本申请要求2017年4月11日提交的美国临时专利申请no.62/484,262的优先权，其全部内容通过引用合并于此。
本发明是在美国国立卫生研究院(nih)授予的编号ai055475的政府资助下完成的。政府对这项发明享有一定的权利。
本公开的开发由威奥切基金会(welchfoundation)根据编号c-1819进行部分资助。
本公开涉及医学、药理学、化学和肿瘤学领域。特别地，公开了与含埃博霉素类似物的氮丙啶相关的新化合物、组合物、治疗方法和合成方法。
背景技术：
天然产物埃博霉素a、b、c和d(1-4)是许多合成研究的主题，包括从天然产物和关键中间体开发总合成路径以及半合成探索(nicolaou和snyder，2003；altmann等人，2007；altmann等人，2009；pfeiffer等人，2009；altmann等人，2011；pfeiffer等人，2012；altmann等人，2014；以及schiess等人，2015)。所有这些合成的努力已经产生了几种药物候选物，包括最近一个被批准为治疗转移性或局部晚期乳腺癌的临床药物(5，伊沙匹隆，以
将高细胞毒性化合物配制成抗体-药物偶联物(adc)的能力和其他靶向治疗方法提供了一种方法，以提高那些由于毒性问题而阻止它们成为可行药物的高效力化合物的治疗指数(chari等人，2014以及srinivasarao等人，2015)。因此，仍然需要高效的化疗剂，其可以作为这些靶向治疗方法的化学有效负荷。
技术实现要素：
本公开提供了如下分子式的化合物：
其中：
x1为-o-或-nra；其中
ra为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；
r1为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、烯基(c≤8)、炔基(c≤8)、-烷二基(c≤6)-环烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；
r2为杂芳基(c≤12)、-杂亚芳基(c≤8)-rd、或这些基团中任一者的取代形式；其中：
rd为烷基(c≤12)、芳基(c≤12)、芳烷基(c≤12)、杂芳基(c≤12)、杂芳烷基(c≤12)、或这些基团中任一者的取代形式；
r3为氢或烷基(c≤12)、环烷基(c≤12)、或其中任一基团的取代形式；
r4为烷基(c≤12)、环烷基(c≤12)、或其中任一基团的取代形式；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，将该化合物进一步定义为：
其中：
x1为-o-或-nra-；其中
ra为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；
r1为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、烯基(c≤8)、炔基(c≤8)、-烷二基(c≤6)-环烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；
r2为杂芳基(c≤12)、-杂芳烃二基(c≤8)-rd、或这些基团中任一者的取代形式；其中：
rd为烷基(c≤12)、芳基(c≤12)、芳烷基(c≤12)、杂芳基(c≤12)、杂芳烷基(c≤12)、或这些基团中任一者的取代形式；
r3和r4分别为独立的氢或烷基(c≤12)、环烷基(c≤12)、或其中任一基团的取代形式；
如果r4为氢，且r2为2-甲基噻唑-4-基时，则r1不是氢或羟乙基；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，将该化合物进一步定义为：
其中：
x1、r3和r4如上定义；
r1为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、烯基(c≤8)、炔基(c≤8)、-烷二基(c≤6)-环烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；并且
r2为
其中：
x2为-o-或-nrb-；其中
rb为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)，或这些基团中任一者的取代形式；
r5为氢、氨基、卤代、羟基、烷基(c1-3)、取代的烷基(c1-3)、烷氧基(c1-3)或取代的烷氧基(c1-3)；并且
r6为氢、氨基、卤代、羟基、巯基、烷基(c≤6)、取代烷基(c≤6)、杂芳基(c≤8)、取代杂芳基(c≤8)、杂芳烷基(c≤8)、取代杂芳烷基(c≤8)、烷氧基(c≤6)、取代烷氧基(c≤6)、烷硫基(c≤6)或取代烷硫基(c≤6)；或者
其中：
x3和x4各自独立地为-o-或-nrc-；其中
rc不存在，为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、芳基(c≤8)、芳烷基(c≤8)、杂芳基(c≤8)、杂芳烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；如果rc不存在，则与其结合的原子是双键的一部分；并且如果rc与原子结合，则rc不存在；并且
r7和r8各自独立地为氢、氨基、卤代、羟基、烷基(c1-3)、取代的烷基(c1-3)、芳基(c≤8)、取代的芳基(c≤8)、烷氧基(c1-3)、取代的烷氧基(c1-3)、烷硫基(c1-3)或取代的烷硫基(c1-3)；或者
其中：
x5、x6和x7各自独立地为-o-、-s-或-nrd-；其中
rd不存在，为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；如果rd不存在，则与其结合的原子是双键的一部分；并且如果rd与原子结合，则rd不存在；并且
r9为氢、氨基、卤代、羟基、烷基(c1-3)、取代的烷基(c1-3)、芳基(c≤8)、取代的芳基(c≤8)、烷氧基(c1-3)或取代的烷氧基(c1-3)；或者
一种化合物，其中：
x1、r3和r4如上定义；
r1为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、烯基(c≤8)、炔基(c≤8)、-烷二基(c≤6)-环烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；并且
r2为：
其中：
r10为氢、氨基、卤代、羟基、烷基(c1-3)、取代的烷基(c1-3)、芳基(c≤8)、取代的芳基(c≤8)、烷氧基(c1-3)或取代的烷氧基(c1-3)；
r11为烷基(c≤8)、杂芳基(c≤8)或取代的杂芳基(c≤8)；以及
一种化合物，其中：
x1、r3和r4如上定义；
r1为环烷基(c≤8)、烯基(c≤8)、炔基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；并且
r2为：
其中：
r12为氢、氨基、卤代、羟基、烷基(c1-3)、取代的烷基(c1-3)、芳基(c≤8)、取代的芳基(c≤8)、烷氧基(c1-3)或取代的烷氧基(c1-3)；并且
r13为烷基(c≤6)或取代的烷基(c≤6)；如果r2为
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，将该化合物进一步定义为：
其中：
r1、r2和x1如上定义；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，将该化合物进一步定义为：
其中：
r1和r2如上定义；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，将该化合物进一步定义为：
其中：
r1和r2如上定义；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，将该化合物进一步定义为：
其中：
r1为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、烯基(c≤8)、炔基(c≤8)、-烷二基(c≤6)-环烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；并且
r2为
其中：
x2为-o-或-nrb-；其中
rb为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；
r5为氢、氨基、卤代、羟基、烷基(c1-3)、取代的烷基(c1-3)、烷氧基(c1-3)或取代的烷氧基(c1-3)；并且
r6为氢、氨基、卤代、羟基、巯基、烷基(c≤6)、取代烷基(c≤6)、杂芳基(c≤8)、取代杂芳基(c≤8)、杂芳烷基(c≤8)、取代杂芳烷基(c≤8)、烷氧基(c≤6)、取代烷氧基(c≤6)、烷硫基(c≤6)或取代烷硫基(c≤6)；或者
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，该化合物进一步定义为：
其中：
r1为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、烯基(c≤8)、炔基(c≤8)、-烷二基(c≤6)-环烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；并且
r2为
其中：
x3和x4各自独立地为-o-或-nrc-；其中
rc不存在，为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、芳基(c≤8)、芳烷基(c≤8)、杂芳基(c≤8)、杂芳烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；如果rc不存在，则与其结合的原子是双键的一部分；并且如果rc与原子结合，则rc不存在；并且
r7和r8各自独立地为氢、氨基、卤代、羟基、烷基(c1-3)、取代的烷基(c1-3)、芳基(c≤8)、取代的芳基(c≤8)、烷氧基(c1-3)或取代的烷氧基(c1-3)；或者
如果r2为
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，将该化合物进一步定义为：
其中：
r1为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、烯基(c≤8)、炔基(c≤8)、-烷二基(c≤6)-环烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；并且
r2为
其中：
x5、x6和x7各自独立地为-o-、-s-或-nrd-；其中
rd不存在，为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；如果rd不存在，则与其结合的原子是双键的一部分；并且如果rd与原子结合，则rd不存在；并且
r9为氢、氨基、卤代、羟基、烷基(c1-3)、取代的烷基(c1-3)、芳基(c≤8)、取代的芳基(c≤8)、烷氧基(c1-3)或取代的烷氧基(c1-3)；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，将该化合物进一步定义为：
其中：
r1为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、烯基(c≤8)、炔基(c≤8)、-烷二基(c≤6)-环烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；并且
r2为：
其中：
r10为氢、氨基、卤代、羟基、烷基(c1-3)、取代的烷基(c1-3)、芳基(c≤8)、取代的芳基(c≤8)、烷氧基(c1-3)或取代的烷氧基(c1-3)；并且
r11为烷基(c≤8)、杂芳基(c≤8)或取代的杂芳基(c≤8)；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，将该化合物进一步定义为：
其中：
r1为环烷基(c≤8)、烯基(c≤8)、炔基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；并且
r2为：
其中：
r12为氢、氨基、卤代、羟基、烷基(c1-3)、取代的烷基(c1-3)、芳基(c≤8)、取代的芳基(c≤8)、烷氧基(c1-3)或取代的烷氧基(c1-3)；并且
r13为烷基(c≤6)或取代的烷基(c≤6)；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，r3为烷基(c≤6)，例如甲基。在一些实施例中，r4为烷基(c≤6)，例如甲基。在一些实施例中，x1为-o-。
在一些实施例中，r1为氢。在其他实施例中，r1为烷基(c≤6)，例如-ch2ch(ch2)2。在其他实施例中，r1为取代的烷基(c≤6)，例如2-羟乙基、2-叠氮乙基、2-巯基乙基、2-氨基乙基或2-乙酰氧基乙基。在其他实施例中，r1为烷二基(c≤6)-环烷基(c≤8)。在其他实施例中，r1为炔烃基(c≤6)，例如-ch2cch。
在一些实施例中，r2为：
其中：
x2为-o-或-nrb-；其中
rb为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；并且
r6为氢、氨基、卤代、羟基、巯基、烷基(c≤6)、取代的烷基(c≤6)、杂芳基(c≤8)、取代的杂芳基(c≤8)、杂芳烷基(c≤8)、取代的杂芳烷基(c≤8)、烷氧基(c≤6)、取代的烷氧基(c≤6)、烷硫基(c≤6)或取代的烷硫基(c≤6)。
在一些实施例中，r2为：
其中：
x2为-o-或-nrb-；其中
rb为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；并且
r6为氢、氨基、卤代、羟基、巯基、烷基(c≤6)、取代的烷基(c≤6)、杂芳基(c≤8)、取代的杂芳基(c≤8)、杂芳烷基(c≤8)、取代的杂芳烷基(c≤8)、烷氧基(c≤6)、取代的烷氧基(c≤6)、烷硫基(c≤6)或取代的烷硫基
(c≤6)。
在一些实施例中，r6为烷基(c≤6)，例如甲基。在其他实施例中，r6为取代的烷基(c≤6)。在其他实施例中，r6为烷硫基(c≤6)，例如-sch3。在其他实施例中，r6为取代的烷硫基(c≤6)。
在其他实施例中，r2为：
其中：
x3和x4各自独立地为-o-或-nrc-；其中
rc不存在，为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、芳基(c≤8)、芳烷基(c≤8)、杂芳基(c≤8)、杂芳烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；如果rc不存在，则与其结合的原子是双键的一部分；并且如果rc与原子结合，则rc不存在；并且
r7和r8各自独立地为氢、氨基、卤代、羟基、烷基(c1-3)、取代的烷基(c1-3)、芳基(c≤8)、取代的芳基(c≤8)、烷氧基(c1-3)、取代的烷氧基(c1-3)、烷硫基(c1-3)或取代的烷硫基(c1-3)。
在一些实施例中，r8为烷基(c1-3)，例如甲基。在其他实施例中，r8为取代的烷基(c1-3)。在其他实施例中，r8为芳基(c≤8)。在其他实施例中，r8为取代的芳基(c≤8)，例如4-氟苯基。在其他实施例中，r8为烷硫基(c1-3)，例如-sch3。在其他实施例中，r8为取代的烷硫基(c1-3)。
在其他实施例中，rc为芳基(c≤8)。在其他实施例中，rc为取代的芳基(c≤8)，例如4-氨基苯基、3-氟-4-氨基苯基、或3-三氟甲基-4-氨基苯基。在其他实施例中，rc为杂芳烷基(c≤8)。在其他实施例中，rc为取代的杂芳烷基(c≤8)，例如4-吡唑基甲基。
在其他实施例中，r2为：
其中：
x5、x6和x7各自独立地为-o-、-s-或-nrd-；其中
rd不存在，为氢或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；如果rd不存在，则与其结合的原子是双键的一部分；并且如果rd与原子结合，则rd不存在；并且
r9为氢、氨基、卤代、羟基、烷基(c1-3)、取代的烷基(c1-3)、芳基(c≤8)、取代的芳基(c≤8)、烷氧基(c1-3)或取代的烷氧基(c1-3)。
在一些实施例中，rd不存在或为氢。在一些实施例中，r9为烷基(c1-3)或取代的烷基(c1-3)。
在其他实施例中，r2为：
其中：
r10为氢、氨基、卤代、羟基、烷基(c1-3)、取代的烷基(c1-3)、芳基(c≤8)、取代的芳基(c≤8)、烷氧基(c1-3)或取代的烷氧基(c1-3)；并且
r11为烷基(c≤8)、杂芳基(c≤8)或取代的杂芳基(c≤8)。
在一些实施例中，r10为氢。
在一些实施例中，r11为烷基，例如甲基。在其他实施例中，r11为杂芳基(c≤8)。在其他实施例中，r11为取代的芳基(c≤8)，例如4-甲基噻唑-2-基。
在其他实施例中，r2为：
其中：
r12为氢、氨基、卤代、羟基、烷基(c1-3)、取代的烷基(c1-3)、芳基(c≤8)、取代的芳基(c≤8)、烷氧基(c1-3)或取代的烷氧基(c1-3)；并且
r13为烷基(c≤6)或取代的烷基(c≤6)。
在一些实施例中，r12为氢。在一些实施例中，r13为烷基(c≤6)，例如甲基。
在一些实施例中，将该化合物进一步定义为：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，将该化合物进一步定义为：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，将该化合物进一步定义为：
或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本公开提供了如下分子式的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本公开提供了药物组合物，其包含：
(a)本公开的化合物；以及(b)药学上可接受的载体。
在一些实施例中，配制药物组合物以用于给药：口服、脂肪内、动脉内、关节内、颅内、皮内、病变内、肌内、鼻内、眼内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、直肠内、鞘内、气管内、瘤内、脐内、阴道内、静脉内、囊内、玻璃体内、脂质体内、局部(locally)、粘膜、肠胃外、直肠、结膜下、皮下、舌下、局部(topically)、经口含化、经皮、阴道，以乳剂的形式、以脂质组合物的形式，经由导管、经由灌洗、经由连续输注、经由输注、经由吸入、经由注射、经由局部递送或经由局部灌注。在一些实施例中，将药物组合物配制成单位剂量。
在另一个方面，本公开提供治疗患者的疾病或病症的方法，包括给有此需要的患者施用治疗有效量的本公开的化合物或组合物。
在一些实施例中，疾病或病症是癌症，例如肿瘤、肉瘤、淋巴瘤、白血病、黑色素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤或精原细胞瘤。在一些实施例中，癌症是膀胱癌、血液癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、中枢神经系统癌、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、胆囊癌、胃肠道癌、生殖器癌、泌尿生殖道癌、头癌、肾癌、喉癌、肝癌、肺癌、肌肉组织癌、颈癌、口腔癌或鼻粘膜癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、脾癌、小肠癌、大肠癌、胃癌、睾丸癌或甲状腺癌。
在一些实施例中，该方法还包括第二种癌症治疗，例如手术、第二种化疗剂、放射疗法或免疫疗法。在一些实施例中，受试者是哺乳动物，如人。在一些实施例中，该方法包括施用化合物一次。在一些实施例中，该方法包括施用化合物两次或多次。
在另一个方面，本公开提供了抗体药物偶联物，其包含：
(a)抗体；以及
(b)本公开的化合物。
在一些实施例中，抗体和化合物通过接头(如可酶降解的接头)连接。在一些实施例中，抗体包含两种或多种与抗体偶联的化合物。
在另一个方面，本公开提供了制备如下分子式化合物的方法：
其中：
x1为-o-或-nra-；其中
ra为氢、一价胺保护基、或烷基(c≤8)、环烷基(c≤8)、-烷二基(c≤6)-环烷基(c≤8)、芳烷基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式；
y1和y2各自独立地为氨基、羟基或烷氧基(c≤8)、芳烷氧基(c≤8)、酰氧基(c≤8)、烷基氨基(c≤8)、二烷基氨基(c≤8)、酰氨基(c≤8)、或这些基团中任一者的取代形式、或-orc，其中：
rc为羟基保护基；
r1和r2各自独立地为氢或烷基(c≤12)、环烷基(c≤12)、烯基(c≤12)、炔基(c≤12)、芳基(c≤12)、或这些基团中任一者的取代形式；以及
包括在rh催化剂存在的情况下，使如下分子式化合物与o-(2，4-二硝基苯基)羟胺反应：
其中：
x1、y1、y2、r1和r2如上定义。
在某些实施例中，rh催化剂是rh(ii)催化剂，如rh2(esp)2。在一些实施例中，rh催化剂以约0.25％至约5％的摩尔百分比存在。在其他实施例中，摩尔百分比约为2％。
在一些实施例中，该方法包括加入约1∶1至约1∶5比率的分子式vi化合物与o-(2，4-二硝基苯基)羟胺。在其他实施例中，比率约为1∶1.5。
可以设想，本文描述的任何方法或组合物可以相对于本文描述的任何其他方法或组合物来实施。例如，一种方法合成的化合物可以根据不同的方法用于最终化合物的制备。
当在权利要求和/或说明书中与术语“包括”一起使用时，单词“一”的使用可以意味着“一个”，但是它也与“一个或多个”“至少一个”和“一个或多于一个”的含义一致。词语“大约”是指所述数字的5％的增加或减少。
通过下面详细的描述，本公开的其他目的、特点和优点将会变得显而易见。然而应当理解，这些详细说明和特定的实施例在指示本公开的优选实施例时，只是用于示范，因为根据此详细说明，在本公开的精神和范围内的各种变化和改进对于本领域技术人员将显而易见。
附图简要说明
以下附图构成本说明书的一部分并包括在本说明书内，以进一步说明本公开的某些方面。通过参考一个或多个附图，并结合本文给出的详细说明，可以更好地理解本公开。
图1a至图1h显示对messa细胞的杀伤测定：化合物1-4、紫杉醇和mmae(图1a)、mmae和8-12(图1b)、mmae和13-17(图1c)、mmae和18-22(图1d)、mm和23-27(图1e)、mm和28-32(图1f)、mmae和33-37(图1g)以及mmae、38-40、73、79和81(图1h)。
图2a至图2h显示对messadx细胞的杀伤测定：化合物1-4、紫杉醇和mmae(图2a)、mmae和8-12(图2b)、mmae和13-17(图2c)、mmae和18-22(图2d)、mmae和23-27(图2e)、mmae和28-32(图2f)、mmae和33-37(图2g)以及mmae、38-40、73、79和81(图2h)。
图3a至图3h显示对hek293t细胞的杀伤测定：化合物1-4、紫杉醇和mmae(图3a)、mmae和8-12(图3b)、mmae和13-17(图3c)、mmae和18-22(图3d)、mmae和23-27(图3e)、mmae和28-32(图3f)、mmae和33-37(图3g)以及mmae、38-40、73、79和81(图3h)。
图4a显示了化合物10的x射线晶体结构(图4a)，图4b显示了化合物39的x射线晶体结构(图4b)。
具体实施方式
本公开提供了在12，13位含有氮丙啶环的埃博霉素衍生物。这些化合物可用于治疗癌症，包括用作抗体药物偶联物中的化学有效载荷。在一些方面，相对于已知的埃博霉素，这些化合物显示出改进的活性或其他药理学特征。
本文还提供了从含双键的起始原料制备含氮丙啶的埃博霉素类似物的方法。利用ess-kürti-falck氮丙啶化反应条件，将甲基酮衍生物转化为含埃博霉素类似物的氮丙啶。为了得到该类似物，在引入氮丙啶基团之后，在horner-wadsworth-emmons条件下，使甲基酮与膦酸酯叶立德反应，得到最终产物。
i.化合物及其制剂
a.化合物
例如，在发明内容部分以及下面的实例和权利要求中示出了本公开所提供的化合物。可以使用实例部分中概述的方法来制备这些化合物。本文所述的含埃博霉素类似物的氮丙啶可以根据例如以下实例部分所述的方法合成。这些方法可以使用本领域技术人员应用的有机化学的原理和技术进一步修改和优化。例如，在march的《高级有机化学：反应、机制和结构》(advancedorganicchemistry：reactions，mechanisms，andstructure)(2007)中，就教授了这些原理和技术，其通过引用合并于此。
本文所述的含埃博霉素类似物的氮丙啶可以含有一个或多个不对称取代的碳原子或氮原子，并且可以以光学活性或外消旋形式分离。因此，除非具体指明特定的立体化学或异构体形式，否则意指化学式的所有手性、非对映异构体、外消旋形式、差向异构形式和的所有几何异构体形式。化合物可以外消旋物和外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单个非对映异构体的形式存在。在一些实施例中，获得单一的非对映异构体。本公开化合物的手性中心可以具有s或r构型。
用于表示本文所述含埃博霉素类似物的氮丙啶的化学式通常仅显示可能的几种不同互变异构体中的一种。例如，已知许多类型的酮基与相应的烯醇基平衡存在。类似地，许多类型的亚胺基与烯胺基平衡存在。不管给定化合物描述了哪种互变异构体，也不管哪种互变异构体最普遍，给定化学式的所有互变异构体都是意指的。
本文所述的含埃博霉素类似物的氮丙啶还可以具有这样的优点：与现有技术中已知的化合物相比，它们可以更有效、毒性更低、作用更长、更强、产生更少的副作用、更容易吸收、和/或具有更好的药代动力学特征(例如，更高的口服生物利用度和/或更低的清除率)，和/或具有其他有用的药理学、物理或化学性质，无论是用于本文所述的适应症还是其他用途。
此外，构成本文所述的含埃博霉素类似物的氮丙啶的原子旨在包括这些原子的所有同位素形式。本文中使用的同位素包括具有相同原子序数但不同质量数的那些原子。作为一般示例而非限制，氢同位素包括氚和氘，碳同位素包括13c和14c。
本文描述的埃博霉素类似物也可以前药形式存在。由于已知前药能提高药物的许多期望质量(例如溶解度、生物利用度、制造等)，如果需要，在本公开的一些方法中使用的化合物可以前药形式递送。因此，本公开设想了本公开化合物的前药以及递送前药的方法。本文所述的含埃博霉素类似物的氮丙啶的前药可以通过修饰化合物中存在的官能团来制备，使得所述修饰在常规操作中或在体内裂解为母体化合物。因此，前药包括例如本文所述的化合物，其中羟基、氨基或羧基与任何基团键合，当将前药给药于受试者时，所述基团分别裂解形成羟基、氨基或羧酸。
应当认识到，形成本文提供的化合物的任何盐形式的一部分的特定阴离子或阳离子不是关键的，只要该盐作为整体是药理学上可接受的。药学上可接受的盐的其他实例及其制备和使用方法在《药用盐手册：性能和用途》(2002)中有介绍，其通过引用并入本文。
有机化学领域的技术人员将理解，许多有机化合物可以与溶剂形成络合物，在所述溶剂中它们反应或从所述溶剂中沉淀或结晶。这些络合物被称为“溶剂化物”。例如，含有水的络合物被称为“水合物”。本文所述埃博霉素类似物的溶剂化物在本发明的范围内。有机化学领域的技术人员还将理解，许多有机化合物可以以一种以上的结晶形式存在。例如，结晶形式可能因溶剂化物而异。因此，本文所述埃博霉素类似物的所有结晶形式都在本发明的范围内。
b.制剂
在本公开的一些实施例中，含有埃博霉素类似物的氮丙啶包含在药物制剂中。用于制备微球和/或微胶囊的材料是，例如，可生物降解/可生物溶蚀的聚合物，例如羟基乳酸聚合物、聚(异丁基氰基丙烯酸酯)、聚(2-羟乙基-1-谷氨酰胺)和聚乳酸。当配制控释胃肠外制剂时，可以使用的生物相容性载体是碳水化合物(例如右旋糖酐)、蛋白质(例如白蛋白)、脂蛋白或抗体。用于植入物的材料可以是不可生物降解的(例如聚二甲基硅氧烷)或可生物降解的(例如聚己内酯、聚乳酸、聚乙醇酸或聚原酸酯或其组合物)。
口服制剂包括含有活性成分(如本文所述埃博霉素类似物)和无毒药学上可接受的赋形剂的混合物的片剂。这种制剂是技术人员已知的。赋形剂可以是例如惰性稀释剂或填充剂(例如蔗糖、山梨醇、糖、甘露醇、微晶纤维素、淀粉(包括马铃薯淀粉)、碳酸钙、氯化钠、乳糖、磷酸钙、硫酸钙或磷酸钠)；粒化剂和崩解剂(例如，纤维素衍生物(包括微晶纤维素)、淀粉(包括马铃薯淀粉)、交联羧甲基纤维素钠、藻酸盐或藻酸)；粘合剂(例如蔗糖、葡萄糖、山梨醇、阿拉伯胶、海藻酸、海藻酸钠、明胶、淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、硅酸镁铝、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；以及润滑剂、助流剂和抗粘剂(例如硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸、二氧化硅、氢化植物油或滑石)。其他药学上可接受的赋形剂可以是着色剂、调味剂、增塑剂、湿润剂、缓冲剂等。
片剂可以是未包衣的，或者可以用已知技术包衣，任选地延迟在胃肠道中的分解和吸收，从而提供更长时间的持续作用。包衣可以适于以预定模式释放活性药物(例如，为了获得控释制剂)，或者可以适于直到通过胃后才释放活性药物(肠溶包衣)。包衣可以是糖衣、薄膜包衣(例如基于羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、丙烯酸酯共聚物、聚乙二醇和/或聚乙烯吡咯烷酮)，或肠溶包衣(例如基于甲基丙烯酸共聚物、醋酸邻苯二甲酸纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、醋酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素、醋酸邻苯二甲酸聚乙烯酯、虫胶和/或乙基纤维素)。此外，可以使用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
ii.癌症和其他过度增殖性疾病
虽然过度增殖性疾病可能与任何导致细胞开始不受控制地繁殖的疾病有关，但最典型的示例是癌症。癌症的关键因素之一是细胞的正常凋亡周期被中断，因此中断细胞生长的药剂作为治疗这些疾病的治疗药剂是重要的。在本公开中，本文所述的含有埃博霉素类似物的氮丙啶可用于减少细胞计数，因此可潜在地用于治疗多种类型的癌症。在一些方面，本文所述的含埃博霉素类似物的氮丙啶有望用于治疗几乎任何恶性肿瘤。
可用本公开化合物治疗的癌细胞包括但不限于来自膀胱、血液、骨、骨髓、脑、乳房、结肠、食道、胃肠、牙龈、头部、肾脏、肝脏、肺、鼻咽、颈部、卵巢、前列腺、皮肤、胃、胰腺、睾丸、舌头、子宫颈或子宫的细胞。此外，癌症可以具体为以下组织学类型，但不限于此：恶性肿瘤；癌；未分化癌；巨细胞癌和梭形细胞癌；小细胞癌；乳头状癌；鳞状细胞癌；淋巴上皮癌；基底细胞癌；毛母质细胞癌；移行细胞癌；乳头状移行细胞癌；腺癌；恶性胃泌素瘤；胆管癌；肝细胞癌；合并肝细胞癌和胆管癌；小梁腺癌；腺样囊性癌；腺瘤性息肉腺癌；家族性结肠息肉病腺癌；实体癌；恶性类癌；细支气管-肺泡腺癌；乳头状腺癌；嫌色细胞癌；嗜酸细胞癌；嗜氧腺癌；嗜碱细胞癌；透明细胞腺癌；颗粒细胞癌；滤泡腺癌；乳头状腺癌和滤泡腺癌；非包囊硬化性癌；肾上腺皮质癌；子宫内膜样癌；皮肤附件癌；顶浆腺癌；皮脂腺腺癌；角化腺癌；粘液表皮样癌；囊腺癌；乳头状囊腺癌；乳头状浆液性囊腺癌；粘液性囊腺癌；粘液腺癌；印戒细胞癌；浸润性导管癌；髓样癌；小叶癌；炎性癌；乳腺paget病；腺泡细胞癌；腺鳞癌；腺癌伴鳞状化生；恶性胸腺瘤；恶性卵巢间质肿瘤；恶性卵泡膜细胞瘤；恶性颗粒细胞肿瘤；恶性男性母细胞瘤；支持细胞癌；恶性睾丸间质细胞瘤；恶性脂质细胞肿瘤；恶性副神经节瘤；恶性乳房外副神经节瘤；嗜铬细胞瘤；血管球血管瘤病；恶性黑色素瘤；无色素黑色素瘤；浅表扩散黑色素瘤；巨大色素痣中的恶性黑色素瘤；上皮样细胞黑色素瘤；恶性蓝色痣；肉瘤；纤维肉瘤；恶性纤维组织细胞瘤；粘液肉瘤；脂肪肉瘤；平滑肌肉瘤；横纹肌肉瘤；胚胎横纹肌肉瘤；肺泡横纹肌肉瘤；间质肉瘤；恶性混合肿瘤；苗勒氏混合瘤；肾母细胞瘤；肝母细胞瘤；癌肉瘤；恶性间叶瘤；恶性勃勒纳瘤；恶性叶状肿瘤；滑膜肉瘤；恶性间皮瘤；无性细胞瘤；胚胎癌；恶性畸胎瘤；恶性卵巢甲状腺肿；绒毛膜癌；恶性中肾瘤；血管肉瘤；恶性血管内皮瘤；卡波西肉瘤；恶性血管外皮细胞瘤；淋巴管肉瘤；骨肉瘤；近皮质骨肉瘤；软骨肉瘤；恶性软骨母细胞瘤；间质软骨肉瘤；骨巨细胞瘤；尤文氏肉瘤；恶性牙源性肿瘤；成釉细胞牙肉瘤；恶性成釉细胞瘤；成釉细胞性纤维肉瘤；恶性松果体瘤；脊索瘤；恶性胶质瘤；室管膜瘤；星形细胞瘤；原生质体星形细胞瘤；纤维星形细胞瘤；星形胶质母细胞瘤；胶质母细胞瘤；少突神经胶质瘤；少突神经胶质母细胞瘤；原始神经外胚层；小脑肉瘤；神经节母细胞瘤；神经母细胞瘤；嗅源性肿瘤；恶性脑膜瘤；神经纤维肉瘤；恶性神经鞘瘤；恶性颗粒细胞瘤；恶性淋巴瘤；霍奇金病；类肉芽肿；小淋巴细胞恶性淋巴瘤；弥漫性大细胞恶性淋巴瘤；滤泡性恶性淋巴瘤；蕈样肉芽肿病；其他特定的非霍奇金淋巴瘤；恶性组织细胞增生症；多发性骨髓瘤；肥大细胞肉瘤；免疫增生性小肠疾病；白血病；淋巴白血病；浆细胞白血病；红白血病；淋巴肉瘤细胞白血病；髓细胞白血病；嗜碱性白血病；嗜酸性白血病；单核细胞白血病；肥大细胞白血病；巨核母细胞性白血病；髓样肉瘤；多毛细胞白血病。在某些方面，肿瘤可包括骨肉瘤、血管肉瘤、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、尤文氏肉瘤、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤或白血病。
iii.细胞靶向部分
在某些方面，本公开提供了直接或通过接头偶联到细胞靶向部分的化合物。在一些实施例中，化合物与细胞靶向部分的偶联提高了化合物在治疗疾病或病症中的有效性。根据实施例的细胞靶向部分可以是例如抗体、生长因子、激素、肽、适体、小分子(如激素)、显象剂或辅因子或细胞因子。例如，根据实施例的细胞靶向部分可能与肝癌细胞(如hep3b细胞)结合。已证实gp240抗原在多种黑色素瘤中表达，但在正常组织中不表达。因此，在某些实施例中，本公开的化合物可用于与特定抗原的抗体结合，该抗原由癌细胞表达，但不在正常组织中表达。
在某些附加实施例中，设想癌细胞靶向部分与多种类型的癌细胞结合。例如，8h9单克隆抗体和由其衍生的单链抗体与在乳腺癌、肉瘤和神经母细胞瘤上表达的糖蛋白结合(onda等人，2004)。另一个示例是美国专利公开no.2004/005647和winthrop等人(2003)中描述的细胞靶向剂，其与一种在多种癌症类型上表达的抗原muc-1结合。因此，应了解，在某些实施例中，根据实施例的细胞靶向结构可靶向多种癌症或肿瘤类型。
此外，某些细胞表面分子在肿瘤细胞中高度表达，包括激素受体，如人绒毛膜促性腺激素受体和促性腺激素释放激素受体(nechushtan等人，1997)。因此，相应的激素可用作癌症治疗中的细胞特异性靶向部分。另外，可使用的细胞靶向部分包括辅因子、糖、药物分子、显像剂或荧光染料。已知许多癌细胞过度表达叶酸受体，因此叶酸或其他叶酸衍生物可用作偶联物，以触发本公开的偶联物与细胞之间的细胞特异性相互作用(campbell等人，1991；weitman等人，1992)。
由于在不同谱系的造血细胞中已鉴定出大量的细胞表面受体，这些受体的特异性配体或抗体可作为细胞特异性靶向部分。il-2也可用作嵌合蛋白中的细胞特异性靶向部分以靶向il-2r+细胞。或者，其他分子如b7-1、b7-2和cd40也可用于特异性地靶向活化的t细胞(《白细胞抗原事实手册》(theleucocyteantigenfactsbook)，1993，barclay等人(编辑)，美国学术出版社)。此外，b细胞表达cd19、cd40和il-4受体，并且可以被结合这些受体的部分(例如cd40配体、il-4、il-5、il-6和cd28)靶向。免疫细胞(如t细胞和b细胞)的消除在淋巴样肿瘤的治疗中特别有用。
可用于靶向特定细胞亚群的其他细胞因子包括白细胞介素(il-1至il-15)、粒细胞集落刺激因子、巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、白血病抑制因子、肿瘤坏死因子、转化生长因子、表皮生长因子、胰岛素样生长因子和/或成纤维细胞生长因子(thompson(编辑)，1994，《细胞因子手册》(thcytokinehandbook)，美国学术出版社，圣地亚哥)。在一些方面，靶向多肽是与fn14受体结合的细胞因子，例如tweak(参见，例如，winkles，2008；zhou等人，2011以及burkly等人，2007，以引用方式并入本文)。
技术人员认识到有许多已知的细胞因子，包括红细胞生成素(四螺旋束)(如epo(促红细胞生成素))、il-2(t-细胞生长因子)、il-3(多集落csf)、il-4(bcgf-1、bsf-1)、il-5(bcgf-2)、il-6il-4(ifn-2、bsf-2、bcdf)、il-7、il-8、il-9、il-11、il-13(p600)、g-csf、il-15(t-细胞生长因子)、gm-csf(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)、osm(om、抑瘤素m)和lif(白血病抑制因子)；干扰素类(如ifn-γ、ifn-α和ifn-β)；免疫球蛋白超家族(如b7.1(cd80)和b7.2(b70、cd86))；tnf家族(如tnf-α(恶病质素)、tnf-β(淋巴毒素、lt、lt-α)、lt-β、cd40配体(cd40l)、fas配体(fasl)、cd27配体(cd27l)、cd30配体(cd30l)和4-1bbl)；以及那些未分配到特定家族的(如tgf-β、il1α、il-1β、il-1ra、il-10(细胞因子合成抑制剂f)、il-12(nk细胞刺激因子)、mif、il-16、il-17(mctla-8)和/或il-18(igif、干扰素-γ诱导因子))。此外，抗体重链的fc部分可用于靶向fc受体表达细胞，例如使用ige抗体的fc部分来靶向肥大细胞和嗜碱性细胞。
此外，在一些方面，细胞靶向部分可以是肽序列或环肽。在例如美国专利no.6,232,287、no.6,528,481、no.7,452,964、no.7,671,010、no.7,781,565和no.8,507,445中提供了可根据实施例使用的实例、细胞靶向肽和组织靶向肽，每一个均以引用方式并入本文。
因此，在一些实施例中，细胞靶向部分是抗体或高亲和性多聚体。抗体和高亲和性多聚体可通过几乎任何细胞表面标记物产生，因此，提供了将grb靶向递送至几乎任何兴趣细胞群的方法。产生可用作细胞靶向部分的抗体的方法详述如下。生成与给定细胞表面标记物结合的高亲和性多聚体的方法在美国专利公开no.2006/0234299和no.2006/0223114中详细说明，每一个均以引用方式并入本文。
此外，预期本文描述的化合物可以与纳米粒子或其他纳米材料偶联。一些纳米粒子的非限制性实例包括金属纳米粒子(例如纳米金粒子或纳米银粒子)或聚合物纳米粒子(例如聚-1-乳酸或聚(乙烯)乙二醇聚合物)。可能与这些化合物偶联的纳米颗粒和纳米材料包括在美国专利公开no.2006/0034925、no.2006/0115537、no.2007/0148095、no.2012/0141550、no.2013/0138032和no.2014/0024610以及pct公开no.2008/121949、no.2011/053435和no.2014/087413中描述的那些，每一个均以引用方式并入本文。
iv.治疗
a.药物制剂和给药途径
在拟定临床应用时，有必要以适用于预期应用的形式制备药物组合物。在一些实施例中，设想了含有本公开的含埃博霉素类似物的氮丙啶的此类制剂。通常，这将包括制备基本上无热原的组合物以及可能对人类或动物有害的其他杂质。
人们通常希望使用合适的盐和缓冲液来使递送载体稳定并允许靶细胞摄取。当重组细胞引入患者体内时，也将使用缓冲液。本公开的水性组合物包含溶解或分散在药学上可接受的载体或水性介质中的有效量的细胞载体。此类组合物也称为接种物。术语“药学上或药理学上可接受的”是指分子实体和组合物在施用于动物或人类时不产生不利的、过敏的或其他不良反应。如本文所用，“药学上可接受的载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。这种介质和药剂用于药物活性物质在本领域中是众所周知的。除了任何常规的介质或药剂与本公开的载体或细胞不相容的情况之外，其在治疗组合物中的应用是可以预期的。补充活性成分也可以加入到组合物中。
本发明的活性成分可能包括经典的药物制剂。根据本公开的这些组合物的给药将通过任何普通途径进行，只要靶组织可通过该途径获得。此类途径包括经口、鼻、颊、直肠、阴道或局部途径。或者，可通过原位、皮内、皮下、肌内、瘤内、腹膜内或静脉内注射给药。如上所述，这些组合物通常作为药学上可接受的组合物给药。
活性化合物也可以通过肠胃外或腹膜内给药。活性化合物作为游离碱或药理学上可接受的盐的溶液可以在水中制备，该溶液与表面活性剂(如羟丙基纤维素)适当混合。分散体也可在甘油、液体聚乙烯二醇及其混合物和油中制备。在一般的储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物的生长。
适于注射的药物形式包括无菌水溶液或分散体以及用于临时制备无菌注射溶液或分散体的无菌粉末。在所有情况下，该形式必须是无菌的，并且必须是易注射的流体。其必须在生产和储存条件下保持稳定，并且必须防止微生物(如细菌和真菌)的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、其合适的混合物、以及植物油。适当的流动性可以例如通过使用包衣(如卵磷脂)、通过在分散的情况下保持所需的粒度和通过使用表面活性剂来保持。可以通过各种抗细菌和抗真菌剂(例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等)来防止微生物的作用。在许多情况下，最好包括等渗剂，例如糖或氯化钠。在特定实施例中，可注射组合物的延长吸收可以通过在所述组合物中使用延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)来实现。
无菌注射液的制备方法是将所需量的活性化合物加入到适当的溶剂中，并根据需要加入上述几种其他成分，然后过滤灭菌。通常，分散体是通过将各种无菌活性成分掺入无菌媒介物中制备的，该媒介物含有基本分散介质和上述所需的其他成分。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，其产生来自先前无菌过滤的溶液中的活性成分和任何其他所需成分的粉末。
如本文所用，“药学上可接受的载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。这种介质和药剂用于药物活性物质在本领域中是众所周知的。除了任何常规的介质或药剂与活性成分不相容的情况之外，其在治疗组合物中的应用是可以预期的。补充活性成分也可以加入到组合物中。
对于口服给药，本文所述的含埃博霉素类似物的氮丙啶可与赋形剂结合，并以不可摄取的漱口水和洁齿剂的形式使用。漱口水可以在适当的溶剂中加入所需量的活性成分，例如硼酸钠溶液(dobell溶液)。或者，活性成分可加入含有硼酸钠、甘油和碳酸钾的防腐洗液中。活性成分也可以分散在洁齿剂中，包括：凝胶、糊剂、粉末和浆液。可将活性成分以治疗有效量添加到可能包括水、黏合剂、研磨剂、调味剂、发泡剂和润湿剂的糊剂洁齿剂中。
本公开的组合物可以配制成中性或盐的形式。药学上可接受的盐包括酸加成盐(由蛋白质的游离氨基形成)，其由无机酸(如盐酸或磷酸)或有机酸(如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等)形成。由游离羧基形成的盐也可以衍生自无机碱(如钠、钾、铵、钙或铁的氢氧化物)和有机碱(如异丙胺、三甲胺、组氨酸、普鲁卡因等)。
在配制时，溶液将以与剂量制剂相容的方式并且以治疗有效的量给药。该制剂易于以多种剂型给药，例如注射液、药物释放胶囊等。例如，对于水性溶液中的胃肠外给药，如果需要，应对溶液进行适当缓冲，并且液体稀释剂首先与足量的生理盐水或葡萄糖等渗。这些特定水溶液特别适用于静脉、肌内、皮下和腹膜内给药。在这方面，根据本公开内容，可以使用的无菌水性介质对于本公开领域技术人员来说是已知的。例如，一个剂量可以溶解在1ml等渗nacl溶液中，或者加入1000ml皮下注射液，或者在建议的输液部位注射(见《雷明登药学大全》(“remington′spharmaceuticalsciences”)，第15版，第1035-1038页和第1570-1580页)。根据受治疗者的情况，剂量必然会有某些变化。在任何情况下，给药负责人将确定个体受试者的适当剂量。此外，对于人体给药，制剂应符合fda依从性与生物制品质量办公室的生物标准与质量控制部门要求的无菌性、热原性、一般安全性和纯度标准。
b.治疗方法
特别地，本文公开了可用于治疗受试者(例如人类受试者)癌症的组合物。上述组合物优选地以有效量给予哺乳动物(例如啮齿动物、人类、非人灵长类动物、犬、牛、羊、马、猫等)，有效量是指能够在治疗受试者中产生期望结果的量(例如，引起癌细胞凋亡或杀死细菌细胞)。本公开方法中使用的组合物的毒性和治疗有效性可以通过标准制药程序来确定。在医学和兽医学领域众所周知的是，任何一种动物的剂量取决于许多因素，包括受试者的体型、体表面积、体重、年龄、要施用的特定组合物、施用时间和途径、一般健康状况、感染或癌症的临床症状以及同时施用的其他药物。本文所述的组合物通常以诱导癌细胞死亡(例如，诱导癌细胞凋亡)的剂量给药，如通过鉴定血液学参数(全血计数-cbc)或癌细胞生长或增殖的降低来分析。在一些实施例中，用于诱导癌细胞凋亡的含埃博霉素类似物的氮丙啶的量计算为约0.01mg/天至约10,000mg/天。在一些实施例中，该量为约1mg/天至约1,000mg/天。在一些实施例中，这些剂量可基于特定患者的生物因素减少或增加，例如如果口服给药，药物代谢分解增加或减少、或消化道摄取减少。此外，埃博霉素类似物可能更有效，因此需要更小的剂量以达到类似的效果。这种剂量通常每天给药一次，持续数周，或直至达到癌细胞的充分减少。
本公开的治疗方法(包括预防性治疗)通常包括给予有需要的受试者(包括哺乳动物，特别是人)治疗有效量的本文所述的组合物。这种治疗将适用于患有疾病或病症，具有其症状，或对疾病、病症敏感或有患病风险的受试者，尤其是人类。可以通过受试者或保健提供者的诊断测试或意见(例如，基因测试、酶或蛋白质标记物、标记物(如本文定义的)、家族史等)的任何客观或主观判断来确定那些受试者是否“处于危险中”。
在一个实施例中，本发明提供了一种监测治疗进展的方法。该方法包括用细胞表面蛋白作为诊断标记(其可以包括但不限于，例如cd34、cd38、cd90和cd117)或诊断测量(例如，筛选、测定)，来确定患有或易患与癌症(例如白血病)相关的病症或症状的受试者的血液参数和/或癌症干细胞(csc)分析的变化水平的步骤，其中已经给予该受试者治疗量的本文所述的组合物。在该方法中确定的标记物水平可以与健康正常的对照者或其他患病患者中标记物的已知水平进行比较，以确定受试者的疾病状态。在优选实施例中，在比第一水平测定晚的时间点测定受试者中标记物的第二水平，并将这两个水平进行比较以监测疾病进程或治疗有效性。在某些优选实施例中，根据本文所述的方法，在开始治疗之前确定受试者中标记物的治疗前水平；然后可以将该治疗前标记物水平与治疗开始后受试者的标记物水平进行比较，以确定治疗的有效性。
c.联合疗法
可以设想，本文所述埃博霉素类似物可与一种或多种癌症疗法或可缓解患者所经历的一种或多种副作用的化合物联合治疗。在癌症治疗领域，联合治疗模式是很常见的。以下是对可以与本公开的治疗结合使用的治疗的一般性讨论。
为了使用本公开的方法和组合物治疗癌症，通常将肿瘤细胞或受试者与化合物和至少一种其他疗法接触。这些治疗将以可有效降低一个或多个疾病参数的组合量提供。该过程可以包括使细胞/受试者同时与两种药剂/疗法接触，例如，使用包含两种药物的单一组合物或药理学制剂，或者通过使细胞/受试者同时与两种不同的组合物或制剂接触，其中一种组合物包含该化合物，另一种组合物包含另一种药物。
或者，本文所述的含埃博霉素类似物的氮丙啶可以在其他治疗之前或之后间隔数分钟至数周。一般情况下，应确保每次递送之间的一段相当长的时间不会到期，以便治疗仍能够对细胞/受试者产生有利的联合效应。在这种情况下，可以预期的是，在彼此相距约12-24小时内，在彼此相距约6-12小时内，或者仅具有约1-2小时的延迟时间，可以用两种形式接触细胞。在某些情况下，可能需要显著延长治疗时间；然而，在每次给药之间，间隔数天(2天、3天、4天、5天、6天或7天)至数周(1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周或8周)。
也可以想象，需要多次给予化合物或其他疗法。可采用各种组合，其中本公开的化合物为“a”，另一种疗法为“b”，如下例所示：
a/b/ab/a/bb/b/aa/a/bb/a/aa/b/bb/b/b/ab/b/a/b
a/a/b/ba/b/a/ba/b/b/ab/b/a/ab/a/b/ab/a/a/bb/b/b/a
a/a/a/bb/a/a/aa/b/a/aa/a/b/aa/b/b/bb/a/b/bb/b/a/b
还考虑了其他组合。以下是对可以与本公开的化合物联合使用的癌症治疗的一般性讨论。
1.化学疗法
术语“化学疗法”是指使用药物来治疗癌症。“化疗剂”用于表示在癌症的治疗中施用的化合物或组合物。这些药剂或药物按其在细胞内的活性模式进行分类，例如它们是否影响细胞周期以及影响细胞周期的什么阶段。或者，药剂可以基于其直接与dna交联、嵌入dna或通过影响核酸合成来诱导染色体和有丝分裂畸变的能力来进行表征。大多数化疗剂属于以下类别：烷化剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、有丝分裂抑制剂和亚硝基脲。
