本发明涉及医药生物技术领域，具体地，本发明涉及一种地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊及其制备方法。
背景技术：
地衣芽孢杆菌为活性成分的微生态活菌制剂，地衣芽孢杆菌口服以后以活菌形成进入肠道内，在生长代谢中能产生多种抗菌活性物质，如短杆菌肽、枯草杆菌素、制霉菌素和头孢菌素c等，故对葡萄球菌及酵母样菌均有明显、拮抗作用。地衣芽孢杆菌为需氧兼厌氧菌，在有氧、微氧和无氧条件下都能迅速生长繁殖，同时消耗生态环境中的游离氧，具有生态夺氧作用，造成低氧环境，促进肠道有益生理性菌群如双歧杆菌、乳酸杆菌、拟杆菌及消化链球菌等生长，抑制大部分倡导需氧致病菌生长繁殖、恢复肠道生态平衡，使腹泻等症状缓解或消失。
但是微生态活菌制剂不耐酸，在胃酸环境下不能存活。且目前市售的肠溶剂型活菌制剂，尤其是市售的肠溶胶囊制剂，容易胃液容易渗入，胶囊在胃酸中易鼓包、胶囊缝翘起和褪色，都会导致肠溶胶囊活菌在胃中失活、在肠道中崩解不完全，进而导致耐酸能力不佳、得不到稳定的产品质量。
技术实现要素：
本发明所解决的技术问题在于解决地衣芽孢杆菌肠溶胶囊的耐酸力，使地衣芽孢杆菌肠溶胶囊溶出限定，不会在胃中突释，避免活菌在胃中失活，进而将含地衣芽孢杆菌为活性成分的肠溶胶囊送达到作用部位，以提高活菌的存活率和作用率。
本发明第一方面提供一种地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊，所述地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊在人工胃液中处理2-4h，地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊中的活菌存活率96.0％以上；优选地，地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊中的活菌存活率97.0％以上；更优选地，地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊中的活菌存活率99.0％以上。
在一种实施方式中，所述地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊为对地衣芽孢杆菌活菌胶囊采用肠溶全包衣。
在一种实施方式中，所述地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊，其制备原料包括地衣芽孢杆菌活菌胶囊和包衣辅料，所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备原料至少包括地衣芽孢杆菌活菌菌粉、填充剂、润湿剂、溶剂中的一种或多种。
在一种实施方式中，所述地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊中包衣辅料至少包括薄膜包衣预混剂、乙醇水溶液、纯化水中的一种或多种。
在一种实施方式中，所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊与所述包衣辅料中薄膜包衣预混剂的重量比为1：(0.2-0.8)；优选地，所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊与所述包衣辅料中薄膜包衣预混剂的重量比为1：(0.3-0.5)；更优选地，所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊与所述包衣辅料中薄膜包衣预混剂的重量比为1：0.45。
在一种实施方式中，所述包衣辅料为薄膜包衣预混剂、乙醇水溶液、纯化水。
在一种实施方式中，所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊与所述乙醇水溶液、所述纯化水的重量比为1：(1-10)：(0.1-2)；优选地，所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊与所述乙醇水溶液、所述纯化水的重量比为1：(2-5)：(0.2-0.7)；更优选地，所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊与所述乙醇水溶液、所述纯化水的重量比为1：3.8：0.5。
在一种实施方式中，所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊中所述填充剂包括乳糖、淀粉、微晶纤维素、甘露醇中的一种或多种；所述润湿剂包括药用乙醇、水中的一种或多种；所述溶剂为纯化水；
优选地，所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊中所述填充剂为乳糖、淀粉。
本发明中所述药用乙醇为乙醇水溶液，所述乙醇水溶液的体积分数为50-100％，优选地，所述药用乙醇为体积分数为95％的乙醇水溶液。
在一种实施方式中，所述乳糖与所述淀粉的重量比为1：(1-7)；优选地，所述乳糖与所述淀粉的重量比为1：(2-5)；更优选地，所述乳糖与所述淀粉的重量比为1：2.7。
在一种实施方式中，按重量份计算，所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备原料至少包括地衣芽孢杆菌活菌菌粉1-3份、填充剂10-30份、润湿剂0.1-10份、溶剂1-10份；优选地，所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备原料至少包括地衣芽孢杆菌活菌菌粉1份、填充剂22份、润湿剂5份、溶剂3.6份。
在一种实施方式中，所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备方法包括以下步骤：
按重量份将填充剂、粉碎过80目筛后，加入润湿剂、溶剂，混合均匀后，干燥，加入地衣芽孢杆菌活菌粉，再进行混合均匀，装入胶囊，得到所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊。
