本发明涉及提取物及制剂制备领域，具体涉及刺青果中有效成分的提取方法及青刺果提取物凝胶。
背景技术：
：青刺果是一种多年生的稀有木本油料植物，它生长于海拔1800—3000米的山坡、荒地、地边、路边和阴湿山沟灌丛中，尤其适宜在海拔2200—2700米地带生长，是一种具有药食兼用的经济植物。青刺果含青刺果油，青刺果油主含不饱和脂肪酸、油酸和亚油酸、棕榈酸、维生素a、维生素d、1维生素e和维生素k等，还含有非常丰富的钙、硫、锰、镁、钾、磷、锌和铁等常量及微量元素，青刺果油中脂肪酸，油酸，亚油酸含量30％左右，在体内可转化成花生四烯酸是传递细胞间信息的生化介质，以炎症，感染、组织损伤和免疫系统调节有关，青刺果油内服具有缓解高血压和抗动脉粥样硬化形成的作用，体外实验青刺果油具有抗氧化、抗炎、抑制血小板聚集等作用；报道青刺果油制剂在体外实验中具有突出的天然渗透性用于皮肤及组织中，养份会有60％进入深层组织、40％进入真皮，基本不会流失；青刺果油民间传统用于蛇，虫叮咬，护肤等具有良好效果。清刺果除青刺果油外，还含有少量生物碱，青刺果总碱极性偏大，具有一定的水溶性，是清刺果中主要的抗炎成分，其抗炎效果强于青刺果油，青刺果总碱对致病菌，例如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、志贺菌、白色念珠菌均具有较强的预制效果。传统的清刺果加工方法主要还是提取青刺果油，油渣丢弃，压榨法所得青刺果油，含有少量水分，大量高分子脂肪酸，少量蛋白质，所得油放置久容易出现分层腐败现象。而对刺青果总碱提取的研究少之又少。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种刺青果中有效成分的提取方法及青刺果提取物凝胶，解决刺青果总碱提取难度大的问题。为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：一种刺青果中有效成分的提取方法，包括：压榨：对青刺果干粉进行低温压榨，得到刺青果渣和刺青果粗油；提取：对刺青果渣进行回流提取，溶剂为乙醇，得到乙醇粗提物；提纯：对乙醇粗提物进行过滤后，用酸性阳离子树脂吸附乙醇粗提物中的生物总碱，用水洗柱子到流出液无色后，用含氨水的乙醇溶液洗脱酸性阳离子树脂中吸附的生物总碱，得到总碱溶液；浓缩：调节总碱溶液的ph至6.8～7.2，浓缩得到刺青果总碱浸膏。作为优选的，所述提取步骤中，乙醇的体积浓度40～70％，提纯步骤中乙醇体积浓度40～50％。作为优选的，所述浓缩步骤后还有精制，所述精制是将刺青果总碱浸膏置于乙醇中溶解，然后在-5～5℃下静置至不溶物不再增加，滤去不溶物然后对其进行浓缩得到精制刺青果总碱。作为优选的，所述含氨水的乙醇溶液是将氨水与质量浓度75～85％乙醇溶液混合，其中氨水在溶液中的质量浓度为8～12％。作为优选的，对所述刺青果粗油进行分离、冷冻、干燥得到小分子青刺果油，其中，所述冷冻是将离心后的刺青果粗油置于-10～-15℃冷冻20～30小时，然后过滤。作为优选的，所述分离步骤是对刺青果粗油进行离心，离心速度为10000～25000r/min、时间为1～1.5h，温度-12～4℃，离心后用活性炭吸附其中的可吸附组分。