化疗剂的示例包括烷化剂，诸如噻替哌和环磷酰胺；烷基磺酸盐，诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，诸如苯并多巴、卡波醌、甲基脲多巴和脲多巴；乙烯亚胺和甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、三伸乙蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三甲基三聚氰胺；番荔枝内酯(尤其是布拉它辛和布拉它辛酮)；喜树碱(包括合成类似物拓扑替康)；苔藓抑素；卡利司他汀；cc-1065(包括其阿多来新、卡泽来新和比泽来新合成类似物)；隐藻素(尤其是隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；多卡霉素(duocarmycin)(包括合成类似物kw-2189和cb1-tm1)；软珊瑚醇(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑素；氮芥类，诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌氮芥、异环磷酰胺、二氯甲基二乙胺、盐酸甲氧氮芥、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇、泼尼氮芥、三芥环磷酰胺、尿嘧啶氮芥(uracilmustard)；亚硝基脲类，诸如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素类，诸如烯二炔类抗生素(例如，加利车霉素，尤其是加利车霉素γ1和加利车霉素ω1)；达内霉素，包括达内霉素a；uncialamycin及其衍生物；双膦酸盐，诸如氯膦酸盐；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新抑癌素发色团和相关色蛋白烯二炔抗氧化发色团、阿克拉希霉素(aclacinomysin)、放线菌素、氨茴霉素(authrarnycin)、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素c、卡柔比星、洋红霉素、嗜癌菌素、色霉素、放线菌素d、柔红霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-l-正亮氨酸、多柔比星(包括吗啉代多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、2-吡咯烷酮多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、依达比星、马塞罗霉素、丝裂霉素(诸如丝裂霉素c)、麦考酚酸、诺拉霉素(nogalarnycin)、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链脲菌素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁或佐柔比星；抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-fu)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，例如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷；雄激素类，诸如卡普睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，诸如亚叶酸；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；阿莫司汀(bestrabucil)；比生群；依达曲沙；defofamine；秋水仙胺；地吖醌；依氟鸟氨酸(eflornithine)；依利醋铵；埃博霉素；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美登素类化合物，诸如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇(mopidamol)；尼曲吖啶(nitracrine)；喷司他丁；苯来美特；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸(podophyllinicacid)；乙肼；普鲁苄肼；psk多糖络合物；雷佐生；根霉素；西佐喃；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2，2′，2″-三氯三乙胺；单端孢霉烯族毒素类(尤其是t-2毒素、疣孢菌素a(verrucarina)、杆孢菌素a和蛇形菌素)；乌拉坦(urethan)；长春地辛；达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿糖胞苷(“ara-c”)；环磷酰胺；紫杉烷类(taxoids)，例如紫杉醇和多西他赛(docetaxel)；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；铂配位络合物，诸如顺铂、奥沙利铂和卡铂；长春碱；铂；依托泊苷(vp-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨(vinorelbine)；替尼泊苷；依达曲沙；柔红霉素；希罗达；伊班膦酸盐；伊立替康(例如，cpt-11)；拓扑异构酶抑制剂rfs2000；二氟甲基鸟氨酸(dmfo)；维甲酸，诸如视黄酸；卡培他滨；顺铂(cddp)、甲基苄肼、普卡霉素(plicamycin)、他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬、雌激素受体结合药剂、他克唑(taxol)、诺维苯(navelbine)、法呢基蛋白转移酶抑制剂、反式铂，以及上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
2.放射疗法
放射治疗，也称为放射疗法，是通过电离辐射治疗癌症和其他疾病。电离辐射储存能量，通过破坏遗传物质来损伤或破坏治疗区域的细胞，使这些细胞不可能继续生长。虽然辐射会同时损伤癌细胞和正常细胞，但正常细胞能够自我修复并正常工作。
根据本发明所使用的放射疗法可以包括但不限于使用γ-射线、x射线和/或向肿瘤细胞定向递送放射性同位素。还考虑了dna损伤因子的其他形式，如微波和uv辐射。最有可能的是所有这些因素影响对dna、对dna前体、对dna的复制和修复以及对染色体的装配和维护的广泛损伤。x射线的剂量范围从长时间(3至4周)12.9至51.6mc/kg的日剂量，到0.516至1.55c/kg的单次剂量。放射性同位素的剂量范围差异很大，并且取决于同位素的半衰期、所发出辐照的强度和类型，以及赘生性细胞的摄入。
放疗可能包括使用放射性标记抗体将放射剂量直接输送至癌症部位(放射性免疫疗法)。抗体是机体对抗原(被免疫系统识别为异物的物质)的存在做出反应而产生的高度特异性蛋白质。一些肿瘤细胞含有特异性抗原，所述特异性抗原可触发产生肿瘤特异性抗体。可在实验室中制备大量这些抗体，并附着于放射性物质(这一过程称为放射性标记)。一旦注入体内，抗体会主动寻找癌细胞，通过辐射的细胞杀伤(细胞毒性)作用破坏癌细胞。这种方法可以最大程度降低对健康细胞造成辐射损伤的风险。
适形放射治疗使用与正常放射治疗相同的放射治疗机器，即线性加速器，但是在x射线束的路径上放置金属块，以改变其形状从而匹配癌症的形状。这可确保对肿瘤给予更高的辐射剂量。健康的周围细胞和附近结构接受较低剂量的辐射，因此副作用的可能性降低。一种被称为多叶准直仪的装置已经开发出来，可以作为金属块的替代品。多叶准直仪由许多固定在直线加速器上的金属片组成。每层都可以调整，使放疗光束可以在不需要金属块的情况下成形到治疗区域。放射治疗机的精确定位对于适形放射治疗非常重要，并且在每次治疗开始时可以使用特殊的扫描机来检查内部器官的位置。
高分辨率强度调制放射疗法也使用多叶准直仪。在该治疗期间，在进行治疗的同时，移动多叶准直仪的图层面板。这种方法有可能实现更精确的治疗波束成形，并允许放射治疗的剂量在整个治疗区域内保持恒定。
尽管研究表明，适形放射治疗和调强放射治疗可以减少放射治疗的副作用，但如此精确地形成治疗区域有可能阻止治疗区域外的微小癌细胞破坏。这意味着使用这些专门的放射治疗技术，癌症在未来复发的风险可能会更高。
科学家们也在寻找提高放射疗法有效性的方法。正在研究两种类型的研究药物对接受辐射的细胞的作用。放射增敏剂使肿瘤细胞更容易受损，放射保护剂保护正常组织免受辐射影响。也正在研究热疗(即热的使用)在使组织对辐射敏感方面的有效性。
3.免疫疗法
在癌症治疗的背景下，免疫疗法通常依赖于使用免疫效应细胞和分子来靶向和破坏癌细胞。曲妥珠单抗(赫赛汀tm)就是此类示例。免疫效应物可以是例如对肿瘤细胞表面上的某些标记物具有特异性的抗体。单独的抗体可以充当治疗的效应物，或者其可以募集其他细胞来实际影响细胞杀伤。该抗体还可与药物或毒素(化疗、放射性核素、蓖麻毒蛋白a链、霍乱毒素、百日咳毒素等)偶联，且仅用作靶向试剂。或者，效应物可以是携带表面分子的淋巴细胞，所述表面分子与肿瘤细胞靶标直接或间接地相互作用。各种效应器细胞包括细胞毒性t细胞和nk细胞。治疗方式的组合，即直接细胞毒性活性和erbb2的抑制或减少，将在erbb2过度表达癌症的治疗中提供治疗益处。
在免疫疗法的一个方面中，肿瘤细胞必须带有一些易于靶向(即，不存在于大多数其他细胞上)的标记物。存在许多肿瘤标记物，并且在本公开实施例的背景下，这些肿瘤标记物中的任何一种可适用于靶向。常见的肿瘤标记物包括癌胚抗原、前列腺特异性抗原、泌尿系统肿瘤相关抗原、胎儿抗原、酪氨酸酶(p97)、gp68、tag-72、hmfg、唾液酸化lewis抗原、muca、mucb、plap、雌激素受体、层粘连蛋白受体、erbb和p155。免疫疗法的替代方面是将抗癌效应与免疫刺激效应组合。还存在免疫刺激分子，包括：细胞因子，诸如il-2、il-4、il-12、gm-csf、γ-ifn；趋化因子，诸如mip-1、mcp-1、il-8；以及生长因子，诸如flt3配体。结合免疫刺激分子，或者作为蛋白质，或者使用基因递送结合肿瘤抑制剂，已经显示出增强抗肿瘤效应(ju等人，2000)。此外，针对任何这些化合物的抗体可用于靶向本文讨论的抗癌剂。
目前正在研究或使用的免疫疗法的示例是免疫佐剂，例如牛分枝杆菌、恶性疟原虫、二硝基氯苯和芳香族化合物(美国专利5,801,005和5,739,169；hui和hashimoto，1998；christodoulides等人，1998)；细胞因子疗法，例如干扰素α、β和γ，il-1、gm-csf和tnf(bukowski等人，1998；davidson等人，1998；hellstrand等人，1998)；基因疗法，例如tnf、il-1、il-2、p53(qin等人，1998；austin-ward和villaseca，1998；美国专利5,830,880和5,846,945)；以及单克隆抗体，例如抗神经节苷脂gm2、抗her-2、抗p185(pietras等人，1998；hanibuchi等人，1998；美国专利5,824,311)。预期一种或多种抗癌疗法可与本文所述的基因沉默疗法一起使用。
在主动免疫疗法中，施用抗原肽、多肽或蛋白质，或自体或同种异体肿瘤细胞组合物或“疫苗”，通常与不同的细菌佐剂一起施用(ravindranath和morton，1991；morton等人，1992；mitchell等人，1990；mitchell等人，1993)。
在过继免疫疗法中，患者的循环淋巴细胞或肿瘤浸润淋巴细胞在体外分离，被淋巴因子(如il-2)激活或被肿瘤坏死基因转导，并重新给药(rosenberg等人1988；1989)。
4.手术
约60％的癌症患者将接受某种类型的手术，所述手术包括预防手术、诊断手术或分期手术、治愈手术以及姑息手术。根治性手术是一种癌症治疗，可与其他治疗方法结合使用，例如本发明的治疗、化疗、放疗、激素治疗、基因治疗、免疫治疗和/或替代治疗。
治愈性手术包括切除，其中全部或部分癌组织被物理移除、切除和/或破坏。肿瘤切除是指物理去除肿瘤的至少部分。除肿瘤切除外，通过手术治疗还包括激光手术、冷冻手术、电外科手术和显微控制手术(莫氏手术)。还可以设想，本发明可以与浅表癌、癌前病变或偶然量的正常组织的去除结合使用。
在切除癌细胞、组织或肿瘤的部分或全部后，可能在体内形成空腔。可以通过使用附加抗癌疗法对该区域进行灌注、直接注射或局部应用来完成治疗。可以例如每1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天，或者每1周、2周、3周、4周和5周，或每1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月重复此类治疗。这些治疗也可以具有不同的剂量。
在一些特定实施例中，在移除肿瘤后，用本公开的化合物进行辅助治疗被认为在减少肿瘤复发方面特别有效。此外，本公开的化合物也可用于新辅助治疗。
5.其他药剂
可以设想，本公开可以使用其他药剂。这些附加药剂包括免疫调节剂、影响细胞表面受体和gap连接上调的药剂、细胞抑制剂和分化药剂、细胞粘附抑制剂、增加过度增殖细胞对凋亡诱导剂敏感性的药剂或其他生物药剂。免疫调节剂包括肿瘤坏死因子；干扰素α、β和γ；il-2和其他细胞因子；f42k和其他细胞因子类似物；或mip-1、mip-1β、mcp-1、rantes和其他趋化因子。进一步认为，细胞表面受体或它们的配体如fas/fas配体、dr4或dr5/trail(apo-2配体)的上调，将通过建立自身分泌或旁分泌对高增殖细胞的诱导凋亡作用而增强本公开的诱导凋亡的能力。通过增加gap接合的数量而增加细胞间信号传导，将增加对邻近的过度增殖性细胞群体的抗过度增殖效应。在其他实施例中，细胞抑制剂或分化药剂可以与本公开结合使用，以提高治疗的抗过度增殖疾病效应。细胞粘附抑制剂预期为改善本公开的有效性。细胞粘附抑制剂的示例是黏着斑激酶(fak)抑制剂和洛伐他汀。还可以预期的是，增加过度增殖细胞对凋亡敏感性的其他药剂，例如抗体c225，可以与本公开结合使用，以提高治疗有效性。
随着细胞毒性化疗药物的引入，癌症的治疗取得了许多进展。然而，化疗的后果之一是耐药性表型的发展/获得和多重耐药性的发展。耐药性的发展仍然是治疗此类肿瘤的主要障碍，因此，显然需要替代方法，如基因治疗。
与化疗、放射治疗或生物治疗结合使用的另一种治疗形式包括热疗，热疗是将患者组织暴露于高温(高达106°f)的过程。外部或内部加热装置可能涉及局部、区域或全身热疗的应用。局部热疗涉及将热量应用于小区域，例如肿瘤。热量可以由体外装置产生，高频波将从体表靶向肿瘤。内部加热可能涉及无菌探针，包括细的加热导线或充满温水的空心管、植入的微波天线或射频电极。
加热患者的器官或肢体以进行局部治疗，这是通过使用产生高能量的装置(如磁铁)来实现的。或者，在灌注到将被内部加热的区域之前，可以抽取并加热一些患者的血液。在癌症已经扩散到全身的情况下，也可以实施全身加热。温水毯、热蜡、感应线圈和热室可用于此目的。
熟练的技术人员可参考《雷明登药学大全》，第15版，第33章，特别是第624-652页。根据受治疗者的情况，剂量必然会有某些变化。在任何情况下，给药负责人将确定个体受试者的适当剂量。此外，对于人体给药，制剂应符合fda依从性与生物制品质量办公室的生物标准与质量控制部门要求的无菌性、热原性、一般安全性和纯度标准。
还应该指出的是，任何前述疗法本身可证明在治疗癌症中是有用的。
v.合成方法
在一些方面，可以使用本申请中描述的有机化学方法合成本公开的含有埃博霉素类似物的氮丙啶。这些方法可以使用本领域技术人员应用的有机化学的原理和技术进一步修改和优化。例如，在march的《高级有机化学：反应、机制和结构》(2007)中，就教授了这些原理和技术，其通过引用合并于此。
a.工艺放大
使用本领域技术人员所应用的工艺化学原理和技术，本文所述的合成方法可以进一步改进和优化，以用于制备、中试或大规模生产，或者是连续批量生产。这种原理和技术在例如《实践过程研究与开发》(practicalprocessresearch&development)(2000)中被教导，该文献通过引用合并于此。本文所述的合成方法可用于生产制备规模量的本文所述埃博霉素类似物。
b.化学定义
当在化学基团的上下文中使用时：“氢”指-h；“羟基”指-oh；“氧代”指＝o；“羰基”指-c(＝o)-；“羧基”指-c(＝o)oh(也写作-cooh或-co2h)；“卤代”独立地指-f、-cl、-br或-i；“氨基”指-nh2；“羟基氨基”指2；“羟氨基”指-nhoh；“硝基”指-no2；亚氨基指＝nh；“氰基”指-cn；“异氰酸酯”指-n＝c＝o；“叠氮”指-n3；“肼”指-nhnh2；在单价上下文中，“磷酸盐”指-op(o)(oh)2-或其去质子化形式；在二价上下文中，“磷酸盐”指-op(o)(oh)o-或其去质子化形式；“巯基”指-sh；“硫代”指＝s；“羟基磺酰基”指-so3h；“磺酰基”指-s(o)2-；“亚磺酰基”指-s(o)-。
在化学公式的上下文中，符号“-”表示单键，“＝”表示双键，“≡”表示三键。符号“----”代表可选键，如果存在，它可以是单键或双键。符号
当一个基团“r”在环系统上被描述为一个“浮动基团”时，例如在下式中：
那么，只要形成稳定的结构，r可以取代连接到任何环原子上的任何氢原子，包括描述的、暗示的或明确定义的氢。当基团“r”被描述为稠环系统上的“浮动基团”时，例如在下式中：
那么，除非另有说明，r可替换附着于任一融合环的任何环原子上的任何氢。可替换氢包括所描绘的氢(例如，在上述化学式中附着于氮的氢)、隐含的氢(例如，上述化学式中未显示但被理解为存在的氢)、明确定义的氢和其存在取决于环原子鉴别的可选氢(例如，当x为-ch-时，附着于x基团的氢)，只要形成稳定结构即可。在所述实例中，r可驻留在融合环系统的5元环或6元环上。在上式中，紧接在括号中的基团“r”后面的下标字母“y”代表一个数值变量。除非另有说明，否则该变量可以是0、1、2或任何大于2的整数，仅受到环或环系统中可替换氢原子的最大数值的限制。
对于下面的基团和类，以下括号内下标进一步定义基团/类别如下：“(cn)”定义了基团/类别中碳原子的精确数量(n)。“(c≤n)”定义可能属于基团/类别的碳原子的最大数量(n)，对于所述基团，最小数量尽可能小，例如，应理解“烯基(c≤8)”或“烯烃(c≤8)”基团中碳原子的最小数量为2。例如，“烷氧基(c≤10)”指具有1到10个碳原子的烷氧基。(cn-n′)定义了基团中碳原子的最小数量(n)和最大数量(n′)。类似地，“烷基(c2-1)”指具有2至10个碳原子的烷基。除非另有说明，否则权利要求集中列出的没有碳原子限制的任何化学基团或化合物类别的碳原子限制小于或等于12。
这里使用的“饱和”一词是指经过如此修饰的化合物或基团，即没有碳-碳双键和碳-碳三键，除非另有说明。在饱和基团的取代形式的情况下，可以存在一个或多个碳氧双键或碳氮双键。并且当存在这样的键时，不排除可能作为酮-烯醇互变异构或亚胺/烯胺互变异构的一部分出现的碳-碳双键。
术语“脂肪族”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，表示如此修饰的化合物/基团是无环或环状但非芳烃化合物或基团。在脂肪族化合物/基团中，碳原子可以连接在直链、支链或非芳香环(脂环族)中。脂肪族化合物/基团可以是饱和的，通过单键(烷烃/烷基)或不饱和键连接，具有一个或多个双键(烯烃/烯基)或具有一个或多个三键(炔烃/炔基)。
当用于修饰化合物或化学基团时，术语“芳族”是指在完全共轭的环状π体系中具有4n+2个电子的平面不饱和原子环。
术语“烷基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指单价饱和脂肪族基团，其以碳原子作为连接点，具有线性或分支的非环状结构，没有除碳和氢以外的原子。基团-ch3(me)、-ch2ch3(et)、-ch2ch2ch3(n-pr或丙基)、-ch(ch3)2(i-pr、1pr或异丙基)、-ch2ch2ch2ch3(n-bu)、-ch(ch3)ch2ch3(仲丁基)、-ch2ch(ch3)2(异丁基)、-c(ch3)3(叔丁基、t-丁基、t-bu或tbu)和-ch2c(ch3)3(新-戊烷基)为烷基基团的非限制性示例。术语“烷二基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指二价饱和脂肪族基团，具有一个或两个饱和碳原子作为连接点，具有线性或分支的非环状结构，没有碳-碳双键或三键，并且没有除碳和氢以外的原子。基团-ch2-(亚甲基)、-ch2ch2-、-ch2c(ch3)2ch2-和-ch2ch2ch2-是烷二基的非限制性示例。术语“亚烷基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指二价基团＝crr′，其中r和r′独立地为氢或烷基。亚烷基的非限制性示例包括：＝ch2、＝ch(ch2ch3)和＝c(ch3)2。“烷烃”是指化合物h-r，其中r是如上所定义的烷基。当这些术语与“取代的”修饰物一起使用时，一个或多个氢原子已经被-oh、-f、-cl、-br、-i、-nh2、-no2、-n3、-co2h、-co2ch3、-cn、-sh、-och3、-sch3、-och2ch3、-c(o)ch3、-nhch3、-nhch2ch3、-n(ch3)2、-c(o)nh2、-c(o)nhch3、-c(o)n(ch3)2、-oc(o)ch3、-nhc(o)ch3、-s(o)2oh或-s(o)2nh2独立地取代。以下基团是取代的烷基的非限制性示例：-ch2oh、-ch2cl、-cf3、-ch2cn、-ch2c(o)oh、-ch2c(o)och3、-ch2c(o)nh2、-ch2c(o)ch3、-ch2och3、-ch2oc(o)ch3、-ch2nh2、-ch2n(ch3)2和-ch2ch2cl。术语“卤代烷基”是取代的烷基的子集，其中一个或多个氢原子被卤代基团取代，并且除了碳、氢和卤素之外不存在其他原子。基团-ch2cl是卤代烷基的非限制性示例。术语“氟烷基”是取代烷基的子集，其中一个或多个氢被氟基团取代，除了碳、氢和氟之外不存在其他原子。基团-ch2f、-cf3和-ch2cf3是氟烷基的非限制性示例。
术语“环烷基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指以碳原子作为连接点的单价饱和脂族基团，所述碳原子形成一个或多个非芳环结构、环或环状结构的一部分，没有碳-碳双键或三键，并且没有除碳和氢以外的原子。环烷基的非限制性示例包括：-ch(ch2)2(环丙基)、环丁基、环戊基或环己基。术语“环烷二基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，指的是以一个或两个碳原子作为附着点的二价饱和脂肪族，碳原子构成一个或多个非芳香环结构、环或环状结构的一部分，没有碳-碳双键或三键，并且没有除碳和氢以外的原子。
术语“烯基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指单价不饱和脂族基团，其以碳原子作为连接点，具有线性或分支、非环状结构，具有至少一个非芳族碳-碳双键，没有碳-碳三键，并且没有除碳和氢以外的原子。烯基的非限制性示例包括：-ch＝ch2(乙烯基)、-ch＝chch3、-ch＝chch2ch3、-ch2ch＝ch2(烯丙基)、-ch2ch＝chch3和-ch＝chch＝ch2。术语“烯烃二烯基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指二价不饱和脂肪族基团，具有两个碳原子作为连接点，具有线性或分支、环形、环状或非环状结构，至少有一个非芳族碳-碳双键，没有碳-碳三键，并且没有除碳和氢以外的原子。基团-ch＝ch-、ch＝c(ch3)ch2-和-ch＝chch2-是烯烃二烯基基团的非限制性示例。值得注意的是，虽然烯烃二基基团是脂族的，一旦两端连接，该基团不排除形成芳族结构的一部分。术语“烯烃”是指具有式h-r的化合物，其中r是如上所定义的烯基。“末端烯烃”是指只有一个碳-碳双键的烯烃，其中该键在分子的一端形成乙烯基。当这些术语与“取代的”修饰物一起使用时，一个或多个氢原子已经被-oh、-f、-cl、-br、-i、-nh2、-no2、-n3、-co2h、-co2ch3、-cn、-sh、-och3、-sch3、-och2ch3、-c(o)ch3、-nhch3、-nhch2ch3、-n(ch3)2、-c(o)nh2、-c(o)nhch3、-c(o)n(ch3)2、-oc(o)ch3、-nhc(o)ch3、-s(o)2oh或-s(o)2nh2独立地取代。基团-ch＝chf、-ch＝chcl和-ch＝chbr是取代烯基的非限制性示例。
术语“炔基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指单价不饱和脂族基团，其具有碳原子作为连接点，具有线性或分支、非环状结构，具有至少一个碳-碳三键，并且没有除碳和氢以外的原子。如本文所用，术语炔基不排除一个或多个非芳族碳-碳双键的存在。基团-c≡ch、-c≡cch3和-ch2c≡cch3是炔基的非限制性示例。“炔烃”是指化合物h-r，其中r是炔基。当这些术语与“取代的”修饰物一起使用时，一个或多个氢原子已经被-oh、-f、-cl、-br、-i、-nh2、-no2、-n3、-co2h、-co2ch3、-cn、-sh、-och3、-sch3、-och2ch3、-c(o)ch3、-nhch3、-nhch2ch3、-n(ch3)2、-c(o)nh2、-c(o)nhch3、-c(o)n(ch3)2、-oc(o)ch3、-nhc(o)ch3、-s(o)2oh或-s(o)2nh2独立地取代。
术语“芳基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指一价不饱和芳族基团，其中芳族碳原子作为连接点，所述碳原子形成一个或多个六元芳环结构的一部分，其中环原子都是碳，并且其中该基团不包含除了碳和氢之外的其他原子。如果存在一个以上的环，这些环可以是稠合或未稠合的。如本文所用，该术语不排除一个或多个烷基或芳烷基(碳数限制允许)连接到第一芳环或存在的任何附加芳环上。芳基的非限制性示例包括苯基(ph)、甲基苯基、(二甲基)苯基、-c6h4ch2ch3(乙基苯基)、萘基和衍生自联苯的单价基团。术语“芳烃二基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指具有两个芳族碳原子作为连接点的二价芳族基团，所述碳原子形成一个或多个六元芳环结构的一部分，其中环原子都是碳，并且其中单价基团不包含除碳和氢以外的原子。如本文所用，该术语不排除连接到第一芳环或存在的任何附加芳环上的一个或多个烷基、芳基或芳烷基(碳数限制允许)的存在。如果存在一个以上的环，这些环可以是熔合或未熔合的。未稠合的环可以通过以下一个或多个方式连接：共价键、链烷二基或链烯二基(碳数限制允许)。芳烃二基的非限制性示例包括：
“芳烃”是指化合物h-r，其中r是如上所定义的芳基。苯和甲苯是芳烃的非限制性示例。当这些术语与“取代的”修饰物一起使用时，一个或多个氢原子已经被-oh、-f、-cl、-br、-i、-nh2、-no2、-n3、-co2h、-co2ch3、-cn、-sh、-och3、-sch3、-och2ch3、-c(o)ch3、-nhch3、-nhch2ch3、-n(ch3)2、-c(o)nh2、-c(o)nhch3、-c(o)n(ch3)2、-oc(o)ch3、-nhc(o)ch3、-s(o)2oh或-s(o)2nh2独立地取代。
术语“芳烷基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指单价基团-链烷二基-芳基，其中术语链烷二基和芳基各自以与上述定义一致的方式使用。芳烷基的非限制性示例为：苯基甲基(苄基，bn)和2-苯基-乙基。当这些术语与“取代的”修饰物一起使用时，来自一链烷二基和芳基基团的一个或多个氢原子已经被-oh、-f、-cl、-br、-i、-nh2、-no2、-n3、-co2h、-co2ch3、-cn、-sh、-och3、-sch3、-och2ch3、-c(o)ch3、-nhch3、-nhch2ch3、-n(ch3)2、-c(o)nh2、-c(o)nhch3、-c(o)n(ch3)2、-oc(o)ch3、-nhc(o)ch3、-s(o)2oh或-s(o)2nh2独立地取代。取代的芳烷基的非限制性示例为：(3-氯苯基)-甲基和2-氯-2-苯基-醚-1-基。
术语“杂芳基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指以芳族碳原子或氮原子作为连接点的单价芳族基团，所述碳原子或氮原子形成一个或多个芳环结构的一部分，其中至少一个环原子是氮、氧或硫，并且其中杂芳基不包含除碳、氢、芳族氮、芳族氧和芳族硫之外的原子。如果存在一个以上的环，这些环可以是稠合或未稠合的。如本文所用，该术语不排除连接到芳环或芳环体系上的一个或多个烷基、芳基和/或芳烷基(碳数限制允许)的存在。杂芳基的非限制性示例包括呋喃基、咪唑基、吲哚基、丁唑基、异恶唑基、甲基吡啶基、恶唑基、苯基吡啶基、吡啶基、吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、三唑基、四唑基、噻唑基、噻吩基和三唑基。如本文所用术语，术语“杂芳基”包括嘧啶碱和碱类似物。术语“n-杂芳基”是指以氮原子作为连接点的杂芳基。术语“杂亚芳基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指具有两个芳族碳原子、两个芳族氮原子或一个芳族碳原子和一个芳族氮原子作为两个连接点的二价芳族基团，所述原子形成一个或多个芳族环结构的一部分，其中至少一个环原子是氮、氧或硫，并且其中二价基团不包括除碳、氢、芳族氮、芳族氧和芳族硫之外的原子。如果存在一个以上的环，这些环可以是稠合或未稠合的。未稠合的环可以通过以下一个或多个方式连接：共价键、链烷二基或链烯二基(碳数限制允许)。如本文所用，该术语不排除连接到芳环或芳环体系上的一个或多个烷基、芳基、芳烷基和/或杂芳烷基(碳数限制允许)的存在。杂亚芳基的非限制性示例包括：
“杂芳烃”是指化合物h-r，其中r是杂芳基。吡啶和喹啉是杂芳烃的非限制性示例。当这些术语与“取代的”修饰物一起使用时，一个或多个氢原子已经被-oh、-f、-cl、-br、-i、-nh2、-no2、-n3、-co2h、-co2ch3、-cn、-sh、-och3、-sch3、-och2ch3、-c(o)ch3、-nhch3、-nhch2ch3、-n(ch3)2、-c(o)nh2、-c(o)nhch3、-c(o)n(ch3)2、-oc(o)ch3、-nhc(o)ch3、-s(o)2oh或-s(o)2nh2独立地取代。
术语“杂芳烷基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指单价基团-链烷二基-杂芳基，其中术语链烷二基和杂芳基各自以与上述定义一致的方式使用。杂芳烷基的非限制性示例为：n-吡唑基甲基或喹啉基甲基。当这些术语与“取代的”修饰物一起使用时，来自一链烷二基和杂芳基基团的一个或多个氢原子已经被-oh、-f、-cl、-br、-i、-nh2、-no2、-n3、-co2h、-co2ch3、-cn、-sh、-och3、-sch3、-och2ch3、-c(o)ch3、-nhch3、-nhch2ch3、-n(ch3)2、-c(o)nh2、-c(o)nhch3、-c(o)n(ch3)2、-oc(o)ch3、-nhc(o)ch3、-s(o)2oh或-s(o)2nh2独立地取代。取代的芳烷基的非限制性示例为：(3-硝基嘧啶基)-甲基和4-氯-2-喹啉基-醚-1-基。
术语“酰基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指基团-c(o)r，其中r是如上所定义的氢、烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂芳基。基团-cho、-c(o)ch3(乙酰基，ac)、-c(o)ch2ch3、-c(o)ch2ch2ch3、-c(o)ch(ch3)2、-c(o)ch(ch2)2、-c(o)c6h5、-c(o)c6h4ch3、-c(o)ch2c6h5、-c(o)(咪唑基)是酰基的非限制性示例。“硫酰基”以类似的方式定义，除了-c(o)r基团的氧原子被硫原子、-c(s)r取代。术语“醛”对应于如上定义的烷烃，其中至少一个氢原子被-cho基团取代。“酸酐”是化学式ror′的基团，其中r和r′是如上所定义的酰基。当这些术语与“取代的”修饰物一起使用时，一个或多个氢原子(如果有的话，包括直接连接羰基或硫代羰基的氢原子)已经被-oh、-f、-cl、-br、-i、-nh2、-no2、-n3、-co2h、-co2ch3、-cn、-sh、-och3、-sch3、-och2ch3、-c(o)ch3、-nhch3、-nhch2ch3、-n(ch3)2、-c(o)nh2、-c(o)nhch3、-c(o)n(ch3)2、-oc(o)ch3、-nhc(o)ch3、-s(o)2oh或-s(o)2nh2独立地取代。基团-c(o)ch2cf3、-co2h(羧基)、-co2ch3(甲基羧基)、-co2ch2ch3、-c(o)nh2(氨基甲酰)和-con(ch3)2是取代酰基的非限制性示例。
术语“烷基氨基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指基团-nhr，其中r是如上所定义的烷基。烷基氨基的非限制性示例包括：-nhch3和-nhch2ch3。术语“二烷基氨基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指基团-nrr′，其中r和r′可以各自独立地是相同或不同的烷基，或者r和r′可以一起表示链烷二基。二烷基氨基的非限制性示例包括：-n(ch3)2、-n(ch3)(ch2ch3)和n-吡咯烷基。术语“烷氧基氨基”“环烷基氨基”“烯基氨基”“环烯基氨基”“炔基氨基”“芳基氨基”“芳烷基氨基”“杂芳基氨基”“杂环烷基氨基”和“烷基磺酰基氨基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指定义为-nhr的基团，其中r分别是烷氧基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂环烷基和烷基磺酰基。芳基氨基的非限制性示例为-nhc6h5。术语“酰胺基”(酰基氨基)，当在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指基团-nhr，其中r是如上所定义的酰基。酰胺基的一个非限制性示例是-nhc(o)ch3。术语“芳基氨基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指二价基团＝nr，其中r是如上所定义的烷基。术语“烷基氨基二基”指二价基团-nh-烷二基-、-nh-烷二基-nh-或-烷二基-nh-烷二基-。当这些术语与“取代的”修饰物一起使用时，一个或多个氢原子已经被-oh、-f、-cl、-br、-i、-nh2、-no2、-n3、-co2h、-co2ch3、-cn、-sh、-och3、-sch3、-och2ch3、-c(o)ch3、-nhch3、-nhch2ch3、-n(ch3)2、-c(o)nh2、-c(o)nhch3、-c(o)n(ch3)2、-oc(o)ch3、-nhc(o)ch3、-s(o)2oh或-s(o)2nh2独立地取代。基团-nhc(o)och3和-nhc(o)nhch3是取代的酰胺基的非限制性实例。
术语“烷氧基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指基团-or，其中r是如上所定义的烷基。烷氧基的非限制性示例包括：-och3(甲氧基)、-och2ch3(乙氧基)、-och2ch2ch3、-och(ch3)2(异丙氧基)和-oc(ch3)3(叔丁氧基)。术语“环烷氧基”“烯氧基”“炔氧基”“芳氧基”“芳烷氧基”“杂芳氧基”“杂环烷氧基”和“酰氧基”，当在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指定义为-or的基团，其中r分别是环烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂环烷基和酰基。术语“烷氧基二基”是指二价基团-o-烷二基-、-o-烷二基-o-或烷二基-o-烷二基-。“烷基硫基”和“酰基硫基”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，是指基团-sr，其中r分别为烷基和酰基。术语“烷基硫代二基”是指二价基团-s-链烷二基-、-s-链烷二基-s-或-链烷二基-s-链烷二基-。术语“醇”对应于如上所定义的烷烃，其中至少一个氢原子被羟基取代。如上文所定义，术语“醚”对应于烷烃或环烷烃，其中至少一个氢原子已被烷氧基或环烷氧基取代。当这些术语与“取代的”修饰物一起使用时，一个或多个氢原子已经被-oh、-f、-cl、-br、-i、-nh2、-no2、-n3、-co2h、-co2ch3、-cn、-sh、-och3、-sch3、-och2ch3、-c(o)ch3、-nhch3、-nhch2ch3、-n(ch3)2、-c(o)nh2、-c(o)nhch3、-c(o)n(ch3)2、-oc(o)ch3、-nhc(o)ch3、-s(o)2oh或-s(o)2nh2独立地取代。
术语“烷基硅烷”在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，指基团-sir3，其中每个r分别是如上所定义的烷基。术语“烯基硅烷”“炔基硅烷”“芳基硅烷”“芳烷基硅烷”“杂芳基硅烷”和“杂环烷基硅烷”以类似方式定义。当这些术语与“取代的”修饰物一起使用时，一个或多个氢原子已经被-oh、-f、-cl、-br、-i、-nh2、-no2、-n3、-co2h、-co2ch3、-cn、-sh、-och3、-sch3、-och2ch3、-c(o)ch3、-nhch3、-nhch2ch3、-n(ch3)2、-c(o)nh2、-c(o)nhch3、-c(o)n(ch3)2、-oc(o)ch3、-nhc(o)ch3、-s(o)2oh或-s(o)2nh2独立地取代。
术语“膦(phosphine)”和“磷烷(phosphane)”在本文中同义使用。当在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，这些术语是指化学式pr3的化合物，其中每个r独立地是如上所定义的氢、烷基、环烷基、烯基、芳基或芳烷基。非限制性示例包括pme3、pph3和pcy3(三环己基膦)。术语“三烷基膦(trialkylphosphine)”和“三烷基磷烷(trialkylphosphane)”也是同义词。这些基团是膦的子集，其中每个r是烷基。当在没有“取代的”修饰物的情况下使用时，术语“二膦”是指式r2-p-l-p-r2的化合物，其中每个r独立为氢、烷基、环烷基、烯基、芳基或芳烷基，并且其中l是烷二基、环烷基、烯二基或芳二基。当这些术语与“取代的”修饰物一起使用时，一个或多个氢原子已经被-oh、-f、-cl、-br、-i、-nh2、-no2、-n3、-co2h、-co2ch3、-cn、-sh、-och3、-sch3、-och2ch3、-c(o)ch3、-nhch3、-nhch2ch3、-n(ch3)2、-c(o)nh2、-c(o)nhch3、-c(o)n(ch3)2、-oc(o)ch3、-nhc(o)ch3、-s(o)2oh或-s(o)2nh2独立地取代。
如上所述，在某些方面，细胞靶向部分是抗体。如本文所用，术语“抗体”旨在包括对指定的蛋白质或肽或其片段具有特异性反应的免疫球蛋白及其片段。合适的抗体包括但不限于：人类抗体、灵长类化抗体、去免疫抗体、嵌合抗体、双特异性抗体、人源抗体、结合抗体(即与其他蛋白质结合或融合的抗体、放射性抗体、细胞毒素)、小模块免疫药物(“smiptm”)、单链抗体、骆驼抗体、抗体样分子(如抗运载蛋白)和抗体片段。如本文所使用，术语“抗体”还包括完整单克隆抗体、多克隆抗体、单域抗体(例如鲨鱼单域抗体(例如ignar或其片段))、由至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出期望的生物活性。本文所用抗体多肽可为任何类型(例如igg、igm、iga、igd和ige)。一般来说，首选igg和/或igm，因为它们是生理情况下最常见的抗体，并且最容易在实验室环境下制备。如本文所使用，术语抗体还包括抗体片段，例如完整抗体的一部分(例如抗体的抗原结合区或可变区)。抗体片段的示例包括fab、fab’、f(ab’)2、fc和fv片段；三元体；四元体；线性抗体；单链抗体分子；和由抗体片段形成的多特异性抗体。术语“抗体片段”还包括通过结合特定抗原形成络合物而起到抗体作用的任何合成或基因工程蛋白质。例如，抗体片段包括分离的“fv”片段，其由重链和轻链的可变区、重组的单链多肽分子(在其中轻链和重链可变区通过肽接头(“scfv蛋白”)连接)以及由模拟高变区的氨基酸残基组成的最小识别单元构成。氧连接抗体是具有化学官能团的抗体，使得抗体和接头或化合物之间的连接通过氧原子连接。类似地，氮连接抗体是具有化学官能团的抗体，使得抗体和接头或化合物之间的连接通过氮原子连接。
本申请上下文中的“金属”是过渡金属或i或ii族金属。也可能是13族的元素，例如但不限于硼和铝。
在本申请中，“接头”是二价化学基团，可用于将一个或多个分子连接到本公开的化合物中。接头也可以是氨基酸链，其中羧基和氨基末端用作接头的连接点。在一些实施例中，接头在每一端含有反应性官能团，例如羧基、酰胺、胺、羟基、巯基、醛或酮，用于将一种或多种分子连接到本公开的化合物上。在一些非限制性实例中-ch2ch2ch2ch2-、-c(o)ch2ch2ch2-、-och2ch2nh-、-nhch2ch2nh-和-(och2ch2)n-是接头，其中n在1-1000之间。
“胺保护基团”在本领域中是众所周知的。胺保护基团是在修饰分子的某些其他部分的反应过程中防止胺基反应的基团，并且可以容易地除去以产生所需的胺。胺保护基团至少可在greene和wuts(1999)的文献中找到，其通过引用并入本文。氨基保护基团的一些非限制性例子包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、新戊酰基、叔丁基乙酰基、2-氯乙酰基、2-溴乙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、o-硝基苯氧乙酰基、α-氯丁酰基、苯甲酰基、4-氯苯甲酰基、4-溴苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基等；磺酰基，如苯磺酰基、对甲苯磺酰基等；烷氧基或芳氧基羰基(与受保护的胺形成氨基甲酸酯)，如苄氧基羰基(cbz)、对氯苄氧羰基、对甲氧苄氧羰基、对硝基苄氧羰基、2-硝基苄氧羰基、对溴苄氧羰基、3，4-二甲氧基苄氧羰基、3，5-二甲氧基苄氧羰基、2，4-二甲氧基苄氧羰基、4-甲氧基苄氧羰基、2-硝基-4，5-二甲氧基苄氧羰基、3，4，5-三甲氧基苄氧羰基、1-(对联苯基)-1-甲基乙氧羰基、α，α-二甲基-3，5-二甲氧基苄氧羰基、二苯甲基氧羰基、叔丁氧羰基(boc)、二异丙基甲氧羰基、异丙基氧羰基、乙氧羰基、甲氧羰基、烯丙氧羰基(alloc)、2，2，2-三氯乙氧羰基、2-三甲基甲硅烷氧羰基(teoc)、苯氧羰基、4-硝基苯氧羰基、芴基-9-甲氧羰基(fmoc)、环戊氧羰基、金刚氧羰基、环己氧羰基、苯硫羰基等；芳烷基，如苄基、三苯基甲基、苄基氧甲基等；以及甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基等。另外，“胺保护基团”可以是二价保护基团，使得伯胺上的两个氢原子被单个保护基团取代。在这种情况下，胺保护基团可以是邻苯二甲酰亚胺(phth)或其取代衍生物，其中术语“取代的”如上所定义。在一些实施例中，卤代邻苯二甲酰亚胺衍生物可以是四氯邻苯二甲酰亚胺(tcphth)。当在本文中使用时，“受保护氨基”是化学式pgmanh-或pgdan-的基团，其中是pgma单价胺保护基团，其也可以被描述为“单价保护氨基”；pgda是如上所述的二价胺保护基团，其也可以被描述为“双价保护氨基”。
“羟基保护基团”在本领域中是众所周知的。羟基保护基团是在修饰分子的某些其他部分的反应中防止羟基反应的基团，并且可以容易地除去以产生所需的羟基。羟基保护基团至少可在greene和wuts(1999)的文献中找到，其通过引用并入本文。羟基保护基团的一些非限制性例子包括酰基，如甲酰基、乙酰基、丙酰基、新戊酰基、叔丁基乙酰基、2-氯乙酰基、2-溴乙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、邻硝基苯氧乙酰基、α-氯丁酰基、苯甲酰基、4-氯苯甲酰基、4-溴苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基等；磺酰基，如苯磺酰基、对甲苯磺酰基等；酰氧基，例如苄氧羰基(cbz)、对氯苄氧羰基、对甲氧苄氧羰基、对硝基苄氧羰基、2-硝基苄氧羰基、对溴苄氧羰基、3，4-二甲氧基苄氧羰基、3，5-二甲氧基苄氧羰基、2，4-二甲氧基苄氧羰基、4-甲氧基苄氧羰基、2-硝基-4，5-二甲氧基苄氧羰基、3，4，5-三甲氧基苄氧羰基、1-(对联苯基)-1-甲基乙氧羰基、α，α-二甲基-3，5-二甲氧基苄氧羰基、二苯甲基氧羰基、叔丁氧羰基(boc)、二异丙基甲氧羰基、异丙基氧羰基、乙氧羰基、甲氧羰基、烯丙氧羰基(alloc)、2，2，2-三氯乙氧羰基、2-三甲基甲硅烷氧羰基(teoc)、苯氧羰基、4-硝基苯氧羰基、芴基-9-甲氧羰基(fmoc)、环戊氧羰基、金刚氧羰基、环己氧羰基、苯硫羰基等；芳烷基，如苄基、三苯基甲基、苄基氧甲基等；以及甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基等。当本文使用时，受保护的羟基是化学式pgho-的基团，其中pgh是如上文所述的羟基保护基团。
“巯基保护基团”在本领域中是众所周知的。硫醇保护基团是在修饰分子的某些其他部分的反应过程中防止巯基反应的基团，并且可以容易地除去以产生所需的巯基。硫醇保护基团至少可在greene和wuts(1999)的文献中找到，其通过引用并入本文。硫醇保护基团的一些非限制性例子包括酰基，如甲酰基、乙酰基、丙酰基、新戊酰基、叔丁基乙酰基、2-氯乙酰基、2-溴乙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、邻硝基苯氧乙酰基、α-氯丁酰基、苯甲酰基、4-氯苯甲酰基、4-溴苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基等；磺酰基，如苯磺酰基、对甲苯磺酰基等；酰氧基，如苄氧羰基(cbz)、对氯苄氧羰基、对甲氧苄氧羰基、对硝基苄氧羰基、2-硝基苄氧羰基、对溴苄氧羰基、3，4-二甲氧基苄氧羰基、3，5-二甲氧基苄氧羰基、2，4-二甲氧基苄氧羰基、4-甲氧基苄氧羰基、2-硝基-4，5-二甲氧基苄氧羰基、3，4，5-三甲氧基苄氧羰基、1-(对联苯基)-1-甲基乙氧羰基、α，α-二甲基-3，5-二甲氧基苄氧羰基、二苯甲基氧羰基、叔丁氧羰基(boc)、二异丙基甲氧羰基、异丙基氧羰基、乙氧羰基、甲氧羰基、烯丙氧羰基(alloc)、2，2-三氯乙氧羰基、2-三甲基甲硅氧羰基(teoc)、苯氧羰基、4-硝基苯氧羰基、芴基-9-甲氧羰基(fmoc)、环戊氧羰基、金刚氧羰基、环己氧羰基、苯硫羰基等；芳烷基，如苄基、三苯基甲基、苄基氧甲基等；以及甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基等。在本文中使用时，受保护的硫醇基是化学式pgts-的基团，其中pgt是如上文所述的硫醇保护基团。
“立体异构体”或“光学异构体”是给定化合物的异构体，其中相同的原子与相同的其他原子键合，但这些原子在三维空间的构型不同。“对映异构体”是给定化合物的立体异构体，它们是彼此的镜像，如左手和右手。“非对映异构体”是给定化合物的立体异构体，不是对映异构体。手性分子含有手性中心，也称为立体中心或立体生成中心，它是带有基团的分子中的任何点，但不一定是原子，这样任何两个基团的互换都会导致立体异构体。在有机化合物中，手性中心通常是碳、磷或硫原子，尽管在有机和无机化合物中其他原子也可能是立体中心。一个分子可以有多个立体异构体，为其提供了许多立体异构体。在立体异构是由四面体立体生成中心(例如四面体碳)引起的化合物中，假设可能的立体异构总数将不超过2n，其中n是四面体立体中心的数量。对称分子的立体异构体数量经常少于最大可能数量。对映异构体的50∶50混合物称为外消旋混合物。或者，对映异构体的混合物可以对映体富集，使得一种对映异构体的含量大于50％。典型地，对映异构体和/或非对映异构体可以使用本领域已知的技术来拆分或分离。可以设想，对于没有定义立体化学的任何立体中心或手性轴，立体中心或手性轴可以以其(r)形式、(s)形式或者以(r)形式和(s)形式的混合物存在，包括外消旋和非外消旋混合物。如本文所用，短语“基本上不含其他立体异构体”是指组合物含有≤15％，更优选≤10％，甚至更优选≤5％，或最优选≤1％的另一种立体异构体。
vi.实例
包括以下实例以说明本公开的优选实施例。本领域技术人员应该理解，以下实施例中公开的技术代表本发明人发现的在本公开的实践中发挥良好作用的技术，因此可以被视为构成本公开实践的优选模式。然而，根据本公开，本领域技术人员应当理解，在不脱离本公开的精神和范围的情况下，可以对所公开的特定实施例进行许多改变并且仍可获得相同或相似的结果。
实例1-氮丙啶埃博霉素类似物的合成
a.氮丙啶埃博霉素b类似物的制备
