体外酪氨酸酶实验和小鼠黑色素瘤细胞内的酪氨酸酶活性及黑色素合成抑制实验对灵芝发酵液的美白功效进行评价。结果表明，灵芝发酵液富含多糖，质量浓度为9.910g/l，多酚、黄酮和多肽的质量浓度分别为0.054，0.045和2.931g/l。体积分数分别为25.89％和42.18％的灵芝发酵液可清除50％的dpph自由基和羟自由基；体积分数为0.05％～0.2％范围内的灵芝发酵液可有效促进成纤维细胞增殖；灵芝发酵液对酪氨酸酶活性抑制率高达73.22％，其通过抑制酪氨酸酶活性起到抑制黑色素合成的作用。因此灵芝发酵液具有一定的抗衰老和美白功效。
北京工商大学理学院、中国检验检疫科学研究院化妆品技术中、心云南白药集团医药电子商务有限公司的赵丹、李萌、苏宁、安全、张佳婵、王昌涛在《日用化学品科学》杂志2016年06期上发表论文《枸杞发酵液的抗衰老活性和皮肤安全性研究》，文章中提出，采用枸杞为原料，德氏乳杆菌为菌种进行发酵获得枸杞发酵液。对枸杞发酵液的生理生化性质与成分进行检测，通过自由基清除实验与成纤维细胞增殖实验对枸杞发酵液的抗衰老活性进行检测，利用人体斑贴实验对枸杞发酵液的安全性进行评估。实验结果表明，枸杞发酵液为黏稠弱酸性液体，主要成分是多糖，具有较强的清除dpph自由基和羟自由基的能力，在一定体积分数内可促进成纤维细胞增殖。
北京工商大学理学院、北京工商大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心的许丹妮、史豆豆、赵丹、王昌涛、李萌在《日用化学品科学》杂志2016年12期上发表论文《葡萄籽发酵液抗衰老活性研究》，文章中提出，利用乳酸菌发酵葡萄籽得到葡萄籽发酵液。对发酵液中的主要活性成分进行检测，通过测定自由基清除效果以及成纤维细胞增殖实验来衡量发酵液的抗衰老活性。结果表明葡萄籽发酵液中蛋白质、黄酮、原花青素的含量分别为2.89，1.01，0.43mg/ml。体积分数为0.43％和1.25％的发酵液可清除50％的abts自由基和dpph自由基；发酵液原液对羟自由基的清除率为40％，对铁离子的还原能力表示为2073.43μmoltrolox/l。
北京工商大学理学院/植物资源研究与开发北京市重点实验室、中国检验检疫科学研究院化妆品技术中心、云南白药集团公司的许丹妮、刘平平、苏宁、安全、赵丹、李萌、王昌涛在《湖北农业科学》杂志2017年05期上发表论文《马齿苋发酵液中活性成分含量及化妆品功效研究》，文章中提出，采用紫外分光光度法测定马齿苋(portulacaoleraceal.)发酵液中总糖、黄酮、蛋白质的含量，分析了发酵液对dpph自由基的清除效果，通过测定发酵液对b16细胞中酪氨酸酶活性的抑制效果评价发酵液的美白功效。结果表明，马齿苋发酵液中总糖、黄酮含量分别为3.90、0.59mg/ml；蛋白质含量为55.72±0.83μg/ml。发酵液对dpph自由基的清除效果良好，对b16细胞中酪氨酸酶的活性有抑制作用。
北京工商大学植物资源研究与开发重点实验室、北京食品营养与人类健康高精尖创新中心的赵丹、曹玉峰、丁文玉、王昌涛、史豆豆、虞旦、张佳婵、李萌在《食品与机械》杂志2017年09期上发表论文《玫瑰发酵液的抗氧化及美白功效探究》，文章中提出，通过对玫瑰发酵液的抗氧化和美白功效及皮肤安全性进行评价，探究美白机理。利用酿酒酵母发酵玫瑰获得玫瑰发酵液，检测其对自由基的清除作用以及对酪氨酸酶活性与黑色素合成的影响，利用基因芯片检测其美白机理，采用人体斑贴试验评估其皮肤安全性。结果表明，玫瑰发酵液具有较强的清除dpph自由基能力，对细胞外酪氨酸酶活性的抑制作用与浓度呈正比，对b16细胞内酪氨酸酶活性以及黑色素合成都有一定的抑制作用；玫瑰发酵液能够抑制黑色素瘤通路上游的ngf和fgf2基因表达；人体斑贴试验显示玫瑰发酵液未引起阳性刺激反应。玫瑰发酵液具有较高的皮肤安全性，同时具有抗氧化、抑制酪氨酸酶活性与黑色素生成的功效，其通过抑制ngf和fgf2的表达发挥美白作用。
本发明利用微生物在生长过程中分泌的多种酶对中草药中的活性成分进行提取和修饰，从而获得安全、纯天然的中药护肤品。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种泽润芳发酵原浆。
本发明的另一目的是提供泽润芳发酵原浆的制备方法。
本发明的还提供了泽润芳发酵原浆在制备治疗白癜风的保健化妆品中的用途。
本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：
一种泽润芳发酵原浆，该泽润芳发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)泽润芳干粉的制备：将黄芪0.1～1重量份、白术0.1～1重量份、白蔹0.1～1重量份、黄精1～2重量份、川芎1～2重量份、杏仁0.1～1重量份、防风0.1～1重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过20～30目筛，得到泽润芳干粉；
