一种抗衰老的组合物、制备方法及含有该组合物的化妆品与流程

本发明属于化妆品
技术领域：
，具体涉及一种抗衰老的组合物、制备方法及含有该组合物的化妆品。
背景技术：
：大多数人的皮肤衰老基本从25岁就开始了，主要是基因控制的自然衰老和诸多外源性因素引起的衰老。目前，对抗衰老主要有以下措施：防紫外线、保湿补水、营养补充、抗氧化、抗糖基化、胶原蛋白合成与保护、消除微循环障碍、增强细胞活力。由于紫外线无处不在，人们不可能完全不接触紫外线，因此，对于防紫外线外的其他措施的重视尤为重要。水分为营养成分供给和代谢废物排除提供了溶剂媒介，是皮肤中细胞之间、大分子之间的润滑剂和隔离剂，缺水直接引起新陈代谢障碍，分子间、细胞之间作用力增强，皮肤变硬，大分子之间接触几率增加，大分子间交联反应更易发生，皮肤硬化不能逆转；桥粒水解不完全，角质细胞部分粘连，在皮肤表面形成鳞屑。因此，皮肤含有适当的水分有助于延缓衰老和保持光滑，通过保湿补水有助于缓解皮肤衰老。皮肤需要的七大营养成分主要是：氨基酸和肽、脂肪酸、糖、维生素、微量和常量元素、水、氧气。正常情况下，循环系统会给皮肤带来充足的营养，但随着人体的衰老以及衰老带来的疾病影响，造成微循环功能障碍，影响了营养成分的供给或者吸收，皮肤一旦开始衰老，再多的营养物质也无法较好地吸收，能够较好地吸收化妆品中的营养是化妆品保持皮肤年轻的关键。人体内抗氧化，主要是清除过量自由基和自由基介导的活性氧，人体自身已经有抗氧化系统，这个系统中包含了众多抗氧化酶和抗氧化活性成分。抗氧化酶主要是：超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、硒谷胱甘肽过氧化物酶、不含硒谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽硫转移酶、醛酮还原酶；抗氧化成分主要是：维生素c、维生素e、辅酶q10、谷胱苷肽、类胡萝卜素、胆红素和一些蛋白。随着人体的衰老，人体抗氧化系统也会衰退，主要表现为抗氧化酶和抗氧化成分减少导致的抗氧化能力降低。至于抗糖基化、胶原蛋白合成与保护、消除微循环障碍以及增强细胞活力这些抗衰老措施，可以通过保湿补水、营养补充以及抗氧化得到较大的改善。因此，保湿补水、营养补充以及抗氧化是研发抗衰老化妆品的关键。然而，目前的抗衰老化妆品存在较大的缺陷，使用效果好的多为激素，而未添加激素化妆品，考虑到添加成本或者制备工艺的限制，大多仅添加提高化妆品抗氧化性的活性成分，消费者使用感受差，市场反馈差。因此，现有的化妆品或多或少的会添加一点激素或激素类似物甚至一些不允许添加的物质，以便使消费者在短期内能看到显著的抗衰老效果，增加收益。随着研究不断的进步，人们发现了大米活性多肽、茶籽活性多肽和甘薯活性多肽等植物性多肽对人们的身体健康等具有较大的益处，这些产品可应用在保健品、食品或者化妆品中。中药中不乏对身体有较大益处的药材，然而，目前的研究还仅限于对单独植物的活性肽的研究，并且多为人们日常生活中常见食物，对于中药古方或药材的活性肽的研究还未见报道。如果能利用中药材开发一种既能抗氧化、又能补充营养和水分的化妆品，多方位缓解衰老，减少添加成本，简化制备工艺，则可克服为了效果明显添加激素或激素类似物的缺陷。技术实现要素：为了解决现有技术存在的上述问题，本发明目的在于提供一种既能抗氧化、又能补充营养和水分的抗衰老组合物，本发明还提供了抗衰老组合物的制备方法以及含有该抗衰老组合物的化妆品。在中药材中，麦冬、山茱萸、当归和一点血具有如下特性：麦冬：甘、微苦，微寒。润肺清心、泻热生津、化痰止呕、治嗽行水；山茱萸：性味酸、涩，微温。归肝、肾。补益肝肾，收涩固脱。用于眩晕耳鸣，腰膝酸痛，阳痿遗精，遗尿尿频，崩漏带下，大汗虚脱，内热消；当归：甘、辛，温。归肝、心、脾经。补血活血，调经止痛，润肠通便。用于血虚萎黄，眩晕心悸，月经不调，经闭痛经，虚寒腹痛，风湿痹痛，跌扑损伤，痈疽疮疡，肠燥便秘。酒当归活血通经。用于经闭痛经，风湿痹痛，跌扑损伤；一点血：性微寒，味甘，苦。