受高活性埃博霉素中某一位置需要存在碱性氮原子的启发，并受合适官能基团作为偶联研究连接点的必要性的启发(nicolaou和snyder，2003；altmann等人，2007；altmann等人，2009；pfeiffer等人，2009；altmann等人，2011；pfeiffer等人，2012；altmann等人，2014；schiess等人，2015；以及wo9825929a1；wo9967252a2；wo9967253a2；wo03018002a2；wo2004014919a1；wo2007062288a2；nicolaou等人，2015；us2016057093)，重点研究了埃博霉素类似物，其中埃博霉素b的环氧化物部分被氮丙啶部分取代。鉴于埃博霉素的大多数合成路线是通过相应的c12-c13烯烃进行的，并考虑到最近公开的ess-kürti-falck氮丙啶化(jat等人，2014)的威力，开始试验埃博霉素c和d(方案1的3和4)是否可以作为该反应的底物。应该注意的是，c12-c13氮丙啶基埃博霉素b的合成尚未有报道，尽管相应的氮丙啶基埃博霉素a(8)先前是经过一个较长的工艺由埃博霉素a和c(面板a，方案2的1和3)制备的(wo9954319a1；regueiro-ren等人，2001；wo02098868a1；us20070276018；wo2007140297a1；wo2007140298a1；wo2008147941a1)。相比之下，如方案1所示，氮丙啶基埃博霉素a类似物8(产率为70％)和氮丙啶基埃博霉素b类似物10(产率为66％)的制备分别通过ess-kürti-falck法[o-(2，4-二硝基苯基)羟胺(dph)，rh2(esp)2cat(jat等人，2014)]由埃博霉素c和d(方案3的3和4)直接且一步完成。此外，发现氮丙啶化反应是完全区域选择性和立体选择性的，通过将氮丙啶8的nmr数据与bristol-myerssquibb(bms)报道的相同化合物的nmr数据进行比较，可以证明得到所需的埃博霉素构型(wo9954319a1；regueiro-ren等人，2001；wo02098868a1；us20070276018；wo2007140297a1；wo2007140298a1；wo2008147941a1)。氮丙啶10和本研究中获得的其他氮丙啶化合物的β构型的分配是通过类比完成的。这些结果与环氧化反应[dmdo(二甲基二氧杂环乙烷)或tfdo(甲基(三氟甲基)二氧杂环乙烷)]形成对比，后者由相应的烯属前体埃博霉素d(4)生成埃博霉素b(2)，这一过程表现出中等的非对映立体选择性(约为5∶1的非对映比)(nicolaou等人，1997)。这些氮丙啶随后用2-溴乙醇(dph、k2co3)进行烷化，分别得到n-羟乙基氮丙啶基埃博霉素a(9，产率为97％)和n-羟乙基氮丙啶基埃博霉素b(11，产率为95％)，如方案3所示。这些结构上的伯羟基可以作为一种方便的官能团来将潜在连接的接头附接至抗体和其他递送系统。
方案1.埃博霉素a-d(1-4)、伊沙匹隆(5)、甲硫基埃博霉素b(abj879，6)、氨基甲基埃博霉素b(bms-310705，7)、氮丙啶基埃博霉素a(8)及其n-烷基化类似物(bms-748285，9)的分子结构。
方案2.面板a：先前分别由埃博霉素b(2)和埃博霉素a(1)或c(3)合成伊沙匹隆(5)和12，13-氮丙啶基埃博霉素a(8)。面板b：从β-杂芳族膦酸酯ii和氮丙啶基甲基酮iii获得氮丙啶基埃博霉素b类似物i的一般合成策略，氮丙啶基甲基酮iii衍生自烯烃甲基酮iv，并最终生成埃博霉素b(2)。hwe＝homer-wadsworth-emmons。
方案3.埃博霉素c(3)和d(4)的氮丙啶化及通过8和10a的n-烷基化合成n-羟乙基氮丙啶基埃博霉素a和b类似物9和11。
a试剂和条件：(a)dph(1.1当量)、rh2(esp)2(0.05当量)、tfe，25℃，4h，8为70％，10为66％；(b)2-溴乙醇(5.0当量)、k2co3(6.0当量)、dmf，50℃，48h，9为97％，11为95％。dmf＝n，n-二甲基甲酰胺；dph＝o-(2，4-二硝基苯基)羟胺；esp＝α，α，α′，α’-四甲基-1，3-苯并二丙酸；tfe＝2，2，2-三氟乙醇。
b.尝试以stille偶联法合成氮丙啶基埃博霉素b侧链类似物。
已经确定了用这些相当复杂的底物进行氮丙啶化反应的可行性，并证明了其优异的区域和立体选择性以及对噻唑部分的耐受性，开始进行实验以探索其对其他底物的适用性，例如那些具有乙烯基碘化物部分的底物(例如，71，因为它能够作为多种类似物的前体)和各种杂环侧链(例如，n-甲基-5-甲基硫代吡唑，因为它具有高效力)(nicolaou等人，2006)，如方案2所示。因此，使用先前公布的方法(nicolaou等人，1999)容易获得的碘化三醇前体69通过双碘化物70转化为碘化物71(nabh3cn，产率为80％)，双碘化物70通过其甲苯磺酸酯对应物从69获得(ts2o、et3n、dmap；然后tbai，产率为88％)。然而，在ess-kürti-falck条件下，碘71可作为氮丙啶化的底物，而偶氮碘72无法获得有意义的量。为了避免这个问题，通过乙烯基碘化物前体71与吡唑基锡烷74的stille偶联来制备底物73(nicolaou等人，2006)[pd2(dba)3cat.、cui、asph3，产率为67％]，如方案2所示。然而，将该底物暴露于氮丙啶化反应中未能产生所需的氮丙啶(40)。不希望受任何理论的束缚，据信该反应的失败是由于富含电子的甲基硫代吡唑部分的氧化降解(zenzola等人，2016)。
方案4.合成的氮丙啶基埃博霉素类似物8-40。
方案5.合成的β-杂环膦酸酯41-68。
方案6.由碘化乙烯69合成埃博霉素d类似物73，以及碘化乙烯71和埃博霉素73a的氮丙啶化尝试
a试剂和条件：(a)ts2o(3.0当量)、et3n(5.0当量)、dmap(1.0当量)、ch2cl2，0℃，20min；然后tbai(5.0当量)，0℃，20min，88％；(b)nabh3cn(12当量)、dmpu，25℃，40min，80％；(c)dph(1.1当量)、rh2(esp)2(0.1当量)、tfe，25℃，16h，非预期产物40或72；(d)74(2.5当量)、pd2(dba)3(0.5当量)、asph3(1.0当量)、cui(2.0当量)、dmf，0℃，1h，67％。dba＝二亚苄基丙酮；dmap＝4-二甲氨基吡啶；dmpu＝1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1h)-嘧啶酮；tbai＝n-四丁基碘化铵；ts＝4-甲苯磺酰基。
c.取代的氮丙啶基埃博霉素b类似物新合成路线的开发。
注意力转移到容易获得的(通过发酵)埃博霉素b(2)的侧链断裂和其环氧化物部分的脱氧，以提供一种可行的前体，氮丙啶部分和各种侧链都可以安装在该前体上。
因此，如方案3所示，埃博霉素b(2)通过臭氧分解(o3；然后me2s)转化为甲基酮75(产率为94％)，然后将其暴露于tesotf和2，6-二甲基吡啶中，得到产率为84％的双-tes醚76。化合物75和76在随后用wcl6/n-buli对环氧化物部分进行脱氧时进行了测试，揭示了它们分别作为制备所需烯属甲基酮77[产率为85％，(z)∶(e)约5∶1]和78[产率为86％，仅(z)]的底物的可行性。后者被证明是首选底物，因为其对所需(z)异构体具有独特的几何选择性。在标准条件下，底物77或78的氮丙啶化也被证明是成功的(jat等人，2014)，底物77以87％的产率提供氮丙啶79，底物78以90％的产率提供氮丙啶80，两者都具有完全的立体选择性。化合物80被转化为埃博霉素b类似物10(方案3)，其nmr光谱学数据与方案1中描述的源自埃博霉素b(johnson等人，2000)(或埃博霉素d)的样品的nmr光谱学数据相匹配，从而支持甲基酮77和78的氮丙啶化的立体化学分配。氮丙啶79(游离羟基)和80(tes-保护的羟基)随后用2-溴乙醇(有或没有tbs-保护的羟基)和k2co3烷基化[79+2-溴乙醇→81(产率为29％)；80+2-溴乙醇-tbs醚→82(产率为90％)]，然而，就总产率和选择性而言，将tes-保护的化合物(即，80)和2-溴乙醇tbs醚区分为优选的底物。然后，在n-buli提供的影响下，通过随后的立体选择性horner-wadsworth-emnons(hwe)烯烃化，前体82与侧链膦酸酯41偶联((a)horner等人，1958(b)horner等人，1959(c)wadsworth等人，1961(d)wadsworth等人，1965以及(a)maryanoff等人，1989(b)nicolaou等人，1997(c)gu等人，2012(d)blakemore等人，2014(e)bisceglia和orelli，2015)，以60％的产率得到了预期的保护的氮丙啶基埃博霉素b类似物83。从后者，脱硅产物氮丙啶基甲硫基埃博霉素b类似物12通过hfpy处理而释放出来(产率为79％)。以类似的方式，前体82与膦酸酯42偶联，这次是在nahmds的影响下，以提供受保护的氮丙啶基埃博霉素b类似物84(产率为68％)。总体去保护(hfpy；然后tfa)以48％的总产率提供氮丙啶基氨甲基埃博霉素b类似物13，如方案7中总结的。
该合成路线明显优于先前描述的路线(例如，8(wo9954319a1；regueiro-ren等人，2001；wo02098868a1；us20070276018；wo2007140297a1；wo2007140298a1；wo2008147941a1)和9(us20070275904a1；kim等人，2011；gokhale等人，2013)，方案1)由于它的多功能性和常见中间体的实际可用性(即，甲基酮82，方案7)，它可以从该中间体分散到各种可想象的侧链氮丙啶基埃博霉素b类似物。此外，这项合成工作代表了ess-kürti-falck氮丙啶化在高复杂性底物上的首次应用，这一观察结果预示着它在合成复杂天然产物和设计分子方面的未来应用。
方案7.由埃博霉素b(2)a合成氮丙啶基埃博霉素b类似物12和13
a试剂和条件：(a)o3；然后me2s(10.0当量)、ch2cl2，-78℃，5min，94％；(b)tesotf(2.4当量)、2，6-二甲基吡啶(3.0当量)、ch2cl2，-78℃，15min，84％；(c)wcl6(2.0当量)、n-buli(4.0当量)、thf，-78→25℃，40min；然后75或76(1.0当量)，-20→0℃，2h，77为85％[(z)∶(e)约5∶1]、78为86％[仅(z)]；(d)dph(1.5当量)、rh2(esp)2(0.02当量)、tfe，25℃，30min，79为87％，80为90％；(e)2-溴乙醇或2-溴乙醇tbs乙醚(5.0当量)、k2co3(4.0当量)、dmf，70℃，12h，81为29％，82为90％；(f)41(15当量)、n-buli(12当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78→0℃，3h，60％；或42(8.3当量)、nahmds(6.8当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78℃，2.5h，68％；(g)hf·py(xs)、thf，0→25℃，1h，79％；(h)hf·py(xs)、thf，0→25℃，5h；然后tfa(xs)、ch2cl2，0→25℃，2.5h，总体48％。hmds＝六甲基二硅氮烷；otf＝三氟甲磺酸酯；py＝吡啶；tbs＝叔丁基-二甲基甲硅烷基；tes＝三乙基甲硅烷基；tfa＝三氟乙酸；thf＝四氢呋喃；xs＝过量。
方案8.由甲基酮80或n-保护的甲基酮87a合成游离氮丙啶基埃博霉素b类似物14
a试剂和条件：(a)41(9.6当量)、n-buli(7.7当量)；然后80(1.0当量)、thf，-78→25℃，1.5h，59％；(b)hf·py(xs)、thf，0→25℃，1h，93％；(c)boc2o(3.0当量)、et3n(3.0当量)、dmap(0.2当量)、mecn，0℃，5min，78％；(d)semcl(1.5当量)、i-pr2net(2.0当量)、ch2cl2，0℃，2h，59％；(e)41(23当量)、n-buli(19当量)；然后86或87(1.0当量)、thf，-78→10℃，3h，88单独的伴有杂质；89为60％；(f)tfa(xs)、ch2cl2，0→25℃，1.5h，75％。boc＝叔丁氧羰基；sem＝2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基。
d.游离氮丙啶基埃博霉素b类似物的合成路线延伸。
如方案4中所总结的，使用未保护的(80)氮丙啶基或保护的(86和87)氮丙啶基甲基酮作为底物，开展了研究埃博霉素侧链的直接连接的试验。观察到游离氮丙啶双-tes保护的甲基酮80可以作为与甲基硫代噻唑基膦酸酯41(n-buli，产率为59％)的hwe反应的底物，以完全的几何控制[(e)∶(z)＞98∶2]，提供相应的保护氮丙啶基埃博霉素b85，其脱甲硅烷化(hf·py，产率为93％)平稳地导致靶向氮丙啶基甲硫基埃博霉素b类似物14。狭窄的底物范围显示了各种保护基团的筛选。因此，用boc保护的氮丙啶基甲基酮86(在et3n和dmap存在下由80和boc2o制备，产率为78％，方案8)作为hwe烯烃化反应的底物的进一步实验没有得到预期的产物(即88)，表明其不适于有效地发挥作用，可能是由于氨基甲酸酯基团赋予氮丙啶部分的活化。尝试与4-甲氧基苄基(pmb)保护的氮丙啶部分发生hwe反应也证明不成功。另一方面，使用sem基团作为氮原子上的保护装置(底物87，如方案4中所示由80制备)导致与膦酸酯41的hwe烯烃化反应成功，提供了产率为60％的相应氮丙啶基埃博霉素b衍生物89作为单一几何异构体[(e)∶(z)＞98∶2]。后者的全局脱甲基硅(tfa)得到产率为75％的靶向氮丙啶基甲硫基埃博霉素b类似物14。这些发现将这一合成策略的范围扩大到其他设计的游离氮丙啶基埃博霉素b类似物(见下文方案11和17)。
e.氮丙啶基埃博霉素b类似物的分子设计。
已经开发了用于构建具有适当侧链的氮丙啶基埃博霉素的高效和立体选择性合成策略和方案，如12，13-氮丙啶基埃博霉素b类似物8-14的合成所示(方案3、7和8)，这些策略被应用于各种附加氮丙啶基埃博霉素b类似物的合成。在这些努力的过程中，开发了对hwe烯烃化反应的新修改。为此，开发了26种额外类似物(15-40，方案7)以及一系列相应的β-杂芳族膦酸酯(见方案5)。在设计埃博霉素的这一12，13-氮丙啶家族时，注意到nicolaou(nicolaou等人，1998；nicolaou等人，2001；nicolaou等人，2001；nicolaou等人，2002)、altmann(cachoux等人，2006；kuzniewski等人，2008；altmann等人，2010；schiess等人，2011；gaugaz等人，2014)和bms(sefkow等人，1998；
方案9.由甲基酮82a合成n-羟乙基氮丙啶基埃博霉素b类似物15-26
a试剂和条件：(a)43(14当量)、nahmds(14当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78→0℃，4h，69％；(b)hf·py(xs)、thf，0→25℃，5h；然后tfa(xs)、ch2cl2，0→25℃，6h，总体80％；(c)44(12当量)、nahmds(11当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78→-40℃，1h；然后hf·py(xs)、thf，0→25℃，3h，总体37％[(e)∶(z)ca.88∶12]，加27％回收的82；(d)45(15当量)、nahmds(13当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78℃，30min，65％；(e)hf·py(xs)、thf，0→25℃，3h，95％；(f)ac2o(5.0当量)、dmap(3.0当量)、ch2cl2，0→25℃，25min，74％；(g)46(12当量)、nahds(9.7当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78→0℃，2.5h，50％；47(12当量)、nahmds(9.7当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78→0℃，2.5h，45％；(h)hf·py(xs)、thf，0→25℃，4h，90％；hf·py(xs)、thf，0→25℃，5h；然后tfa(xs)、ch2cl2，0→25℃，3h，总体71％；(i)48(28当量)、n-buli(22当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78→25℃，2h，94％；(j)hf·py(xs)、thf，0→25℃，5h，93％；(k)49(21当量)、n-buli(18当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78→25℃，4h，67％，加28％回收的82；(1)hf·py(xs)、thf，0→25℃，5h，74％；(m)50(11当量)、nahmds(4.9当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78℃，1h；然后t-buok(5.0当量)、thf，-20℃，5min，总体28％[(e)∶(z)约30∶70]；(n)hf·py(xs)、thf，0→25℃，5h，82％；(o)51(13当量)、n-buli(10当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78→10℃，1.5h，65％；(p)hf·py(xs)、thf，0→25℃，9h，81％；(q)52(11当量)，n-buli(10当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78℃，1.5h；然后t-buok(5.0当量)、thf，-20℃，5min，总体73％，加10％回收的82；(r)hf·py(xs)、thf，0→25℃，3h，95％；(s)ac2o(2.0当量)、i-pr2net(2.0当量)、dmap(0.05当量)、ch2cl2，0℃，1.5h，71％。
方案10.由甲基酮82a合成n-羟乙基氮丙啶基埃博霉素b类似物27-31
a试剂和条件：(a)53(31当量)、n-buli(29当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78→0℃，3h，32％；54(60当量)、n-buli(48当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78→0℃，3h，71％；(b)hf·py(xs)、thf，0→25℃，3h，27为80％，28为76％；(c)56(15当量)、nahmds(14当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78→15℃，2.5h，33％；(d)hf·py(xs)、thf，0→25℃，3h，95％；(e)55(11当量)、nahmds(10当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78→-60℃，1h，57％[(e)∶(z)约75∶25]；(f)hf·py(xs)、thf，0→25℃，3h，90％；(g)57(15当量)、nahmds(14当量)；然后82(1.0当量)、thf，-60℃，1h，35％[(e)∶(z)约86∶14]，加34％回收的82；(h)hf·py(xs)、thf，0→25℃，3h，97％。
f.设计的n-羟乙基氮丙啶基埃博霉素b类似物15-31的合成。
设计的氮丙啶基埃博霉素b类似物15-31的合成(方案4)依赖于上述合成前面提及的氮丙啶基埃博霉素b类似物的最佳中间体和条件(即12-14，方案7和8)。方案9总结了由受保护的甲基酮82和相应的膦酸酯43-52通过两步烯烃化(nahmds或n-buli，见方案9)然后整体去保护(hf·py或hf·py；然后tfa)来构建n-羟乙基氮丙啶基埃博霉素b类似物15-26，总产率为32-87％，如方案9所示。合成了具有吡啶(21)、苯并噻唑(24)和n-甲基-5-甲基硫代吡唑(23)的类似物(见方案9)。此外，氨基噻唑(15)、羟乙基噻唑(19)和氨基乙基噻唑(20)含代表对天然产物侧链的新修饰的类似物，而这些类似物含未充分开发的甲基噁唑(16)(与4-甲氧基苄基(pmb)-保护的氮丙啶部分的尝试性hwe反应也证明是不成功的。)还制备了(nicolaou等人，1997)和未知的甲基硫代(17)结构基序。此外，双噻唑基类似物22和1，1-二吡唑基甲基类似物25的设计和合成基于噻唑氮原子附近有一个位置合适的第二碱性氮原子(假设埃博霉素与β-微管蛋白氢键合)(carlomagno等人，2003；nettles等人，2004；reese等人，2007；prota等人，2013)可能导致这些化合物的效力增加的假设。最后，过乙酰化的(18)和单乙酰化的(26)类似物分别由类似物17和25通过标准乙酰化条件制备，以探索由于细胞膜渗透性增加而增强效力的可能性(rautio等人，2008；huttunen等人，2011)。
方案10总结了分别从受保护的甲基酮82和膦酸酯53-57制备具有非天然杂环部分(即噁二唑27、噻二唑28和30以及异噁唑29和31)的n-羟乙基氮丙啶基埃博霉素b类似物27-31，以进一步探测侧链区域内的结构-活性关系(sars)。以与方案9中描述的合成类似物相似的方式，该方案依赖于标准烯烃化(nahmds或n-buli)/全局去保护(hf·py)策略，提供良好的总产率，如方案10所示。值得注意的是，虽然大多数hwe反应只提供了所需的(e)异构体，但[(e)∶(z)＞98∶2]，噁唑[类似物16，方案9，(e)∶(z)约88∶12]和异噁唑[类似物29和31，方案10，(e)∶(z)分别约为75∶25和86∶14]膦酸酯(即，分别为44、55和57)也产生了少量相应的埃博霉素(z)异构体，但仍然是非对映选择性的。通过这些观察，显而易见的是杂环部分的电子密度在决定该反应的立体化学结果中起作用(下面进一步讨论)。
g.设计的游离氮丙啶基埃博霉素b类似物32和33的合成。
如上所述，构建游离氮丙啶基埃博霉素b类似物的保护基团策略(即方案8)相应地应用于由sem-保护的甲基酮前体87合成类似物32和33，如方案11所示。因此，用膦酸酯49和52(n-buli)对87进行烯烃化，然后去保护(tfa)，分别释放出游离氮丙啶基埃博霉素b类似物32(总产率为29％)和33(总产率为28％)，如方案11所示。对于这些具有挑战性的底物，较低的产率通过回收大量的起始材料(即，87)而得到补偿(见标题，方案11)。
方案11.由甲基酮87a合成氮丙啶基埃博霉素b类似物32和33
a试剂和条件：(a)49(18当量)、n-buli(15当量)；然后87(1.0当量)、thf，-78→25℃，4h，34％，加50％回收的87；(b)tfa(xs)、ch2cl2，0→25℃，2h，85％；(c)52(15当量)、n-buli(14当量)；然后87(1.0当量)、thf，-78℃，40min；然后t-buok(3.0当量)、thf，-20℃，5min，总体53％，加28％回收的87；(d)tfa(xs)、ch2cl2，0→25℃，2h，52％。
方案12.由类似物12a合成氮丙啶基埃博霉素b类似物34-36
a试剂和条件：(a)ts2o(5.0当量)、et3n(4.0当量)、ch2cl2，0→25℃、45min；然后nan3(4.0当量)、dmf，25℃，17h，34总体为40％；(b)ts2o(2.0当量)、et3n(2.0当量)、ch2cl2，0℃，5min；然后nash(2.0当量)、dmf，0→15℃，1.5h，35总体为54％；(c)accl(2.0当量)、i-pr2net(2.0当量)、ch2cl2，0℃，1h，88％。
方案13.由受保护的氮丙啶基埃博霉素b类似物85合成氮丙啶基埃博霉素b类似物37，以及由甲基酮80a合成氮丙啶基埃博霉素b类似物38和39
a试剂和条件：(a)90(6.0当量)、k2co3(5.0当量)、dmf，75℃，12h，32％，加35％回收的85；(b)hf·py(xs)、thf，0→25℃，2h；然后tfa(xs)、ch2cl2，0℃，1h，总体65％；(c)92(6.0当量)、k2co3(5.0当量)、dmf，75℃，16h，92％；(d)41(13当量)、n-buli(10当量)；然后93(1.0当量)、thf，-78→10℃，1.5h，65％；(e)hf·py(xs)、thf，0→25℃，3.5h，92％；(f)95(5.0当量)、k2co3(4.0当量)、dmf，80℃，18h，90％；(g)41(20当量)、n-buli(17当量)；然后96(1.0当量)、thf，-78→0℃，3h，63％；(h)hf·py(xs)、thf，0℃，2h；然后tbaf/acoh(1∶1，xs)、thf，25℃，8h，总体68％。
h.设计的n-取代的氮丙啶基埃博霉素b类似物34-39的合成。
为了进一步探索埃博霉素这种新文库的sar，并为了安装各种潜在的偶联位点，合成了一系列氮丙啶环上具有不同官能团的类似物，同时在侧链区域保持了高度有效的部分(即甲基硫代噻唑)。这些努力的结果在方案12和13中描述。因此，如方案12所示，n-叠氮乙基(34)、n-硫乙基(35)和n-乙酰氧乙基(36)氮丙啶基埃博霉素b类似物由n-羟乙基氮丙啶基埃博霉素12(如上所述制备，方案7)通过伯羟基的选择性官能化制备[用ts2o选择性甲苯磺酰化，然后用nan3(34，总产率为40％)或nash(35，总产率为54％)甲苯磺酰化置换；并用accl、i-pr2net(36，产率为88％)选择性乙酰化12，见方案12]。
方案13总结了n-氨基乙基、n-环丙基甲基和n-高炔丙基氮丙啶基埃博霉素b类似物37-39的合成。因此，双-tes保护的氮丙啶基埃博霉素b类似物85(其合成见方案8)与溴化物90的氮烷基化生成前体91(k2co3，产率为32％)，其整体去保护(hf·py；然后tfa，总产率为65％)提供了配有适于与合适的递送系统偶联的伯氨基基团的靶类似物37。环丙基类似物38的合成始于氮丙啶基甲基酮80和溴化物92，它们在碱性条件下的偶联(k2co3，产率为92％)提供了中间体甲基酮93。后者用膦酸酯41进行烯烃化(n-buli，产率为65％)，然后只得到前体94[(e)∶(z)＞98∶2]，其用hf·py脱硅得到靶类似物38，产率为92％。来自相同前体(即氮丙啶基甲基酮80)的类似途径，使用高炔丙基溴化物95作为烷基化剂(k2co3，产率为90％)，提供了甲基酮中间体96。后者在类似条件下用相同的膦酸酯(即41)进行烯烃化后，提供了tms-保护的炔属前体97(产率为63％)，通过全局去保护生成期望类似物39(hf·py；然后是tbaf/acoh，总产率为68％)，如方案13所示。
i.稳定β-羟膦酸加合物的观察和分离。
在这些研究过程中观察到的hwe反应的一个特征是与某些底物形成稳定的β-羟基膦酸酯加合物(方案14和15)(petrova等人，1990；amer等人，1991；angelova等人，1992；petrova等人，1992；vassilev等人，1993；vassilev等人，1994；mizuno等人，1998；modro等人，1998；takaki等人，2000；tsuge等人，1988；以及harusawa等人，2002)。因此，如方案14所示，用膦酸酯52和n-buli产生的碳负离子处理甲酮底物82和87分别提供β-羟基膦酸酯加合物98和99。通过薄层色谱和高分辨率质谱分析法(hrms)观察到了这些加合物，但未纯化。相反，粗材料随后用t-buok处理以分别提供受保护的类似物100(总体的73％来自82，加上10％回收的82)和101(总体的53％来自87，加上28％回收的87)，具有独特的(e)几何结构[(e)∶(z)＞98∶2](化合物52的相应2-氟乙氧基膦酸酯在hwe反应中没有充分发挥作用，并且仅回收了起始材料。这表明2-氟乙氧基膦酸酯在酮和β-杂芳族膦酸酯之间的hwe反应中的成功高度依赖于杂环部分的电子性质。该结果是seyden-penne和bottin-strzalo的研究结果，他们报告苯基甲基膦酸与苯甲醛的二乙酯仅提供反式-芪(deschamps等人，1972以及bottin-strzalko和seyden-penne，1984)。然而，进一步的实验表明，碱诱导的由p-杂芳族膦酸酯和甲基酮衍生的β-羟基膦酸酯的消除并不总是提供高(e)选择性，如下所述。
因此，如方案15所示，用nahmds处理膦酸酯50，随后将所得碳负离子转移到甲酮82的溶液中，以非对映异构体混合物的形式递送加合物102(约3∶7)，这证明色谱稳定，允许其以纯形式(但仍然是不可分离的非对映异构体混合物)分离，产率为37％。随后，用t-buok处理该混合物(102)产生受保护的氮丙啶基埃博霉素b类似物103(产率为75％)，作为几何异构体不可分离的混合物[(e)-103∶(z)-103约3∶7，方案15]。102和103的保守非对映异构体比率(约3∶7)符合β-酮膦酸酯的经典机理研究(homer等人，1958；horner等人，1959；wadsworth等人，1961；wadsworth等人，1965；denmark和dorow1990；zarges等人，1991；narasaka等人，1993；brandt等人，1998；以及ando，1999)(即102的3∶7的非对映比对应于3∶7顺式/反式加合物分布，见方案16)petrova及其同事的研究已将这一保守比率现象定义为两种β-羟基膦酸酯加合物相对构型的“化学证明”(petrova等人，1990)。这一观察结果表明，这一特定底物不会与顺式β-羟基膦酸酯平衡(见方案16)，这一结果反映了tsuge及其同事之前的研究(tsuge等人，1988)，他们报告了β-呋喃基膦酸酯与甲基酮的反应，以提供几何比例与相应的β-羟基膦酸酯加合物的非对映体比例相匹配的烯烃。有趣的是，加合物102的主要非对映异构体可能是反异构体，这一结果与petrova之前的报告形成对比，petrova观察到苄基膦酸酯与醛或酮的反应显示出明显的顺式选择性(petrova等人，1990以及petrova等人，1992)。
方案14.观察hwe加合物98和99并进行碱处理以提供受保护的氮丙啶基埃博霉素b类似物100和101a
a试剂和条件：(a)52(11当量)、n-buli(10.0当量)；然后82(1.0当量)，-78℃，1.5h；然后t-buok(5.0当量)、thf，-20℃，5min，总体73％，加10％回收的82；(b)52(15当量)、n-buli(14当量)；然后87(1.0当量)、thf，-78℃，40min；然后t-buok(5.0当量)、thf，-20℃，5min，总体53％，加28％回收的87。
方案15.hwe加合物102的检测和分离以及碱处理以提供受保护的氮丙啶基埃博霉素b类似物103a
a试剂和条件：(a)50(11当量)、nahds(4.9当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78℃，1h，37％；(b)t-buok(5.0当量)、thf，-20℃，5min，75％。
方案16.经典的horner-wadsworth-emmons烯烃几何形成机制(kürti等人，2005)。几何选择性是1)初始羰基加成步骤的立体化学，和2)中间体平衡能力的函数。顺式和反式β-羟基膦酸酯加合物的平衡有利于反式氧杂的四元环中间体，最终得到所需的热力学产物[(e)烯烃]。ewg＝吸电子基团。
j.乙氧基取代基对β-芳杂环族膦酸酯与甲基酮82和87的hwe反应的影响。
如上所述，大多数标准乙氧基膦酸酯(即41-49、51-57)在其与相应甲基酮埃博霉素前体的反应中在产率和几何选择性方面表现良好。用于合成期望的n-甲基-5-甲基硫代吡唑类似物23(见方案15)的标准乙氧基膦酸酯50缺乏选择性和产率提高的空间，这促使人们研究这种β-杂芳族膦酸酯的更立体选择性的hwe反应。怀疑后者的困境是由富含电子的甲基硫代吡唑部分的电子供体性质与膦酸酯基团的吸电子能力之间的不利失衡所致。为验证该假设，在不同溶剂中对膦酸酯50进行一系列碱作用，并通过所得阴离子的d2o猝灭和随后的1hnmr光谱分析评估其相对去质子化。这些结果总结在表1中。在0℃至25℃下(适用于上述几种膦酸酯的去质子化)使用nahmds是无效的(0.5h后掺入25％d)，即使在环境温度下也是如此(表1，条目1)。更令人惊讶的是，在-78℃下，在hmpa不存在或存在的情况下，用t-buli或n-buli在多种溶剂中处理膦酸酯50(见表1，条目2-4)，仅导致部分去质子化，我们的实验中低氘掺入(25-45％)证明了这一点。相比之下，膦酸酯50在-78℃下暴露于thf中的schlosser碱(n-buli/t-buok)(schlosser1988)，或在25℃下暴露于dmf中的kh，分别导致80％和85％的氘结合，表明去质子化程度很高(分别见表1的条目5和6)。然而，事实证明，这些条件对甲酮底物(即82)来说太苛刻，排除了由于底物分解而形成预期产物的可能性。
表1.膦酸酯50的氘标记研究
a使用0.8当量碱进行反应。b使用过量碱进行反应。c通过粗反应混合物的1hnmr光谱分析测定的近似d掺入量。
表2.乙氧基取代基对合成受保护的氮丙啶基埃博霉素b类似物103的影响
a用d2o在指定时间后猝灭膦酸酯/碱混合物之后，通过粗样本的1hnmr光谱分析确定的近似d掺入量。有关详细信息，请参见支持信息。b使用0.8当量碱进行反应。c未鉴别的混合物。dβ-羟基膦酸酯加合物的形成(102，见方案11)。e观察到膦酸酯的分解。
这些失败(见表1和表2，条目1和2)促使人们探索另一种途径，通过降低膦酸酯的pka来活化膦酸酯(即50)，以提高其反应性。由于膦酸酯部分的烷基上的吸电子残基可以实现这一目标，我们研究了许多氟化和氯化衍生物，如表2所示。在使用标准膦酸酯50的尝试失败后，使用了2，2，2-三氟乙氧基膦酸酯58(采用自still-gennari方法(still-gennari1983))，其在n-buli存在下与甲基酮82反应，以70％的产率提供所需的产物(即103)，但是在新形成的三元取代烯键上不可分离的烯化异构体的几何比例为1∶1(表2，条目3)。尽管对有机合成有影响，但据我们所知，传统的与β-杂芳族膦酸酯的still-gennari立体选择性烯化反应尚未报道。此外，据我们所知，尚未系统性探索各种卤素取代基在原始still-gennari方案之外的任何背景下对二乙氧基膦酸酯的影响。因此，氟化膦酸酯58和甲基酮82的观察结果(表2，条目3)促使对含有氟和氯取代基的另外膦酸酯的反应性进行研究，以寻找甲基酮底物82和87的立体选择性烯烃化。
制备了3，3，3-三氟丙氧基膦酸酯59和2，2，2-三氯乙氧基膦酸酯60，但是它们在与底物82的预期偶联中表现不佳，如表2所示(条目4-6)。2，2-二氟膦酸酯61与nahmds在-78℃下与甲酮82平稳反应，得到所需的烯化产物(即103)，产率为52％，尽管是几何异构体的混合物[(e)∶(z)约1∶1，表2，条目7]，但与2，2，2-三氟乙氧基膦酸酯58(表2，条目3)的结果相一致。最后，使用2-氟乙氧基膦酸酯62(表2，条目8)。虽然其与nahmds和底物82的尝试反应导致其分解(表2，条目8)，但该膦酸酯在进一步实验后提供了氮丙啶基埃博霉素b103所需几何选择性的解决方案，如下所述。
方案17(面板a)显示了由甲基酮87和膦酸酯62[通过用tmscl、(cocl)2、2-氟丙醇逐步处理，由膦酸酯50以78％的总产率合成，如方案17中总结的那样]形成的中间体β-羟基膦酸酯(即104，非对映异构体的不可分离混合物，非对映比为约3∶7)的分离和鉴定的试验。因此，62与n-buli在-78℃下反应10min，然后将所得的碳负离子添加到甲基酮87溶液中，然后在-78℃下1h后猝灭反应混合物，得到产率为28％的加合物104(加上42％回收的87)，作为非对映异构体的不可分离混合物(非对映比为约3∶7)，其色谱稳定。将该加合物(104)暴露于t-buok可提供产率为63％且具有仅(e)烯化几何结构[(e)∶(z)＞98∶2]的所需受保护的埃博霉素似物105。这些条件的进一步改善导致由甲基酮87和膦酸酯62的反应一步产生烯化产物(105)，如方案17(面板b)所总结的。因此，在-78℃至0℃下用膦酸酯62和n-buli生成的碳负离子处理甲酮87，在全局去保护(tfa)后，以高度立体选择性的方式提供氮丙啶基埃博霉素b类似物40(总产率为52％)[(e)∶(z)约92∶8]。类似地，如方案17(面板b)所示，甲酮82与膦酸酯62的阴离子反应(在78至40℃下)，在n-buli(-78℃)存在下生成，得到前体(e)-103(产率为62％)，其用hf·py·进行的全局脱甲硅基提供了产率为82％的靶氮丙啶基埃博霉素b类似物(e)-23。在这些情况下，与方案17中的结果相反(面板a；87和62的hwe反应在78℃猝灭)，甲基酮87或82与膦酸酯62之间的hwe偶联被允许升温至0℃或-40℃(方案12，面板b)，诱导相应的原位形成的β-羟基膦酸酯(例如104)经历消除，以分别提供直接受保护的氮丙啶基埃博霉素b类似物105和(e)-103。
方案17.由膦酸酯50合成膦酸酯62，以及用碱检测、分离和处理hwe加合物104以提供受保护的氮丙啶基埃博霉素b类似物105和类似物23和40a的立体选择性合成
a试剂和条件：面板a：(a)tmscl(5.1当量)，80℃，72h；然后(cocl)2(2.5当量)、ch2cl2，0→25℃，4h；然后2-氟丙醇(4.0当量)、et3n(6.0当量)、dmap(0.02当量)、ch2cl2，0→25℃，12h，总体78％；(b)62(22当量)、n-buli(18当量)，10min；然后87(1.0当量)、thf，-78℃，1h，28％，加42％回收的87；(c)t-buok(5.0当量)、thf，-20℃，5min，70％。面板b：(d)62(22当量)、n-buli(18当量)；然后87(1.0当量)、thf，-78→0℃，4h，63％；(e)tfa(xs)、ch2cl2，0→25℃，2h，82％；(f)62(16当量)、n-buli(13当量)；然后82(1.0当量)、thf，-78→-40℃，1h，62％；(g)hf·py(xs)、thf，0→25℃，5h，82％。tms＝三甲基甲硅烷基。
方案18.受保护的氮丙啶基埃博霉素b类似物103的(z)选择性合成的拟定基本原理。
总的来说，方案17中显示的结果证明了该反应的热力学控制，较高的温度有利于反应中间体的平衡和/或其他热力学因素(例如，pka效应)，例如含磷碳中心的差向异构化，其促进(e)具有高立体选择性的烯键形成[(e)∶(z)＞98∶2]。基于这些结果，提出了膦酸酯50[(e)∶(z)约3∶7]和膦酸酯62[(e)∶(z)＞98∶2]与甲基酮底物82和87(分别为方案18和19)的反应的不同立体化学结果的机理原理。因此，如方案18中所示，底物82与由乙氧基膦酸酯50(nahmds)生成的碳负离子反应，得到顺式和反式β-羟基膦酸酯的混合物(顺式-102和反式-102，非对映比为约3∶7)。从newman投影式可以看出，在t-buok的影响下，这些非对映异构体分别平衡地形成相应的氧杂膦中间体a和b，它们分别通过反式和顺式消除折叠为(e)和(z)烯化产物(见方案18)，并保持初始非对映立体选择性[(e)∶(z)约3∶7]。正是非对映异构体顺式-102和反式-102在反应条件下对c17差向异构化的稳定性和/或这些加合物回复到起始原料(即82和50)的抗性导致了它们立体特异性转化为相应的(e)和(z)烯烃。如果这些事件中的一个或两个发生[例如，方案18，与顺式-102(分别通过逆转回到82和50)或与17-表-反式-102(通过差向异构化)平衡的反式-102及其转化为烯烃(e)-103]，那么这些β-羟基膦酸酯加合物的转化将会受到干扰。
方案19.受保护氮丙啶基埃博霉素类似物(e)-105立体选择性合成的拟定基本原理。
类似于乙氧基膦酸酯50，并且如方案19所示，双(2-氟乙氧基)膦酸酯62也与甲基酮87反应，在这种情况下，在n-buli的影响下，最初以相似的比例提供β-羟基膦酸酯顺式-104和反式-104(非对映比为约3∶7，分离的，结构暂时指定)。为了解释加合物混合物在用t-buok进一步处理后向(e)-烯烃产物(e)-105的唯一转化，可以预见反式非对映异构体(反式-104)向17-表-反式-104(见newman投影)发生差向异构化，这种差向异构化通过氧杂磷杂蒽f找到了通向(e)-烯烃(e)-105的途径，后者经历反式消除。注意到氧杂膦中间体d和f(方案19)代表对映体过渡状态，因此在反式消除时提供相同的所需的(e)烯化产物。
有人提出反式-104和17-表-反式-104的简单平衡是氟残基对膦酸酯62的吸电子效应的结果，这使得17h比乙氧基膦酸酯50中的对应物更具酸性，乙氧基膦酸酯50在类似条件下显然不经历差向异构化(见方案18)。然而，不能排除的一种可能性是，这些吸电子基团导致系统中发生可逆性(即，逆hwe)，从而促进(e)烯烃的热力学有利的形成(见方案16)。
这一探索导致β-杂芳族2-氟乙氧基膦酸酯62的hwe反应在烯化杂环化合物[例如(e)-103和(e)-105)]的合成中的独特应用。这些类型的膦酸酯，包括其他β-杂环和β-酮膦酸酯的进一步应用，有望在合成有机和药物化学中得到应用。尽管在整个研究过程中观察到杂环部分的底物范围异常广泛，但应该注意的是，迄今为止，膦酸酯63-68被证明难以提供所需的烯烃化产物。具体而言，甲酮82与噻二唑基膦酸酯63和噁二唑基膦酸酯64的反应产生了不可识别的副产物混合物，而咪唑基膦酸酯65和n-芳基吡唑基膦酸酯66-68仅产生回收的原料。
实例2-一般方法和材料
除非另有说明，所有反应都是在无水条件下用干燥溶剂在氩气气氛下进行的。通过将市售预干燥、无氧制剂通过活性氧化铝色谱柱获得干燥乙腈(mecn)、乙醚(et2o)、二甲基甲酰胺(dmf)、二氯甲烷(ch2cl2)、四氢呋喃(thf)、三乙胺(et3n)和甲苯。除非另有说明，产率指色谱和光谱(1hnmr)均质材料。除非另有说明，试剂是以最高的商业质量购买的，无需进一步纯化即可使用。使用uv光作为可视化剂，使用对茴香醛的酸性水溶液、硫酸铈的水溶液或高锰酸钾的碱性水溶液和加热作为显像剂，在s-20.25mme.merck硅胶板(60f-254)上进行薄层色谱分析(tlc)监测反应。使用e.merck硅胶(60，粒径0.040-0.063mm)进行快速柱色谱分析。在brukerdrx-600仪器上记录nmr光谱，并使用残留的未氘化的溶剂(cd2cl2：δh＝5.32ppm，δc＝53.84ppm；cdcl3：δh＝7.26ppm，δc＝77.16ppm；c6d6：δh＝7.16ppm，δc＝128.06ppm)作为内部参考进行校准。以下缩写用于表示多重性：s＝单线，d＝双线，t＝三线，q＝四线，m＝多重线，qd＝双线的四线，dd＝双线的双线，ddd＝双线的双线的双线，dddd＝双线的双线的双线的双线，dt＝三线的双线，dq＝四线的双线，ddq＝四线的双线的双线，br＝宽。在perkin-elmer100ft-ir光谱仪上记录红外(ir)光谱。使用maldi(基质辅助激光解吸电离)或esi(电喷雾电离)在agilentesi-tof(飞行时间)质谱仪上记录高分辨率质谱(hrms)。光学旋转记录在polartronicm100偏振计上，波长为589nm，单位为10-1(degcm2g-1)。
实例3-化合物表征
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-8，8，10，12-四甲基-3-[(1e)-1-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)丙-1-烯-2-基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(8)：
在25℃下，向埃博霉素c(3；50mg、0.11mmol，1.0当量)在2，2，2-三氟乙醇(1.1ml)中的搅拌溶液中加入o-(2，4-二硝基苯基)羟胺(23mg，0.12mmol，1.1当量)，然后加入双[铑(α，α，α′，α′，-四甲基-1，3-苯二丙酸)](4.0mg，5.3μmol，0.05当量)。4h后，用乙酸乙酯(5ml)稀释反应混合物，并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤。分离两相，用乙酸乙酯(3×3ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，4→11％甲醇溶于二氯甲烷)，得到白色无定形固体状的纯埃博霉素8(38mg，77μmol，产率为70％)。8：rf＝0.22(硅胶，7％甲醇的二氯甲烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12-四甲基-3-[(1e)-1-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)丙-1-烯-2-基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(9)：
在25℃下，向埃博霉素8(12mg，24μmol，1.0当量)在二甲基甲酰胺(0.2ml)中的搅拌溶液中加入2-溴乙醇42(8.5μl，0.12mmol，5.0当量)，然后加入碳酸钾(7.2mg，52μmol，6.0当量)。将反应混合物加热至50℃保持48h，然后冷却至25℃。用乙酸乙酯(2.5ml)稀释反应混合物，用水(2.5ml)洗涤。分离两相，用乙酸乙酯(3×1ml)萃取水层。合并的有机层用盐水(2ml)反洗，用无水硫酸镁干燥，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，12％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到白色无定形固体状的纯埃博霉素9(12mg，23μmol，产率为97％)。9：rf＝0.18(硅胶，7％甲醇的二氯甲烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)丙-1-烯-2-基]-4-氧杂.17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(10)：
在25℃下，向埃博霉素d(4；50mg，0.10mmol，1.0当量)在2，2，2-三氟乙醇(1.1ml)的搅拌溶液中加入o-(2，4-二硝基苯基)羟胺(23mg，0.12mmol，1.1当量)，然后加入双[铑(α，α，α′，α′，-四甲基-1，3-苯二丙酸)](4mg，5.3μmol，0.05当量)。4h后，用乙酸乙酯(5ml)稀释反应混合物，并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤。分离两相，用乙酸乙酯(3×3ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，4→11％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到白色无定形固体状的纯埃博霉素10(33mg，66μmol，产率为66％)。10：rf＝0.24(硅胶，7％甲醇的二氯甲烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)丙-1-烯-2-基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(11)：
在25℃下，向埃博霉素10(15mg，30μmol，1.0当量)在二甲基甲酰胺(0.8ml)中的搅拌溶液中加入2-溴乙醇(11μl，0.15mmol，5.0当量)，然后加入碳酸钾(22mg，0.16mmol，6.0当量)。将反应混合物加热至50℃保持48h，然后冷却至25℃。用乙酸乙酯(2.5ml)稀释反应混合物，用水(2.5ml)洗涤。分离两相，用乙酸乙酯(3×1ml)萃取水层。合并的有机层用盐水(2ml)反洗，用无水硫酸镁干燥，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，12％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到白色无定形固体状的纯埃博霉素11(15mg，29μmol，产率为95％)。11：rf＝0.19(硅胶，7％甲醇的二氯甲烷溶液)；
(4s，7r，8s，9s，13e，16s)-4，8-二羟基-13-(碘甲基)-16-[(1e)-1-碘丙-1-烯-2-基]-5，5，7，9-四甲基氧杂环己烷-13-烯-2，6-二酮(70)：
在0℃下，向埃博霉素69(9.6mg，18μmol，1.0当量)在二氯甲烷(0.5ml)中的搅拌溶液中加入三乙胺(13μl，90μmol，5.0当量)，然后加入对甲基苯磺酸酐(18mg，54μmol，3.0当量)和4-二甲氨基吡啶(2.2mg，18μmol，1.0当量)。20min后，用干丙酮(3ml)稀释反应混合物，并在减压下浓缩至约1.5ml剩余溶剂。然后在0℃搅拌下向反应混合物中加入碘化正四丁基铵(33mg，90μmol，5.0当量)。20min后，用水(10ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取混合物，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，10→30％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状的纯双碘化物70(10mg，15μmol，产率为88％)。70：rf＝0.24(硅胶，25％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(4s，7r，8s，9s，13z，16s)-4，8-二羟基-16-[(1e)-1-碘丙-1-烯-2-基]-5，5，7，9，13-五甲基氧杂环己基-13-烯-2，6-二酮(71)：