(2)泽润芳发酵初始体系的制备：将浓度为(105～108)cfu·ml-1、ph值为6.5～7.5的酵母菌液，与步骤(1)所得的泽润芳干粉和水混合，酵母菌液、泽润芳干粉和水的配比比例为(5～10)ml：(13～20)g：300ml，即得泽润芳发酵初始体系；
(3)泽润芳发酵初原液的制备：在35～45℃下，对步骤(2)所得的泽润芳发酵初始体系进行发酵培养24～30h，得到泽润芳发酵初原液；
(4)泽润芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的泽润芳发酵初原液在115～121℃下进行灭菌25～35min、然后在离心半径为8～11cm，转速为3800～4200r·min-1条件下，进行离心10～15min，取离心后的上清液，即得到泽润芳发酵原浆。
所述的泽润芳发酵原浆，该泽润芳发酵原浆采用如下制备方法制备，优选的步骤如下：
(1)泽润芳干粉的制备：将黄芪0.5重量份、白术0.5重量份、白蔹0.5重量份、黄精1重量份、川芎1重量份、杏仁0.5重量份、防风0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到泽润芳干粉；
(2)泽润芳发酵初始体系的制备：将浓度为107cfu·ml-1、ph值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的泽润芳干粉和水混合，酵母菌液、泽润芳干粉和水的配比比例为8ml：15g：300ml，即得泽润芳发酵初始体系；
(3)泽润芳发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的泽润芳发酵初始体系进行发酵培养28h，得到泽润芳发酵初原液；
(4)泽润芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的泽润芳发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到泽润芳发酵原浆。
一种泽润芳发酵原浆的制备方法，该制备方法的步骤如下：
(1)泽润芳干粉的制备：将黄芪0.1～1重量份、白术0.1～1重量份、白蔹0.1～1重量份、黄精1～2重量份、川芎1～2重量份、杏仁0.1～1重量份、防风0.1～1重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过20～30目筛，得到泽润芳干粉；
(2)泽润芳发酵初始体系的制备：将浓度为(105～108)cfu·ml-1、ph值为6.5～7.5的酵母菌液，与步骤(1)所得的泽润芳干粉和水混合，酵母菌液、泽润芳干粉和水的配比比例为(5～10)ml：(13～20)g：300ml，即得泽润芳发酵初始体系；
(3)泽润芳发酵初原液的制备：在35～45℃下，对步骤(2)所得的泽润芳发酵初始体系进行发酵培养24～30h，得到泽润芳发酵初原液；
(4)泽润芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的泽润芳发酵初原液在115～121℃下进行灭菌25～35min、然后在离心半径为8～11cm，转速为3800～4200r·min-1条件下，进行离心10～15min，取离心后的上清液，即得到泽润芳发酵原浆。
所述的泽润芳发酵原浆的制备方法，该制备方法优选的步骤如下：
(1)泽润芳干粉的制备：将黄芪0.5重量份、白术0.5重量份、白蔹0.5重量份、黄精1重量份、川芎1重量份、杏仁0.5重量份、防风0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到泽润芳干粉；
(2)泽润芳发酵初始体系的制备：将浓度为107cfu·ml-1、ph值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的泽润芳干粉和水混合，酵母菌液、泽润芳干粉和水的配比比例为8ml：15g：300ml，即得泽润芳发酵初始体系；
(3)泽润芳发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的泽润芳发酵初始体系进行发酵培养28h，得到泽润芳发酵初原液；
(4)泽润芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的泽润芳发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到泽润芳发酵原浆。
