短指软珊瑚提取物及其用途的制作方法

本发明属于天然产物及其应用
技术领域：
，具体涉及短指软珊瑚提取物及其用途。
背景技术：
：阳光中的紫外线根据波长的不同，可以分为长波紫外线(uva，320～400nm)、中波紫外线(uvb，280～320nm)、短波紫外线(uvc，200～280nm)三种类型。其中uva和uvb穿透力强，皮肤长久暴露于紫外线强的环境中会导致还原黑色素被氧化，皮肤光老化，色素沉着。紫外线还可以引发自由基和活性氧(ros)，加速皮肤的衰老，能使皮肤表皮细胞内的核酸或蛋白质变性，发生急性皮炎-日光晒焦(红斑或灼伤)，甚至诱发皮肤癌及机体的免疫抑制等。目前常用的防晒剂有物理防晒剂、化学防晒剂和天然防晒剂。物理防晒剂例如：二氧化钛、氧化锌等，化学防晒剂如肉桂酸酯、水杨酸酯、二苯甲酮等。但这类防晒物质或易致皮肤过敏，或太厚重、不易涂抹。随着人们健康意识及环保意识的提高，天然防晒剂得到了越来越多的关注。科研人员开始从自然界的提取物中筛选是否具有吸收紫外线的效果，以期获得安全有效、环境友好型的天然防晒原料。此外，人体在与自然界的持续接触过程中体内会产生自由基，科学研究表明，癌症、衰老或其它疾病大都与过量自由基的产生有关联。环境污染、辐射、紫外线照射、精神压力大均会产生大量的自由基，所以抗氧化物质的研究也是人们关注的热点之一。在自然界中，动物、植物、微生物中体内或者分泌物存在着大量的抗氧化活性物质，例如绿茶、芦荟、槐米、蜂蜜、番茄、葡萄、金银花、植物乳酸杆菌、牡蛎、虾、鱼类等，均含有抗氧化物质。天然的抗氧化物质主要5类：有机硫化合物，黄酮类，酚类化合物，类胡萝卜素和维生素。这些成分在化妆品、食品、医药等领域有着广泛的应用前景。超过70％的地球表面被海洋覆盖，海洋生物多样性为天然的防晒剂和抗氧化剂提供了丰富的天然产物来源。藻类中含有多糖，维生素，多酚化合物等成分，具有防晒、抗炎、保湿美白等功效；海洋鱼类来源蛋白和多肽可以促进皮肤修复和组织再生，抗光氧化，抗衰老；甲壳类动物中来源的虾青素也是一种很强的抗氧化剂；此外，海洋微生物等其他生物也可以产生具有防晒、抗氧化、保湿美白等活性的天然物质。由此可见，海洋生物产生的天然物质开发潜力大，应用前景广阔。软珊瑚(alcyonacea)是珊瑚虫纲、软珊瑚目动物，因身体柔软得名，是珊瑚虫纲、软珊瑚目的通称。已知有1000多种，主要分布于热带和亚热带浅海区，少数种类分布在温带、寒带和深海区。截至目前未有关于软珊瑚及其提取物在防晒、抗氧化方面的研究报道。技术实现要素：本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了短指软珊瑚提取物及其用途。本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：一种短指软珊瑚提取物，为短指软珊瑚sinulariacompacta或短指软珊瑚sinulariawanannensis的醇提物。一实施例中：所述醇提物通过以下方法制备得到：短指软珊瑚用乙醇提取，固液比为1:6～10，提取时间为70～75h；重复乙醇提取步骤，共提取2～4次；合并提取液，去除溶剂，得到所述醇提物。本发明解决其技术问题所采用的技术方案之二是：所述的短指软珊瑚提取物在制备防晒剂上的用途。一种包括所述的短指软珊瑚提取物的组合物在制备防晒剂上的用途。其中，所述组合物可包括至少一种具有防晒作用的物质，包括但不限于二氧化钛、氧化锌、肉桂酸酯、水杨酸酯、熊果苷、芦丁、二苯甲酮等。所述组合物还可包括至少一种辅料。本发明所述的辅料应为药学上或化妆品制备工艺上可接受的、符合相关法规的辅料，例如包括稀释剂、溶剂、赋形剂、吸收剂、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、增溶剂、乳化剂、助悬剂、成膜剂、抛射剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、杀菌剂、防腐剂等。一实施例中：所述防晒指的是吸收紫外线，紫外线的波长范围为10～400nm，尤其指的是波长范围为200～400nm，包括长波紫外线(uva，320～400nm)、中波紫外线(uvb，280～320nm)、短波紫外线(uvc，200～280nm)三种类型。