在25℃下，向双碘化物70(10.0mg，15.5μmol，1.0当量)在1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1h)-嘧啶酮(0.5ml)中的搅拌溶液中加入氰基硼氢化钠(12.4mg，0.186mmol，12当量)。40min后，用水(5ml)猝灭反应混合物，用乙酸乙酯(50ml)稀释，并用盐水(3×10ml)清洗。用无水硫酸钠干燥有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，10→30乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状的纯碘化乙烯71(6.5mg，12μmol，产率为80％)。71：rf＝0.36(硅胶，30％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(4s，7r，8s，9s，13z，16s)-4，8-二羟基-5，5，7，9，13-五甲基-16-{(1e)-1-[1-甲基-5-(甲基磺酰基)-1h-吡唑-3-基]丙-1-烯-2-基}氧杂环己基-13-烯-2，6-二酮(73)：
在0℃，向三(二亚苄基丙酮)二钯(37.8mg，41.3μmol，0.5当量)、碘化铜(31.4mg，165μmol，2.0当量)和三苯基胂(25.3mg，82.6μmol，1.0当量)在二甲基甲酰胺(0.5ml)中的搅拌悬浮液中加入碘化乙烯71(43.0mg，82.6μmol，1.0当量)，并通过套管加入在二甲基甲酰胺(0.2ml)中的吡唑基锡烷74(88.0mg，211μmol，2.5当量)，用二甲基甲酰胺(3×0.2ml)彻底冲洗原始烧瓶。1h后，用乙酸乙酯(5ml)稀释反应混合物，通过
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-3-乙酰基-7、11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(75)：
在-78℃下，将埃博霉素b(2，122mg，24.0μmol，1.0当量)在二氯甲烷(5ml)中的搅拌溶液鼓泡通过新鲜生成的臭氧。在反应混合物的颜色变为浅蓝色后(约5min)，用二甲基硫醚(0.180ml，2.45mmol，10.0当量)猝灭，并升温至25℃。1h后，减压除去溶剂，所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，40→70％ethylacetateinhexanes)toaffordpuremethylketone75(93.0mg，22.5μmol，产率为94％)为无定形固体。75：rf＝0.26(硅胶，40％己烷的乙酸乙酯溶液)；
(4s，7r，8s，9s，13z，16s)-16-乙酰基-4，8-二羟基-5，5，7，9，13-五甲基氧杂环己基-13-烯-2，6-二酮(77)：
在-78℃下，向六氯化钨(0.163g，0.413mmol，2.0当量)在四氢呋喃(2ml)中的搅拌悬浮液中逐滴地加入正丁基锂(1.6m的己烷溶液，0.52ml，0.83mmol，4.0当量)。10min后，使反应混合物缓慢升温至25℃，并再搅拌30min。然后将反应混合物冷却至-20℃，逐滴加入甲基酮75(85.4mg，0.207mmol，1.0当量)在四氢呋喃(1ml)中的溶液，并使反应混合物缓慢升温至0℃。2h后，用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并升温至25℃。分离两相，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，10→50％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状的纯烯化甲基酮77(57.0mg，0.144mmol，产率为70％)及其(e)异构体(12.3mg，31.0μmol，产率为15％)。77：rf＝0.28(硅胶，40％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-3-乙酰基-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七-5，9-二酮(79)：
在25℃下，向烯化甲基酮77(47.0mg，0.119mmol，1.0当量)在2，2，2-三氟乙醇(0.5ml)中的搅拌溶液中加入o-(2，4-二硝基苯基)羟胺(35.5mg，0.180mmol，1.1当量)，然后加入双[铑(α，α，α′，α′，-四甲基-1，3-苯二丙酸)](1.8mg，2.4μmol，0.02当量)。30min后，用二氯甲烷(30ml)稀释反应混合物，并用饱和碳酸氢钠水溶液(3×10ml)和盐水(10ml)洗涤。分离两相，用无水硫酸钠干燥有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→30％甲醇的乙酸乙酯溶液)，得到白色无定形固体状的纯氮丙啶79(42.5mg，0.103mmol，产率为87％)。79：rf＝0.22(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-3-乙酰基-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(81)：
在25℃下，向氮丙啶79(68.8mg，167μmol，1.0当量)在二甲基甲酰胺(0.5ml)中的搅拌溶液中加入2-溴乙醇(104mg，0.835mmol，5.0当量)，然后加入碳酸钾(92.5mg，0.669mmol，4.0当量)，并将反应混合物加热至70℃。12h后，让反应混合物冷却至25℃，用水(3.5ml)猝灭。用乙酸乙酯(3×2ml)萃取混合物，用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→10％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到白色无定形固体状的纯氮羟乙基氮丙啶81(22.0mg，48.3μmol，产率为29％)。81：rf＝0.38(硅胶，10％甲醇的二氯甲烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-3-乙酰基-8，8，10，12，16-五甲基-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4，17-二氧双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(76)：
在-78℃下，向甲基酮75(0.150g，0.364mmol，1.0当量)在二氯甲烷(5ml)中的搅拌溶液中加入2，6-二甲基吡啶(0.13ml，1.1mmol，3.0当量)，然后加入三乙基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(22mg，0.87mmol，2.4当量)。8min后，用水(10ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→15％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到白色泡沫状的纯双-tes醚76(0.196g，0.306mmol，产率为84％)。76：rf＝0.37(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(4s，7r，8s，9s，13z，16s)-16-乙酰基-5，5，7，9，13-五甲基-4，8-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]氧杂环己基-13-烯-2，6-二酮(78)：
在-78℃下，向六氯化钨(0.496g，1.25mmol，2.0当量)在四氢呋喃(7ml)中的搅拌悬浮液中逐滴地加入n-丁基锂(1.6m的己烷溶液，1.56ml，2.50mmol，4.0当量)。10min后，使反应混合物缓慢升温至25℃，并再搅拌30min。然后将反应混合物冷却至-20℃，逐滴加入双-tes醚76(0.401g、0.626mmol、1.0当量)在四氢呋喃(4ml)中的溶液，并使反应混合物缓慢升温至0℃。2h后，用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并升温至25℃。分离两相，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，2.5→30％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状的纯烯化甲基酮78(0.335g，0.536mmol，产率为86％)。78：rf＝0.21(硅胶，10％乙醚的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-3-乙酰基-8，8，10，12，16-五甲基-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(80)：
在25℃下，向烯化甲基酮78(0.320g，0.512mmol，1.0当量)在2，2，2-三氟乙醇(3ml)中的搅拌溶液中加入o-(2，4-二硝基苯基)羟胺(153mg，0.768mmol，1.1当量)，然后加入双[铑(α，α，α′，α′，-四甲基-1，3-苯二丙酸)](7.8mg，10.2μmol，0.02当量)。30min后，用二氯甲烷(60ml)稀释反应混合物，并用饱和碳酸氢钠水溶液(3×15ml)和盐水(20ml)洗涤。分离两相，用无水硫酸钠干燥有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，2.5→5％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到淡黄色泡沫状的纯埃博霉素80(38mg，77μmol，产率为70％)。80：rf＝0.29(硅胶，5％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-3-乙酰基-17-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(82)：
在25℃下，向氮丙啶80(105mg，0.164mmol，1.0当量)在二甲基甲酰胺(0.8ml)中的搅拌溶液中加入(2-溴乙氧基)-叔丁基二甲基硅烷(196mg，0.820mmol，5.0当量)，然后加入碳酸钾(90.7mg，0.656mmol，4.0当量)，并将反应混合物加热至70℃。12h后，让反应混合物冷却至25℃，用水(3.5ml)猝灭。用乙酸乙酯(3×2ml)萃取混合物，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，10→40％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到淡黄色泡沫状的纯n-烷基化氮丙啶82(0.118g，0.148mmol，产率为90％)。82：rf＝0.31(硅胶，30％乙酸乙酯的己烷溶液)；
方案s1.膦酸酯41的合成。
4-溴-2-(甲基硫酸氢基)-1，3-噻唑(s2)：
在0℃下，向2，4-二溴噻唑s1(1.97g，8.11mmol，1.0当量)在乙醇(10ml)中的搅拌溶液中加入硫甲醇钠(1.70g，24.3mmol，3.0当量)，使反应混合物缓慢升温至25℃。6h后，用水(30ml)猝灭反应混合物，并用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，2→8％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到白色无定形固体状的纯甲基硫代噻唑s2(nicolaou等人，1998；nicolaou等人，1999；以及nicolaou等人，2002)(1.50g，7.14mmol，产率为88％)。s2：rf＝0.43(硅胶，10％乙醚的己烷溶液)；ft-ir(膜)νmax3006、2990、1275、1260、764、750cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.07(s，1h)、2.70(s，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝168.1、124.5、115.7、16.8ppm。
[2-(甲基硫基)-1，3-噻唑-4-基)甲醇(s3)：
在-78℃下，向甲基硫代噻唑s2(1.48g，7.04mmol，1.0当量)在乙醚(20ml)中的搅拌溶液中逐滴地加入叔丁基锂(1.4m的己烷溶液，6.0ml，8.4mmol，1.2当量)。5min后，加入二甲基甲酰胺(1.03ml，14.1mmol，2.0当量)，并继续搅拌另外20min。然后用甲醇(20ml)猝灭反应混合物，使其升温至0℃，并加入硼氢化钠(533mg，14.1mmol，2.0当量)。30min后，用饱和氯化铵水溶液(20ml)猝灭反应混合物，用水(20ml)稀释，并升温至25℃。分离两相，用乙酸乙酯(3×20ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，20→50％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状的纯溴甲基噻唑s3(0.850g，5.27mmol，产率为75％)。s3：rf＝0.26(硅胶，50％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3334、3118、2924、2860、1529、1407、1314、1261、1213、1135、1037、966、944、849、752、725cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.05(s，1h)、4.71(s，2h)、2.69(s，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝167.5、156.5、114.0、61.2、17.0ppm；针对c5h8nos2+[m+h]+计算的hrms(esi)为162.0042，实测值为162.0048。
4-(溴甲基)-2-(甲基硫基)-1，3-噻唑(s4)：
在-78℃下，向羟甲基噻唑s3(642mg，3.98mmol，1.0当量)在二氯甲烷(6ml)中的搅拌溶液中加入三苯基膦(1.10g，4.18mmol，1.05当量)，然后加入n-溴琥珀酰亚胺(708mg，3.98mmol，1.0当量)。5min后，用水(10ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，1→5％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状的纯溴甲基噻唑s4(0.696g，3.10mmol，产率为78％)。s4：rf＝0.27(硅胶，10％乙醚的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3103、2924、2850、1511、1411、1314、1214、1147、1108、1055、1037、966、882、746、701、672cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.16(s，1h)、4.51(s，2h)、2.69(s，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝167.7、152.3、117.0、27.1、16.9ppm；针对c5h7brns2+[m+h]+计算的hrms(esi)为223.9198，实测值为223.9201。
{[2-(甲基硫酸氢基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}膦酸二乙酯(41)：
将溴甲基噻唑s4(1.02g，4.55mmol，1.0当量)在亚磷酸三乙酯(5.0ml，29mmol，6.4当量)中的搅拌溶液加热至160℃。2h后，在稳定的氮气流下除去亚磷酸三乙酯，并将反应混合物冷却至25℃。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，70→100％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯41(1.18g，4.19mmol，产率为92％)。41：rf＝0.20(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3463、3108、2982、2929、1646、15151478、1411、1393、1368、1314、1248、1163、1097、1023、966、947、867、842、808、781、716、660cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.08(d，j＝3.6hz，1h)、4.08(dq，j＝8.4、7.2hz，4h)、3.32(d，j＝21.0hz，2h)、2.65(s，3h)、1.28(t，j＝7.2hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝166.1、146.8(d，j＝8.1hz)、115.6(d，j＝8.0hz)、62.4(d，j＝6.5hz)、29.5(d，j＝140hz)、16.9、16.5(d，j＝6.0hz)ppm；针对c9h17no3ps2+[m+h]+计算的hrms(esi)为282.0382，实测值为282.0378。
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基硫烷基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(83)：
在-78℃下，向膦酸酯41(115mg，0.409mmol，15当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液中逐滴地加入正丁基锂(1.6m的己烷溶液，0.20ml，0.33mmol，12当量)。45min后，加入甲基酮82(21.6mg，27.0μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的溶液，并将反应混合物缓慢升温至0℃。然后用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→15％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状的受保护的纯埃博霉素83(15.0mg，16μmol，产率为60％)。83：rf＝0.30(硅胶，15％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基硫基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(12)：
在0℃下，向受保护的埃博霉素83(30.0mg，32.4μmol，1.0当量)在四氢呋喃(1.0ml)中的搅拌溶液加入氟化氢-吡啶络合物(70％hf，0.10ml，3.9mmol，过量的)，让反应混合物缓慢升温至25℃。1h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)猝灭反应混合物，分离两相。用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→20％甲醇的乙酸乙酯溶液)，得到白色无定形固体形式的纯埃博霉素12(15.0mg，25.7mmol，产率为79％)。12：rf＝0.41(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
方案s2.膦酸酯42的合成。
(4-溴-1，3-噻唑-2-基)甲醇(s5)：如前所述，羟甲基噻唑s5由市售的2，4-二溴噻唑s1制备；物理和光谱数据与报告的数据一致(nicolaou等人，1998)。
4-溴-2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-1，3-噻唑(s6)：甲硅烷基醚噻唑s6如前所述由羟甲基噻唑s5制备；物理和光谱数据与报告的数据一致(siméon等人，2007)。
[2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-1，3-噻唑-4-基]甲醇(s7)：根据上述制备s3的方法由甲硅烷基醚噻唑s6(2.42g，7.85mmol，1.0当量)制备，得到无色油状羟甲基噻唑s7(1.59g，6.13mmol，产率为78％)；物理和光谱数据与报告的数据一致(lee等人，2001)。
4-(溴甲基)-2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-1，3-噻唑(s8)：
在25℃下，向羟甲基噻唑s7(1.41g，5.43mmol，1.0当量)在乙腈(45ml)中的搅拌溶液中加入三苯基膦(2.42g，9.23mmol，1.7当量)，然后加入2，6-二甲基吡啶(0.25ml，2.2mmol，0.4当量)和四溴化碳(3.06g，9.23mmol，1.7当量)。2h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)猝灭反应混合物，并用乙醚(20ml)稀释。分离两相，用乙酸乙酯(3×15ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→10％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状的纯溴甲基噻唑s8(1.60g，4.96mmol，产率为91％)。s8：rf＝0.31(硅胶，10％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3106、2954、2929、2885、2857、1519、1492、1471、1463、1426、1390、1355、1255、1197、1145、1111、1006、964、939、836、778、706、684、662cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.23(s，1h)、4.95(s，2h)、4.55(s，2h)、0.95(s，9h)、0.13(s，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝174.6、151.9、117.4、63.3、27.4、25.9、18.4、-5.3ppm；针对c11h21brnossi+[m+h]+计算的hrms(esi)为322.0291，实测值为322.0285。
二乙基{[2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}膦酸酯(s9)：
将溴甲基噻唑s8(0.20g，0.63mmol，1.0当量)在亚磷酸三乙酯(2.2ml，13mmol，20当量)中的搅拌溶液加热至160℃。3h后，在稳定的氮气流下除去亚磷酸三乙酯，并将反应混合物冷却至25℃。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50→100％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状的纯膦酸酯s9(190mg，0.51mmol，产率为80％)。s9：rf＝0.28(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3476、3107、2955、2930、2903、2858、1519、1472、1463、1444、1392、1361、1321、1253、1198、1164、1099、1055、1027、959、837、779、722、708、674、658cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.17(d，j＝3.5hz，1h)、4.94(s，2h)、4.11-4.06(m，4h)、3.34(d，j＝21.0hz，2h)、1.27(t，j＝7.1hz，6h)、0.95(s，9h)、0.12(s，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝173.2、146.1(d，j＝8.3hz)、116.1(d，j＝6.4hz)、63.2、62.4(d，j＝6.6hz)、29.0(d，j＝141.0hz)、25.9、18.4、16.5(d，j＝6.0hz)、-5.3ppm；针对c15h31no4pssi+[m+h]+计算的hrms(esi)为380.1475，实测值为380.1475。
{[2-(羟甲基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}膦酸二乙酯(s10)：
在0℃下，向膦酸酯s9(1.53g，4.03mmol，1.0当量)在二甲基甲酰胺(25ml)中的搅拌溶液中加入三(二甲氨基)锍二氟三甲基硅酸盐(5.55g，20.2mmol，5.0当量)在二甲基甲酰胺(14ml)中的溶液，然后加入水(0.73ml，40mmol，10.0当量)，并使反应混合物缓慢升温至25℃。10h后，向反应混合物中加入水(30ml)，然后加入乙酸乙酯(30ml)，并分离两相。用乙酸乙酯(3×15ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(5％甲醇的二氯己烷溶液)，得到无色油状的纯羟甲基膦酸酯s10(687mg，2.56mmol，产率为64％)。s10：rf＝0.33(硅胶，5％甲醇的二氯甲烷)；ft-ir(纯)νmax3319、2983、2909、1520、1477、1443、1393、1346、1325、1231、1163、1139、1097、1050、1022、957、874、845、809、784、723、670cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.14(d，j＝3.2hz，1h)、4.81(s，2h)、4.08-4.04(m，4h)、3.32(d，j＝21.0hz，2h)、1.25(t，j＝7.1hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝172.5、146.0(d，j＝8.2hz)、116.4(d，j＝6.8hz)、62.5(d，j＝6.6hz)、61.9、28.9(d，j＝141.5hz)、16.5(d，j＝6.0hz)ppm；针对c9h17no4ps+[m+h]+计算的hrms(esi)为266.0610，实测值为266.0601。
二乙基{[2-(叠氮甲基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}膦酸二乙酯(s11)
在25℃下，向羟甲基膦酸酯s10(687mg，2.59mmol，1.0当量)在二氯甲烷(10.4ml)中的搅拌溶液中加入三乙胺(0.72ml，5.2mmol，2.0当量)，然后加入4-(二甲氨基)吡啶(32mg，0.26mmol，0.1当量)。将反应混合物冷却至-20℃，加入对甲苯磺酸酐(1.27g，3.89mmol，1.5当量)。30min后，用水(5ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，用二氯甲烷(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。然后在搅拌下将粗甲苯磺酸酯再溶解在二甲基甲酰胺(5ml)中，并冷却至-20℃。加入叠氮化钠(505mg，7.77mmol，3.0当量)，15min后，用水(5ml)猝灭反应混合物并使其升温至25℃。分离两相，用乙酸乙酯(3×3ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(5％甲醇的己烷溶液)，得到无色油状的纯膦酸酯s11(643mg，2.22mmol，产率为86％)。s11：rf＝0.44(硅胶，5％甲醇的二氯甲烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3470、3111、2983、2930、2100、1517、1443、1393、1327、1250、1162、1098、1053、1026、965、874、810、783、724cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.25(d，j＝3.5hz，1h)、4.63(s，2h)、4.12-4.07(m，4h)、3.37(d，j＝21.0hz，2h)、1.27(t，j＝7.1hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝164.3、147.4(d，j＝8.1hz)、117.6(d，j＝7.5hz)、62.4(d，j＝6.6hz)、51.4、29.1(d，j＝141.1hz)、16.5(d，j＝6.0hz)ppm；针对c9h16n4o3ps+[m+h]+计算的hrms(esi)为291.0675，实测值为291.0675。
二乙基[(2-{[双(叔丁氧基羰基)氨基]甲基}-1，3-噻唑-4-基)甲基]膦酸二乙酯(42)：
在25℃下，向叠氮甲基膦酸酯s11(0.20g，0.69mmol，1.0当量)在乙酸乙酯(4ml)中的搅拌溶液中加入5％碳载钯(50mg，25％w/w)，并引入氢气气氛(1个大气压)。12h后，除去氢气气氛，反应混合物通过
二叔丁基({4-[(1e)-2-{(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-5，9-二氧代-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七-3-基}丙-1-烯-1-基]-1，3-噻唑-2-基}甲基)亚氨碳酸二碳酸酯(84)：
在-78℃下，向膦酸酯42(97.0mg，0.209mmol，8.3当量)在四氢呋喃(1.0ml)中的搅拌溶液中逐滴地加入双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(1.0m的四氢呋喃溶液，0.17ml，0.17mmol，6.8当量)。35min后，加入甲基酮82(20mg，25μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.4ml)中的溶液，并将反应混合物再搅拌2h。然后用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→20％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状的受保护的纯埃博霉素84(18.8mg，17μmol，产率为68％)。84：rf＝0.24(硅胶，15％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-3-{(1e)-1-[2-(氨基甲基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(13)：
在0℃下，向受保护的埃博霉素84(32mg，29μmol，1.0当量)在四氢呋喃(2.0ml)中的搅拌溶液加入氟化氢-吡啶络合物(70％hf，0.20ml，7.7mmol，过量的)，让反应混合物缓慢升温至25℃。5h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物，分离两相。用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。在搅拌下将粗物料再溶解在二氯甲烷(2.0ml)中，冷却至0℃。加入三氟乙酸(0.50ml，6.5mmol，过量)，让反应混合物缓慢升温至25℃。2.5h后，减压除去溶剂，在25℃下将所得残余物搅拌再溶解在乙酸乙酯(15ml)中。然后加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)。10min后，分离两相，用无水硫酸钠干燥有机层，并减压浓缩。通过快速柱色谱纯化获得的残留物(硅胶，0→20％甲醇的丙酮溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素13(10.6mg，14.0μmol，总产率为48％)。13：rf＝0.18(硅胶，10％甲醇的丙酮溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基磺酰基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(85)：
在-78℃下，向膦酸酯41(190mg，0.675mmol，9.6当量)在四氢呋喃(1.0ml)中的搅拌溶液中逐滴地加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，0.22ml，0.55mmol，7.7当量)。30min后，加入甲基酮80(45mg，70μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的溶液，并使反应混合物缓慢升温至25℃。1h后，将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭。分离两相，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，30→100％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状的受保护的纯埃博霉素85(32mg，42μmol，产率为59％)。85：rf＝0.34(硅胶，30％己烷的乙酸乙酯溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基磺酰基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(14)：
在0℃下，向受保护的埃博霉素85(13.0mg，17.0μmol，1.0当量)在四氢呋喃(1.0ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％hf，0.10ml，3.9mmol，过量的)，让反应混合物缓慢升温至25℃。1h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物，分离两相。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→15％甲醇的乙酸乙酯溶液)，得到白色无定形固体状的纯埃博霉素14(8.5mg，16μmol，产率为93％)。14：rf＝0.29(硅胶，15％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-3-乙酰基-8，8，10，12，16-五甲基-5，9-二氧杂-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-17-羧酸叔丁酯(86)：
在0℃下，向甲基酮80(28mg，39μmol，1.0当量)在mecn(1.0ml)中的搅拌溶液中加入三乙胺(16mg，0.12mmol，3.0当量)，之后加入二碳酸二叔丁酯(26mg，0.12mmol，3.0当量)和4-二甲基氨基吡啶(1.0mg，8.2μmol，0.2当量)。5min后，减压除去溶剂，并将所获得的残留物通过快速柱色谱(硅胶，5→15％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，以得到无色油状的纯氨基甲酸酯86(23mg，31μmol，产率为78％)。86：rf＝0.36(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-3-乙酰基-17-(4-甲氧苄基)-8，8，10，12，16-五甲基-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(86a)：
在0℃下，向甲基酮80(71.8mg，0.112mmol，1.0当量)在dmf(0.5ml)中的搅拌溶液中加入对甲氧基苄基溴(27.1mg，0.135mmol，1.2当量)，之后是碳酸钾(18.7mg，0.135mmol，1.2当量)。3h后，将反应混合物用水(5ml)猝灭，使其升温至25℃，并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱进行纯化(硅胶，5→40％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的对甲氧基苄基氮丙啶86a(61.7mg，81.1μmol，产率为78％)。86a：rf＝0.29(硅胶，30％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-3-乙酰基-8，8，10，12，16-五甲基-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-17-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(87)：
在0℃下，向甲基酮80(65.0mg，0.102mmol，1.0当量)在ch2cl2(0.5ml)中的搅拌溶液中加入n，n-二异丙基乙胺(26.3mg，0.203mmol，2.0当量)，之后是2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(25.5mg，0.153mmol，1.5当量)。2h后，用水(10ml)猝灭反应混合物，使其升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(2×10ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱进行纯化(硅胶，5→20％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯氮丙啶87(46.0mg，59.7μmol，产率为59％)。87：rf＝0.23(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基磺酰基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-17-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(89)：
在-78℃下，向膦酸酯41(0.120g，0.427mmol，23当量)在四氢呋喃(1.0ml)中的搅拌溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，0.14ml，0.34mmol，19当量)。30min后，在-78℃下将反应混合物转移到甲基酮87(14.0mg，18.2μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液中，并使反应混合物在2.5h内缓慢升温至10℃。然后用饱和氯化铵水溶液(5ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→15％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状的受保护的纯埃博霉素89(9.8mg，11μmol，产率为60％)。89：rf＝0.23(硅胶，15％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基磺酰基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(14)：
在0℃下，向受保护的埃博霉素89(6.0mg，6.7μmol，1.0当量)在二氯甲烷(1.2ml)中的搅拌溶液中加入三氟乙酸(0.3ml，3.9mmol，过量)，并使反应混合物缓慢升温至25℃。1.5h后，减压去除溶剂，并将所获得的残留物通过制备型薄层色谱(硅胶，25％甲醇的乙酸乙酯溶液)纯化，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素14(2.7mg，5.0μmol，产率为75％)(关于14的表征数据，请参见上文)。
方案s3.膦酸酯43的合成。
2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-羧酸乙酯(s13)：
在25℃下，向氨基噻唑酯s12(0.500g，2.90mmol，1.0当量)在四氢呋喃(9.7ml)中的搅拌溶液中依次加入三乙胺(0.53ml，3.8mmol，1.3当量)、4-(二甲基氨基)吡啶(35mg，0.29mmol，0.1当量)和二碳酸二叔丁酯(696mg，3.19mmol，1.1当量)，并将反应混合物加热至60℃。1h后，将反应混合物冷却至25℃，并用饱和氯化铵水溶液(15ml)猝灭。分离两相，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(25％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到白色固体状的纯噻唑基氨基甲酸酯s13(569mg，2.10mmol，产率为72％)。s13：rf＝0.24(硅胶，25％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(膜)νmax3168、3068、2980、2935、1713、1553、1478、1455、1393、1368、1331、1294、1235、1207、1154、1098、1071、1021、957、915、875、802、734、682cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝8.67(brs，1h)、7.77(s，1h)、4.35(q，j＝7.2hz，2h)、1.52(s，9h)、1.36(t，j＝7.2hz，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝161.5、159.8、152.3、142.1、121.7、83.3、61.4、28.3、14.5ppm；针对c11h16n2o4s+[m+na]+计算的hrms(esi)为295.0723，实测值为295.0712。
[4-(羟甲基)-1，3-噻唑-2-基]氨基甲酸叔丁酯(s14)：
在25℃下，向噻唑甲酸酯s13(1.14g，4.19mmol，1.0当量)在乙醚(14ml)中的搅拌溶液中加入硼氢化锂(2.0m的四氢呋喃溶液，10.5ml，21.0mmol，5.0当量)。1h后，小心地用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭反应混合物。分离两相，用乙酸乙酯(3×8ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱(30％己烷的乙酸乙酯溶液)纯化，以得到无色油状的纯羟甲基噻唑s14(907mg，3.94mmol，产率为94％)。s14：rf＝0.57(硅胶，30％己烷的乙酸乙酯溶液)；ft-ir(纯)νmax3320、3185、3064、2979、2934、1718、1557、1478、1455、1394、1369、1330、1294、1245、1157、1076、1033、965、915、868、792、732、685cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝6.74(s，1h)、4.57(s，2h)、1.57(s，9h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝161.6、152.6、151.0、109.2、83.1、60.1、28.3ppm；针对c9h14n2o3sna+[m+na]+计算的hrms(esi)为253.0617，实测值为253.0616。
[4-(溴甲基)-1，3-噻唑-2-基]氨基甲酸叔丁酯(s15)：
在-78℃下向羟甲基噻唑s14(115mg，0.500mmol，1.0当量)在二氯甲烷(5ml)中的搅拌溶液中加入三苯基膦(135mg，0.510mmol，1.05当量)，之后是n-溴代琥珀酰亚胺(89mg，0.50mmol，1.0当量)。15min后，用水(2.5ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯溴甲基噻唑s15(104mg，0.350mmol，产率为71％)。s15：rf＝0.31(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3164、3056、2978、2933、2803、1713、1553、1478、1454、1432、1393、1368、1332、1289、1243、1215、1151、1068、1033、977、910、865、791、763、701、655cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝10.08(brs，1h)、6.88(s，1h)、4.54(s，2h)、1.56(s，9h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝161.4、152.6、146.8、111.6、83.2、28.4、27.8ppm；针对c9h14brn2o2s+[m+h]+计算的hrms(esi)为292.9954，实测值为292.9950。
({2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基}甲基)膦酸二乙酯(43)：
将溴甲基噻唑s15(210mg，0.71mmol，1.0当量)在亚磷酸三乙酯(2.4ml，14mmol，20当量)中的搅拌溶液加热至160℃。3h后，在稳定的氮气流下去除亚磷酸三乙酯，并将反应混合物冷却至25℃。在25℃下将粗物质在搅拌下溶于四氢呋喃(2.4ml)中，并依次加入三乙胺(0.26ml，1.9mmol，2.6当量)、4-(二甲基氨基)吡啶(9.0mg，70μmol，0.1当量)和二碳酸二叔丁酯(340mg，1.6mmol，2.2当量)。将反应混合物加热至60℃保持3.5h，然后使其冷却至25℃，并用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭。分离两相，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(35％己烷的乙酸乙酯溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯43(260mg，0.57mmol，产率为80％)。43：rf＝0.28(硅胶，35％己烷乙酸的乙酯溶液)；ft-ir(纯)νmax3475、3109、2981、2934、1776、1725、1526、1490、1458、1395、1370、1345、1326、1248、1156、1120、1054、1027、966、948、846、802、777cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.03(d，j＝3.6hz，1h)、4.10-4.05(m，4h)、3.28(d，j＝21.0hz，2h)、1.52(s，18h)、1.27(t，j＝7.1hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝158.0、149.8、142.8(d，j＝8.3hz)、114.5(d，j＝7.7hz)、84.7、62.4(d，j＝6.2hz)、29.3(d，j＝140.7hz)、27.9、16.5(d，j＝6.0hz)ppm；针对c18h31n2o7psna+[m+na]+计算的hrms(esi)为473.1482，实测值为473.1471。
{4-[(1e)-2-{(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-5，9-二氧杂-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烯-3-基}丙-1-烯-1-基]-1，3-噻唑-2-基}亚氨基二碳酸二叔丁酯(15a)：