一种泽润芳发酵原浆制备抗衰老化妆品中的应用，该泽润芳发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)泽润芳干粉的制备：将黄芪0.5重量份、白术0.5重量份、白蔹0.5重量份、黄精1重量份、川芎1重量份、杏仁0.5重量份、防风0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到泽润芳干粉；
(2)泽润芳发酵初始体系的制备：将浓度为107cfu·ml-1、ph值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的泽润芳干粉和水混合，酵母菌液、泽润芳干粉和水的配比比例为8ml：15g：300ml，即得泽润芳发酵初始体系；
(3)泽润芳发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的泽润芳发酵初始体系进行发酵培养28h，得到泽润芳发酵初原液；
(4)泽润芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的泽润芳发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到泽润芳发酵原浆。
一种泽润芳发酵原浆制备治疗白癜风化妆品中的应用，该泽润芳发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)泽润芳干粉的制备：将黄芪0.5重量份、白术0.5重量份、白蔹0.5重量份、黄精1重量份、川芎1重量份、杏仁0.5重量份、防风0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到泽润芳干粉；
(2)泽润芳发酵初始体系的制备：将浓度为107cfu·ml-1、ph值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的泽润芳干粉和水混合，酵母菌液、泽润芳干粉和水的配比比例为8ml：15g：300ml，即得泽润芳发酵初始体系；
(3)泽润芳发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的泽润芳发酵初始体系进行发酵培养28h，得到泽润芳发酵初原液；
(4)泽润芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的泽润芳发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到泽润芳发酵原浆。
所述的泽润芳发酵原浆，其特征在于，采用化妆品常规的制备方法，将泽润芳发酵原浆制备成面膜、精华液或爽肤水。
酵母菌为酿酒酵母saccharomycescerevisiae，atcc编号为26603，市售。
实验一：对实验性白癜风治疗作用的筛选实验研究
1材料
1.1受试品
1.1.1阳性对照品：他克莫司软膏，由四川明欣药业有限责任公司生产，批准文号：国药准字h20123430，规格：10g：10mg。
1.1.2受试品：泽润芳发酵原浆液，制备方法如下：
(1)干粉的制备：将黄芪7.5g、白术7.5g、白蔹7.5g、黄精15g、川芎15g、杏仁7.5g、防风7.5g混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到柒干粉；
(2)发酵初始体系的制备：将浓度为107cfu·ml-1、ph值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的干粉和水混合，酵母菌液、干粉和水的配比比例为8ml：15g：300ml，即得发酵初始体系；
(3)发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的发酵初始体系进行发酵培养28h，得到发酵初原液；
(4)发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得。
1.2实验用动物
昆明种清洁级豚鼠，体重(250±20)g，雌雄兼有，购自北京大学医学部实验动物科学部，许可证号：scxk(京)2016-0010，分笼饲养。
1.3仪器
全自动生化分析仪，由北京中勤世帝科学仪器有限公司提供；
胆碱酯酶测定试剂盒，由上海君瑞生物技术有限公司提供；
过氧化氢，由无锡市富友化工有限公司提供。
2方法
2.1实验性白癜风动物模型的制备
取黑色豚鼠40只，将其背部的毛剃去，裸露的皮肤面积为3.5cm×3.5cm。
随机分成4组，分别为：正常对照组、模型对照组、他克莫司软膏治疗组、泽润芳发酵原浆液组。
模型对照组、他克莫司软膏治疗组、泽润芳发酵原浆液组在脱毛区涂5％过氧化氢1ml，每天三次，连续35d，进行实验性白癜风的豚鼠造模。正常对照组以同样的方式，用纯净水进行涂抹。在实验期间，豚鼠每4d剃毛1次。
2.2对实验性白癜风的治疗