一实施例中：所述防晒指的是吸收波长为280～400nm紫外线。一实施例中：所述防晒指的是吸收波长为280～340nm紫外线。本发明解决其技术问题所采用的技术方案之三是：所述的短指软珊瑚提取物在制备抗氧化剂上的用途。一种包括所述的短指软珊瑚提取物的组合物在制备抗氧化剂上的用途。其中，所述组合物可包括至少一种具有抗氧化作用的物质，包括但不限于有机硫化合物，黄酮类，酚类化合物，类胡萝卜素和维生素等。所述组合物还可包括至少一种辅料。本发明所述的辅料应为药学上或化妆品制备工艺上可接受的、符合相关法规的辅料，例如包括稀释剂、溶剂、赋形剂、吸收剂、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、增溶剂、乳化剂、助悬剂、成膜剂、抛射剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、杀菌剂、防腐剂等。一实施例中：所述抗氧化指的是清除自由基。本技术方案与
背景技术：
相比，它具有如下优点：本发明提供的短指软珊瑚提取物具备防晒活性和清除自由基的能力，且无皮肤刺激性，安全性良好；软珊瑚主要分布于热带和亚热带浅海区，来源广泛，且目前人们对软珊瑚的人工培养技术已有开展研究，有望解决来源量的问题，是潜在的化妆品原料和药物来源。附图说明下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。图1为不同浓度的短指软珊瑚提取物及阳性对照对紫外线的吸收效果。图2为不同浓度的短指软珊瑚提取物及阳性对照对dpph自由基的清除率，图中*表示与同浓度的阳性对照相比的差异性(***：p<0.001；**：p<0.01；*：p<0.05)。图3为短指软珊瑚提取物及对照组的皮肤刺激性实验结果照片。具体实施方式下面通过实施例具体说明本发明的内容：实施例1：短指软珊瑚提取物的制备本实施例涉及的两种软珊瑚亚种采集自中国海南省三亚市西岛海域浅水区。将采集的软珊瑚于-80℃冰箱进行冷冻，然后放置于冷冻干燥机中冻干，研磨成粉，-20℃保存备用。亚种一，经鉴定为短指软珊瑚sinulariacompacta，干重1847克，加入乙醇，室温进行提取，固液比为1:8，提取时间为72h，过滤获得提取液，重复以上乙醇提取过程，共提取3次，合并提取液，进行旋转蒸发去除乙醇，获得提取物70克，为d1。亚种二，经鉴定为短指软珊瑚sinulariawanannensis，干重2574克，以上述相同步骤获得其乙醇提取物130克，为d2。d1的提取率为3.79％，d2的提取率为5.05％。实施例2：防晒活性1)实验方法将两种短指软珊瑚提取物d1、d2分别以dmso(二甲基亚砜)溶解，设置浓度梯度为1、2、5、10mg/ml，分别吸取各溶液200μl于96孔板中，在280～400nm区间对溶液进行全波长扫描(间隔＝10nm)，物质对不同波长的光的吸收效果即可反映所测物质的防晒效果。阳性对照为当前常用的三种防晒物质熊果苷、芦丁和二苯甲酮，浓度同样设为1、2、5、10mg/ml。2)实验结果2种短指软珊瑚提取物在不同浓度下的防晒活性以其对各波段对紫外线的吸收率，如图1所示。随着浓度的增加，d1、d2对紫外线的吸收率逐渐升高，吸收光谱范围扩大，表现出一定的剂量依赖性。d1在1mg/ml浓度下即表现出对280～340nm波长范围的紫外线有良好的吸收效果，在5mg/ml时对280～400nm波长范围的紫外线均有良好吸收，浓度达10mg/ml时对各波段紫外线的吸收率几乎达100％，显示出优异的防晒活性。d2在不同浓度下对各波段紫外线的吸收率变化趋势类似于d1，但其防晒活性低于d1。相比较熊果苷，5mg/ml时，d1和d2可达到与熊果苷相当的防晒活性，同时光吸收的波段要大于熊果苷。相较二苯甲酮，在280～340nm，5mg/ml的d1和d2与二苯甲酮防晒活性很接近，10mg/ml的d1与二苯甲酮的吸收效果相当，值得注意的是，5mg/ml和10mg/ml的d1和d2光吸收波段均要广于二苯甲酮。相较芦丁(对280～400nm波长范围的紫外线均具较高吸收)，d1和d2在1～5mg/ml时的防晒活性低于芦丁，但在10mg/ml时d1对各波段紫外线的吸收率与芦丁相差很小，基本相当。