辽东栎果实醇提物的用途的制作方法

本发明涉及辽东栎果实的用途，特别涉及辽东栎果实醇提物的用途。

背景技术：

辽东栎(quercuswutaishanseam.)，是栎属(quercus)壳斗科(cupuliferae)的落叶乔木。辽东栎的果实有健脾止泻、收敛止血的功效，可应用于治疗脾虚腹泻、久痢、痔疮出血、脱肛便血、子宫出血、白带、恶疮、痈肿等。辽东栎果实的醇提物是从辽东栎果实经乙醇加热回流提取得到的。经过活性检查，发现辽东栎果实的醇提物具有很强的α-葡萄糖苷酶抑制活性和抗氧化活性，目前，尚未见有辽东栎果实抗α-葡萄糖苷酶以及抗氧化的生物活性的报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于从植物资源寻找能够抑制α-葡萄糖苷酶和抗氧化的活性化合物，为研究开发抗糖尿病和抗衰老的食品或药品提供先导化合物。

本发明的技术方案是：

辽东栎果实醇提物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的用途。

辽东栎果实醇提物在制备抗氧化、抗衰老药物或保健品中的用途。

本发明的有益效果是：本发明采用α-葡萄糖苷酶抑制实验以及dpph自由基清除实验，分别以阿卡波糖和维生素c为阳性对照，测定了辽东栎果实醇提物的α-葡萄糖苷酶抑制活性以及抗氧化活性。结果表明，辽东栎果实醇提物表现出很强的α-葡萄糖苷酶抑制活性和一定的抗氧化活性，可应用于抗衰老的食品或药品的制备。

附图说明

图1为辽东栎果实醇提物的提取流程图。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行具体的描述，只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限定，该领域的技术工程师可根据上述发明的内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。

辽东栎果实醇提物的制备

辽东栎去壳果实(粉碎成粉末至小颗粒状)共10kg，取500g留样。待样品用12l95％乙醇浸泡三天之后，将浸泡透的样品滤去浸提液。将样品用95％乙醇加热回流提取，分10批，每批用95％乙醇提取两次，60％乙醇提取一次，每次两小时左右，最后合并60％乙醇提取液与最初浸提液，回收溶剂得到辽东栎醇提物浸膏。其提取流程如图1所示。

试验例1α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定方法

反应溶液的制备

配制磷酸缓冲液：称取1.167g的磷酸氢二钾和0.9118g的磷酸二氢钾，加适量蒸馏水溶解，再用容量瓶定容至100ml，配置成ph＝6.8的磷酸盐缓冲液，备用。

配制底物pnpg(4-硝基苯基-α-d-吡喃葡萄糖苷)溶液：称取90.375mgpnpg，加适量磷酸盐缓冲液(ph＝6.8)溶解，再用容量瓶准确定容到25ml，配制成12mmol/l的母液。再将母液稀释成4mmol/l的溶液，备用。

配制α-葡萄糖苷酶的酶溶液：将冻干酶粉(酶活力为14u/mg)用磷酸缓冲液(ph＝6.8)溶解，配制成0.15u/ml的母液，备用。

配制na2co3溶液：称取2.12g无水na2co3于烧杯中，加适量蒸馏水溶解，并再用容量瓶定容至100ml，备用。

配制待测样品溶液(抑制剂)：精确称取1mg的辽东栎果实醇提物样品，加适量5％的dmso水溶液(v/v)溶解，再用容量瓶定容至10ml，配制成100μg/ml的母液。将母液用5％的dmso水溶液(v/v)分别稀释成10、20、30、40、50μg/ml五个不同梯度的标准品溶液，备用。

实验分为药物反应组、药物对照组、空白反应组和空白对照组，各反应物按下表中剂量在ep管中进行加样，每组3个平行。依次加入磷酸盐缓冲液、酶溶液、待测样品溶液和5％dmso水溶液，混合均匀后于37℃水浴保温10min。结束后，取出，加入pnpg溶液，充分混匀后于37℃水浴反应30min。结束后加入200μl的na2co3溶液中止反应。然后在紫外波长405nm处测定每组样品的吸光度，每组样品平行测定3次，取其均值。按式(1)计算各待测样品对α-葡萄糖苷酶的抑制率。

式中：a1为药物反应组吸光度；a2为药物对照组吸光度；a3为空白反应组吸光度；a4为空白对照组吸光度。

各组添加试剂及其计量(单位：μl)

辽东栎果实醇提物的实验测定结果

阿卡波糖的实验测定结果

将所得数据绘制浓度-吸光度曲线，拟合曲线方程，得到ic50值(半数抑制率)，以阿卡波糖的ic50值为阳性对照。结果表明，辽东栎果实醇提物具有很强的α-葡萄糖苷酶抑制活性，可应用于抗糖尿病的食品或药品的制备。

试验例2抗氧化活性的测定方法

反应溶液的制备

配制dpph溶液：称取7.0978mgdpph溶于少量无水乙醇中，最后定容至150ml(即120μmol/l)，置于冰箱中冷藏备用。

配制待测样品溶液(抑制剂)：精确称取10mg的辽东栎果实醇提物样品，加适量dmso溶液(v/v)溶解，再用容量瓶定容至10ml，配制成1.0mg/ml的母液。将母液用dmso溶液(v/v)分别稀释成1.0、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml五个不同梯度的标准品溶液，备用。

实验分为药物反应组、药物对照组、空白反应组和空白对照组，各反应物按下表中剂量在ep管中进行加样，每组3个平行。依次加入待测样品溶液、dmso溶液、dpph溶液、无水乙醇溶液，混合均匀后于37℃水浴保温30min。结束后，取出。然后在紫外波长517nm处测定每组样品的吸光度，每组样品平行测定3次，取其均值。同理，按式(1)计算各待测样品对dpph自由基的抑制率。

式中：a1为药物反应组吸光度；a2为药物对照组吸光度；a3为空白反应组吸光度；a4为空白对照组吸光度。

各组添加试剂及其计量(单位：μl)

辽东栎果实醇提物的实验测定结果

维生素c的实验测定结果

将所得数据绘制浓度-吸光度曲线，拟合曲线方程，得到ic50值(半数抑制率)，以维生素c的ic50值为阳性对照。结果表明，辽东栎果实醇提物具有一定的抗氧化活性，可应用于抗衰老的食品或药品的制备。

辽东栎果实醇提物的抗氧化活性实验结果

本发明应用了具体实施例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其中心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护。