归肾经、肝经。补气养血，散瘀止血。属止血药下分类的化瘀止血药。本发明所采用的技术方案为：本发明提供了一种抗衰老的组合物，所述组合物为中药组合物酶解产物，所述中药组合物包括麦冬、山茱萸、当归和一点血，所述麦冬、山茱萸、当归和一点血的重量比为(4～8):(3～5):(0.5～1.5):(2～4)。优选的，上述抗衰老的组合物，所述麦冬、山茱萸、当归和一点血的重量比为6:4:1:3。本发明还提供了一种前述的抗衰老组合物的制备方法，包括如下步骤：(1)粉碎：按量称取麦冬、山茱萸、当归和一点血，粉碎过筛，得到中药组合物粉末；(2)溶解：将所述中药组合物粉末加入水中，溶解，超声处理，得到料液；(3)加碱：向所述料液中加入naoh溶液，搅拌浸提，离心收集上清，得到中药蛋白提取液；(4)加酸：向所述中药蛋白提取液中加入hcl溶液，反应后离心取沉淀，干燥，得到中药粗蛋白干品；(5)多级酶解：将所述中药粗蛋白干品溶解，得到中药粗蛋白溶液，向所述中药粗蛋白溶液中加入胃蛋白酶，进行一次酶解，得到反应液一，向所述反应液一中加入胰蛋白酶，进行二次酶解，得到反应液二，向所述反应液二中加入木瓜蛋白酶，进行三次酶解，得到反应液三，将所述反应液三灭酶后烘干，得到中药组合物活性肽；所述胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的摩尔量的比值为5:3:2。优选的，上述抗衰老组合物的制备方法，所述步骤(2)中的中药组合物粉末质量与水的体积的比例为1:9-1:11。优选的，上述抗衰老组合物的制备方法，所述步骤(3)中naoh溶液中溶质的质量体积百分数为20％，所述步骤(3)中搅拌浸提时的温度为50～55℃，所述步骤(3)中搅拌浸提时的ph为8.5～9，所述步骤(3)中搅拌浸提的时间为4～5h。优选的，上述抗衰老组合物的制备方法，所述步骤(4)中hcl溶液的浓度为1mol/l，所述步骤(4)反应的ph为4.5～5。优选的，上述抗衰老组合物的制备方法，所述步骤(5)中一次酶解、二次酶解和三次酶解的温度分别为37℃、42℃和55℃，所述步骤(5)中一次酶解、二次酶解和三次酶解的时间分别为5h、5h和2h，所述步骤(5)中一次酶解、二次酶解和三次酶解的ph分别为2、8和6.5。本发明还提供了一种抗衰老化妆品，所述抗衰老化妆品包括前述的抗衰老组合物，所述抗衰老化妆品为抗衰老护肤水、抗衰老乳液或抗衰老霜膏中的任意一种。具体的，当所述抗衰老化妆品为抗衰老护肤水时，所述抗衰老化妆品主要由以下重量百分数的原料制备而成：抗衰老组合物8～12％、聚乙二醇-45～8％、丁二醇2～5％和防腐剂0.1～0.4％，余量为去离子水。具体的，当所述抗衰老化妆品为抗衰老乳液时，所述抗衰老化妆品主要由以下重量百分数的原料制备而成：甘油2～4％、杏仁油4～6％、角鲨烷3～7％、乳化剂3～6％、硬脂醇2～4％、pvm/ma共聚物0.2～0.4％、防腐剂0.2～3％和前述的抗衰老组合物10～16％，余量为去离子水；所述乳化剂为十八烷基三甲基氯化铵和油醇聚醚-10中的一种或两种的混合物。本发明的有益效果为：本发明提供的抗衰老组合物，首次采用特定比例的麦冬、山茱萸、当归和一点血混合提取得到其酶解产物，由于麦冬、山茱萸的氨基酸含量很高，水解后可得到丰富的氨基酸和活性肽，同时混合水解当归和一点血，使得最终含有的酶解产物中即含有丰富的氨基酸和活性肽，又含有温补活性成分，其中活性肽具有较强的抗氧化力，缓解人体抗氧化系统的衰退导致的细纹、暗沉等，丰富的氨基酸即可提供营养，又能提高抗衰老组合物的渗透性，补充水份，温补活性成分可调节面部皮肤微循环，促进氨基酸和活性肽的吸收，多方位共同对抗衰老，抗衰老效果显著。同时，在提取过程中，采用特定的碱提酸沉条件，蛋白质得率更高，采用不同的酶进行多级酶解，充分水解麦冬、山茱萸、当归和一点血中的蛋白质，充分暴露其中的活性肽的酶切位点，多点切割，使得酶解产物中含有的asp、glu、phe和lys更多，asp、glu、phe和lys含量高，活性肽的抗氧化性更强。