作为优选的，所述干燥是将离心后的青刺果油和无水硫酸钠混合后，搅拌1～2h，其中无水硫酸钠占青刺果油的6～12wt％。一种青刺果提取物凝胶，包括青刺果提取物溶液和基质，所述青刺果提取物溶液和基质的体积比为10～15:85～90，所述青刺果提取物溶液包括权利要求5-7任意一项所述的脱水小分子青刺果油7～8重量份、权利要求1-7任意一项所述的青刺果总碱2～3重量份。作为优选的，所述青刺果提取物溶液还包括0.4～0.6重量份冰片、0.02～0.04重量份香精、0.4～0.6重量份丙三醇，所述基质为质量浓度0.5～0.8％的卡波姆凝胶，其中苯甲酸钠在卡波姆凝胶中的质量浓度为0.1～0.3％。一种权利要求8或9所述的青刺果提取物凝胶的加工方法，(1)取卡波姆941粉末和苯甲酸钠溶解于纯净水中，搅拌均匀溶胀，静置后形成质量浓度0.5～0.8％的卡波姆凝胶溶液，其中苯甲酸钠在水中的质量浓度为0.1～0.3％；(2)按质量比7～8:2～3:0.4～0.6:0.02～0.04:0.4～0.6的比例，取权利要求5-7任意一项所述的脱水小分子青刺果油、权利要求1-7任意一项所述的青刺果总碱、冰片、香精、丙三醇混合，搅拌溶解制得青刺果提取物溶液；(3)将步骤(2)青刺果提取物溶液加入到步骤(1)卡波姆凝胶溶液中，其中青刺果提取物溶液与卡波姆凝胶溶液的体积比为10～15:85～90，然后置于均质机中，边搅拌边加入三乙醇胺调节ph值7.2～6后，取出超声脱气，得青刺果提取物凝胶。本发明方法采用高速离心和低温冷冻法使得高分子脂肪酸、蛋白质在低温下沉淀去除，保留油酸、亚油酸、不饱和脂肪酸等有益的青刺果油，采用硫酸钠脱水去除残留水分，精制使得青刺果油活性、纯度更好，所得油长期存储不变质不分层，性质更好；采用离子交换法分离纯化生物总碱，使得青刺果总碱和青刺果黄酮、萜类等成分分离，本发明方法简单，易操作，高效，适于工业化生产和市场推广应用。具体实施方式为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。实施例1：本青刺果提取物的制备方法，步骤如下(1)将1kg干燥青刺果粉碎后，投入低温压榨机中，在4℃下低温压榨得青刺果粗油；(2)将步骤(1)青刺果粗油用冷冻离心机10000转/min高速离心1h，取上清液过活性炭柱，得淡黄色清刺果油；(3)将步骤(2)青刺果油置于-12℃冷冻24小时，出现分层，下层为大分子油状固体物质，上层为小分子油，冷冻后过滤得小分子青刺果油；(4)向步骤(3)小分子青刺果油中加入小分子青刺果油质量10％的无水硫酸钠吸附油中残余水分，磁力搅拌1h，抽滤去除硫酸钠，得脱水小分子青刺果油160g；(5)将步骤(1)低温压榨后所得青刺果渣粉碎后，用体积浓度65％的乙醇溶液热回流提取2次，合并提取液回收乙醇，得青刺果乙醇粗提取物；(6)在步骤(5)青刺果乙醇粗提取物中加入乙醇搅拌溶解，溶液中乙醇含量为40％，滤去不溶物，滤液过丙烯酸弱酸性阳离子树脂151柱吸附生物总碱，吸附完全后用水洗柱子到流出液无色，然后用含氨水的乙醇溶液(含氨水的乙醇溶液是将氨水加入质量浓度75％乙醇溶液中制得，氨水在溶液中的质量百分比浓度为8％)洗脱生物总碱，碘化铋钾鉴别，收集含青刺果总碱洗脱液得青刺果总碱溶液，盐酸调节青刺果总碱溶液ph