正常对照组和模型对照组，不进行任何治疗处理。阳性对照组外涂他克莫司软膏，泽润芳发酵原浆液组外涂泽润芳发酵原浆液。他克莫司软膏每次用量为1.0g，泽润芳发酵原浆液每次用量为1.0ml，均匀涂抹，每日3次，连续35d，每4d对豚鼠剃毛1次。
2.2.1肉眼观察
35d后，肉眼观察效果。判定标准，如下：
观察豚鼠受试区中心3cm2的范围，分为优、良、中、差4个等级，分别为：
优：色素基本恢复正常；
良：出现色素面积>50％；
中：出现色素面积<50％；
差：皮肤呈苍白或白斑状；
总有效率以(优+良)计。
2.2.2黑色素染色
取受试区中心(1cm×1cm)皮肤，用甲醛固定，石蜡包埋、切片，用硫酸亚铁lillie法进行黑色素染色，观察20个毛囊，计算表皮基底细胞及棘层中有黑色素毛囊数和皮肤黑色素分布。
“－”：无黑色素；
“±”：偶见黑色素；
“+”：10～12个有黑色素；
“++”：有12个以上有黑色素；
“+++”：均有黑色素。
2.2.3胆碱酯酶(che)测定
将豚鼠麻醉后，腹部主动脉取血，测定胆碱酯酶活性。
3结果
3.1皮肤观察
正常对照组豚鼠皮肤无变化，模型对照组豚鼠皮肤呈现苍白，出现大量白斑、脱屑，与正常对照组比较有非常显著性差异(p<0.01)；
他克莫司软膏组豚鼠和泽润芳发酵原浆液组豚鼠的皮肤呈现为棕黑色，有黑色素沉着，他克莫司软膏组和泽润芳发酵原浆液组总有效率为90％，与模型对照组比较，有极显著性差异(p<0.01)。结果见表1。
表1对白癜风动物模型的疗效(n＝10)
注：与模型组比较，*p<0.01
3.2黑色素毛囊数观察
正常对照组、他克莫司软膏组、泽润芳发酵原浆液组与模型组比较有非常显著性差异(p<0.01)，泽润芳发酵原浆液组与他克莫司软膏组比较有显著性差异(p<0.05)。结果见表2。
表2对白癜风动物模型皮肤黑色素的影响
注：与模型组比较，*p<0.01；与他克莫司软膏组比较，#p<0.05
3.3胆碱酯酶活性测定
模型组胆碱酯酶活性下降，与正常对照组、他克莫司软膏组、泽润芳发酵原浆液组比较有非常显著性差异(p<0.01)，他克莫司软膏组与泽润芳发酵原浆液组比较有显著性差异(p<0.05)。结果见表3。
表3对白癜风动物模型胆碱酯酶的影响
4讨论
用泽润芳发酵原浆液和他克莫司软膏连续治疗35d后，他克莫司软膏组、泽润芳发酵原浆液组皮肤肉眼观察色素基本恢复，接近正常对照组。在组织学检查中，泽润芳发酵原浆液组的黑色素毛囊数明显多于他克莫司软膏组(p<0.05)，表明泽润芳发酵原浆液在恢复黑色素毛囊方面的作用优于他克莫司软膏。同时，泽润芳发酵原浆液组使胆碱酯酶活性恢复接近正常，他克莫司软膏组也使胆碱酯酶活性增加，但泽润芳发酵原浆液组使胆碱酯酶活性增加与他克莫司软膏组相比有显著性差异(p<0.05)，这与组织学检查结果一致，表明泽润芳发酵原浆液对白癜风的疗效优于他克莫司软膏。
实验结果显示，用泽润芳发酵原浆液治疗白癜风动物模型，改善皮损症状明显，具有良好的治疗作用。
具体实施方式
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1：
泽润芳发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)泽润芳干粉的制备：将黄芪7.5g、白术7.5g、白蔹7.5g、黄精15g、川芎15g、杏仁7.5g、防风7.5g混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到泽润芳干粉；
(2)泽润芳发酵初始体系的制备：将浓度为107cfu·ml-1、ph值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的泽润芳干粉和水混合，酵母菌液、泽润芳干粉和水的配比比例为8ml：15g：300ml，即得泽润芳发酵初始体系；
(3)泽润芳发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的泽润芳发酵初始体系进行发酵培养28h，得到泽润芳发酵初原液；
(4)泽润芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的泽润芳发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到泽润芳发酵原浆。
实施例2：
泽润芳发酵霜
操作步骤：
(1)在烧杯中依次称取a相原料；
(2)在另一称重烧杯中称取丁二醇、甘油和汉生胶，用玻璃棒手搅分散均匀后加入去离子水；
(3)分别用玻璃棒手搅加热a、b相原料，升温至80～85℃后，b相搅拌5～10分钟，转速50～100转/分钟，将a相料液加入b相烧杯中进行均质，均质速度大约在3500r·min-1左右，均质5～8min；
(4)以转速35～40转/分钟搅拌降温至45℃，加入mti，搅拌降温；
(5)降至室温后称量，添加去离子水补足重量，搅拌均匀。