本发明中，所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备方法中胶囊为明胶空心胶囊。
本发明中，所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊每粒0.25g，含有2.5亿活菌。所述地衣芽孢杆菌为保藏号cgmccno：0183的地衣芽孢杆菌63516株。
在一种实施方式中，所述薄膜包衣预混剂至少包括
本发明中所述
本发明另一方面提供一种地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊的制备方法，至少包括以下步骤：
1)制备地衣芽孢杆菌活菌胶囊；
2)将薄膜包衣预混剂分散于乙醇水溶液、纯化水中，得到包衣液；
3)包衣：用步骤2)配制的包衣液对地衣芽孢杆菌活菌胶囊置于不锈钢包衣锅中，进行底喷包衣，干燥，得到所述地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊。
在一种实施方式中，所述步骤2)中包衣液的固含量为5-20％，所述乙醇水溶液的体积分数为70-95％；优选地，所述步骤2)中包衣液的固含量为8-15％，所述乙醇水溶液的体积分数为80-90％；更优选地，所述步骤2)中包衣液的固含量为10％，所述乙醇水溶液的体积分数为85％。
在一种实施方式中，所述步骤3)中包衣液温度为10-80℃，喷速为10-150ml/min；优选地，所述步骤3)中包衣液温度为15-65℃，喷速为10-100ml/min；更优选地，所述步骤3)中包衣液温度为20-50℃，喷速为10-70ml/min。
本发明中，喷速是动态的，考察的是最高速度对地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊包衣的影响。
在一种实施方式中，所述步骤3)中包衣液喷射时间为5-12h，优选地，所述步骤3)中包衣液喷射时间为7-9h。
在一种实施方式中，所述步骤3)中得到的地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊包衣增重15-50％；优选地，所述步骤3)中得到的地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊包衣增重30-45％；更优选地，所述步骤3)中得到的地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊包衣增重31-33％。
本发明中，所述地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊每粒0.25g，含有2.5亿活菌。
本发明的积极进步效果在于：本发明提供的地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊能够溶出限定，不会在胃中突释，避免活菌在胃中失活，进而将含地衣芽孢杆菌为活性成分的肠溶胶囊送达到作用部位，以提高活菌的存活率和作用率。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
本发明中，实施例和对比例中所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊每粒0.25g，含有2.5亿活菌；所述地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊每粒0.25g，含有2.5亿活菌；所述活菌粉中0.25g，含有2.5亿活菌。
实施例1
所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备方法包括以下步骤：
一种地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊的制备方法，至少包括以下步骤：
1)制备地衣芽孢杆菌活菌胶囊：将填充剂乳糖5.9kg、淀粉16.1kg，粉碎过80目筛后，加入95％的乙醇水溶液5kg、纯化水3.6kg，混合均匀后，干燥，加入地衣芽孢杆菌活菌粉1kg，再进行混合均匀，装入胶囊，得到所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊；所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备方法中胶囊为明胶空心胶囊；
2)将薄膜包衣预混剂3.14kg分散于乙醇水溶液25.36kg、2.98kg纯化水中，得到包衣液；所述薄膜包衣预混剂为
3)包衣：用步骤2)配制的包衣液对置于不锈钢包衣锅中的地衣芽孢杆菌活菌胶囊7.0kg，进行底喷包衣，干燥，得到所述地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊；
所述步骤2)中包衣液的固含量为10％，所述乙醇水溶液的体积分数为85％；所述步骤3)中包衣液温度为40℃，喷速为10-70ml/min；所述步骤3)中包衣液喷射时间为8h；所述步骤3)中得到的地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊包衣增重32％。
实施例2
一种地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊的制备方法，至少包括以下步骤：
1)制备地衣芽孢杆菌活菌胶囊：将填充剂乳糖5.9kg、淀粉16.1kg，粉碎过80目筛后，加入95％的乙醇水溶液5kg、纯化水3.6kg，混合均匀后，干燥，加入地衣芽孢杆菌活菌粉1kg，再进行混合均匀，装入胶囊，得到所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊；所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备方法中胶囊为明胶空心胶囊；
2)将薄膜包衣预混剂3.14kg分散于乙醇水溶液25.36kg、2.98kg纯化水中，得到包衣液；所述薄膜包衣预混剂为
3)包衣：用步骤2)配制的包衣液对置于不锈钢包衣锅中的地衣芽孢杆菌活菌胶囊7.0kg，进行底喷包衣，干燥，得到所述地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊；