值至中性，浓缩回收乙醇得青刺果总碱浸膏，浸膏干燥后用无水乙醇热溶解，然后在0℃下放置8h，滤去不溶物氯化铵，滤液回收乙醇干燥得青刺果总碱6.3g；(7)青刺果总碱与脱水小分子青刺果油即为青刺果提取物；(8)取卡波姆941粉末和苯甲酸钠溶解于纯净水中，搅拌均匀溶胀，静置8小时后形成质量浓度0.5％的卡波姆凝胶溶液，其中苯甲酸钠在水中的质量浓度为0.2％；(9)按质量比8:2:0.5:0.03:5的比例，取脱水小分子青刺果油、青刺果总碱、冰片、香精、丙三醇混合，搅拌溶解制得青刺果提取物溶液；(10)将青刺果提取物溶液加入到卡波姆凝胶溶液中，其中青刺果提取物溶液与卡波姆凝胶溶液的体积比为15:85，然后置于均质机中，边搅拌边加入三乙醇胺调节ph值7.4后，取出超声脱气，分装即得青刺果提取物凝胶制剂。实施例2：本青刺果提取物的制备方法，步骤如下(1)将1kg干燥青刺果粉碎后，投入低温压榨机中，在2℃下低温压榨得青刺果粗油；(2)将步骤(1)青刺果粗油用冷冻离心机15000转/min高速离心1.2h，取上清液过活性炭柱，得淡黄色清刺果油；(3)将步骤(2)青刺果油置于-10℃冷冻20小时，出现分层，下层为大分子油状固体物质，上层为小分子油，冷冻后过滤得小分子青刺果油；(4)向步骤(3)小分子青刺果油中加入小分子青刺果油质量6％的无水硫酸钠吸附油中残余水分，磁力搅拌1.5h，抽滤去除硫酸钠，得脱水小分子青刺果油176g；(5)将步骤(1)低温压榨后所得青刺果渣粉碎后，用体积浓度50％的乙醇溶液热回流提取3次，合并提取液回收乙醇，得青刺果乙醇粗提取物；(6)在步骤(5)青刺果乙醇粗提取物中加入乙醇搅拌溶解，溶液中乙醇含量为45％，滤去不溶物，滤液过丙烯酸弱酸性阳离子树脂151柱吸附生物总碱，吸附完全后用水洗柱子到流出液无色，然后用含氨水的乙醇溶液(含氨水的乙醇溶液是将氨水加入质量浓度80％乙醇溶液中制得，氨水在溶液中的质量百分比浓度为10％)洗脱生物总碱，碘化铋钾鉴别，收集含青刺果总碱洗脱液得青刺果总碱溶液，盐酸调节青刺果总碱溶液ph值至中性，浓缩回收乙醇得青刺果总碱浸膏，浸膏干燥后用无水乙醇热溶解，然后在4℃下放置8h，滤去不溶物氯化铵，滤液回收乙醇干燥得青刺果总碱6.6g；(7)青刺果总碱与脱水小分子青刺果油即为青刺果提取物；(8)取卡波姆941粉末和苯甲酸钠溶解于纯净水中，搅拌均匀溶胀，静置8小时后形成质量浓度0.7％的卡波姆凝胶溶液，其中苯甲酸钠在水中的质量浓度为0.1％；(9)按质量比7:3:0.4:0.02:0.4的比例，取脱水小分子青刺果油、青刺果总碱、冰片、香精、丙三醇混合，搅拌溶解制得青刺果提取物溶液；(10)将青刺果提取物溶液加入到卡波姆凝胶溶液中，其中青刺果提取物溶液与卡波姆凝胶溶液的体积比为10:90，然后置于均质机中，边搅拌边加入三乙醇胺调节ph值7.4后，取出超声脱气，分装即得青刺果提取物凝胶制剂。