本发明涉及一种葛根多肽组合物的制备方法，具体为从葛叶中提取葛根多肽组合物的制备方法及其在抗衰老方面的应用。
背景技术：
野葛是豆科葛属多年生草质藤本植物,我国大部分地区均有分布。葛根是一味传统的药食同源中药,具有保护心脏、降血压、抗凋亡、降血糖、防治骨质疏松、保护神经、抗氧化和治疗神经病理性疼痛等多种活性；葛花性味甘、辛、凉,入脾、胃经,有和味解酒、生津止渴之功效。
中国专利库中公开了一种葛叶红茶及其加工方法(cn201510780086.9)，所述葛叶红茶由葛叶和茶树幼嫩芽叶混合加工制成。所述葛叶红茶依次通过如下步骤制得，采用葛叶和茶树幼嫩芽叶，分别进行自然萎凋和热风萎凋，然后按照质量比为6:4或4:6比例，将葛叶和茶树幼嫩芽叶混匀后进行揉捻，揉捻完进行解块，淀粉葡萄糖苷酶发酵，滚形，制形，固形和微波提香。本发明将葛叶与茶叶中的营养物质相互渗透并有机融合，共同发酵后产生的独特的香味，使得产品的营养更丰富，具有养生保健功效，抗衰老和提高人体免疫力的作用。
中国专利库中公开了葛叶复合红茶及其制作方法(cn201611105384.9)，包括以下步骤：自然萎凋，将葛叶和茶树芽叶放入室内，避免日光直射，分别摊放在竹垫上，摊放厚度均为4-6cm，作自然温度萎凋，葛叶萎凋时间偏长，为2-3h；茶树芽叶萎凋时间为1-2h；机械匀叶，将自然萎凋后的葛叶与茶叶同时放入匀叶机内，进行机械混合，使其成为复合葛茶产物；热风萎凋，将复合萎凋叶输入热风萎凋机，在36-38度，萎凋4-6h，热风萎凋作用是通过热温，促进葛叶和茶叶中的内含茶多酚、葛根素生化物质初步氧化红变，形成红茶特有的品质风味；本发明操作简单，方便加工，且能保证产品质量，提高产品品级。
现有技术中，对葛根的研究利用已经很充分了，但是对于占野葛大部分的葛叶研究和利用很少，只有少部分被加工为茶叶，导致利用率不高，资源浪费严重。
技术实现要素：
本发明的目的是提供葛根多肽组合物的制备方法及其在抗衰老方面的应用，充分利用葛叶中的有效成分，改良和优化现有的提取方法，提高提取率，利用葛根多肽组合物的抗衰老活性将其应用到抗衰老化妆品和保健食品中。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案
葛根多肽组合物的制备方法，包括以下步骤：
s1、将新鲜采摘的葛叶清洗干净，滤水后风干葛叶表面水分；
s2、将葛叶在于-25--15℃的低温下预冷10-15min，粉碎后过100目筛，得到葛叶粉末颗粒，将葛叶粉末颗粒在-15--10℃的低温下冷冻15-20min；
s3、将恢复常温的葛叶粉末颗粒用10-15倍的80-95％(v/v)的食用酒精浸提30-60min；
s4、采用连续回流提取法对s3中的混合物进行提取，提取时间2-3h，得到提取液；
s5、使用板框压滤机进行过滤，过滤精度15-20μm，得到滤液a；
s6、将s4中得到的滤渣采用水提法再提取一次，过滤后得到滤液b；
s7、使用超滤膜对滤液a和滤液b的混合液进行超滤，得到以葛根多肽为主的葛叶活性成分提取物，也就是葛根多肽组合物；
s8、将葛根多肽组合物真空干燥，粉碎后过筛，得到粉末状葛根多肽组合物。
优选的，s2中，粉碎后用100目的超声波震荡筛筛选，对大颗粒葛叶再次粉碎，再次过筛。
优选的，s3中，采用微波辅助浸提，微波频率为800mhz-1500mhz。
优选的，s3中，采用漩涡混匀器辅助浸提，速度为500-1000rmp/min。
优选的，s4中，使用超声波辅助提取，超声波频率为50-200mhz。
优选的，s4中，采用低温提取，提取温度50-60℃。
优选的，s4中，采用将连续回流提取置于旋转搅匀器中旋转，旋转速度80-120rpm，按照正转30s,反转30s循环转动。
优选的，s7中，超滤时，超滤膜过滤粒径为8-10nm，操作压力为0.15-0.25mpa。