在-78℃下，向膦酸酯43(118mg，0.266mmol，14当量)在四氢呋喃(1.2ml)中的搅拌溶液中逐滴地加入双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(1.0m的四氢呋喃溶液，0.266ml，0.266mmol，14当量)。30min后，加入甲基酮82(15.0mg，19.0μmol，1.0当量)在四氢呋喃(1.0ml)中的溶液，并使反应混合物在3.5h内缓慢升温至0℃。然后用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→20％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的受保护的埃博霉素15a(14.2mg，13.1μmol，产率为69％)。15a：rf＝0.20(硅胶，10％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-3-[(1e)-1-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)丙-1-烯-2-基]-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(15)：
在0℃下向受保护的埃博霉素15a(10mg，9.1μmol，1.0当量)在四氢呋喃(2.0ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％hf，0.05ml，1.9mmol，过量)，并使反应混合物缓慢升温至25℃。5h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。在搅拌下将粗物料再溶解在二氯甲烷(1.0ml)中，冷却至0℃。加入三氟乙酸(0.10ml，1.3mmol，过量)，让反应混合物缓慢升温至25℃。6h后，减压除去溶剂，在在25℃下将所得残余物搅拌并再溶解在乙酸乙酯(15ml)中。然后加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)。10min后，分离两相，用无水硫酸钠干燥有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，10％甲醇的二氯甲烷溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素15(4.0mg，7.2μmol，总产率为80％)。15：rf＝0.13(硅胶，10％甲醇的二氯甲烷溶液)；
方案s4.膦酸酯44的合成。
(2-甲基-1，3-噁唑-4-基)甲醇(s23)：
在0℃下向噁唑甲酯s22(0.500g，3.54mmol，1.0当量)在四氢呋喃(35ml)中的搅拌溶液中逐滴加入氢化锂铝(1.0m的四氢呋喃溶液，3.54ml，3.54mmol，1.0当量)。30min后，将反应混合物小心地用十水硫酸钠(11.4g，35.4mmol，10.0当量)猝灭，并使其加热至25℃。然后将猝灭的反应混合物滤过
4-(溴甲基)-2-甲基-1，3-噁唑(s24)：
在25℃下向羟甲基噁唑s23(502mg，4.44mmol，1.0当量)在二氯甲烷(37ml)中的搅拌溶液中依次加入三苯基膦(1.98g，7.55mmol，1.7当量)、2，6-二甲基吡啶(0.21ml，1.8mmol，0.4当量)和四溴化碳(2.50g，7.55mmol，1.7当量)。1h后，将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(8ml)和饱和硫代硫酸钠水溶液(8ml)猝灭。分离两相，并用二氯甲烷(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，25％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯溴甲基噁唑s24(672mg，3.82mmol，产率为86％)。s24：rf＝0.34(硅胶，25％乙酸乙酯的己烷溶液ft-ir(纯)νmax3140、2922、2859、1585、1430、1385、1330、1279、1223、1199、1103、1055、1033、989、917、872、834、772、746、700cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.53(s，1h)、4.35(s，2h)、2.46(s，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝162.4、137.4、135.9、23.2、14.1ppm；针对c5h7brno+[m+h]+计算的hrms(esi)为175.9711，实测值为175.9706。
[(2-甲基-1，3-噁唑-4-基)甲基]膦酸二乙酯(44)：
在25℃下向溴甲基噁唑s24(0.10g，0.57mmol，1.0当量)在苯(1.9ml)中的搅拌溶液中加入亚磷酸三乙酯(0.49ml，2.85mmol，5.0当量)。将反应混合物加热至100℃保持24h，使其冷却至25℃，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，0→5％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯44(111mg，0.480mmol，产率为84％)。44：rf＝0.35(硅胶，5％甲醇的乙酸乙酯溶液)；ft-ir(纯)νmax3466、3135、2984、2933、2911、1641、1580、1479、1445、1392、1369、1331、1288、1248、1198、1164、1098、1052、1024、967、847、811、740、689cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.50(d，j＝3.6hz，1h)、4.14-4.08(m，4h)、3.06(d，j＝20.7hz，2h)、2.42(s，3h)、1.30(t，j＝7.1hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝161.4，136.1(d，j＝7.9hz)、131.4(d，j＝7.8hz)、62.4(d，j＝6.6hz)、24.8(d，j＝143.2hz)、16.5(d，j＝6.0hz)、14.0ppm；针对c9h16no4pna+[m+na]+计算的hrms(esi)为256.0709，实测值为256.0718。
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(2-甲基-1，3-噁唑-4-基)丙-1-烯-2-基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(16)：
在-78℃下，向膦酸酯44(108mg，0.460mmol，61当量)在四氢呋喃(1.0ml)中的搅拌溶液中逐滴地加入双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(1.0m的四氢呋喃溶液，0.44ml，0.44mmol，58当量)。20min后，在-78℃下将等分的反应混合物44(0.30ml，约91μmol，12当量)快速转移至甲基酮82(6.1mg，7.6μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.3ml)中的搅拌溶液。使反应混合物在30min内缓慢升温至-40℃，然后用饱和氯化铵水溶液(1.0ml)猝灭，并使其升温至25℃。分离两相，用乙酸乙酯(3×1ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，20→50％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到受保护的埃博霉素(产率为约42％)和甲基酮82(产率为约27％)的混合物。这种难以分离的混合物直接用于下一步骤。
在0℃下向受保护的埃博霉素(2.8mg，3.2μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.2ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％hf，0.10ml，3.9mmol，过量)，并使反应混合物缓慢升温至25℃。3h后，将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭。分离两相，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱法纯化(硅胶，5％甲醇的乙酸乙酯溶液+1.5％氢氧化铵)，以得到为白色无定形固体形式的纯埃博霉素16[1.5mg，2.8μmol，总产率为37％，(e)∶(z)＝88∶12]，以及为白色无定形固体状的回收的去保护的甲基酮81(0.96mg，2.1μmol，27％来自82)。16：rf＝0.40(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
方案s5.膦酸酯45的合成。
2-(甲基磺酰基)-1，3-噁唑-4-羧酸乙酯(s26)：
在25℃下向溴噁唑乙酯s25(0.500g，2.27mmol，1.0当量)在乙醇(15ml)中的搅拌溶液中加入甲基硫醇钠(635mg，9.06mmol，4.0当量)。2h后，将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭，并用乙酸乙酯(20ml)稀释。分离两相，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯噁唑乙酯s26(111mg，0.480mmol，产率为84％)。s26：rf＝0.35(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3161、3114、2983、2935、1739、1719、1579、1567、1504、1446、1392、1370、1315、1262、1177、1128、1092、1022、973、924、863、830、763、692cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝8.18(s，1h)、4.37(q，j＝7.1hz，2h)、2.70(s，3h)、1.37(t，j＝7.1hz，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝163.3、161.1、145.0、134.8、61.4、14.9、14.4ppm；针对c7h9no3sna+[m+na]+计算的hrms(esi)为210.0195，实测值为210.0195。
[2-(甲基磺酰基)-1，3-噁唑-4-基]甲醇(s27)：
在0℃下向噁唑乙酯s26(520mg，2.8mmol，1.0当量)在四氢呋喃(28ml)中的搅拌溶液中加入氢化铝锂(1.0m的四氢呋喃溶液，1.4ml，1.4mmol，0.5当量)。30min后，将反应混合物小心地用十水硫酸钠(9.0g，28mmol，10当量)猝灭，并使其升温至25℃。然后将猝灭的反应混合物滤过
4-(溴甲基)-2-(甲基磺酰基)-1，3-噁唑(s28)：
在0℃下向羟甲基噁唑s27(333mg，2.29mmol，1.0当量)在二氯甲烷(23ml)中的搅拌溶液中依次加入三苯基膦(1.02g，3.89mmol，1.7当量)和四溴化碳(1.29g，3.89mmol，1.7当量)。1h后，将反应混合物依次用饱和碳酸氢钠水溶液(8ml)和饱和硫代硫酸钠水溶液(8ml)猝灭，并将其升温至25℃。分离两相，用二氯甲烷(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，25％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到白色无定形固体形式的纯溴甲基噁唑s28(367mg，1.76mmol，产率为77％)。s28：rf＝0.32(硅胶，10％乙酸乙酯的己烷溶液ft-ir(膜)νmax3178、3134、3014、2970、2933、1593、1500、1429、1307、1258、1211、1155、1087、991、981、932、761、727、694、652cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.64(s，1h)、4.34(s，2h)、2.66(s，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝162.4、138.8、137.5、22.9、14.8ppm；针对c5h7brnos+[m+h]+计算的hrms(esi)为207.9426，实测值为207.9425。
{[2-(甲基磺酰基)-1，3-噁唑-4-基]甲基}膦酸二乙酯(45)：
在25℃下向溴甲基噁唑s28(416mg，2.00mmol，1.0当量)在苯(6.7ml)中的搅拌溶液中加入亚磷酸三乙酯(1.7ml，10mmol，5.0当量)。将反应混合物加热至95℃保持12h，使其冷却至25℃，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50→100％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯45(498mg，1.88mmol，产率为94％)。45：rf＝0.28(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3466、3191、3139、2983、2933、2910、2871、1647、1595、1497、1443、1394、1369、1309、1244、1163、1052、1024、966、846、808、725、688cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.62(d，j＝3.6hz，1h)、4.16-4.09(m，4h)、3.08(d，j＝20.7hz，2h)、2.63(s，3h)、1.32(t，j＝7.1hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝161.1，137.7(d，j＝8.0hz)、133.0(d，j＝7.8hz)、62.5(d，j＝6.4hz)、24.9(d，j＝143.1hz)、16.5(d，j＝6.1hz)、14.8ppm；针对c9h17no4ps+[m+h]+计算的hrms(esi)为266.0610，实测值为266.0621。
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基磺酰基)-1，3-噁唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(17a)：
在-78℃下，向膦酸酯45(493mg，1.86mmol，219当量)在四氢呋喃(5.0ml)的搅拌溶液中逐滴地加入双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(1.0m的四氢呋喃溶液，1.75ml，1.75mmol，206当量)。20min后，在-78℃下将等分的反应混合物45(0.46ml，约130μmol，15当量)转移至甲基酮82(6.8mg，8.5μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.4ml)中的搅拌溶液。30min后，将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(0.6ml)猝灭，用水(5ml)和乙酸乙酯(5ml)稀释，并升温至25℃。分离两相，用乙酸乙酯(3×3ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，20→50％乙酸乙酯的己烷溶液)，并通过制备型薄层色谱(硅胶，30％乙酸乙酯的己烷溶液)进一步纯化，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素17a(5.0mg，5.5μmol，产率为65％)。17a：rf＝0.20(硅胶，15％乙酸乙酯的己烷溶液
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基磺酰基)-1，3-噁唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(17)：
在0℃下向受保护的埃博霉素17a(5.0mg，5.5μmol，1.0当量)在四氢呋喃(1.0ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％hf，0.10ml，3.9mmol，过量)，并使反应混合物缓慢加热至25℃。3h后，将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭。分离两相，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素17(2.9mg，5.2μmol，产率为95％)。17：rf＝0.32(硅胶，10％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-乙酰氧基乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基磺酰基)-1，3-噁唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-5，9-二氧杂-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-7，11-二基二乙酯(18)：
在0℃下向埃博霉素17(1.0mg，2.4μmol，1.0当量)在二氯甲烷(0.25ml)中的搅拌溶液中加入新鲜蒸馏的乙酸酐(1.1μl，12μmol，5.0当量)，之后是4-二甲基氨基吡啶(0.90mg，7.2μmol，3.0当量)。在25min内将反应混合物缓慢升温至25℃，然后用饱和氯化铵水溶液(1.0ml)猝灭。分离两相，用乙酸乙酯(3×0.5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，25％己烷的乙酸乙酯溶液)，以得到无色膜状的纯埃博霉素18(0.90mg，1.8μmol，产率为74％)。18：rf＝0.34(硅胶，25％己烷的乙酸乙酯溶液)；
方案s6.膦酸酯46和47的合成。
2-(4-溴-1，3-噻唑-2-基)乙醇(s16)：
在-78℃下向2，4-二溴噻唑s1(10.2g，42.0mmol，1.0当量)在乙醚(250ml)中的搅拌溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，16.8ml，42.0mmol，1.0当量)。20min后，加入环氧乙烷(2.5m的四氢呋喃溶液，16.8ml，42.0mmol，1.0当量)，之后逐滴加入三氟化硼乙醚络合物(5.18ml，42.0mmol，1.0当量)在乙醚(30ml)中的溶液。20min后，将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(50ml)猝灭，并升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×80ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，30→60％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯羟乙基噻唑s16(5.42g，26.0mmol，产率为62％)。s16：rf＝0.24(硅胶，50％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3350、3122、2881、1480、1421、1330、1257、1210、1135、1085、1052、938、887、857、832、733cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.12(s，1h)、4.02(td，j＝6.0、6.0hz，2h)、3.22(t，j＝6.0hz，2h)、2.67(t，j＝6.0hz，1h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝169.7、124.6、116.5、61.3、36.2ppm；针对csh7brnos+[m+h]+计算的hrms(esi)为207.9426，实测值为207.9421。
4-溴-2-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1，3-噻唑(s17)：
在25℃下向羟乙基噻唑s16(5.38g，25.9mmol，1.0当量)在二甲基甲酰胺(25ml)中的搅拌溶液中加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(4.68g，31.0mmol，1.2当量)，之后是咪唑(2.64g，38.9mmol，1.5当量)。1h后，将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)稀释，然后用水(20ml)和盐水(20ml)洗涤。分离两相，用无水硫酸钠干燥有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，2→8％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯甲硅烷基醚s17(8.25g，25.6mmol，产率为99％)。s17：rf＝0.24(硅胶，5％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3125、2954、2928、2856、1481、1471、1437、1388、1361、1331、1254、1147、1099、1050、1006、939、914、884、831、810、776、728cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.09(s，1h)、3.93(t，j＝6.0hz，2h)、3.19(t，j＝6.0hz，2h)、0.87(s，9h)、0.02(s，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝169.6、124.1、116.7、61.9、37.2、26.0、18.4、-5.3ppm；针对c11h21brnossi+[m+h]+计算的hrms(esi)为322.0291，实测值为322.0281。
[2-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1，3-噻唑-4-基]甲醇(s18)：
在-78℃下向甲硅烷基醚s17(2.45g，7.60mmol，1.0当量)在乙醚(75ml)中的搅拌溶液中逐滴加入叔丁基锂(1.7m的戊烷溶液，5.40ml，9.12mmol，1.2当量)。1min后，逐滴加入二甲基甲酰胺(1.17ml，15.2mmol，2.0当量)。5min后，将反应混合物用甲醇(30ml)猝灭，加入硼氢化钠(1.44g，38.0mmol，5.0当量)，并使反应混合物升温至0℃。5min后，将反应混合物用水(60ml)猝灭，并升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×40ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，30→60％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯溴甲基噻唑s18(1.70g，6.23mmol，产率为82％)。s18：rf＝0.32(硅胶，60％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3301、2954、2928、2857、1530、1471、1387、1361、1254、1156、1096、969、937、913、834、810、774、660cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.05(s，1h)、4.73(d，j＝6.0hz，2h)、3.94(t，j＝6.0hz，2h)、3.18(t，j＝6.6hz，2h)、3.09(t，j＝6.0hz，1h)、0.87(s，9h)、0.02(s，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝169.0、155.6、114.7、62.2、60.9、37.0、26.0、18.4、-5.3ppm；针对c12h24no2ssi+[m+h]+计算的hrms(esi)为296.1111，实测值为296.1102。
4-(溴甲基)-2-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1，3-噻唑(s19)：
在-78℃下向羟甲基噻唑s18(2.45g，8.96mmol，1.0当量)在二氯甲烷(30ml)中的搅拌溶液中加入三苯基膦(2.47g，9.41mmol，1.05当量)，之后是n-溴代琥珀酰亚胺(1.59g，8.96mmol，1.0当量)。5min后，用水(50ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×20ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，2→8％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯溴甲基噻唑s19(2.93g，8.71mmol，产率为97％)。s19：rf＝0.19(硅胶，5％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax2954、2928、2883、2856、1517、1471、1424、1387、1361、1333、1254、1214、1161、1095、1053、1006、977、937、915、834、810、775、731、679、659cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.16(s，1h)、4.55(s，2h)、3.95(t，j＝6.0hz，2h)、3.19(t，j＝6.0hz，2h)、0.87(s，9h)、0.02(s，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝169.2、151.4、117.8、77.4、62.1、37.1、27.4、26.0、18.4、-5.3ppm；针对c12h23brnossi+[m+h]+计算的hrms(esi)为336.0448，实测值为336.0441。
{[2-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}膦酸二乙酯(46)：
向溴甲基噻唑s19(2.83g，8.41mmol，1.0当量)在亚磷酸三乙酯(5.0ml，29mmol，3.5当量)中的搅拌溶液加热至160℃。2h后，在稳定的氮气流下除去亚磷酸三乙酯，并将反应混合物冷却至25℃。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50→100％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯46(3.29g，8.36mmol，产率为99％)。46：rf＝0.35(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3468、2955、2929、2857、1652、1519、1472、1444、1391、1361、1323、1252、1162、1097、1054、1026、964、917、836、811、777、723、662cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.09(d，j＝3.6hz，1h)、4.08(dq，j＝8.4、7.2hz，4h)、3.93(t，j＝6.0hz，2h)、3.36(d，j＝21.0hz，2h)、3.17(t，j＝6.0hz，2h)、1.28(t，j＝7.2hz，6h)、0.88(s，9h)、0.02(s，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝167.6、145.7(d，j＝8.0hz)、116.2(d，j＝7.1hz)、62.4(d，j＝6.5hz)、62.3、37.1、29.5(d，j＝140.1hz)、26.0、18.4、16.6(d，j＝6.0hz)、-5.3ppm；针对c16h32no4pssina+[m+na]+计算的hrms(esi)为416.1451，实测值为416.1441。
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-3-{(1e)-1-[2-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-8，8，10，12，16-五甲基-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(19a)：
在-78℃下向膦酸酯46(0.200g，0.508mmol，12当量)在四氢呋喃(0.8ml)中的搅拌溶液中逐滴加入双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(1.0m的四氢呋喃溶液，0.41ml，0.41mmol，9.7当量)。25min后，加入甲基酮82(33.6mg，42.1μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的溶液，并将反应混合物缓慢升温至0℃。然后用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→15％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素19a(21.8mg，21.0μmol，产率为50％)。19a：rf＝0.36(硅胶，15％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-3-{(1e)-1-[2-(2-羟乙基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-8，8，10，12，16-五甲基-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(19)：
在0℃下，向受保护的埃博霉素19a(6.9mg，6.6μmol，1.0当量)在四氢呋喃(1.5ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％hf，0.03ml，1.2mmol，过量的)，让反应混合物缓慢升温至25℃。4h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物，分离两相。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，0→30％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素19(3.5mg，6.0μmol，产率为90％)。19：rf＝0.35(硅胶，30％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
{[2-(2-羟乙基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}膦酸二乙酯(s20)：
在0℃下向膦酸酯46(2.75g，6.99mmol，1.0当量)在四氢呋喃(20ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％hf，0.90ml，35mmol，5.0当量)。1h后，将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)猝灭，并升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×20ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，0→10％甲醇的二氯甲烷溶液)，以得到无色油状的纯羟乙基膦酸酯s20(1.94g，6.95mmol，产率为99％)。s20：rf＝0.20(硅胶，5％甲醇的二氯甲烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3389、2982、2909、1653、1519、1477、1443、1393、1368、1324、1226、1162、1126、1098、1048、1017、963、874、842、808、784、722、668cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.07(d，j＝3.6hz，1h)、4.07(dq，j＝7.8、6.6hz，4h)、3.96(td，j＝6.0、6.0hz，2h)、3.66(t，j＝6.0hz，1h)、3.33(d，j＝21.0hz，2h)、3.16(t，j＝6.0hz，2h)、1.27(t，j＝7.2hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝168.3，146.1(d，j＝8.6hz)、115.8(d，j＝8.0hz)、62.4(d，j＝6.6hz)、61.3、35.7、29.5(d，j＝140.4hz)、16.5(d，j＝6.0hz)ppm；针对c10h18no4psna+[m+na]+计算的hrms(esi)为302.0586，实测值为302.0577。
{[2-(2-叠氮基乙基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}膦酸二乙酯(s21)：
在25℃下向羟乙基膦酸酯s20(1.37g，4.91mmol，1.0当量)在二氯甲烷(10ml)中的搅拌溶液中加入三乙胺(2.05ml，14.7mmol，3.0当量)和4-(二甲基氨基)吡啶(60.0mg，0.491mmol，0.1当量)。将反应混合物冷却至-20℃，加入对甲苯磺酸酐(3.20g，9.81mmol，2.0当量)。30min后，用水(10ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用二氯甲烷(3×10ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。然后在搅拌下于25℃下将粗制甲苯磺酸酯重新溶解在二甲基甲酰胺(5ml)中。然后加入叠氮化钠(957mg，14.7mmol，3.0当量)，并将反应混合物加热至65℃。2h后，将反应混合物冷却至25℃，用水(20ml)猝灭，并用乙酸乙酯(3×15ml)萃取。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，0→4％甲醇的二氯甲烷溶液)，以得到无色油状的纯叠氮基乙基膦酸酯s21(1.16g，3.81mmol，产率为78％)。s21：rf＝0.38(硅胶，5％甲醇的二氯甲烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3464、3111、2983、2931、2098、1647、1519、1477、1445、1394、1323、1250、1163、1124、1098、1053、1025、965、873、846、828、783、725、663cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.14(d，j＝3.6hz，1h)、4.09(dq，j＝7.8、7.2hz，4h)、3.71(t，j＝6.6hz，2h)、3.37(d，j＝21.0hz，2h)、3.23(t，j＝6.6hz，2h)、1.29(t，j＝7.2hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝165.9、146.7(d，j＝8.1hz)、116.5(d，j＝7.2hz)、62.4(d，j＝6.0hz)、50.7、33.1、29.6(d，j＝140.3hz)、16.6(d，j＝6.0hz)ppm；针对c10h17n4o3psna+[m+na]+计算的hrms(esi)为327.0651，实测值为327.0661。
[(2-{2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]乙基}-1，3-噻唑-4-基)甲基]膦酸二乙酯(47)：
在25℃下向叠氮基乙基膦酸酯s21(1.06g，3.48mmol，1.0当量)在四氢呋喃/水(9∶1，15ml)中的搅拌溶液中加入三苯基膦(2.74g，10.5mmol，3.0当量)，并将反应混合物加热至65℃。1.5h后，将反应混合物冷却至25℃，并依次加入水(6ml)、碳酸氢钠(0.882g，10.5mmol，3.0当量)和二碳酸二叔丁酯(1.52g，6.96mmol，2.0当量)。2.5h后，分离两相，并用乙酸乙酯(3×15ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，0→7.5％甲醇的二氯甲烷溶液)，以得到无色油状的膦酸酯47(1.65g，3.44mmol，产率为99％)。47：rf＝0.37(硅胶，5％甲醇的二氯甲烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3471、2980、2933、1791、1748、1697、1519、1478、1444、1393、1367、1353、1254、1220、1166、1126、1054、1026、962、892、854、806、779、722cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.10(d，j＝3.6hz，1h)、4.08(dq，j＝7.8、7.2hz，4h)、3.96-3.94(m，2h)、3.35(d，j＝21.0hz，2h)、3.25-3.23(m，2h)、1.49(s，18h)、1.28(t，j＝7.2hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝166.7、152.3、146.5(d，j＝7.8hz)、116.1(d，j＝7.2hz)、82.8、62.4(d，j＝6.0hz)、46.1、32.9、29.5(d，j＝140.0hz)、28.2、16.6(d，j＝6.0hz)ppm；针对c20h35n2o7psna+[m+na]+计算的hrms(esi)为501.1795，实测值为501.1803。
(2-{4-[(1e)-2-{(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-5，9-二氧杂-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烯-3-基}丙-1-烯-1-基]-1，3-噻唑-2-基}乙基)亚氨基二碳酸二叔丁酯(20a)：
在-78℃下，向膦酸酯47(330mg，0.690mmol，12当量)在四氢呋喃(1.0ml)中的搅拌溶液中逐滴地加入双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(1.0m的四氢呋喃溶液，0.41ml，0.41mmol，9.7当量)。25min后，加入甲基酮82(45.0mg，56.4μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的溶液，并使反应混合物缓慢升温至0℃。2h后，用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→20％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素20a(28.2mg，25.1mmol，产率为45％)。20a：rf＝0.30(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-3-{(1e)-1-[2-(2-氨基乙基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(20)：
在0℃下，向受保护的埃博霉素20a(14.9mg，13.3μmol，1.0当量)在四氢呋喃(2.0ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％hf，0.06ml，2.31mmol，过量的)，让反应混合物缓慢升温至25℃。5h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物，分离两相。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。在搅拌下将粗物质重新溶解于二氯甲烷(1.0ml)中，并冷却至0℃。加入三氟乙酸(0.10ml，1.3mmol，过量)，并使反应混合物缓慢升温至25℃，并搅拌另外3h。减压去除溶剂，并在搅拌下于25℃下将获得的残留物重新溶解在乙酸乙酯(15ml)中。然后加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)。10min后，分离两相，用无水硫酸钠干燥有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，40％甲醇的丙酮溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素20(5.5mg，10μmol，总产率为71％)。20：rf＝0.39(硅胶，40％甲醇的丙酮溶液)；
方案s7.膦酸酯48的合成。
(吡啶-2-基甲基)膦酸二乙酯(48)：
将溴甲基吡啶氢溴酸盐s29(0.410g，2.38mmol，1.0当量)在亚磷酸三乙酯(1.5ml，8.8mmol，3.7当量)中的搅拌溶液加热至160℃。2.5h后，在稳定的氮气流下去除亚磷酸三乙酯，并将反应混合物冷却至25℃。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50→80％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯48(355mg，2.87mmol，产率为65％)。48：rf＝0.33(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3467、2983、2931、2908、1588、1570、1474、1435、1392、1368、1238、1199、1162、1097、1048、1018、957、839、809、748、704cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝8.54(dd，j＝4.8、1.8hz，1h)、7.64(ddd，j＝7.8、7.8、1.8hz，1h)、7.39(ddd，j＝7.8、2.4、1.2hz，1h)、7.19-7.16(m，1h)、4.08(dq，j＝7.8、7.2hz，4h)、3.42(d，j＝22.2hz，2h)、1.27(t，j＝7.2hz，6h)ppm；13cnnr(151mhz，cdcl3)δ＝152.9(d，j＝8.3hz)、149.7(d，j＝2.5hz)、136.7(d，j＝2.6hz)、124.5(d，j＝5.0hz)、122.0(d，j＝3.3hz)、62.4(d，j＝6.5hz)、36.9(d，j＝134.6hz)、16.5(d，j＝6.0hz)ppm；针对c10h17no3p+[m+h]+计算的hrms(esi)为230.0941，实测值为230.0948。
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(吡啶-2-基)丙-1-烯-2-基]-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(21a)：
在-78℃下向膦酸酯48(317mg，1.38mmol，28当量)在四氢呋喃(1ml)中的搅拌溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，0.44ml，1.1mmol，22当量)。30min后，加入甲基酮82(40.0mg，50μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的溶液，并使反应混合物缓慢升温至25℃。1.5h后，用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，10→40％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素21a(41mg，47μmol，产率为94％)。21a：rf＝0.23(硅胶，30％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(吡啶-2-基)丙-1-烯-2-基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(21)：
在0℃下，向受保护的埃博霉素21a(39.0mg，44.5μmol，1.0当量)在四氢呋喃(2.0ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％hf，0.20ml，7.7mmol，过量的)，让反应混合物缓慢升温至25℃。5h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物，分离两相。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→40％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素21(22mg，42μmol，产率为93％)。21：rf＝0.40(硅胶，30％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
方案s8.膦酸酯49的合成。
4，4′-二甲基-2，2′-双-1，3-噻唑(s34)：
在25℃下向4-甲基噻唑s32(2.00g，20.2mmol，1.0当量)在间二甲苯(40ml)中的搅拌溶液中加入2-吡啶酮钠盐s33(53.0mg，0.404mmol，0.02当量)，之后是cucl(20.0mg，0.202mmol，0.01当量)。将反应混合物在氩气气氛下加热至150℃保持5min。然后去除氩气气氛，并在露天下继续回流。60h后，将反应混合物冷却至25℃，滤过
4-(溴甲基)-4′-甲基-2，2′-双-1，3-噻唑(s35)：
在25℃下向噻唑s34(557mg，2.84mmol，1.0当量)在四氯化碳(8ml)中的搅拌溶液中加入n-溴代琥珀酰亚胺(556mg，3.12mmol，1.1当量)。将反应混合物加热至80℃保持5min，然后加入过氧化苯甲酰(68.8mg，0.284mmol，0.1当量)。1.5h后，将反应混合物冷却至25℃，用乙酸乙酯(100ml)稀释，并用碳酸氢钠饱和水溶液(30ml)和盐水(30ml)洗涤。分离两相，并将有机层经无水硫酸钠干燥且减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，2.5→15％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到浅黄色无定形固体状的纯溴甲基噻唑s356(0.704g，2.56mmol，产率为90％)。s35：rf＝0.34(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(膜)νmax3102、3028、2958、2921、2853、1505、1442、1426、1404、1373、1326、1304、1260、1214、1147、1109、1036、983、880、743、700、672cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.37(s，1h)、7.00(d，j＝1.2hz，1h)、4.61(s，2h)、2.50(d，j＝1.2hz，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝162.2、160.2、154.5、153.5、119.6、116.3、26.8、17.3ppm。
[(4′-甲基-2，2′-双-1，3-噻唑-4-基)甲基]膦酸二乙酯(49)：