其次，通过使用本发明提供的抗衰老组合物，配以适宜的保湿剂、乳化剂等，制作出来的抗衰老化妆品的具有优异的抗氧化性、渗透性，营养丰富，抗衰老效果更好。附图说明图1是本发明的抗衰老组合物在不同碱提ph下的蛋白得率；图2是本发明的抗衰老组合物在不同碱提温度下的蛋白得率；图3是本发明的抗衰老组合物在不同酸沉ph下的蛋白得率；图4是本发明的抗衰老组合物在不同料液比的蛋白得率；图5是本发明的抗衰老组合物在不同酶解条件下的酶解产物中的氨基酸占比；图6是本发明的抗衰老组合物的还原力测定；图7是本发明的抗衰老组合物的ddph清除率；图8是本发明的抗衰老组合物的超氧阴离子自由基清除率；图9是本发明的抗衰老组合物的羟基自由基清除率；图10是本发明的不同比例的抗衰老组合物的抗氧化力测定结果；图11是本发明的抗衰老化妆品的抗氧化力测定结果。具体实施方式下面结合附图及具体试验例对本发明做进一步阐释。试验例1：本试验例的目的在于提供一种抗衰老组合物，其制备方法如下：1.粉碎过筛称取中药组合物：麦冬、山茱萸、当归和一点血。将中药组合物经过laboratorymill3100破碎机粉碎后，过120-200目筛，即制得中药组合物粉末。2.碱提酸沉法提取中药粗蛋白称取100g的中药组合物粉末，在一定的料液比条件下，用超纯水使其溶解，充分溶解后，使用20％naoh(w/v)溶液调节其碱提ph，控制碱提温度，搅拌浸提4～5h，得到浸提液，将浸提液以5000r/min，15min的条件进行离心，收集上清液，即为中药蛋白提取液。用1mol/lhcl溶液调节中药组合物粉末的酸沉ph，待大量沉淀物出现后，以5000r/min，15min的条件进行离心，弃液，留沉淀，即为中药粗蛋白，将所得中药粗蛋白用超纯水反复洗涤至其洗涤液为中性，用真空冷冻干燥机干燥，得到中药粗蛋白干品，放置于4℃冰箱中保存。具体参数见下表：表1碱提ph碱提温度(℃)酸沉ph料液比7.5353.51:58.4041:78.5454.51:995051:1110555.51:1360采用bca法测定中药粗蛋白干品中蛋白含量，中药粗蛋白干品中蛋白含量与中药组合物粉末中蛋白含量的比值即为其提取率。各参数下的提取率结果如图1-4所示。由图1可知，随着碱提ph的不断增加，蛋白质得率先升高后降低，ph超过9后蛋白质得率显著下降，在ph为8.5条件下，蛋白质得率最高。由图2可知，随着碱提温度的不断增加，蛋白质得率先升高后降低，温度超过55℃后蛋白质得率显著下降，在温度为50℃条件下，蛋白质得率最高。由图3可知，随着酸沉ph的不断增加，蛋白质得率先升高后降低，变ph超过5后蛋白质得率显著下降，在ph为4.5条件下，蛋白质得率最高。由图4可知，料液比在1:9～1:11，对蛋白质得率幅度不大，但料液比在1:11时蛋白质得率最高。由此可见，麦冬、山茱萸、当归和一点血的组合物的最优提取条件为：碱提ph8.5，碱提温度50℃，酸沉ph为4.5，料液比为1:11。3.中药组合物酶解产物的制备将上述中药粗蛋白干品配制为中药粗蛋白溶液，向所述中药粗蛋白溶液中加入胃蛋白酶，于37℃左右进行一次酶解，得到反应液一，向所述反应液一中加入胰蛋白酶，进行二次酶解，得到反应液二，向所述反应液二中加入木瓜蛋白酶，进行三次酶解，得到反应液三，将所述反应液三水浴灭酶后烘干，得到中药组合物酶解产物干品；所述胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶的摩尔量的比值为5:3:2，单一酶和中药粗蛋白干品的质量比为4:100。将中药粗蛋白干品配制为中药粗蛋白溶液，先用超声波对中药粗蛋白溶液进行预处理，避免蛋白粘连，再将中药粗蛋白溶液水浴加热至适当的酶解温度，加入反应所需的酶量，搅拌，保温反应一段时间，得到酶解液。在反应过程中以0.2mol/lnaoh或0.5mol/lhcl维持ph值恒定。