上述制备的葛根多肽组合物在抗衰老方面的应用，其特征在于：将葛根多肽组合物作为原料加入到抗衰老类化妆品、保健食品和保健饮品中。
优选的，一种含有葛根多肽组合物的抗衰老类化妆品组合物，所述抗衰老化妆品组合物为抗衰老护肤水、抗衰老乳液或抗衰老膏霜中的一种。
优选的，一种含有葛根多肽组合物的眼部抗衰老乳液，按重量计，包括以下组分：
葛根多肽组合物8-15份、荷花提取物6-10份、保湿剂10-20份、抗氧化剂5-10份、油脂2-15份、乳化剂5-15份、防腐剂0.01-0.3份。本发明的有益效果：
1、本发明采用微波辅助浸提法配合超声波辅助的连续回流法提取葛根多肽组合物，提取率高，时间较短；
2、采用连续回流法提取时处于低温环境，不易使活性成分变性；
3、连续回流提取时采用动态环境，有助于增加溶剂和溶液的相互运行和接触的表面积；
4、充分利用现有技术中几乎废弃掉的葛叶部分，减少资源浪费；
5、充分利用葛根多肽组合物的抗衰老活性，将其应用到抗衰老化妆品和保健食品中；
6、野葛根多肽组合物有较强的清除dpph自由基、超氧阴离子自由基和abts自由基能力及较强还原能力，含有葛根多肽组合物的化妆品在抗衰老方面效果更好。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
葛根多肽组合物的制备方法，包括以下步骤：
s1、将新鲜采摘的葛叶清洗干净，滤水后风干葛叶表面水分；
s2、将葛叶在于-25--15℃的低温下预冷10-15min，粉碎后过100目筛，得到葛叶粉末颗粒，将葛叶粉末颗粒在-15--10℃的低温下冷冻15-20min；
s3、将恢复常温的葛叶粉末颗粒用10-15倍的80-95％(v/v)的食用酒精浸提30-60min；
s4、采用连续回流提取法对s3中的混合物进行提取，提取时间2-3h，得到提取液；
s5、使用板框压滤机进行过滤，过滤精度15-20μm，得到滤液a；
s6、将s4中得到的滤渣采用水提法再提取一次，过滤后得到滤液b；
s7、使用超滤膜对滤液a和滤液b的混合液进行超滤，得到以葛根多肽为主的葛叶活性成分提取物，也就是葛根多肽组合物；
s8、将葛根多肽组合物真空干燥，粉碎后过筛，得到粉末状葛根多肽组合物。
为了提高提取效率，s2中，粉碎后用100目的超声波震荡筛筛选，对大颗粒葛叶再次粉碎，再次过筛；s3中，采用微波辅助浸提，微波频率为800mhz-1500mhz；s3中，采用漩涡混匀器辅助浸提，速度为500-1000rmp/min；s4中，使用超声波辅助提取，超声波频率为50-200mhz；s4中，采用低温提取，提取温度50-60℃；s4中，采用将连续回流提取置于旋转搅匀器中旋转，旋转速度80-120rpm，按照正转30s,反转30s循环转动；s7中，超滤时，超滤膜过滤粒径为8-10nm，操作压力为0.15-0.25mpa，将提取液中的溶剂、盐和小分子物质过滤掉，留下大分子的葛叶活性成分，其中以葛根多肽为主。
实施例1：
葛根多肽组合物的制备方法，包括以下步骤：
s1、将新鲜采摘的葛叶清洗干净，滤水后风干葛叶表面水分；
s2、将葛叶在于-15℃的低温下预冷15min，粉碎后过100目筛，得到葛叶粉末颗粒，将葛叶粉末颗粒在-10℃的低温下冷冻20min；
s3、将恢复常温的葛叶粉末颗粒用12倍的85％(v/v)的食用酒精浸提50min；
s4、采用连续回流提取法对s3中的混合物进行提取，提取时间3h，得到提取液；
s5、使用板框压滤机进行过滤，过滤精度20μm，得到滤液a；
s6、将s4中得到的滤渣采用水提法再提取一次，过滤后得到滤液b；
s7、使用超滤膜对滤液a和滤液b的混合液进行超滤，得到以葛根多肽为主的葛叶活性成分提取物，也就是葛根多肽组合物；
s8、将葛根多肽组合物真空干燥，粉碎后过筛，得到粉末状葛根多肽组合物。
实施例2：