将溴甲基噻唑s35(0.670g，2.44mmol，1.0当量)在亚磷酸三乙酯(2.02g，12.2mmol，5.0当量)中的搅拌溶液加热至160℃。1.5h后，在稳定的氮气流下去除亚磷酸三乙酯，并将反应混合物冷却至25℃。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50→100％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯49(0.423g，1.27mmol，产率为52％)。49：rf＝0.21(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmsx3457、3102、2982、2925、1643、1505、1443、1394、1374、1324、1247、1162、1097、1051、1022、981、933、881、82、826、809、782、747、699、660cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.29(d，j＝3.0hz，1h)、6.95(d，j＝1.2hz，1h)、4.15-4.06(m，4h)、3.42(d，j＝21.0hz，2h)、2.48(d，j＝1.2hz，3h)、1.28(t，j＝7.2hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝161.1、160.6、154.4、148.1、148.0(d、j＝7.8hz)、118.3(d，j＝7.4hz)、62.5(d，j＝6.6hz)、30.0(d，j＝139.8hz)、17.3，16.6(d，j＝6.0hz)ppm；针对c12h17n2o3ps2na+[m+na]+计算的hrms(esi)为355.0310，实测值为355.0317。
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(4′-甲基-2，2′-双-1，3-噻唑-4-基)丙-1-烯-2-基]-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(22a)：
在-78℃下向膦酸酯49(130mg，0.391mmol，21当量)在四氢呋喃(1.0ml)中的搅拌溶液中加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，0.13ml，0.33mmol，18当量)。30min后，在-78℃下将反应混合物转移到甲基酮82(14.5mg，18.2μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液，并使反应混合物在4h内缓慢升温至25℃。然后用饱和氯化铵水溶液(5ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×5ml)萃取有机层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→15％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素22a(11.8mg，12.1μmol，67％，加上28％回收的甲基酮82)。22a：rf＝0.27(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(4′-甲基-2，2′-双-1，3-噻唑-4-基)丙-1-烯-2-基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(22)：
在0℃下向受保护的埃博霉素22a(11mg，11μmol，1.0当量)在四氢呋喃(2.0ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％，0.20ml，7.6mmol，过量)，并使反应混合物缓慢升温至25℃。5h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×15ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→20％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素22(5.2mg，8.2μmol，产率为74％)。22：rf＝0.32(硅胶，15％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
方案s9.膦酸酯50和58-62的合成。
1-甲基-5-(甲基磺酰基)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(s49)：
在25℃下向悉尼酮s47(hammick和voaden，1961，以及masuda和okutani，1974)(3.09g，21.1mmol，1.0当量)在二甲苯(10ml)中的搅拌悬浮液中加入丙炔酸甲酯(3.76ml，42.3mmol，2.0当量)，并将反应混合物加热至130℃。12h后，将反应混合物冷却至25℃，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→30％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯吡唑基酯s49(2.44g，13.1mmol，产率为62％)及为无色油状物的其位置异构体s50(0.943g，5.06mmol，产率为24％)。s49：rf＝0.26(硅胶，40％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3137、2996、2951、1718、1503、1458、1441、1397、1366、1320、1290、1217、1126、1076、1044、1010、977、946、808、776、721cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝6.77(s，1h)、3.92(s，3h)、3.90(s，3h)、2.43(s，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝162.6、142.7、138.8、111.2、52.2、37.5、18.6ppm；针对c7h11n2o2s+[m+h]+计算的hrms(esi)为187.0536，实测值为187.0531。s50：rf＝0.37(硅胶，40％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax2996、2949、1713、1519、1435、1405、1389、1365、1314、1275、1221、1169、1108、1045、983、945、871、805、777、728cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.93(s，1h)、3.97(s，3h)、3.85(s，3h)、2.48(s，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝163.0、141.9、139.8、116.4、51.5、37.4、18.8ppm；针对c7h11n2o2s+[m+h]+计算的hrms(esi)为187.0536，实测值为187.0529。
[1-甲基-5-(甲基磺酰基)-1h-吡唑-3-基]甲醇(s51)：
在-78℃下向吡唑基酯s50(2.44g，13.1mmol，1.0当量)在二氯甲烷(36ml)中的搅拌溶液中逐滴加入氢化二异丁基铝(1.0m的二氯甲烷溶液，40.0ml，40.0mmol，3.0当量)。10min后，用盐酸水溶液(2.0m，30ml)猝灭反应混合物，并升温至25℃。2h后，分离两相，并用乙酸乙酯(3×20ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50→100％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯羟甲基吡唑s51(1.70g，10.7mmol，产率为82％)。s51：rf＝0.22(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3327、2925、2869、1508、1423、1318、1379、1279、1216、1147、1057、1020、1001、976、771cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝6.25(s，1h)、4.62(d，j＝6.0hz，2h)、3.83(s，3h)、2.40(s，3h)、2.27(t，j＝6.0hz，1h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝151.7、137.5、107.1、59.2、36.5、18.8ppm；针对c6h11n2os+[m+h]+计算的hrms(esi)为159.0587，实测值为159.0581。
3-(溴甲基)-1-甲基-5-(甲基磺酰基)-1h-吡唑(s52)：
在-78℃下向羟甲基吡唑s51(1.70g，10.7mmol，1.0当量)在二氯甲烷(20ml)中的搅拌溶液中加入三苯基膦(2.96g，11.3mmol，1.05当量)，之后是n-溴代琥珀酰亚胺(1.90g，10.7mmol，1.0当量)。5min后，用水(20ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×15ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→20％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯溴甲基吡唑s52(2.03g，9.06mmol，产率为85％)。s52：rf＝0.30(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3122、2924、1503、1425、1317、1285、1213、1159、1111、1082、1043、1007、974、801、767、711cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝6.30(s，1h)、4.43(s，2h)、3.84(s，3h)、2.41(s，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝148.4、138.1、108.4、36.7、25.3、18.7ppm；针对c6h10brn2s+[m+h]+计算的hrms(esi)为220.9743，实测值为220.9749。
{[1-甲基-5-(甲基磺酰基)-1h-吡唑-3-基]甲基}膦酸二乙酯(50)：
将溴甲基吡唑s52(2.03g，9.06mmol，1.0当量)在亚磷酸三乙酯(4.0ml，23mmol，2.6当量)中的搅拌溶液加热至160℃。2h后，在稳定的氮气流下去除亚磷酸三乙酯，并将反应混合物冷却至25℃。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50→90％丙酮的己烷溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯50(2.49g，8.97mmol，产率为99％)。50：rf＝0.43(硅胶，丙酮)；ft-ir(纯)νmax3471、2982、2927、1505、1441、1425、1392、1368、1253、1163、1097、1054、1025、963、848、815、757、727、696cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝6.27(d，j＝1.8hz，1h)、4.08(dq，j＝7.2、7.2hz，4h)、3.81(s，3h)、3.15(d，j＝20.4hz，2h)、2.39(s，3h)、1.28(t，j＝7.2hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝142.6(d，j＝7.1hz)、137.4(d，j＝2.3hz)、108.7(d，j＝3.3hz)、62.3(d，j＝6.3hz)、36.5、26.9(d，j＝141.0hz)、18.7、16.6(d，j＝6.0hz)ppm；针对c10h20n2o3ps+[m+h]+计算的hrms(esi)为279.0927，实测值为279.0930。
{[1-甲基-5-(甲基磺酰基)-1h-吡唑-3-基]甲基}瞵酸双(2，2，2-三氟乙基)酯(58)：
将膦酸酯50(2.49g，8.97mmol，1.0当量)在三甲基甲硅烷基氯(5.75ml，45.3mmol，5.1当量)中的搅拌溶液加热至80℃。72h后，将反应混合物冷却至25℃，并减压去除三甲基甲硅烷基氯以得到粗物质50a。在搅拌下将粗残留物重新溶解于二氯甲烷(30ml)中，并冷却至0℃。然后逐滴加入草酰氯(3.05g，24.0mmol，2.5当量)在二氯甲烷(5ml)中的溶液，并将反应混合物缓慢升温至25℃。4h后，减压去除溶剂以得到50b。在搅拌下将粗残留物重新溶解于二氯甲烷(30ml)中，并冷却至0℃。然后依次加入三乙胺(7.58ml，54.4mmol，6.0当量)、2，2，2-三氟乙醇(2.72ml，36.2mmol，4.0当量)和4-(二甲基氨基)吡啶(22.1mg，0.181mmol，0.02当量)，并将反应混合物缓慢升温至25℃。12h后，将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)稀释，并用水(20ml)和盐水(20ml)洗涤。分离两相，用无水硫酸钠干燥有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，20→60％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯三氟乙基膦酸酯58(3.00g，7.77mmol，总产率为87％)。58：rf＝0.17(硅胶，50％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax2971、1504、1422、1291、1260、1168、1103、1070、1007、963、879、845、780、704cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝6.21(d，j＝1.8hz，1h)、4.42-4.31(m，4h)、3.81(d，j＝1.2hz，3h)、3.33(d，j＝21.0hz，2h)、2.39(s，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝140.3(d，j＝8.1hz)、138.2(d，j＝2.1hz)、122.7(qd，j＝275.9、8.0hz)、108.6(d，j＝5.3hz)、62.5(qd，j＝37.7、6.0hz)、36.6、26.8(d，j＝143.3hz)、18.6ppm；针对c10h14n2o3ps+[m+h]+计算的hrms(esi)为387.0361，实测值为387.0346。
{[1-甲基-5-(甲基磺酰基)-1h-吡唑-3-基]甲基}膦酸双(3，3，3-三氟丙基)酯(59)：
在0℃下向粗物质50b(约172mg，0.662mmmol，1.0当量)在二氯甲烷(10ml)中的搅拌溶液中加入三乙胺(0.29ml，4.0mmol，6.0当量)，之后是3，3，3-三氟丙醇(0.300g，2.65mmol，4.0当量)和4-二甲基氨基吡啶(1.6mg，13μmol，0.02当量)，并将反应混合物缓慢升温至25℃。12h后，将反应混合物用乙酸乙酯(50ml)稀释，并用水(20ml)和盐水(20ml)洗涤。分离两相，用无水硫酸钠干燥有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50→100％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯三氟丙基膦酸酯59(0.137g，0.330mmol，总产率为50％)。59：rf＝0.34(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3476、2928、1505、1434、1391、1351、1297、1254、1153、1132、1067、1006、974、929、878、846、823、762、700cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝6.22(d，j＝1.2hz，1h)、4.26-4.19(m，4h)、3.80(d，j＝0.6hz，3h)、3.20(d，j＝21.0hz，2h)、2.50-2.42(m，4h)、2.38(s，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝141.4(d，j＝7.7hz)、138.0(d，j＝2.1hz)、125.6(q，j＝275.1hz)、108.6(d，j＝4.1hz)、59.2(m)、36.5、35.1(qd，j＝28.8、6.5hz)、26.8(d，j＝140.7hz)、18.6ppm；针对c12h18f6n2o3ps+[m+h]+计算的hrms(esi)为415.0674，实测值为415.0673。
{[1-甲基-5-(甲基磺酰基)-1h-吡唑-3-基]甲基}膦酸双(2，2，2-三氯乙基)酯(60)：
在0℃下向粗物质50b(约172mg，0.662mmol，1.0当量)在二氯甲烷(10ml)中的搅拌溶液中加入三乙胺(0.29ml，4.0mmol，6.0当量)，之后是2，2，2-三氯乙醇(0.396g，2.65mmol，4.0当量)和4-二甲基氨基吡啶(1.6mg，13μmol，0.02当量)，并使反应混合物缓慢升温至25℃。12h后，将反应混合物用乙酸乙酯(50ml)稀释，并用水(20ml)和盐水(20ml)洗涤。分离两相，用无水硫酸钠干燥有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，40→70％ethylacetateinhexanes)toaffordpuretrichloroethylphosphonate60(0.167g，0.344mmol，总产率为52％)，为无色油状物。60：rf＝0.45(硅胶，20％己烷的乙酸乙酯溶液)；ft-ir(纯)νmax3480、2990、2947、2926、1504、1447、1425、1391、1376、1317、1262、1111、1095、1045、1023、974、874、833、814、790、765、747、719cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝6.29(d，j＝1.8hz，1h)、4.63-4.58(m，4h)、3.81(s，3h)、3.43(d，j＝21.0hz，2h)、2.38(s，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝140.6(d，j＝8.1hz)、138.0(d，j＝2.1hz)、108.9(d，j＝4.8hz)、95.3(d，j＝8.9hz)、76.0(d，j＝6.0hz)、36.6、27.3(d，j＝142.8hz)、18.7ppm；针对c10h14cl6n2o3ps+[m+h]+计算的hrms(esi)为482.8588，实测值为482.8608。
{[1-甲基-5-(甲基磺酰基)-1h-吡唑-3-基]甲基}膦酸双(2，2-双氟乙基)酯(61)：
在0℃下向粗物质50b(约191mg，0.737mmol，1.0当量)在二氯甲烷(10ml)中的搅拌溶液中加入三乙胺(0.62ml，4.4mmol，6.0当量)，之后是2，2-二氟乙醇(0.242g，2.95mmol，4.0当量)和4-二甲基氨基吡啶(2.0mg，16μmol，0.02当量)，并使反应混合物缓慢升温至25℃。3h后，将反应混合物用乙酸乙酯(60ml)稀释，并用水(20ml)和盐水(20ml)洗涤。分离两相，用无水硫酸钠干燥有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50→90％ethylacetateinhexanes)toaffordpuredifluoroethylphosphonate61(0.205g，0.585mmol，总产率为79％)，为无色油状物。61：rf＝0.33(硅胶，10％己烷的乙酸乙酯溶液)；ft-ir(纯)νmax3465、2962、2930、1504、1426、1395、1375、1324、1260、1143、1080、1048、1007、946、903、870、780、703cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝6.23(d，j＝1.2hz，1h)、5.91(tt，j＝55.2、4.2hz，2h)、4.25-4.15(m，4h)、3.81(s，3h)、3.28(d，j＝21.0hz，2h)、2.40(s，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝140.9(d，j＝8.0hz)、138.2(d，j＝2.1hz)、113.0(td，j＝240.6、7.1hz)、108.6(d，j＝4.7hz)、64.3(td，j＝29.9、6.3hz)、36.6，26.8(d，j＝142.5hz)、18.6ppm；针对c10h15f4n2o3psna+[m+na]+计算的hrms(esi)为373.0369，实测值为373.0377。
{[1-甲基-5-(甲基磺酰基)-1h-吡唑-3-基]甲基}膦酸双(2-氟乙基)酯(62)：
在0℃下向粗物质50b(约191mg，0.737mmol，1.0当量)在二氯甲烷(10ml)中的搅拌溶液中加入三乙胺(0.62ml，4.4mmol，6.0当量)，之后是2-氟乙醇(0.189g，2.95mmol，4.0当量)和4-二甲基氨基吡啶(2.0mg，16μmol，0.02当量)，并使反应混合物缓慢升温至25℃。3h后，将反应混合物用乙酸乙酯(60ml)稀释，并用水(20ml)和盐水(20ml)洗涤。分离两相，用无水硫酸钠干燥有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，40→80％ethylacetateinhexanes)toaffordpurefluoroethylphosphonate62(0.180g，0.573mmol，总产率为78％)，为无色油状物。62：rf＝0.28(硅胶，40％己烷的丙酮溶液)；ft-ir(纯)νmax3455、2954、1654、1504、1452、1426、1394、1373、1252、1119、1072、1028、958、868、848、814、758、728cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝6.26(d，j＝1.8hz，1h)、4.55(dt，j＝47.4、4.2hz，4h)、4.33-4.20(m，4h)、3.80(d，j＝0.6hz，3h)、3.24(d，j＝20.4hz，2h)、2.38(s，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝141.7(d，j＝7.5hz)、137.8(d，j＝2.3hz)、108.6(d，j＝3.8hz)、82.4(dd，j＝170.9、6.0hz)、65.1(dd，j＝20.4、6.5hz)、36.5、26.8(d，j＝142.2hz)、18.6ppm；针对c10h17f2n2o3psna+[m+na]+计算的hrms(esi)为337.0558，实测值为337.0549。
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[1-甲基-5-(甲基磺酰基)-1h-吡唑-3-基]丙-1-烯-2-基}-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮103[仅(e)]：
在-78℃下，向膦酸酯62(124mg，0.395mmol，16当量)在四氢呋喃(1ml)中的搅拌溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，0.13ml，0.32mmol，13当量)。20min后，在-78℃下将等分(0.4ml，约5.7当量)的反应混合物62加入到甲基酮82(19.6mg，24.6μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的溶液中，并在30min内将反应混合物缓慢升温至-40℃。然后将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭，并升温至25℃。分离两相，用乙酸乙酯(3×15ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，10→30％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素103(14.0mg，15.2μmol，产率为62％)。103：rf＝0.32(硅胶，30％乙酸乙酯的己烷溶液)；
受保护的埃博霉素103[(e)∶(z)约1∶1]：
在-78℃下，向膦酸酯58(350mg，906μmol，16当量)在四氢呋喃(1ml)中的搅拌溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，0.29ml，0.73mmol，13当量)。45min后，加入甲基酮82(45.0mg，56.4μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.6ml)中的溶液，并使反应混合物缓慢升温至25℃，并搅拌另外2h。然后用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×15ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，10→60％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素103[36.5mg，39.6μmol，70％，(e)∶(z)约1∶1](关于103的表征数据，请参见上文)。
受保护的埃博霉素103[(e)∶(z)约30∶70]：
在-20℃下向膦酸酯加合物102(2.5mg，2.3μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.6ml)中的搅拌溶液中加入叔丁醇钾(1.3mg，12μmol，5.0当量)。5min后，用水(3ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，30％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素103[1.6mg，1.7μmol，75％，(e)∶(z)约30∶70](关于103的表征数据，请参见上文)。
(2-{(1s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-5，9--二.氧杂-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烯-3-基}-2-羟基-1-[1-甲基-5-(甲基磺酰基)-1h-吡唑-3-基]丙基)膦酸二乙酯(102)：
在-78℃下向膦酸酯50(120mg，0.431mmol，11当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液中逐滴加入双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(1.0m的四氢呋喃溶液，0.21ml，0.21mmol，4.9当量)。30min后，在-78℃下将反应混合物转移至甲基酮82(32.8mg，41.0μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.4ml)中的搅拌溶液中，并搅拌另外30min。然后用饱和氯化铵水溶液(3ml)猝灭反应混合物，并升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，乙酸乙酯)，以得到无色油状的膦酸酯加合物102(16.5mg，15.3μmol，37％，非对映比为约3∶7)102：rf＝0.24(硅胶，80％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[1-甲基-5-(甲基磺酰基)-1h-吡唑-3-基]丙-1-烯-2-基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(23)：
在0℃下向受保护的埃博霉素103(8.0mg，8.7μmol，1.0当量)在四氢呋喃(1.0ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％，0.10ml，3.9mmol，过量)，并将反应混合物缓慢升温至25℃。5h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×20ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→20％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素23(22.0mg，41.5μmol，产率为82％)。23：rf＝0.28(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
方案s10.膦酸酯51的合成。
2-(溴甲基)-1，3-苯并噻唑(s31)：
在-78℃下向羟甲基苯并噻唑s30(1.00g，6.05mmol，1.0当量)在二氯甲烷/四氢呋喃(1∶1，40ml)中的搅拌溶液中加入三苯基膦(1.59g，6.05mmol，1.0当量)，之后是n-溴代琥珀酰亚胺(1.08g，6.05mmol，1.0当量)。5min后，用水(20ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×30ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，2→8％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到白色无定形固体状的纯溴甲基苯并噻唑s31(780mg，3.42mmol，产率为57％)。s31：rf＝0.48(硅胶，10％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(膜)νmax3059、3028、1594、1557、1505、1456、1430、1313、127r、1242、1190、1157、1125、1090、1061、1013、938、901、851、756、727、706cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝8.03(d，j＝8.4hz，1h)、7.88(d，j＝7.8hz，1h)、7.51(ddd，j＝7.8、7.8、1.2hz，1h)、7.43(ddd，j＝7.8、7.8、1.2hz，1h)、4.82(s，2h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝166.2、152.8、136.2、126.5、125.9、123.5、121.8、27.1ppm；针对c8h7brns2+[m+h]+计算的hrms(esi)为227.9477，实测值为227.9466。
(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)膦酸二乙酯(51)：
将溴甲基苯并噻唑s31(775mg，3.40mmol，1.0当量)在亚磷酸三乙酯(2.0ml，12mmol，3.4当量)中的搅拌溶液加热至160℃。2h后，在稳定的氮气流下去除过量的亚磷酸三乙酯，并将反应混合物冷却至25℃。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，60→90％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯51(820mg，2.87mmol，产率为84％)。51：rf＝0.32(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3470、3060、2982、2907、1639、1593、1539、151l、1475、1456、1436、1392、1368、1313、1244、1195、1162、1093、1045、1015、963、891、842、761、731、708、677cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.80(d，j＝7.8hz，1h)、7.86(d，j＝7.8hz，1h)、7.47(ddd，j＝8.4、7.2、1.2hz，1h)、7.38(ddd，j＝8.4、7.2、1.2hz，1h)、4.19-4.13(m，4h)、3.73(d，j＝21.6hz，2h)、1.32(t，j＝7.2hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝161.2(d，j＝9.3hz)、153.1(d，j＝2.4hz)、136.1、126.3、125.3、123.1、121.7、63.0(d，j＝6.6hz)、33.3(d，j＝139hz)、16.5(d，j＝6.0hz)ppm；针对c12h16no3psna+[m+na]+计算的hrms(esi)为308.0481，实测值为308.0482。
(1s，3r，7r，10s，11s，12r，16s)-3-[(1e)-1-(1，3-苯并噻唑-2-基)丙-1-烯-2-基]-17-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(24a)：
在-78℃下，向膦酸酯51(150mg，0.533mmol，13当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，0.17ml，0.43mmol，10.0当量)。20min后，加入甲基酮82(28.7mg，35.9μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的溶液，并使反应混合物缓慢升温至10℃，再搅拌1h。然后用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→30％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素24a(22mg，27μmol，产率为65％)。24a：rf＝0.30(硅胶，15％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-3-[(1e)-1-(1，3-苯并噻唑-2-基)丙-1-烯-2-基]-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(24)：
在0℃下向受保护的埃博霉素24a(22.0mg，23.6mmol，1.0当量)在四氢呋喃(2.0ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％hf，0.10ml，3.9mmol，过量)，并使反应混合物缓慢升温至25℃。9h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→20％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素24(11.3mg，19.2μmol，产率为81％)。24：rf＝0.39(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
方案s11.膦酸酯52和52a的合成。
[1-(1h-吡唑-1-基甲基)-1h-吡唑-3-基]甲醇(s39)：
在-78℃下向吡唑基酯s38(523mg，2.54mmol，1.0当量)在二氯甲烷(11ml)中的搅拌溶液中逐滴加入氢化二异丁基铝(1.0m的二氯甲烷溶液，3.80ml，3.80mmol，1.5当量)。10min后，用甲醇(12ml)猝灭反应混合物，并升温至0℃。加入硼氢化钠(0.288g，7.62mmol，3.0当量)，并且在10min后，用饱和酒石酸钾钠水溶液(40ml)猝灭反应混合物，并升温至25℃。4h后，将猝灭的反应混合物滤过
3-(溴甲基)-1-(1h-吡唑-1-基甲基)-1h-吡唑(s40)：
在-78℃下向羟甲基吡唑s39(0.358g，2.01mmol，1.0当量)在二氯甲烷(12ml)中的搅拌溶液中加入三苯基膦(580mg，2.21mmol，1.1当量)，之后是n-溴代琥珀酰亚胺(0.393g，2.21mmol，1.1当量)。5min后，用水(20ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×15ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，20→50％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到白色无定形固体状的纯溴甲基吡唑s40(0.330g，1.37mmol，产率为68％)。s40：rf＝0.22(硅胶，50％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(膜)νmax3122、3096、3022、2972、1718、1627、1520、1474、1447、1430、1392、1366、1312、1278、1213、1206、1154、1115、1089、1055、1009、998、973、960、917、904、867、758、737、719cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.65(d，j＝2.4hz，1h)、7.59(d，j＝2.4hz，1h)、7.55(d，j＝1.8hz，1h)、6.34(d，j＝2.4hz，1h)、6.30(dd，j＝2.4、1.8hz，1h)、6.25(s，2h)、4.45(s，2h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝150.5、141.2、131.2、129.9、107.5、65.5、24.8ppm；针对c8h10brn4+[m+h]+计算的hrms(ci)为241.0083，实测值为241.0089。
{[1-(1h-吡唑-1-基甲基)-1h-吡唑-3-基]甲基}膦酸二乙酯(52)：
将溴甲基吡唑s40(0.301g，1.25mmol，1.0当量)在亚磷酸三乙酯(0.312g，1.88mmol，1.5当量)中的搅拌溶液加热至160℃。2h后，在稳定的氮气流下去除亚磷酸三乙酯，并将反应混合物冷却至25℃。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，0→10％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯52(2.49g，8.97mmol，产率为89％)。52：rf＝0.23(硅胶，10％甲醇的乙酸乙酯溶液)；ft-ir(纯)νmax3455、3115、2984、2908、1647、1522、1475、1446、1391、1367、1313、1279、1215、1162、1089、1051、1025、963、918、848、763cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.62(d，j＝2.4hz，1h)、7.57(d，j＝2.4hz，1h)、7.52(d，j＝1.8hz，1h)、6.30(dd，j＝1.8、1.8hz，1h)、6.26(dd，j＝2.4、1.8hz，1h)、6.22(s，2h)、4.06-3.97(m，4h)、3，19(d，j＝20.4hz，2h)、1.22(t，j＝7.2hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝144.9(d，j＝7.2hz)、140.9、131.0(d，j＝2.0hz)、129.7、107.9(d，j＝3.3hz)、107.2、65.4、62.3(d，j＝6.5hz)、26.9(d，j＝140.6hz)、16.5(d，j＝6.0hz)ppm；针对c12h20n4o3p+[m+h]+计算的hrms(esi)为299.1268，实测值为299.1264。
{[1-(1h-吡唑-1-基甲基)-1h-吡唑-3-基]甲基}瞵酸双(2-氟乙基)酯(52a)：
将膦酸酯52(0.230g，0.771mmol，1.0当量)在三甲基甲硅烷基氯(0.490ml，3.86mmol，5.0当量)中的搅拌溶液加热至80℃。72h后，将反应混合物冷却至25℃，并减压去除三甲基甲硅烷基氯。在搅拌下将粗残留物重新溶解于二氯甲烷(10ml)中，并冷却至0℃。然后逐滴加入草酰氯(0.244g，1.93mmol，2.5当量)在二氯甲烷(5ml)中的溶液，并将反应混合物缓慢升温至25℃。4h后，减压去除溶剂。在搅拌下将粗残留物重新溶解于二氯甲烷(10ml)中，并冷却至0℃。然后依次加入三乙胺(0.644ml，4.63mmol，6.0当量)、2-氟乙醇(197ml，3.08mmol，4.0当量)和4-(二甲基氨基)吡啶(5.0mg，41μmol，0.05当量)，并将反应混合物缓慢升温至25℃。1h后，将反应混合物用乙酸乙酯(20ml)稀释，并用水(10ml)和盐水(10ml)洗涤。分离两相，用无水硫酸钠干燥有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，20→60％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯52a(185mg，0.553mmol，总产率为72％)。52a：rf＝0.27(硅胶，10％甲醇的乙酸乙酯溶液)；ft-ir(纯)νmax3443、3117、2957、2921、2851、1644、1520、1449、1391、1367、1313、1279、1251、1120、1075、1031、962、870、847、811、764cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.64(d，j＝2.4hz，1h)、7.59(d，j＝1.8hz，1h)、7.53(d，j＝1.8hz，1h)、6.32(dd，j＝1.8、1.8hz，1h)、6.28(dd，j＝1.8、1.8hz，1h)、6.23(s，2h)、4.56-4.51(m，2h)、4.49-4.43(m，2h)、4.27-4.11(m，4h)、3.30(d，j＝21.6hz，2h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)6＝144.2(d，j＝7.8hz)、141.0、131.2(d，j＝2.0hz)、129.8、108.0(d，j＝3.6hz)、107.3、82.4(dd，j＝170.9、6.0hz)、65.4、65.2(d，j＝20.6、6.6hz)、26.8(d，j＝141.9hz)ppm；针对c12h17f2n4o3pna+[m+na]+计算的hrms(esi)为357.0899，实测值为357.0909。
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-/[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[1-(1h-吡唑-1-基甲基)-1h-吡唑-3-基]丙-1-烯-2-基}-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(100)：
在-78℃下向膦酸酯52(45.0mg，0.151mmol，11当量)在四氢呋喃(0.6ml)中的搅拌溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，55μl，0.14mmol，10.0当量)。40min后，在-78℃下将反应混合物转移至甲基酮82(10.5mg，13.2μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液中，并搅拌另外1h。然后用饱和氯化铵水溶液(5ml)猝灭反应混合物，并升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，以得到加合物的粗混合物98{通过hrms(esi)证实：针对c54h103n5o10psi3+[m+h]+的计算值为1096.6745，实测值为1096.6749}和受保护的埃博霉素100。
在搅拌下将获得的粗残留物重新溶解于四氢呋喃(1.0ml)中，并冷却至-20℃。加入叔丁醇钾(7.3mg，66μmol，5.0当量)，并在5min后用水(3ml)猝灭反应混合物，并升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，20→50％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素100(9.1mg，9.7μmol，总产率为73％，加10％回收的甲基酮82)。100：rf＝0.19(硅胶，40％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[1-(1h-吡唑-1-基甲基)-1h-吡唑-3-基]丙-1-烯-2-基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(25)：
在0℃下，向受保护的埃博霉素100(8.1mg，8.6μmol，1.0当量)在四氢呋喃(1.8ml)中的搅拌溶液加入氟化氢-吡啶络合物(70％，0.30ml，11mmol，过量的)，让反应混合物缓慢升温至25℃。3h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→30％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素25(4.9mg，8.2μmol，产率为95％)。25：rf＝0.27(硅胶，25％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
2-[(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-5，9-二氧杂-3-{(1e)-1-[1-(1h-吡唑-1-基甲基)-1h-吡唑-3-基]丙-1-烯-2-基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烯-17-基]乙酸乙酯(26)：
在0℃下向埃博霉素25(3.7mg，6.2μmol，1.0当量)在二氯甲烷(1ml)中的搅拌溶液中加入n，n-二异丙基乙胺(1.6mg，12μmol，2.0当量)，之后是乙酸酐(1.3mg，12μmol，2.0当量)和4-二甲基氨基吡啶(0.4mg，3μmol，0.05当量)。1.5h后，用甲醇(1ml)猝灭反应混合物，并升温至25℃。减压去除溶剂，并将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，5％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的埃博霉素26(2.8mg，4.4μmol，产率为71％)。26：rf＝0.33(硅胶，5％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
方案s12.膦酸酯53的合成。
(1，2，5-噁二唑-3-基甲基)膦酸二乙酯(53)：
在0℃下向羟甲基噁二唑s36(0.245g，2.45mmol，1.0当量)在二氯甲烷(6ml)中的搅拌溶液中加入三苯基膦(0.706g，2.69mmol，1.1当量)，之后是四溴化碳(0.892g，2.69mmol，1.1当量)。10min后，用水(10ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物滤过硅胶垫，并用己烷(20ml)充分漂洗，以得到粗溴甲基噁二唑s37，为挥发性油状物(提供为粗nmr)。s37：rf＝0.27(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝8.35(s，1h)、4.56(s，2h)ppm；13cnmr(150mhz，cdcl3)δ＝152.5、141.7、17.0ppm。
将粗制溴甲基噁二唑s37在亚磷酸三乙酯(0.814g，4.90mmol，2.0当量)中的搅拌溶液加热至160℃。2h后，在稳定的氮气流下去除亚磷酸三乙酯，并将反应混合物冷却至25℃。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50→80％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯53(0.205g，0.93mmol，总产率为38％)。53：rf＝0.30(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3465、2986、2913、1568、1479、1445、1388、1253、1164、1098、1051、1019、987、971、887、849、827、804cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝8.34(s，1h)、4.16-4.10(m，4h)、3.38(d，j＝21.0hz，2h)、1.13(t，j＝7.2hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝147.7(d，j＝7.2hz)、142.1(d，j＝1.8hz)、63.1(d，j＝6.6hz)、22.6(d，j＝142.2hz)、16.5(d，j＝5.9hz)ppm；针对c7h13n2o4pna+[m+na]+计算的hrms(esi)为243.0505，实测值为243.0511。