反应结束后将酶解液置于沸水浴中灭酶，待冷却后将酶解液值调至4.4，并于4000r/min条件下离心5min，去上清，所得上清液调ph至7.0，真空浓缩，冷冻干燥后即为中药组合物酶解产物干品。复合酶为：胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶。复合酶酶解包括三次分步酶解，一次酶解、二次酶解和三次酶解的温度分别为37℃、40℃和56℃，一次酶解、二次酶解和三次酶解的时间分别为5h、5h和2h，一次酶解、二次酶解和三次酶解的ph分别为2、8和6.5。由于胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶单独酶解上述组合物，切割位点单一，水解得到的多肽要含量低，不一定能水解到含有抗氧化性的活性肽，因此抗氧化性不够。不同的试验目的也会采用不同的酶取酶解，因此目前一般采用单酶酶解。采用不同的酶进行分阶段酶解，可以获得更多类目的肽，但由于各种酶的活性条件不同，并且不同的植物需要不同的酶去酶解，表2展示复合酶的最优条件，如下：表2分组分类温度(℃)ph时间(h)a胰蛋白酶40810b胃蛋白酶37210c木瓜蛋白酶566.510d复合酶37→40→562→8→6.55→5→24.酶解产物干品中氨基酸的测定精确称取20-30mg中药组合物酶解产物干品(不同组酶酶解产物，共计四组)，加入10ml6mol/lhcl，通高纯氮气2min，密封，放于110℃烘箱中水解22h，水解完成后，取出放置至常温，过滤，取1ml滤液置于烧杯中，于60℃水浴蒸干，然后加入1ml超纯水，继续蒸干，再次加入1ml超纯水，蒸干后，放于4℃冰箱中待测。测定样品时，向每个烧杯中加入4ml上机溶剂以充分溶解样品，0.22μm滤膜过滤，取出1.5ml样品，混合1ml上机溶剂，上机测定，所有测定2天内完成。进样体积50μl，色谱柱型号lcak06/na，流动相柠檬酸钠a＝0.12n，ph3.45；b＝0.2n，ph10.5。洗脱泵流速设定为0.4ml/min，衍生泵流速设定为0.25ml/min。温度梯度设为60-75℃，压力控制在30-40bar之间。由于脯氨酸的最大吸收波长是440nm，而其它氨基酸的最大吸收波长是570nm，因此，同时采集570nm和440nm两个波长下的信号，分别对其准确定量。图5中a、b、c和d分别代表表2中各分组的酶解产物的氨基酸组成，由图5可知，d组复合酶酶解产物中asp、glu、phe和lys含量远远高于其他三组，表明该组酶解产物具有更加丰富的氨基酸和抗氧化能力的活性肽。胃蛋白酶和胰蛋白酶的联合处理，使得酶解产物中蛋白质在不同位点被切割，以便获得更多含asp、glu、phe和lys的活性肽，同时再用无特异性切割的木瓜蛋白酶切割2h，可以获得更加丰富的氨基酸。5.酶解产物干品抗氧化活性评价5.1dpph自由基清除活性测定用80％乙醇配制150μmol/ldpph储备液，测试前，用80％乙醇稀释至所需浓度。采用96孔板测定样品的dpph自由基清除活性。加入20μl超纯水和180μldpph溶液，进行全波段扫描，最大吸收波长为522nm(酶标仪程序：振荡30s，测定波长范围300-700nm)。测试样品和阳性对照vc的自由基清除活性时，调节体系吸光度值至0.70±0.02得到工作液。样品的测定：设定波长为522nm，加入20μl不同浓度的a、b、c和d四组酶解产物，浓度单位为μg/ml。5.2超氧阴离子自由基清除能力的测定邻苯三酚在弱碱条件下发生自氧化，产生·o2。·o2清除剂能使邻苯三酚自氧化产物在325nm处的吸收峰减弱，通过吸光值a325的变化率，计算对·o2的清除能力。取4.5ml的50mmol/l磷酸盐缓冲液和4.2ml蒸馏水，混匀后在25℃水浴中保温20min，取出后立即加入25℃预热的0.2mmol/l邻苯三酚0.3ml，总体积9ml；迅速摇匀后，在325nm下每隔30s测定吸光值，计算在线性范围内每分钟吸光度的增加值。样品为不同浓度的a、b、c和d四组酶解产物，浓度单位为μg/ml。