实施例3：本青刺果提取物的制备方法，步骤如下(1)将1kg干燥青刺果粉碎后，投入低温压榨机中，在3℃下低温压榨得青刺果粗油；(2)将步骤(1)青刺果粗油用冷冻离心机10000转/min高速离心1.2h，取上清液过活性炭柱，得淡黄色清刺果油；(3)将步骤(2)青刺果油置于-15℃冷冻24小时，出现分层，下层为大分子油状固体物质，上层为小分子油，冷冻后过滤得小分子青刺果油；(4)向步骤(3)小分子青刺果油中加入小分子青刺果油质量12％的无水硫酸钠吸附油中残余水分，磁力搅拌2h，抽滤去除硫酸钠，得脱水小分子青刺果油248.1g；(5)将步骤(1)低温压榨后所得青刺果渣粉碎后，用体积浓度75％的乙醇溶液热回流提取2次，合并提取液回收乙醇，得青刺果乙醇粗提取物；(6)在步骤(5)青刺果乙醇粗提取物中加入乙醇搅拌溶解，溶液中乙醇含量为50％，滤去不溶物，滤液过丙烯酸弱酸性阳离子树脂113柱吸附生物总碱，吸附完全后用水洗柱子到流出液无色，然后用含氨水的乙醇溶液(含氨水的乙醇溶液是将氨水加入质量浓度85％乙醇溶液中制得，氨水在溶液中的质量百分比浓度为11％)洗脱生物总碱，碘化铋钾鉴别，收集含青刺果总碱洗脱液得青刺果总碱溶液，盐酸调节青刺果总碱溶液ph值至中性，浓缩回收乙醇得青刺果总碱浸膏，浸膏干燥后用无水乙醇热溶解，然后在-5℃下放置8h，滤去不溶物氯化铵，滤液回收乙醇干燥得青刺果总碱6.1g；(7)青刺果总碱与脱水小分子青刺果油即为青刺果提取物；(8)取卡波姆941粉末和苯甲酸钠溶解于纯净水中，搅拌均匀溶胀，静置8小时后形成质量浓度0.7％的卡波姆凝胶溶液，其中苯甲酸钠在水中的质量浓度为0.3％；(9)按质量比8:3:0.6:0.05:0.6的比例，取脱水小分子青刺果油、青刺果总碱、冰片、香精、丙三醇混合，搅拌溶解制得青刺果提取物溶液；(10)将青刺果提取物溶液加入到卡波姆凝胶溶液中，其中青刺果提取物溶液与卡波姆凝胶溶液的体积比为12:88，然后置于均质机中，边搅拌边加入三乙醇胺调节ph值7.4后，取出超声脱气，分装即得青刺果提取物凝胶制剂。用小鼠耳肿胀法(体外实验)验证上述实施例提取物的抗炎效果：取昆明小白鼠40只，雌雄各半，随机分4组，用乙醚麻醉，在右耳前后两面涂抹100％二甲苯致炎液，0.02ml/只，青刺果总碱用少量生理盐水溶解呈混悬状，空白组(a组)以生理盐水涂抹炎症处；青刺果油剂量组(b组)以含青刺果油10mg/kg剂量涂抹炎症处；青刺果生物碱组(c组)以含青刺果生物碱2mg/kg剂量涂抹炎症处；青刺果油与青刺果生物碱混合组(d组)以含青刺果油5.0mg/kg和青刺果生物碱1.5mg/kg剂量涂抹炎症处；各组涂抹药物4小时后，将小鼠脱颈椎处死，用5mm打孔器在小鼠双耳同一部位打圆孔，电子天平称重，右耳重减左耳重计算肿胀度，并计算肿胀率；由下表可知青刺果油，青刺果生物碱均能明显抑制由二甲苯引起的小鼠耳肿胀，其中d组肿胀率最低。表1：肿胀率的影响(n＝10)组别肿胀度(mg)肿胀率(％)a组7.6±1.2111.2±14.0b组5.0±2.376.7±32.9c组4.3±0.670.8±16.5d组3.7±0.661.2±16.3注：以空白组比较，p＜0.05。尽管这里参照本发明的多个解释性实施例对本发明进行了描述，但是，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。更具体地说，在本申请公开和权利要求的范围内，可以对主题组合布局的组成部件和/或布局进行多种变型和改进。除了对组成部件和/或布局进行的变形和改进外，对于本领域技术人员来说，其他的用途也将是明显的。当前第1页12