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(1，2，5-噁二唑-3-基)丙-1-烯-2-基]-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(27a)：
在-78℃下，向膦酸酯53(90.0mg，0.409mmol，31当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，0.15ml，0.37mmol，29当量)。10min后，在-78℃下将反应混合物加入到甲基酮82(10.5mg，13.2μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液中，并在3h内缓慢升温至0℃。然后用水(5ml)猝灭反应混合物，并升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素27a(3.6mg，4.2μmol，产率为32％)。27a：rf＝0.31(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(1，2，5-噁二唑-3-基)丙-1-烯-2-基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(27)：
在0℃下向受保护的埃博霉素27a(1.5mg，1.7μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.9ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％，0.10ml，3.9mmol，过量)，并使反应混合物缓慢升温至25℃。3h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素27(0.8mg，1.5μmol，产率为80％)。27：rf＝0.25(硅胶，15％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
方案s13.膦酸酯54的合成。
(1，2，5-噻二唑-3-基甲基)膦酸二乙酯(54)：
将氯甲基噻二唑s41(0.150g，1.11mmol，1.0当量)在亚磷酸三乙酯(0.484g，2.92mmol，2.6当量)中的搅拌溶液加热至160℃。2h后，在稳定的氮气流下去除亚磷酸三乙酯，并将反应混合物冷却至25℃。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，40→70％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯54(0.210g，0.889mmol，产率为80％)。54：rf＝0.30(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3466、2983、2910、1645、1487、1444、1393、1357、1320、1249、1163、1097、1048、1017、961、885、960、828、777、735cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝8.57(s，1h)、4.14-1.08(m，4h)、3.57(d，j＝21.0hz，2h)、1.29(t，j＝6.6hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝155.0(d，j＝7.2hz)、150.5(d，j＝3.3hz)、62.8(d，j＝6.5hz)、29.1(d，j＝139.1hz)、16.5(d，j＝6.0hz)ppm；针对c7h13n2o3ps+[m+na]+计算的hrms(esi)为259.0277，实测值为259.0278。
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(1，2，5-噻二唑-3-基)丙-1-烯-2-基]-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(28a)：
在-78℃下，向膦酸酯54(90.0mg，0.381mmol，60当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，0.12ml，0.31mmol，48当量)。10min后，在-78℃下将反应混合物转移至甲基酮82(5.0mg，6.3μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液中，并在3h内缓慢升温至0℃。然后用水(5ml)猝灭反应混合物，并升温至25℃。分离两相，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。所得残余物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的受保护的纯埃博霉素28a(3.9mg，4.4μmol，产率为71％)。28a：rf＝0.37(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(1，2，5-噻二唑-3-基)丙-1-烯-2-基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(28)：
在0℃下向受保护的埃博霉素28a(2.8mg，3.2μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.9ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％，0.10ml，过量)，并使反应混合物缓慢升温至25℃。3h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素28(1.3mg，2.4μmol，产率为76％)。28：rf＝0.29(硅胶，15％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
方案s14.膦酸酯55的合成。
[(3-甲基-1，2-噁唑-5-基)甲基]膦酸二乙酯(55)：
在25℃下向溴甲基异噁唑s44(250mg，1.42mmol，1.0当量)在苯(4.7ml)中的搅拌溶液中加入亚磷酸三乙酯(1.2ml，7.1mmol，5.0当量)。将反应混合物加热至90℃保持6h，使其冷却至25℃，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，0→5％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯55(77mg，0.33mmol，产率为23％)。55：rf＝0.37(硅胶，5％甲醇的乙酸乙酯溶液)；ft-ir(纯)νmax3480、3129、2985、2935、2913、1606、1481、1445、1422、1395、1371、1253、1163、1098、1050、1022、1002、970、903、832、808、743、670cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝6.10(d，j＝2.9hz，1h)、4.12(dq，j＝8.2、7.0hz，4h)、3.30(d，j＝21.3hz，2h)、2.28(s，3h)、1.31(t，j＝7.1hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝163.5(d，j＝7.1hz)、160.4(d，j＝3.1hz)、104.3(d，j＝5.4hz)、62.9(d，j＝6.6hz)、25.7(d，j＝142.8hz)、16.5(d，j＝6.0hz)、11.6ppm；针对c9h16no4pna+[m+na]+计算的hrms(esi)为256.0709，实测值为256.0713。
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(3-甲基-1，2-噁唑-5-基)丙-1-烯-2-基]-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(29a)：
在-50℃下向膦酸酯55(73mg，0.31mmol，43当量)在四氢呋喃(0.7ml)中的搅拌溶液中逐滴加入双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(1.0m的四氢呋喃溶液，0.29ml，0.29mmol，41当量)。20min后，在-78℃下将等分的反应混合物55(0.25ml，约79μmol，11当量)转移至甲基酮82(5.7mg，7.2μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.25ml)中的搅拌溶液中，并在1h内将反应混合物缓慢升温至-60℃。然后用饱和氯化铵水溶液(0.8ml)猝灭反应混合物，并升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×1ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，15→50％乙酸乙酯的己烷溶液)，并通过制备型薄层色谱进一步纯化(硅胶，30％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素29a[3.6mg，4.1μmol，57％，(e)∶(z)约75∶25]。29a：rf＝0.33(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(3-甲基-1，2-噁唑-5-基)丙-1-烯-2-基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(29)：
在0℃下向受保护的埃博霉素29a(3.6mg，4.1μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.7ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％hf，0.10ml，3.9mmol，过量)，并使反应混合物缓慢升温至25℃。3h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物。分离两相，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素29[2.0mg，3.7μmol，90％，(e)∶(z)约75∶25]。通过重复的制备型薄层色谱(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液，运行4次)获得几何纯的(e)-29。29：rf＝0.25(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
方案s15.膦酸酯56的合成。
5-(溴甲基)-4-甲基-1，2，3-噻二唑(s43)：
在25℃下向羟甲基噻二唑s42(0.600g，4.61mmol，1.0当量)在二氯甲烷(46ml)中的搅拌溶液中加入三苯基膦(1.81g，6.92mmol，1.5当量)，之后是四溴化碳(2.29g，6.92mmol，1.5当量)。15min后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)和饱和硫代硫酸钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物。分离两相，用二氯甲烷(3×8ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→15％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯溴甲基噻二唑s43(0.870g，4.51mmol，产率为98％)。s43：rf＝0.27(硅胶，15％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3025、2975、2928、2862、1514、1440、1382、1320、1233、1217、1182、1033、997、969、864、799、689、666cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝4.69(s，2h)、2.70(s，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝157.7、146.9、18.1、12.5ppm；针对c4h6brn2s+[m+h]+计算的hrms(esi)为192.9430，实测值为192.9428。
[(4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-基)甲基]膦酸二乙酯(56)：
在25℃下向溴甲基噻二唑s43(0.870g，4.51mmol，1.0当量)在苯(9.0ml)中的搅拌溶液中加入亚磷酸三乙酯(3.9ml，23mmol，5.0当量)。将反应混合物加热至95℃保持16h，使其冷却至25℃，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50→100％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯56(1.02g，4.08mmol，产率为90％)。56：rf＝0.29(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3484、2983、2933、2911、1649、1513、1479、1444、1392、1369、1247、1163、1097、1049、1023、973、807、724cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝4.10(dq，j＝8.3、7.1hz，4h)、3.40(d，j＝21.3hz，2h)、2.69(d，j＝2.3hz，3h)、1.30(t，j＝7.1hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝157.9(d，j＝8.7hz)、140.8(d，j＝10.4hz)、63.1(d，j＝6.8hz)、24.0(d，j＝145.0hz)、16.5(d，j＝5.9hz)、12.6ppm；针对c8h16n2o3ps+[m+h]+计算的hrms(esi)为251.0614，实测值为251.0612。
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(24[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-基)丙-1-烯-2-基]-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(30a)：
在-30℃下向膦酸酯56(133mg，0.530mmol，98当量)在四氢呋喃(1.3ml)中的搅拌溶液中逐滴加入双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(1.0m的四氢呋喃溶液，0.50ml，0.50mmol，93当量)。20min后，在-78℃下将等分的反应混合物56(0.28ml，约81μmol，15当量)转移至甲基酮82(4.3mg，5.4μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.25ml)中的搅拌溶液中，并使其在2h内缓慢升温至15℃。然后用饱和氯化铵水溶液(0.5ml)猝灭反应混合物，并用水(5ml)和乙酸乙酯(5ml)稀释。分离两相，用乙酸乙酯(3×3ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，15→50％乙酸乙酯的己烷溶液)，并通过制备型薄层色谱(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)进一步纯化，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素30a(3.2mg，3.6μmol，产率为33％)。30a：rf＝0.34(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-基)丙-1-烯-2-基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(30)：
在0℃下向受保护的埃博霉素30a(3.2mg，3.6μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.6ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％hf，0.10ml，3.9mmol，过量)，并将反应混合物缓慢升温至25℃。3h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并用乙酸乙酯(5ml)稀释。分离两相，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素30(1.9mg，3.4μmol，产率为95％)。30：rf＝0.21(硅胶，10％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
方案s16.膦酸酯57的合成。
3-(溴甲基)-5-(4-氟苯基)-1，2-噁唑(s46)：
在0℃下向羟甲基异噁唑s45(630mg，3.26mmol，1.0当量)在二氯甲烷(26ml)中的搅拌溶液中加入三苯基膦(1.63g，4.90mmol，1.5当量)，之后是四溴化碳(2.04g，4.90mmol，1.5当量)。25min后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)和饱和硫代硫酸钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用二氯甲烷(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→10％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到白色无定形固体状的纯溴甲基异噁唑s46(810mg，3.16mmol，产率为97％)。s46：rf＝0.33(硅胶，10％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(膜)νmax3133、2974、1617、1510、1468、1447、1305、1236、1159、1123、1100、1047、1033、1013、949、925、840、813、796、725、696、665cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.80-7.75(m，2h)、7.20-7.14(m，2h)、6.57(s，1h)、4.46(s，2h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝170.0、164.1(d，j＝251.7hz)、161.7、128.1(d，j＝8.5hz)、123.6(d，j＝8.5hz)、116.5(d，j＝22.2hz)、99.4、20.8ppm；针对c10h8brfno+[m+h]+计算的hrms(esi)为255.9768，实测值为255.9776。
{[5-(4-氟苯基)-1，2-噁唑-3-基]甲基}膦酸二乙酯(57)：
在25℃下向溴甲基异噁唑s46(800mg，3.1mmol，1.0当量)在苯(10ml)中的搅拌溶液中加入亚磷酸三乙酯(2.7ml，16mmol，5.0当量)。将反应混合物加热至95℃保持18h，使其冷却至25℃，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50→100％乙酸乙酯的己烷溶液→5％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯57(880mg，4.0mmol，产率为90％)。57：rf＝0.39(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3476、3126、2985、2911、1617、1602、1511、1463、1433、1394、1369、1236、1161、1100、1051、1025、969、949、842、814、723、676cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.79-7.74(m，2h)、7.19-7.12(m，2h)、6.60(d，j＝1.0hz，1h)、4.14(dq，j＝8.5、7.1hz，4h)、3.28(d，j＝21.0hz，2h)、1.32(t，j＝7.1hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝169.5、163.9(d，j＝251.4hz)、156.7(d，j＝7.0hz)、128.1(d，j＝8.6hz)、123.8(d，j＝3.4hz)、116.3(d，j＝22.1hz)、100.2、62.8(d，j＝6.6hz)、24.9(d，j＝142.1hz)、16.5(d，j＝5.9hz)ppm；针对c14h17fno4pna+[m+na]+计算的hrms(esi)为336.0771，实测值为336.0775。
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-3-{(1e)-1-[5-(4-氟苯基)-1，2-噁唑-3-基]丙-1-烯-2-基}-8，8，10，12，16-五甲基-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(31a)：
在-50℃下向膦酸酯57(312mg，1.00mmol，145当量)在四氢呋喃(3.0ml)中的搅拌溶液中逐滴加入双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(1.0m的四氢呋喃溶液，0.95ml，0.95mmol，138当量)。20min后，在-60℃下将等分的反应混合物57(0.40ml，约0.10mmol，15当量)转移至甲基酮82(5.5mg，6.9μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.35ml)中的搅拌溶液。1h后，用饱和氯化铵水溶液(1.2ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×1ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，20→40％乙酸乙酯的己烷溶液)，并通过制备型薄层色谱进一步纯化(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素31a[2.3mg，2.4μmol，35％，(e)∶(z)约86∶14，加34％回收的甲基酮82]。31a：rf＝0.44(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-3-{(1e)-1-[5-(4-氟苯基)-1，2-噁唑-3-基]丙-1-烯-2-基}-7，11-二羟基-17-(2-羟乙基)-8，8，10，12，16-五甲基-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(31)：
在0℃下，向受保护的埃博霉素31a(2.3mg，2.4μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％hf，0.10ml，3.9mmol，过量的)，让反应混合物缓慢升温至25℃。3h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并用乙酸乙酯(10ml)稀释。分离两相，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素31[1.4mg，2.3μmol，97％，(e)∶(z)＝86∶14]。31：rf＝0.34(硅胶，10％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(4′-甲基-2，2′-双-1，3-噻唑-4-基)丙-1-烯-2-基]-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-17-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(32a)：
在-78℃下，向膦酸酯49(40.0mg，120μmol，18当量)在四氢呋喃(5.0ml)中的搅拌溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，39μl，96μmol，15当量)。10min后，在-78℃下将反应混合物转移到甲基酮87(5.0mg，6.5μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.2ml)中的搅拌溶液。1h后，将反应混合物缓慢升温至25℃，并搅拌另外3h。然后用饱和氯化铵水溶液(3ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，30％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素32a(2.1mg，2.2μmol，34％，加上50％回收的甲基酮87)。32a：rf＝0.33(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(4′-甲基-2，2′-双-1，3-噻唑-4-基)丙-1-烯-2-基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(32)：
在0℃下向受保护的埃博霉素32a(1.9mg，2.0μmol，1.0当量)在二氯甲烷(0.4ml)中的搅拌溶液中加入三氟乙酸(0.10ml，1.3mmol，过量)，并将反应混合物缓慢升温至25℃。2h后，减压去除溶剂，并将所获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，25％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素32(1.0mg，1.7μmol，产率为85％)。32：rf＝0.37(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[1-(1h-吡唑-1-基甲基)-1h-吡唑-3-基]丙-1-烯-2-基}-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-17-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(101)：
在-78℃下向膦酸酯52(68.0mg，0.228mmol，15当量)在四氢呋喃(0.7ml)中的搅拌溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，82μl，0.21mmol，14当量)。10min后，在-78℃下将反应混合物加入到甲基酮87(11.5mg，14.9μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液。30min后，用饱和氯化铵水溶液(3ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩，以得到粗制的膦酸酯加合物99{通过hrms(esi)确认：针对c52h99n5o10psi3+[m+h]+的计算值为1068.6432，实测值为1068.6462}。
在搅拌下将获得的粗残留物溶解于四氢呋喃(1.0ml)中，并冷却至-20℃。加入叔丁醇钾(5.0mg，45μmol，3.0当量)，并在5min后用水(3ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，45％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素101(7.2mg，7.9μmol，总产率为53％，加28％回收的甲基酮87)。101：rf＝0.32(硅胶，40％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[1-(1h-吡唑-1-基甲基)-1h-吡唑-3-基]丙-1-烯-2-基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(33)：
在0℃下向受保护的埃博霉素101(6.2mg，6.8μmol，1.0当量)在二氯甲烷(1.2ml)中的搅拌溶液中加入三氟乙酸(0.30ml，3.9mmol，过量)，并将反应混合物升温至25℃。2h后，减压去除溶剂，并将所获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素33(2.0mg，3.6μmol，产率为52％)。33：rf＝0.44(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
{2-羟基-1-[1-甲基-5-(甲基磺酰基)-1h-吡唑-3-基]-2-[(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-8，8，10，12，16-五甲基-5，9-二氧杂-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-17-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烯-3-基]丙基}瞵酸双(2-氟乙基)酯(104)：
在-78℃下，向膦酸酯62(49.0mg，0.156mmol，22当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，50μl，0.13mmol，18当量)。10min后，在-78℃下将反应混合物转移至甲基酮87(5.5mg，7.1μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.4ml)中的搅拌溶液中，并搅拌另外1h。然后用饱和氯化铵水溶液(3ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱(硅胶，乙酸乙酯)，以得到无色油状的纯膦酸酯加合物104(3.2mg，3.0μmol，28％，非对映比为约3∶7，加42％回收的甲基酮87)。104：rf＝0.33(硅胶，80％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[1-甲基-5-(甲基磺酰基)-1h-吡唑-3-基]丙-1-烯-2-基}-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-17-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(105)：
在-20℃下向膦酸酯加合物104(4.5mg，4.1μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.8ml)中的搅拌溶液中加入叔丁醇钾(2.5mg，22μmol，5.0当量)。5min后，用水(3ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，30％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素105(2.6mg，2.9μmol，产率为70％)。105：rf＝0.31(硅胶，25％乙酸乙酯的己烷溶液
受保护的埃博霉素105(一锅法)：
在-78℃下向膦酸酯62(47.7mg，0.152mmol，22当量)在四氢呋喃(1.0ml)中的搅拌溶液中加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，48μl，0.120mmol，18当量)在己烷中的溶液。10min后，将反应混合物转移至甲基酮87(5.3mg，6.9μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液中。30min后，将反应混合物缓慢升温至0℃。4h后，通过加入饱和氯化铵水溶液(3ml)猝灭反应混合物，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，30％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素105(3.9mg，4.4μmol，产率为63％)(关于105的表征数据，请参见上文)。
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[1-甲基-5-(甲基磺酰基)-1h-吡唑-3-基]丙-1-烯-2-基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(40)：
在0℃下向受保护的埃博霉素105(3.7mg，4.1μmol，1.0当量)在二氯甲烷(0.8ml)中的搅拌溶液中加入三氟乙酸(0.20ml，2.6mmol，过量)，并将反应混合物缓慢升温至25℃。2h后，减压去除溶剂，并将所获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素40(1.8mg，3.4μmol，产率为82％)。40：rf＝0.34(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
(2-{(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基磺酰基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-5，9-二氧杂-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烯-17-基}乙基)氨基甲酸叔丁酯(91)：
在25℃下向受保护的埃博霉素85(20.0mg，26.1μmol，1.0当量)在二甲基甲酰胺(0.3ml)中的搅拌溶液中加入氨基甲酸叔丁基-n-(2-溴乙基)酯90(35.0mg，157μmol，6.0当量)，之后是碳酸钾(18.0mg，0.130mmol，5.0当量)，并将反应混合物加热至75℃。12h后，将反应混合物冷却至25℃，并用水(5ml)猝灭。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取混合物，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，10→40％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素91(7.5mg，8.2μmol，32％，加35％回收的受保护的埃博霉素85)。91：rf＝0.34(硅胶，40％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-氨基乙基)-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基磺酰基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(37)：
在0℃下，向受保护的埃博霉素91(6.0mg，6.6μmol，1.0当量)在四氢呋喃(1.0ml)中的搅拌溶液加入氟化氢-吡啶络合物(70％，0.10ml，3.9mmol，过量的)，让反应混合物缓慢升温至25℃。2h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)猝灭反应混合物，分离两相。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。在0℃下将获得的残留物在搅拌下于溶解于二氯甲烷(1ml)中，并加入三氟乙酸(0.10ml，1.3mmol，过量)。1h后，将反应混合物减压浓缩。在25℃下将获得的残留物在搅拌下重新溶解于乙酸乙酯(50ml)中，并加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)。5min后，分离两相，用无水硫酸钠干燥有机层，并减压浓缩。通过快速柱色谱纯化获得的残留物(硅胶，10→30％甲醇的丙酮溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素37(2.5mg，4.3μmol，总产率为65％)。37：rf＝0.30(硅胶，30％甲醇的丙酮溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-3-乙酰基-17-(环丙基甲基)-8，8，10，12，16-五甲基-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(93)：
在25℃下向氮丙啶80(40.0mg，62.5μmol，1.0当量)在二甲基甲酰胺(0.4ml)中的搅拌溶液中加入(溴甲基)环丙烷92(50.6mg，0.375mmol，6.0当量)，之后是碳酸钾(43.0mg，0.312mmol，5.0当量)，并将反应混合物加热至75℃。16h后，将反应混合物冷却至25℃，并用水(3ml)猝灭。用乙酸乙酯(3×15ml)萃取混合物，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，10→40％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到淡黄色油状的纯环丙基甲基氮丙啶93(40.0mg，57.6μmol，产率为92％)。93：rf＝0.23(硅胶，30％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(环丙基甲基)-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基磺酰基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(94)：
在-78℃下，向膦酸酯41(150mg，0.533mmol，13当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，0.17ml，0.425mmol，10.3当量)。20min后，加入环丙基甲基氮丙啶93(28.7mg，41.3μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的溶液，并将反应混合物缓慢升温至10℃，并搅拌另外1h。然后用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×15ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→30％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素94(22.1mg，26.9μmol，产率为65％)。94：rf＝0.22(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(环丙基甲基)-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基磺酰基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(38)：
在0℃下，向受保护的埃博霉素94(18.0mg，21.9μmol，1.0当量)在四氢呋喃(2.0ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％，0.20ml，7.7mmol，过量的)，让反应混合物缓慢升温至25℃。3.5h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×20ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，1→5％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素38(12.0mg，20.2μmol，产率为92％)。38：rf＝0.39(硅胶，5％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-3-乙酰基-8，8，10，12，16-五甲基-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-17-[4-(三甲基甲硅烷基)丁-3-炔-1-基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(96)：
在25℃下向氮丙啶80(26.4mg，41.2μmol，1.0当量)在二甲基甲酰胺(0.5ml)中的搅拌溶液中加入高炔丙基溴95(42.3mg，0.206mmol，5.0当量)，之后是碳酸钾(22.8mg，0.165mmol，4.0当量)，并将反应混合物加热至80℃。18h后，将反应混合物冷却至25℃，并用水(3ml)猝灭。分离两相，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，10→30％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到淡黄色油状的纯炔烃96(28.4mg，37.2μmol，产率为90％)。96：rf＝0.31(硅胶，30％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基磺酰基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-17-[4-(三甲基甲硅烷基)丁-3-炔-1-基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(97)：
在-78℃下，向膦酸酯41(82.0mg，0.291mmol，20当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，0.10ml，0.25mmol，17当量)。10min后，在-78℃下将反应混合物加入炔烃96(11.0mg，14.4μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的搅拌溶液中，并在3h内将反应混合物缓慢升温至0℃。然后用水(5ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素97(8.1mg，9.1μmol，产率为63％)。97：rf＝0.43(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(丁-3-炔-1-基)-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基磺酰基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(39)：
在0℃下向受保护的埃博霉素97(5.6mg，6.3μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.9ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％，0.10ml，3.9mmol，过量)。2h后，将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)猝灭，并升温至25℃。分离两相，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。在25℃下将获得的残留物在搅拌下重新溶解于四氢呋喃(0.5ml)中，并加入乙酸(90.0mg，1.50mmol，过量)和氟化正四丁基铵(1.0m的thf溶液，1.50ml，1.50mmol，过量)在四氢呋喃(0.5ml)中的预混溶液。8h后，用水(10ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，乙酸乙酯)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素39(2.5mg，4.2μmol，总产率为68％)。39：rf＝0.24(硅胶，20％乙酸乙酯的己烷溶液)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-17-(2-叠氮基乙基)-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基磺酰基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(34)：
在0℃下向埃博霉素12(12.8mg，22.0μmol，1.0当量)在二氯甲烷(1ml)中的搅拌溶液中加入对甲苯磺酸酐(35.8mg，0.110mmol，5.0当量)，之后是三乙胺(12.3μl，88.0μmol，4.0当量)。在30min内将反应混合物缓慢升温至25℃，并搅拌另外15min。然后用甲醇(0.5ml)和水(10ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×15ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物滤过硅胶垫，用乙酸乙酯(15ml)充分漂洗，并减压浓缩。然后在25℃下将获得的粗甲苯磺酸酯在搅拌下溶解于二甲基甲酰胺(0.5ml)中，并加入叠氮化钠(5.7mg，88.0μmol，4.0当量)。17h后，将反应混合物用水(5ml)猝灭，并用乙酸乙酯(3×15ml)萃取。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50→90％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素34(5.3mg，8.7μmol，总产率为40％)。34：rf＝0.35(硅胶，乙酸乙酯)；
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基磺酰基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-17-(2-磺酰基乙基)-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(35)：
在0℃下向埃博霉素12(5.0mg，8.6μmol，1.0当量)在二氯甲烷(0.5ml)中的搅拌溶液中加入对甲苯磺酸酐(5.6mg，17μmol，2.0当量)，之后是三乙胺(2.4μl，17μmol，2.0当量)。5min后，用甲醇(0.5ml)和水(10ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物滤过硅胶垫，用乙酸乙酯(15ml)充分漂洗，并减压浓缩。在0℃下，将获得的粗甲苯磺酸酯在搅拌下于溶解于二甲基甲酰胺(0.5ml)中，加入氢硫化钠(1.0mg，17μmol，2.0当量)，并在1.5h内将反应混合物缓慢升温至15℃。然后用水(5ml)猝灭反应混合物，并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，10％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素35(2.6mg，4.3μmol，总产率为54％)。35：rf＝0.18(硅胶，10％甲醇的乙酸乙酯溶液)；
2-[(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-{(1e)-1-[2-(甲基磺酰基)-1，3-噻唑-4-基]丙-1-烯-2-基}-5，9-二氧杂-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烯-17-基]乙酸乙酯(36)：