总体上，d1和d2具较高的吸收紫外线的能力，是潜在的防晒剂原料，可用于防晒化妆品等的制备。实施例3：抗氧化活性1)实验方法本实施例采用常用的抗氧化活性检测方法dpph(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)法。dpph的结构中含有单电子的稳定自由基。当有自由基清除剂存在时，dpph的醇溶液被还原，颜色由紫色逐渐变浅，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用这种方法检测物质清除自由基的能力。将两种短指软珊瑚提取物d1、d2分别以dmso溶解，浓度设定为0.1、0.5、1、2、5和10mg/ml。称取5.9mg的dpph试剂溶解于80％的乙醇并稀释100倍得到0.15mmdpph醇溶液，将50μl提取物的dmso溶液加入50μldpph醇溶液(此组为待测样品组as)，阴性对照组为a0(50μldmso+50μldpph醇溶液)。因为样品有颜色，需要设置样品色素空白组ap(50μl提取物溶液+50μl80％乙醇)。阳性对照使用维生素c(vc)。避光反应30min后，检测λ＝517nm处的吸光度值(a)，以清除率(％)表征提取物清除自由基的能力。计算公式如下：提取物的清除率(％)＝[a0–(as–ap)]/a0×100％维生素c的清除率(％)＝(a0–as)/a0×100％2)实验结果由实验结果可知，d1、d2的清除率随着浓度的升高而增大，表现出了剂量依赖性。其中10mg/mld2对自由基清除率为74.76％±0.65％，显著高于同浓度的vc(67.77％±1.13％，p<0.001)和d1(66.08％±2.16％，p<0.01)，低浓度的d1、d2(0.5mg/ml，1mg/ml)的自由基清除能力显著低于同浓度的vc；1～5mg/ml的d1、d2的清除率略低于vc或与vc相当，无显著性差异。总体来看，短指软珊瑚提取物d1、d2均有良好的清除自由基的效果，具备抗氧化活性，d2的抗氧化活性要优于d1。这说明短指软珊瑚提取物d1、d2在药物、化妆品方面有开发潜力。实施例4：安全性评估1)皮肤刺激性实验方法选用8～10周的健康豚鼠共计3只(购自上海，普通级)。性别随机。实验前24h把每只豚鼠背部进行脱毛处理，为方便观察，脱毛面积约为4cm×4cm，每只豚鼠涂抹面积为1.77cm2×3(短指软珊瑚提取物d1，短指软珊瑚提取物d2，空白对照(dmso)各1.77cm2)。称取d1、d2各10mg，溶解在1mldmso中。每只豚鼠各涂抹150μld1、d2和dmso溶液。双层无菌化妆棉覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。采用封闭试验，作用时间为4h。4h后，用0.9％生理盐水清除残留受试物。于清除受试物后的1、24、48和72h观察涂抹部位皮肤反应，按表1对皮肤的红斑和水肿状况评分，以受试动物积分的平均值进行综合评价，根据1、24、48和72h各观察时点最高积分均值，计算皮肤刺激性指数(primaryirritationindex，p.i.i)，按表2判定皮肤刺激强度(参照化妆品安全技术规范，2015年版，等)。表1皮肤刺激反应评分表2皮肤刺激强度分级皮肤刺激性指数(积分均值)强度0—＜0.5无刺激性0.5—＜2.0轻刺激性2.0—＜6.0中刺激性6.0—8.0强刺激性2)实验结果分别在清除珊瑚提取物溶液1h、24h、48h、72h后，观察3只豚鼠的皮肤状况。表3是d1、d2及对照组的皮肤状况评分情况。表3d1、d2及对照组的皮肤状况评分情况分别计算d1，d2的皮肤刺激性指数，得出结论。p.i.i(d1)＝1/动物只数(n＝3)×给药部位(n＝1)×观察次数(n＝1)＝1/12＝0.083。p.i.i(d2)＝0/动物只数(n＝3)×给药部位(n＝1)×观察次数(n＝1)＝0。对照表2，得出结论：短指软珊瑚提取物d1、d2无刺激性。以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。当前第1页12