葛根多肽组合物的制备方法，包括以下步骤：
s1、将新鲜采摘的葛叶清洗干净，滤水后风干葛叶表面水分；
s2、将葛叶在于-15℃的低温下预冷15min，粉碎后过100目筛，得到葛叶粉末颗粒，将葛叶粉末颗粒在-10℃的低温下冷冻20min；粉碎后用100目的超声波震荡筛筛选，对大颗粒葛叶再次粉碎，再次过筛；
s3、将恢复常温的葛叶粉末颗粒用12倍的85％(v/v)的食用酒精浸提50min；采用微波辅助浸提，微波频率为1000mhz；
s4、采用连续回流提取法对s3中的混合物进行提取，提取时间3h，得到提取液；使用超声波辅助提取，超声波频率为120mhz；采用低温提取，提取温度55℃；采用将连续回流提取置于旋转搅匀器中旋转，旋转速度100rpm，按照正转30s,反转30s循环转动；
s5、使用板框压滤机进行过滤，过滤精度20μm，得到滤液a；
s6、将s4中得到的滤渣采用水提法再提取一次，过滤后得到滤液b；
s7、使用超滤膜对滤液a和滤液b的混合液进行超滤，得到以葛根多肽为主的葛叶活性成分提取物，也就是葛根多肽组合物；
s8、将葛根多肽组合物真空干燥，粉碎后过筛，得到粉末状葛根多肽组合物。
实施例3：
葛根多肽组合物的制备方法，包括以下步骤：
s1、将新鲜采摘的葛叶清洗干净，滤水后风干葛叶表面水分；
s2、将葛叶在于-15℃的低温下预冷15min，粉碎后过100目筛，得到葛叶粉末颗粒，将葛叶粉末颗粒在-10℃的低温下冷冻20min；粉碎后用100目的超声波震荡筛筛选，对大颗粒葛叶再次粉碎，再次过筛；
s3、将恢复常温的葛叶粉末颗粒用12倍的85％(v/v)的食用酒精浸提50min；采用微波辅助浸提，微波频率为1000mhz；采用漩涡混匀器辅助浸提，速度为8000rmp/min；
s4、采用连续回流提取法对s3中的混合物进行提取，提取时间3h，得到提取液；使用超声波辅助提取，超声波频率为120mhz；
s5、使用板框压滤机进行过滤，过滤精度20μm，得到滤液a；
s6、将s4中得到的滤渣采用水提法再提取一次，过滤后得到滤液b；
s7、使用超滤膜对滤液a和滤液b的混合液进行超滤，得到以葛根多肽为主的葛叶活性成分提取物，也就是葛根多肽组合物；
s8、将葛根多肽组合物真空干燥，粉碎后过筛，得到粉末状葛根多肽组合物。
经过测定，提取率方面，实施例1<实施例2<实施例3。
葛叶提取物具有较好的抗衰老活性，浙江大学对此进行过研究，目的研究野葛叶提取物体内、外抗衰老活性，方法体内实验,以d-半乳糖(d-gal)致急性衰老小鼠为模型,灌胃不同浓度的野葛叶提取物,6w后,观察各组行为学及学习记忆改变,分别测定血清、肝脏和脑组织中超氧化物歧化酶(sod)活性、丙二醛(mda)含量及谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px)活性；体外实验,采用分光光度法分别测定野葛叶提取物清除二苯基苦基苯肼(dpph)自由基、超氧阴离子自由基、2,2-聚氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(abts)自由基的能力及还原能力。结果体内实验,与空白对照组比较,野葛叶提取物各组能明显改善衰老模型小鼠学习记忆能力,显著增强血清、肝脏和脑组织中sod和gsh-px活性,降低mda含量；体外实验,野葛叶提取物有较强的清除dpph自由基、超氧阴离子自由基和abts自由基能力及较强还原能力,分别在质量浓度400,300,400,400μg/ml时达到较高水平,之后进入平台期。结论野葛根多肽组合物具有较明显的抗衰老活性,作为药用资源可进一步开发利用。
将葛叶提取物使用超滤膜进行过滤分离，滤去小分子物质，得到大分子的葛叶活性成分提取物；葛叶活性成分提取物中以葛根多肽为主，还包括异黄酮、葛根素、大豆甙元、染料木素更活性成分，也称为葛根多肽组合物。