除用样品液代替蒸馏水外，待测样所取试剂同前，按上述方法计算在线性范围内每分钟吸光度的增加值。空白与样品吸光度的差值与空白吸光度的差值的比值即为·o2清除率。5.3羟基自由基清除能力测定在20ml比色管中依次加入6mmol/lfeso42ml、6mmol/l水杨酸2ml、供试样品抗氧化肽水溶液2ml，摇匀后加入6mmol/lh2o22ml启动反应，加蒸馏水定容至8ml，摇匀室温下静置30min。测定不加水杨酸体系的吸光度as、加样品体系的吸光度ay、不加样品液体系的吸光度a0，样品对·oh的清除能力可表示为：m即为各样品对oh的清除率。5.4还原力测定具有较强还原力的物质能把fe3+还原成fe3+，通过显色反应来判断还原的程度，反应后吸光度越大，说明该物质的还原能力越强。具体操作：在2.5mlph6.6磷酸缓冲液中加入测试样品、1％铁氰化钾1ml，将混合液于50℃恒温20min，再加入1ml浓度为10％的三氯乙酸，然后3000r/min离心分离10min，取上层清液加蒸馏水2.5ml和0.1％fecl3，混合均匀，静置10min后，测定700nm处吸光值，所有测定值均为三次平均值。吸光值越大，表示还原能力越强。抗氧化活性结果如图7～9所示。图7～9中，a、b、c和d分别代表表2中各分组的酶解产物的dpph自由基、超氧阴离子自由基和羟基自由基的清除率，在不同浓度下，d组的dpph自由基、超氧阴离子自由基和羟基自由基清除率均高于其他组；同时，由图6可知，a、b、c和d分别代表表2中各分组的酶解产物的还原力测定，随着酶解产物浓度的升高，其还原力也逐渐升高，但d组的还原力明显高于其他三组，表明使用复合酶分次酶解后的产物具有较好的抗氧化性。试验例2基于麦冬、山茱萸、当归和一点血现有药效，对麦冬、山茱萸、当归和一点血单独通过试验例1所提供的方法进行验证，发现单独的麦冬或茱萸酶解后虽然含有一定的氨基酸，具有一定的抗氧化能力，但其抗氧化能力不如加上当归和一点血后的抗氧化能力，而当归或一点血单独酶解的产物则氨基酸含量较低，抗氧化能力也较低。因此，采用四味药混合进行酶解。称取中药组合物：麦冬、山茱萸、当归和一点血，分别设置三个组别，具体如下：比例1：麦冬:山茱萸:当归:一点血的质量比为4:3:1.5:4；比例2：麦冬:山茱萸:当归:一点血的质量比为8:5:1.5:4；比例3：麦冬、山茱萸、当归和一点血的重量比为6:4:1:3；将上述三个组别的组合物按照试验例1所示方法进行粗提和酶解，并验证三组不同组合物的酶解产物的抗氧化性，结果如图10所示，由图10可知，适宜比例的、山茱萸、当归和一点血，组合物最终的酶解产物的抗氧化力高于麦冬和山茱萸过高的组别(比例2)和当归、一点血占比过高的组别(比例1)，最优的比例为6:4:1:3。试验例3本试验例的目的在于提供一种抗衰老化妆品。抗衰老护肤水，主要由以下重量份的原料制备而成：抗衰老组合物8～12％(比例3的d组酶解产物)、聚乙二醇-45～8％、丁二醇2～5％和防腐剂0.1～0.4％，余量为去离子水。抗衰老乳液时，主要由以下重量百分数的原料制备而成：甘油2～4％、杏仁油4～6％、角鲨烷3～7％、乳化剂3～6％、硬脂醇2～4％、pvm/ma共聚物0.2～0.4％、防腐剂0.2～3％和试验例1的抗衰老组合物10～16％(比例3的d组酶解产物)，余量为去离子水；所述乳化剂为十八烷基三甲基氯化铵和油醇聚醚-10中的一种或两种的混合物。抗衰老护肤品的自由基清除率如图11所示(仅展示抗衰老护肤水数据未展示)。由图10可知，随着抗衰老组合物添加浓度的增加，各自由基的清除率逐渐增加。在10～16％(w/w)的添加浓度下，自由基清除率均能达到60％以上，由此可见，该浓度下的抗衰老组合物效果最优。本发明不局限于上述可选的实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品。上述具体实施方式不应理解成对本发明的保护范围的限制，本发明的保护范围应当以权利要求书中界定的为准，并且说明书可以用于解释权利要求书。当前第1页12