在0℃下向埃博霉素12(3.5mg，6.0μmol，1.0当量)在二氯甲烷(1ml)中的搅拌溶液中加入n，n-二异丙基乙胺(2.1mg，12μmol，2.0当量)，之后是乙酰氯(1.1mg，12μmol，2.0当量)。1h后，用甲醇(1ml)和水(5ml、)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，2.5％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体装的纯埃博霉素36(3.3mg，5.3μmol，产率为88％)。36：rf＝0.19(硅胶，乙酸乙酯)；
方案s17.膦酸酯65的合成。
(2-甲基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1h-咪唑-4-基)甲醇(s59)：
在0℃下向的醛s57(0.485g，4.40mmol，1.0当量)在二氯甲烷(12ml)中的搅拌溶液中加入2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(0.953g，5.72mmol，1.3当量)，之后是n，n-二异丙基乙胺(0.996ml，5.72mmol，1.3当量)，以及4-二甲基氨基吡啶(27mg，0.22mmol，0.05当量)。20min后，用甲醇(12ml)稀释反应混合物，并加入硼氢化钠(0.168g，4.40mmol，1.0当量)。10min后，用丙酮(10ml)和水(40ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，0→15％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到无色油状的纯羟甲基咪唑s59(0.820g，3.38μmol，产率为77％)。s59：rf＝0.41(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)；ft-ir(纯)νmax3156、2952、2894、1578、1509、1421、1362、1262、1248、1202、1142、1124、1083、1023、971、915、857、832、754cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝6.81(s，1h)、5.30(s，2h)、4.60(s，2h)、3.54-3.52(m，2h)、2.42(s，3h)、0.92-0.90(m，2h)、0.02(s，9h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝146.9、131.5、127.0、73.0、66.3、54.6、18.1、13.6、-1.3ppm；针对c11h23n2o2si+[m+h]+计算的hrms(esi)为243.1523，实测值为243.1524。
[(2-甲基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1h-咪唑-4-基)甲基]膦酸二乙酯(65)：
在0℃下在搅拌下向具有羟甲基咪唑s59(0.604g，2.49mmol，1.0当量)的烧瓶中加入亚硫酰氯(1.8ml，25mmol，10当量)，并将反应混合物缓慢升温至25℃。2h后，减压去除亚硫酰氯。在搅拌下向获得的残留物中加入亚磷酸三乙酯(830mg，5.0mmol，2.0当量)，并将反应混合物加热至160℃。2h后，在稳定的氮气流下去除亚磷酸三乙酯，并将反应混合物冷却至25℃。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，0→15％甲醇的丙酮溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯65(550mg，1.5mmol，产率为61％)。65：rf＝0.36(硅胶，20％甲醇的乙酸乙酯溶液)；ft-ir(纯)νmax3444、2981、2954、2901、1642、1569、1519、1478、1443、1420、1395、1363、1312、1247、1162、1084、1053、1024、963、918、857、835、777、725cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝6.94(d，j＝3.0hz，1h)、5.14(s，2h)、4.11-4.06(m，4h)、3.50-3.47(m，2h)、3.14(d，j＝20.4hz，2h)、2.41(s，3h)、1.29(t，j＝7.2hz，6h)、0.91-0.88(m，2h)、-0.02(s，9h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝144.9、130.0(d，j＝7.1hz)、118.3(d，j＝5.9hz)、75.3、66.3、62.2(d，j＝6.6hz)、26.4(d，j＝140.7hz)、17.9、16.6(d，j＝6.0hz)、13.0ppm；针对c15h32n2o4psi+[m+h]+计算的hrms(esi)为363.1863，实测值为363.1870。
方案s18.膦酸酯63的合成。
1，2，3-噻二唑-4-基甲醇(s54)：
在0℃下向噻二唑乙酯s53(650mg，4.11mmol，1.0当量)在四氢呋喃(41ml)中的搅拌溶液中逐滴加入氢化铝锂(1.0m的四氢呋喃溶液，1.39ml，1.39mmol，0.5当量)。45min后，用小心加入的十水硫酸钠(13.2g，41.0mmol，10.0当量)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。然后将反应混合物滤过
4-(溴甲基)-1，2，3-噻二唑(s55)：
在0℃下向羟甲基噻二唑s54(251mg，2.16mmol，1.0当量)在二氯甲烷(22ml)中的搅拌溶液中加入三苯基膦(850mg，3.24mmol，1.5当量)，之后是四溴化碳(1.07g，3.24mmol，1.5当量)。30min后，依次用饱和碳酸氢钠水溶液(8ml)和饱和硫代硫酸钠水溶液(8ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，用二氯甲烷(3×5ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，5→15％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到白色无定形固体状的纯溴甲基噻二，为。s55：rf＝0.26(硅胶，15％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(膜)νmax3105、3036、2978、1489、1427、1245、1215、1121、984、889、805、705cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝8.56(s，1h)、4.94(s，2h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝159.8、135.2、22.2ppm；针对c3h4brn2s+[m+h]+计算的hrms(esi)为178.9273，实测值为178.9272。
(1，2，3-噻二唑-4-基甲基)膦酸二乙酯(63)：
在25℃下向溴甲基噻二唑s55(248mg，1.39mmol，1.0当量)在苯(4.6ml)中的搅拌溶液中加入亚磷酸三乙酯(1.2ml，7.0mmol，5.0当量)。将反应混合物加热至100℃保持12h，使其冷却至25℃，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，0→5％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯63(305mg，1.29mmol，产率为93％)。63：rf＝0.32(硅胶，5％甲醇的乙酸乙酯溶液)；ft-ir(纯)νmax3470、3109、2984、2931、2910、1646、1485、1444、1393、1369、1323、1247、1234、1163、1097、1050、1023、969、890、837、811、778、723、700cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝8.56(d，j＝2.7hz，1h)、4.11(dq，j＝8.2、7.1hz，4h)、3.77(d，j＝20.8hz，2h)、1.29(t，j＝7.1hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝154.1(d，j＝7.0hz)、134.3(d，j＝4.9hz)、62.8(d，j＝6.6hz)、26.6(d，j＝142.3hz)、16.5(d，j＝6.0hz)ppm；针对c7h13n2o3psna+[m+na]+计算的hrms(esi)为259.0277，实测值为259.0278。
方案s19.膦酸酯64的合成。
(1，2，4-噁二唑-3-基甲基)膦酸二乙酯(64)：
将氯甲基噁二唑s56(0.230g，1.94mmol，1.0当量)在亚磷酸三乙酯(678mg，4.08mmol，2.1当量)中的搅拌溶液加热至160℃。2h后，在稳定的氮气流下去除亚磷酸三乙酯，并将反应混合物冷却至25℃。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，40→90％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯64(375mg，1.70mmol，产率为89％)。64：rf＝0.25(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3476、3075、2985、2934、1646、1551、1479、1445、1395、1370、1343、1255、1163、1139、1107、1051、1021、972、959、888、831、807、762、727cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝8.70(s，1h)、4.21-4.15(m，4h)、3.41(d，j＝21.6hz，2h)、1.34(t，j＝7.2hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝165.2、163.3(d，j＝9.2hz)、63.0(d，j＝6.6hz)、24.9(d，j＝140.3hz)、16.5(d，j＝6.0hz)ppm；针对c7h13n2o4pna+[m+na]+计算的hrms(esi)为243.0505，实测值为243.0510。
方案s20.膦酸酯66-68的合成。
[1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基]甲醇(s62)：
在-78℃下向吡唑s61(15.0g，98.6mmol，1.0当量)在四氢呋喃(274ml)中的搅拌溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，47.3ml，118mmol，1.2当量)。20min后，加入二甲基甲酰胺(9.10ml，118mmol，1.2当量)，并继续搅拌另外20min。然后用甲醇(60ml)猝灭反应混合物，使其升温至0℃，并分批加入硼氢化钠(7.46g，197mmol，2.0当量)。30min后，用饱和氯化铵水溶液(100ml)猝灭反应混合物，并用水(100ml)稀释。分离两相，用乙酸乙酯(3×50ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯羟甲基吡唑s62(17.4g，95.6mmol，产率为97％)。s62：rf＝0.22(硅胶，50％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3344、2941、2859、2738、1642、1544、1469、1442、1415、1379、1352、1316、1288、1260、1205、1180、1143、1083、1041、1021、1003、936、913、879、845、825、788、739、664cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.45(d，j＝1.7hz，1h)、6.26(d，j＝1.7hz，1h)、5.50(dd，j＝9.6、2.6hz，1h)、4.67(d，j＝1.2hz，2h)、4.03-4.00(m，1h)、3.72-3.68(m，1h)、2.41-2.35(m，1h)、2.13-2.05(m，3h)、1.74-1.66(m，2h)、1.64-1.60(m，1h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝142.3、138.8、107.2、85.8、67.8、55.3、29.5、25.0、22.5ppm；针对c9h14n2o2+[m]+计算的hrms(ci)为182.1055，实测值为182.1055。
5-(溴甲基)-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑(s63)：
在-78℃下向羟甲基吡唑s62(9.0g，49mmol，1.0当量)在二氯甲烷(490ml)中的搅拌溶液中加入三苯基膦(13.7g，51.9mmol，1.05当量)，之后是n-溴代琥珀酰亚胺(8.88g，49.4mmol，1.0当量)。40min后，用饱和碳酸氢钠水溶液(250ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用二氯甲烷(3×50ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，20→40％乙醚的己烷溶液)，以得到无色油状的纯溴甲基吡唑s63(8.0g，33mmol，产率为66％)。s63：rf＝0.34(硅胶，40％乙醚的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3105、3033、2942、2858、1544、1466、1440、1406、1376、1349、1319、1286、1260、1222、1208、1184、1156、1112、1084、1057、1043、1005、931、914、880、844、824、789、706、674cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.48(d，j＝1.7hz，1h)、6.33(d，j＝1.7hz，1h)、5.51(dd，j＝9.3、2.7hz，1h)、4.64(d，j＝11.6hz，1h)、4.57(d，j＝11.6hz，1h)、4.05-3.97(m，1h)、3.76-3.66(m，1h)、2.51-2.40(m，1h)、2.18-2.09(m，1h)、2.10-2.02(m，1h)、1.79-1.67(m，2h)、1.67-1.56(m，1h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝139.0、138.5、108.2、85.1、67.7、29.4、25.1、22.6、20.5ppm；针对c9h13brn2o+[m]+计算的hrms(ci)为244.0211，实测值为244.0214。
{[1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基]甲基}膦酸二乙酯(s64)：
将溴甲基吡唑s63(3.61g，14.7mmol，1.0当量)在亚磷酸三乙酯(17.6ml，103mmol，7.0当量)中的搅拌溶液加热至100℃。18h后，在稳定的氮气流下去除亚磷酸三乙酯，并将反应混合物冷却至25℃。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50→100％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯s64(3.55g，11.8mmol，产率为80％)。s64：rf＝0.33(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3466、3102、2980、2940、2863、1652、1542、1469、1443、1407、1394、1319、1250、1210、1184、1163、1083、1042、1023、967、914、880、841、827、788、714、659cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.47(d，j＝1.4hz，1h)、6.25(dd，j＝1.4、1.4hz，1h)、5.48(dd，j＝9.5、2.7hz，1h)、4.12-4.04(m，2h)、4.04-3.95(m，3h)、3.70-3.62(m，1h)、3.33(dd，j＝20.2、16.0hz，1h)、3.29(dd，j＝21.7、16.0hz，1h)、2.50-2.40(m，1h)、2.14-2.05(m，1h)、2.04-1.97(m，1h)、1.74-1.64(m，2h)、1.62-1.54(m，1h)、1.28(t，j＝7.1hz，3h)、1.24(t，j＝7.1hz，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝139.3(d，j＝2.8hz)、133.4(d，j＝8.0hz)、107.7(d，j＝5.2hz)、84.5、67.7、62.8(d，j＝6.8hz)、62.5(d，j＝6.7hz)、29.4、25.1、24.2(d，j＝143.6hz)、22.7、16.5(d，j＝5.9hz)ppm；针对c13h23n2o4p+[m]+计算的hrms(ci)为302.1395，实测值为302.1366。
(1h-吡唑-3-基甲基)膦酸二乙酯(s65)：
在25℃下向膦酸酯s64(3.55g，11.7mmol，1.0当量)在乙醇(117ml)中的搅拌溶液中加入盐酸(浓盐酸，0.11ml，3.5mmol，0.3当量)。18h后，将反应混合物减压浓缩，并通过快速柱色谱直接纯化(硅胶，乙酸乙酯0→5％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯s65(2.51g，11.5mmol，产率为98％)。s65：rf＝0.35(硅胶，5％甲醇的乙酸乙酯溶液)；ft-ir(纯)νmax3406、3197、3062、2983、2931、2912、1647、1572、1537、1466、1444、1393、1368、1290、1225、1163、1128、1097、1049、1023、967、843、808、792、723cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.50(d，j＝1.3hz，1h)、6.26(dd，j＝1.3、1.3hz，1h)、4.09-4.00(m，4h)、3.27(d，j＝20.7hz，2h)、1.25(t，j＝7.1hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝139.2、133.4、105.6、62.5，(d，j＝6.7hz)、25.8(d，j＝142.1hz)、16.4(d，j＝6.0hz)ppm；针对c8h15n2o3pna+[m+na]+计算的hrms(esi)为241.0713，实测值为241.0716。
{[1-(4-硝基苯基)-1h-吡唑-3-基]甲基}膦酸二乙酯(s69)：
在25℃下向膦酸酯s65(544mg，2.49mmol，1.0当量)在四氢呋喃(25ml)中的搅拌溶液中加入氢化钠(60％w/w的矿物油溶液，398mg，9.96mmol，4.0当量)。30min后，加入氟苯s66(0.28ml，2.61mmol，1.05当量)，并将反应混合物加热至70℃。1h后，将反应混合物冷却至25℃，然后用饱和氯化铵水溶液(15ml)猝灭。分离两相，用乙酸乙酯(3×7ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到白色无定形固体状的纯膦酸酯s69(255mg，0.750mmol，产率为30％)。s69：rf＝0.30(硅胶，50％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(膜)νmax3457、3119、2983、2930、2909、1611、1596、1537、1518、1506、1479、1455、1443、1381、1335、1311、1249、1163、1111、1099、1043、1024、964、944、853、808、792、765、750、687、654cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝8.32(d，j＝9.1hz，2h)、7.97(d，j＝2.5hz，1h)、7.84(d，j＝9.1hz，2h)、6.59(d，j＝2.5hz，1h)、4.15-4.10(m，4h)、3.32(d，j＝21.0hz，2h)、1.31(t，j＝7.1hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝147.4(d，j＝7.4hz)、144.9(d，j＝161.9hz)、128.1(d，j＝1.9hz)、125.5、118.4、110.1(d，j＝3.0hz)、62.5(d，j＝6.6hz)、27.1(d，j＝141.5hz)、16.5(d，j＝6.1hz)ppm；针对c14h18n3o5pna+[m+na]+计算的hrms(esi)为362.0876，实测值为362.0876。
{[1-(3-氟-4-硝基苯基)-1h-吡唑-3-基]甲基}膦酸二乙酯(s70)：
在25℃下向膦酸酯s65(823mg，3.77mmol，1.0当量)在四氢呋喃(38ml)中的搅拌溶液中加入氢化钠(60％w/w的矿物油溶液，604mg，15.1mmol，4.0当量)。30min后，加入氟苯s67(0.43ml，2.61mmol，1.05当量)，并将反应混合物加热至70℃。1h后，将反应混合物冷却至25℃，然后用饱和氯化铵水溶液(20ml)猝灭。分离两相，用乙酸乙酯(3×8ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，25％己烷的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯膦酸酯s70(700mg，1.96mmol，产率为52％)。s70：rf＝0.28(硅胶，25％己烷的乙酸乙酯溶液)；ft-ir(膜)νmax3447、3092、2985、2931、2909、1620、1597、1535、1507、1459、1440、1382、1361、1288、1246、1196、1163、1138、1107、1047、1025、972、882、847、831、808、790、767、678cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.91(dd，j＝9.0、5.2hz，1h)、7.62(d，j＝2.5hz，1h)、7.31(dd，j＝8.5、2.7hz，1h)、7.17(ddd，j＝9.4、7.2、2.7hz，1h)、6.57(d，j＝2.5hz，1h)、4.08-4.13(m，4h)、3.26(d，j＝20.9hz，2h)、1.31(t，j＝7.1hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝164.2(d，j＝257.6hz)、147.3(d，j＝7.1hz)、140.6(d，j＝2.4hz)、135.5(d，j＝11.3hz)、131.0(d，j＝2.0hz)、127.7(d，j＝10.2hz)、115.2(d，j＝23.2hz)、113.8(d，j＝26.2hz)、109.5(d，j＝3.1hz)、62.5(d，j＝6.5hz)、26.8(d，j＝141.3hz)、16.5(d，j＝6.1hz)ppm；针对c14h17fn3o5pna+[m+na]+计算的hrms(esi)为380.0782，实测值为380.0787。
({1-[4-硝基-3-(三氟甲基)苯基]-1h-吡唑-3-基}甲基)膦酸二乙酯(s71)：
在25℃下向膦酸酯s65(809mg，3.71mmol，1.0当量)在四氢呋喃(37ml)中的搅拌溶液中加入氢化钠(60％w/w的矿物油溶液，592mg，14.8mmol，4.0当量)。30min后，加入氟苯s68(0.54ml，2.61mmol，1.05当量)，并将反应混合物加热至70℃。1h后，将反应混合物冷却至25℃，然后用饱和氯化铵水溶液(20ml)猝灭。分离两相，用乙酸乙酯(3×8ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，乙酸乙酯)，以得到白色无定形固体状的纯膦酸酯s71(664mg，1.63mmol，产率为44％)。s71：rf＝0.39(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(膜)νmax3455、3109、2986、2911、1597、1536、1499、1464、1444、1386、1372、1349、1312、1291、1242、1148、1098、1044、1027、959、904、859、849、793、759、722、660cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝8.19(d，j＝2.4hz，1h)、8.06(d，j＝8.9hz，1h)、7.98(d，j＝2.5hz，1h)、7.96(dd，j＝8.9、2.4hz，1h)、6.63(dd，j＝2.5、2.5hz，1h)、4.16-4.11(m，4h)、3.32(d，j＝21.0hz，2h)、1.32(t，j＝7.1hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝148.1(d，j＝7.2hz)、144.9、142.8、128.1(d，j＝1.9hz)、127.5、126.0(q，j＝34.3hz)、121.8(q，j＝273.9hz)、120.9、117.6(q，j＝5.7hz)、110.8(d，j＝3.1hz)、62.5(d，j＝6.5hz)、27.1(d，j＝141.7hz)、16.5(d，j＝6.0hz)ppm；针对c15h17f3n3o5pna+[m+na]+计算的hrms(esi)为430.0750，实测值为430.0756。
{[1-(4氨基苯基)-1h-吡唑-3-基]甲基}膦酸二乙酯(s72)：
在25℃下向膦酸酯s69(350mg，1.03mmol，1.0当量)在乙酸乙酯(21ml)中的搅拌溶液中加入10％pd/c(25％w/w，88mg)，然后引入氢气气氛(1个大气压)。2h后，去除氢气气氛，并将反应混合物滤过
{[1-(4-氨基-3-氟苯基)-1h-吡唑-3-基]甲基}膦酸二乙酯(s73)：
在25℃下向膦酸酯s70(700mg，1.96mmol，1.0当量)在乙酸乙酯(39ml)中的搅拌溶液中加入10％pd/c(25％w/w，175mg)，然后引入氢气气氛(1个大气压)。2h后，除去氢气气氛，反应混合物通过
({1-[4-氨基-3-(三氟甲基)苯基]-1h-吡唑-3-基}甲基)膦酸二乙酯(s74)：
在25℃下向膦酸酯s71(667mg，1.64mmol，1.0当量)在乙酸乙酯(33ml)中的搅拌溶液中加入10％pd/c(25％w/w，167mg)，然后引入氢气气氛(1个大气压)。2h后，除去氢气气氛，反应混合物通过
[(1-{4-[双(叔丁氧基羰基)氨基]苯基}-1h-吡唑-3-基)甲基]膦酸二乙酯(66)：
在25℃下向膦酸酯s72(251mg，0.810mmol，1.0当量)在乙腈(8.1ml)中的搅拌溶液中加入三乙胺(0.34ml，2.4mmol，3.0当量)，之后是二碳酸二叔丁酯(0.56ml，2.4mmol，3.0当量)，以及4-二甲基氨基吡啶(29mg，0.24mmol，0.3当量)，并将该反应混合物加热至70℃。12h后，将反应混合物冷却至25℃，然后用饱和氯化铵水溶液(5ml)猝灭。分离两相，用乙酸乙酯(3×3ml)萃取水层。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥且减压浓缩。将获得的残留物通过柱色谱纯化(硅胶，乙酸乙酯)，以得到无色油状的纯膦酸酯66(220mg，0.43mmol，产率为53％)。66：rf＝0.30(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3450、3120、3055、2980、2933、1789、1749、1709、1609、1531、1478、1459、1431、1388、1368、1354、1314、1272、1247、1152、1115、1100、1051、1026、1005、965、950、844、801、779、765、730、670cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.86(d，j＝2.2hz，1h)、7.65(d，j＝8.7hz，2h)、7.20(d，j＝8.7hz，2h)、6.51(s，1h)、4.14-4.09(m，4h)、3.32(d，j＝20.9hz，2h)、1.42(s，18h)、1.30(t，j＝7.1hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝151.8、145.5(d，j＝7.1hz)、139.1、137.5、129.1、127.9(d，j＝2.1hz)、119.1、108.5(d，j＝3.3hz)、83.1、62.4(d，j＝6.5hz)、28.1、27.0(d，j＝141.4hz)、16.5(d，j＝6.0hz)ppm；针对c24h36n3o7pna+[m+na]+计算的hrms(esi)为532.2183，实测值为532.2165。
[(1-{4-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-3-氟苯基}-1h-吡唑-3-基)甲基]膦酸二乙酯(67)：
在25℃下向膦酸酯s73(0.640g，1.96mmol，1.0当量)在乙腈(19.6ml)中的搅拌溶液中加入三乙胺(0.82ml，5.9mmol，3.0当量)，之后是二碳酸二叔丁酯(1.35ml，5.88mmol，3.0当量)，以及4-二甲基氨基吡啶(72mg，0.59mmol，0.3当量)，并将该反应混合物加热至70℃。12h后，将反应混合物冷却至25℃，然后用饱和氯化铵水溶液(15ml)猝灭。分离两相，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，并减压浓缩。将获得的残留物通过柱色谱纯化(硅胶，乙酸乙酯)，以得到无色油状的纯膦酸酯67(485mg，0.92mmol，产率为47％)。67：rf＝0.56(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3457、3078、2980、2933、2910、1794、1756、1719、1615、1531、1517、1508、1477、1458、1443、1392、1368、1323、1272、1250、1209、1152、1116、1097、1053、1026、966、879、868、850、829、798、778、734、681cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.64(d，j＝2.1hz，1h)、7.33(dd，j＝9.2、2.9hz，1h)、7.19(dd，j＝8.8、5.5hz，1h)、7.03(ddd，j＝8.9、7.5、2.9hz，1h)、6.50(s，1h)、4.13-4.08(m，4h)、3.26(d，j＝20.8hz，2h)、1.31(s，18h)、1.31(t，j＝7.1hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝161.9(d，j＝253.1hz)、150.8、145.7(d，j＝6.8hz)、138.4(d，j＝10.8hz)、131.4(d，j＝9.3hz)、130.6(d，j＝1.6hz)、128.0(d，j＝3.5hz)、114.4(d，j＝22.5hz)、112.1(d，j＝26.2hz)、108.4(d，j＝2.7hz)、83.4、62.3(d，j＝6.5hz)、27.9、26.7(d，j＝141.9hz)、16.6(d，j＝6.0hz)ppm；针对c24h35fn3o7pna+[m+na]+计算的hrms(esi)为550.2089，实测值为550.2080。
[(1-{4-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-3-(三氟甲基)苯基}-1h-吡唑-3-基)甲基]膦酸二乙酯(68)：
在25℃下向膦酸酯s74(0.30g，0.80mmol，1.0当量)在乙腈(8.0ml)中的搅拌溶液中加入三乙胺(0.33ml，2.4mmol，3.0当量)，之后是二碳酸二叔丁酯(0.55ml，2.40mmol，3.0当量)，以及4-二甲基氨基吡啶(29mg，0.24mmol，0.3当量)，并将该反应混合物加热至70℃。12h后，将反应混合物冷却至25℃，然后用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭。分离两相，用乙酸乙酯(3×3ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，并减压浓缩。将获得的残留物通过柱色谱纯化(硅胶，乙酸乙酯)，以得到无色油状的纯膦酸酯68(405mg，0.700mmol，产率为88％)。68：rf＝0.56(硅胶，乙酸乙酯)；ft-ir(纯)νmax3457、3109、2981、2935、1796、1760、1729、1710、1661、1620、1594、1533、1509、1445、1391、1369、131r、1273、1249、1153、1118、1098、1052、1027、961、900、875、842、802、780、732、694、669cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝8.02(d，j＝2.3hz，1h)、7.91(d，j＝2.3hz，1h)、7.84(dd，j＝8.6、2.3hz，1h)、7.31(d，j＝8.6hz，1h)、6.55(s，1h)、4.15-4.11(m，4h)、3.32(d，j＝20.9hz，2h)、1.37(s，18h)、1.31(t，j＝7.1hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝150.6、146.5(d，j＝7.2hz)、139.5、134.9、132.2、128.7(q，j＝31.1hz)、127.9(d，j＝1.5hz)、123.0(q，j＝273.8hz)、121.8、117.0(q，j＝5.2hz)、109.4(d，j＝3.1hz)、83.5、62.4(d，j＝6.6hz)、27.9、27.0(d，j＝141.6hz)、16.5(6.0hz)ppm；针对c25h35f3n3o7pna+[m+na]+计算的hrms(esi)为600.2057，实测值为600.2044。
方案s21.膦酸酯s78的合成。
(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)甲醇(s76)：
在-78℃下向噻唑基酯s75(1.50g，8.76mmol，1.0当量)在二氯甲烷(15ml)中的搅拌溶液中逐滴加入氢化二异丁基铝(1.0m的二氯甲烷溶液，13.1ml，13.1mmol，1.5当量)。5min后，用甲醇(15ml)猝灭反应混合物，并使其升温至0℃。加入硼氢化钠(994mg，26.3mmol，3.0当量)，并且在10min后，用饱和酒石酸钾钠水溶液(40ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，并用乙酸乙酯(3×20ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50→100％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯羟甲基噻唑s768(0.925g，7.16mmol，产率为82％)。s76：rf＝0.19(硅胶，20％己烷的乙酸乙酯溶液)；ft-ir(纯)νmax3277、2924、2862、1531、1475、1436、1376、1324、1267、1188、1130、1066、1029、992、945、909、857、726cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.04(s，1h)、4.73(s，2h)、3.47(brs，1h)、2.72(s，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝167.4、155.7、114.6、60.7、19.0ppm。
4-(溴甲基)-2-甲基-1，3-噻唑(s77)：
在-78℃下向羟甲基噻唑s76(0.910g，7.04mmol，1.0当量)在二氯甲烷(20ml)中的搅拌溶液中加入三苯基膦(1.85g，7.04mmol，1.0当量)，之后是n-溴代琥珀酰亚胺(1.25g，7.04mmol，1.0当量)。5min后，用水(20ml)猝灭反应混合物，并使其升温至25℃。分离两相，用乙酸乙酯(3×20ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，15→30％乙酸乙酯的己烷溶液)，以得到无色油状的纯溴甲基噻唑s778(0.820g，4.27mmol，产率为61％)。s77：rf＝0.38(硅胶，30％乙酸乙酯的己烷溶液)；ft-ir(纯)νmax3413、3106、2962、2922、2849、1517、1485、1423、1375、1324、1214、1183、1144、1108、1008、955、881、853、754、702cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.13(s，1h)、4.54(s，2h)、2.72(s，3h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝167.2、151.7、117.4、27.2、19.4ppm。
[(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)甲基]膦酸二乙酯(s78)：
将溴甲基噻唑s77(0.808g，4.21mmol，1.0当量)在亚磷酸三乙酯(1.75g，10.5mmol，2.5当量)中的搅拌溶液加热至160℃。2h后，在稳定的氮气流下去除亚磷酸三乙酯，然后将反应混合物冷却至25℃。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，1→5％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到无色油状的纯膦酸酯s788(0.950g，3.81mmol，产率为90％)。s78：rf＝0.35(硅胶，5％甲醇的乙酸乙酯溶液)；ft-ir(纯)νmax3451、2983、2929、1719、1648、1519、1477、1443、1393、1322、1246、1185、1163、1097、1050、1019、950、872、842、829、807、782、727cm-1；1hnmr(600mhz，cdcl3)δ＝7.05(d，j＝3.6hz，1h)、4.11-4.06(m，4h)、3.35(d，j＝21.0hz，2h)、2.68(s，3h)、1.28(t，j＝6.6hz，6h)ppm；13cnmr(151mhz，cdcl3)δ＝165.6、145.9(d，j＝8.0hz)、115.7(d，j＝7.4hz)、62.3(d，j＝6.6hz)、29.2(d，j＝140.1hz)、19.0、16.4(d，j＝6.0hz)ppm。
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)丙-1-烯-2-基]-7，11-双[(三乙基甲硅烷基)氧基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(s79)：
在-78℃下向膦酸酯s78(102mg，0.409mmol，8.2当量)在四氢呋喃(1.0ml)中的搅拌溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5m的己烷溶液，0.13ml，0.33mmol，6.5当量)。30min后，加入甲基酮55(45mg，70μmol，1.0当量)在四氢呋喃(0.5ml)中的溶液，并将反应混合物缓慢升温至25℃，并搅拌另外20min。然后用饱和氯化铵水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×5ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，0→3％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到无色油状的纯的受保护的埃博霉素s79(12.6mg，17.1μmol，产率为35％)。s79：rf＝0.34(硅胶，2.5％乙酸乙酯的己烷溶液
(1s，3s，7s，10r，11s，12s，16r)-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[(1e)-1-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)丙-1-烯-2-基]-4-氧杂-17-氮杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(10)：
在0℃下向受保护的埃博霉素s79(10.6mg，14.4μmol，1.0当量)在四氢呋喃(1.0ml)中的搅拌溶液中加入氟化氢-吡啶络合物(70％hf，0.10ml，3.9mmol，过量)，并将反应混合物缓慢升温至25℃。4h后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)猝灭反应混合物，并分离两相。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机层并减压浓缩。将获得的残留物通过制备型薄层色谱纯化(硅胶，30％甲醇的乙酸乙酯溶液)，以得到白色无定形固体状的纯埃博霉素10(5.2mg，10μmol，产率为71％)。上面包括化合物10的表征。
实例4-生物活性
a.细胞毒性测定方法：
将细胞在t75烧瓶中培养至约50-80％融合，并用胰蛋白酶收获成单细胞悬浮液。将每孔五百(500)个细胞以50μl/孔培养基接种在组织培养板中，并在37℃下孵育18-24h。将化合物以dmso稀释为最终所需浓度的400倍。然后将dmso中的系列稀释液以培养基稀释至为0.25％的最终dmso浓度，并将50μl/孔的最终稀释液加入到细胞中(vf＝100μl)。接种和处理后，将细胞再放回培养箱中另外72h。按照制造商的说明制备celltiter-glo试剂，并以100μl/孔加入到培养物中。celltiter-glo允许通过对细胞内atp浓度进行定量来对代谢活性细胞进行相对计数。在室温下用celltiter-glo孵育5min后，将125μl/孔的celltiterglo/细胞裂解物溶液转移到黑色测定板中，然后将所述黑色测定板在30min内在光度计中读数。将从未经任何处理的培养物(仅细胞培养基)获得的发光读数设置为100％对照，并将所有其他发光值归一化为这些对照(例如，归一化的rlu，相对发光单位)。
b.用于生物学测定的细胞系
messa和messa/dx细胞是人子宫肉瘤。从messa产生messadx细胞系以实现mdr1的上调。mes-sa/dx细胞表现出对多种化疗剂(包括柔红霉素、放线菌素、长春新碱、他克唑(taxol)、秋水仙碱)的显著交叉耐药性，以及对丝裂霉素c和美法仑的中度交叉耐药性。293t细胞是人胚胎肾细胞系。
c.生物测定
对合成的叠氮基腺苷埃博霉素类似物(8-40)进行关于它们对几种人癌细胞系(包括几种耐药细胞系)的细胞毒性(参见表3和表4)和微管蛋白聚合性质(表3)的生物学评估。埃博霉素d甲基硫代吡唑基类似物73(方案6)和缺少杂环侧链的截短的叠氮基埃博霉素中间体79和81(方案11)、埃博霉素a-d(1-4，方案1)、伊沙匹隆(5，方案1)、微管蛋白稳定剂单甲基澳瑞他汀e[mmae，本妥昔单抗vedotin
如在表3中可以看出，合成化合物的微管蛋白聚合与细胞毒性效力之间存在相当大的相关性(但并不总是如此)，其中叠氮基埃博霉素b类似物9、14、17、23、34、36和39表现出对多种人癌细胞系的显著效力，所述人癌细胞系包括高度耐药的人卵巢癌细胞系[nci/adr-res，gi50＝3.2-8.8nm，对比紫杉醇：gi50＝4800nm；伊沙匹隆(5)：gi50＝1400nm；参见表3]。表4显示了合成的氮丙啶基埃博霉素b类似物对人子宫肉瘤细胞系messa、具有显著多药耐药性的人子宫肉瘤细胞系messadx和人胚胎肾癌细胞系hek293t的效力。在这些研究中，类似物10、12、13、17、24、34和36-39表现出最显著的效力，对所有三种细胞系的效力都在亚纳摩尔范围内(ic50低至0.02nm对比mmae：ic50≥0.068nm；nac：ic50≥0.166nm；紫杉醇：ics0≥1.76nm；参见表4)。
本公开的许多化合物表现出对测试细胞系的低皮摩尔活性，所述测试细胞系包括具有显著多药耐药性的messadx细胞系(ic50低至0.51nm对比mmae：ic50＝88.19nm；nac：ic50＝15.31nm；紫杉醇：ic50＞400nm；参见表4)。许多这些叠氮基埃博霉素b类似物的高效力及其反应性化学处理证明它们有资格作为抗体-药物缀合物的有希望的有效负载。这些化合物的杀伤曲线在图1a至图3h中示出。
还注意到了12，13-烯烃吡唑基埃博霉素d(缺少环氧部分)类似物73的相对高效能(gi50＝5.0-52nm，表3和0.17-39.18nm，表4)。同样应注意的是，尽管缺少杂环侧链，但截短的甲基酮氮丙啶埃博霉素81仍具有显著的细胞毒性(与79相对，参见表3和表4)。这些研究促使在埃博霉素结构类别内建立了进一步的结构-活性关系(sar)，这证实并扩展了先前开发的sar(altmann等人，2007)。因此，证明了c12-c13氮丙啶基埃博霉素b类似物通常比其相应的环氧化物类似物更有效，其相应的环氧化物类似物继而已知比其烯属前体更有效(埃博霉素d类似物73除外)。这些观察结果与以下假设相符：所述分子的c12-c13区域不参与与β-微管蛋白的关键结合相互作用，β-微管蛋白是埃博霉素的生物靶标。先前通过对埃博霉素-微管蛋白络合物的x射线晶体学分析证实了该观点(nettles等人，2004)。在氮丙啶部分的氮原子上的宽范围的侧链变化是耐受的。氮丙啶取代基的广泛官能团耐受性在那些表现出抗多药耐药性人癌细胞系的强作用的类似物中也是显而易见的(例如，12、14、34、36和39，参见表3和表4)。
与c12-c13区域相比之下，发现对于高效力的取代基耐受性在分子的侧链区域中受到更大的限制。因此，特定的c12-c13叠氮基埃博霉素b家族(即，n-羟乙基氮丙啶)内的20条杂环侧链中的一些被证明为高活性的，而那些高活性化合物在杂环中几乎相同位置中具有必需碱性氮原子。尽管耐受的侧链变异范围相当有限，然而，这些研究揭示了一种新型的且高度赋能的杂环结构基序，类似物17的结构中包含甲基硫代噁唑的所述基序。
表3.微管蛋白装配诱导(ec50)和细胞毒性(gi50)测定数据
aec50是这样的药物浓度，所述药物浓度产生的未结合蛋白质上清液为对照的50％。
bgi50是使细胞生长降低50％所需的化合物浓度。c人类乳腺癌细胞系。d人卵巢癌细胞系。e高度耐药的人卵巢癌细胞系。f人黑素瘤细胞系。g人胶质母细胞瘤细胞系。
表4：埃博霉素类似物对癌细胞系messa、messadx和hek293t的细胞毒性数据
aic50是化合物抗细胞生长的50％抑制浓度。有关更多细节，参见上面的细胞毒性方法部分。b人子宫肉瘤细胞系；c具有明显多药耐药性的messa细胞系；d人胚胎肾癌细胞系。
＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊
鉴于本公开，可以在不进行过度实验的情况下进行和执行本文所公开和要求保护的所有组合物和/或方法。尽管已经根据优选实施例描述了本公开的组合物和方法，但是对于本领域技术人员而言将显而易见的是，在不脱离本公开的概念、精神和范围的情况下，可以对本文所述的组合物和/或方法和对本文所述方法的步骤或对本文所述方法的步骤顺序应用改变。更具体地，将显而易见的是，在化学和生理上均相关的某些药剂可以代替本文所述的药剂，同时将获得相同或相似的结果。对于本领域技术人员显而易见的所有此类类似替代和修改都被认为落入由所附权利要求所限定的本公开的精神、范围和概念内。
v.参考文献
以下参考文献在一定程度上提供了示例性的过程或其他细节，所述示例性的过程或其他细节是对本文所述的那些过程或细节的补充，所述参考文献以引用方式明确地并入本文：
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