基于葛根多肽组合物的抗衰老活性，将实施例1-3制备的葛根多肽组合物作为原料加入到抗衰老类化妆品、保健食品和保健饮品中。
进一步的，将其制作为一种含有葛根多肽组合物的抗衰老类化妆品组合物，所述抗衰老化妆品组合物为抗衰老护肤水、抗衰老乳液或抗衰老膏霜中的一种。
更进一步的，一种含有葛根多肽组合物的眼部抗衰老乳液，按重量计，包括以下组分：
葛根多肽组合物8-15份、荷花提取物6-10份、保湿剂10-20份、抗氧化剂5-10份、油脂2-15份、乳化剂5-15份、防腐剂0.01-0.3份。
一种含有葛根多肽组合物的眼部抗衰老乳液，按重量计，包括以下组分：
葛根多肽组合物15份、荷花提取物10份、保湿剂20份、抗氧化剂10份、油脂15份、乳化剂15份、防腐剂0.3份。
实施例5
一种含有葛根多肽组合物的眼部抗衰老乳液，按重量计，包括以下组分：
葛根多肽组合物10份、荷花提取物8份、保湿剂15份、抗氧化剂8份、油脂13份、乳化剂10份、防腐剂0.2份。
实施例6
一种含有葛根多肽组合物的眼部抗衰老乳液，按重量计，包括以下组分：
葛根多肽组合物8份、荷花提取物6份、保湿剂10份、抗氧化剂5份、油脂2份、乳化剂5份、防腐剂0.01份。
测试例1
对实施例4-6的制备的眼部抗衰老乳液(采用公知的制备工艺)进行一些性能指标测试，其测试如下：
外观：白色流动性较好的细腻乳液；
香型：植物微香；
粘度：3000-6000mpa.s；
耐热稳定性考察(48℃x24h)：合格；
耐寒稳定性考察(-15℃x24h)：合格。
测试例2
对实施例4-6的制备的眼部抗衰老乳液的抗衰老效果进行检测：
志愿者分为三组，每组100人，年龄最小者40岁，最大者60岁，平均年龄48.6岁，适用者普遍存在鱼尾纹、抬头纹、眼角下垂、眼袋、皮肤无弹性等情况，分别试用实施例4-6制备的眼部抗衰老乳液；试用方法，将乳液涂于眼部周围，然后用手指顺时针或逆时针方向按摩一分钟，早晚各一次，连续使用1个月。
效果判定标准：
优：鱼尾纹变平消失、抬头纹变浅、眼角下垂消失，皮肤紧致、眼袋收缩、皮肤恢复弹性；
良：鱼尾纹减少、抬头纹变浅、眼角下垂改善、眼袋改善、皮肤弹性改善；
差：使用前后皮肤没变化，皮肤有过敏或其他情况出现。
测试结果：第一组，使用的实施例4的产品，100例中，效果判定优者13例，占13％；效果判定良者66例，占66％；总共有效率为79％。全部受试者无1例呈现不良反应；
第二组，使用的实施例5的产品，100例中，效果判定优者16例，占16％；效果判定良者71例，占71％；总共有效率为89％；全部受试者无1例呈现不良反应；
第三组，使用的实施例6的产品，100例中，效果判定优者14例，占14％；效果判定良者68例，占68％；总共有效率为82％；全部受试者无1例呈现不良反应。
测试例3
继续使用一个月。
测试结果：第一组，使用的实施例4的产品，100例中，效果判定优者24例，占24％；效果判定良者72例，占72％；总共有效率为96％；全部受试者无1例呈现不良反应；
第二组，使用的实施例5的产品，100例中，效果判定优者35例，占35％；效果判定良者64例，占64％；总共有效率为99％；全部受试者无1例呈现不良反应；
第三组，使用的实施例6的产品，100例中，效果判定优者58例，占26％；效果判定良者71例，占70％；总共有效率为97％；全部受试者无1例呈现不良反应。
测试说明，含有葛根多肽组合物的眼部抗衰老乳液有较好的改善眼部皮肤的效果，坚持使用一段时间，鱼尾纹、抬头纹、眼角下垂、眼袋收缩、皮肤无弹性等情况均有改善。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
最后需要说明的是，以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。