所述步骤2)中包衣液的固含量为10％，所述乙醇水溶液的体积分数为85％；所述步骤3)中包衣液温度为40℃，喷速为10-70ml/min；所述步骤3)中包衣液喷射时间为5h；所述步骤3)中得到的地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊包衣增重25％。
实施例3
一种地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊的制备方法，至少包括以下步骤：
1)制备地衣芽孢杆菌活菌胶囊：将填充剂乳糖5.9kg、淀粉16.1kg，粉碎过80目筛后，加入95％的乙醇水溶液5kg、纯化水3.6kg，混合均匀后，干燥，加入地衣芽孢杆菌活菌粉1kg，再进行混合均匀，装入胶囊，得到所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊；所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备方法中胶囊为明胶空心胶囊；
2)将薄膜包衣预混剂3.14kg分散于乙醇水溶液25.36kg、2.98kg纯化水中，得到包衣液；所述薄膜包衣预混剂为
3)包衣：用步骤2)配制的包衣液对置于不锈钢包衣锅中的地衣芽孢杆菌活菌胶囊7.0kg，进行底喷包衣，干燥，得到所述地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊；
所述步骤2)中包衣液的固含量为10％，所述乙醇水溶液的体积分数为85％；所述步骤3)中包衣液温度为40℃，喷速为10-70ml/min；所述步骤3)中包衣液喷射时间为12h；所述步骤3)中得到的地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊包衣增重45％。
实施例4
一种地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊的制备方法，至少包括以下步骤：
1)制备地衣芽孢杆菌活菌胶囊：将填充剂乳糖5.9kg、淀粉16.1kg，粉碎过80目筛后，加入95％的乙醇水溶液5kg、纯化水3.6kg，混合均匀后，干燥，加入地衣芽孢杆菌活菌粉1kg，再进行混合均匀，装入胶囊，得到所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊；所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备方法中胶囊为明胶空心胶囊；
2)将薄膜包衣预混剂3.14kg分散于乙醇水溶液25.36kg、2.98kg纯化水中，得到包衣液；所述薄膜包衣预混剂为
3)包衣：用步骤2)配制的包衣液对置于不锈钢包衣锅中的地衣芽孢杆菌活菌胶囊7.0kg，进行底喷包衣，干燥，得到所述地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊；
所述步骤2)中包衣液的固含量为10％，所述乙醇水溶液的体积分数为85％；所述步骤3)中包衣液温度为40℃，喷速为10-40ml/min；所述步骤3)中包衣液喷射时间为8h；所述步骤3)中得到的地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊包衣增重21.8％。
实施例5
一种地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊的制备方法，至少包括以下步骤：
1)制备地衣芽孢杆菌活菌胶囊：将填充剂乳糖5.9kg、淀粉16.1kg，粉碎过80目筛后，加入95％的乙醇水溶液5kg、纯化水3.6kg，混合均匀后，干燥，加入地衣芽孢杆菌活菌粉1kg，再进行混合均匀，装入胶囊，得到所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊；所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备方法中胶囊为明胶空心胶囊；
2)将薄膜包衣预混剂3.14kg分散于乙醇水溶液25.36kg、2.98kg纯化水中，得到包衣液；所述薄膜包衣预混剂为
3)包衣：用步骤2)配制的包衣液对置于不锈钢包衣锅中的地衣芽孢杆菌活菌胶囊7.0kg，进行底喷包衣，干燥，得到所述地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊；
所述步骤2)中包衣液的固含量为10％，所述乙醇水溶液的体积分数为85％；所述步骤3)中包衣液温度为40℃，喷速为10-100ml/min；所述步骤3)中包衣液喷射时间为8h；所述步骤3)中得到的地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊包衣增重33.1％。
实施例6
一种地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊的制备方法，至少包括以下步骤：
1)制备地衣芽孢杆菌活菌胶囊：将填充剂乳糖5.9kg、淀粉16.1kg，粉碎过80目筛后，加入95％的乙醇水溶液5kg、纯化水3.6kg，混合均匀后，干燥，加入地衣芽孢杆菌活菌粉1kg，再进行混合均匀，装入胶囊，得到所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊；所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备方法中胶囊为明胶空心胶囊；
2)将薄膜包衣预混剂3.14kg分散于乙醇水溶液25.36kg、2.98kg纯化水中，得到包衣液；所述薄膜包衣预混剂为
3)包衣：用步骤2)配制的包衣液对置于不锈钢包衣锅中的地衣芽孢杆菌活菌胶囊7.0kg，进行底喷包衣，干燥，得到所述地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊；
所述步骤2)中包衣液的固含量为10％，所述乙醇水溶液的体积分数为85％；所述步骤3)中包衣液温度为15℃，喷速为10-70ml/min；所述步骤3)中包衣液喷射时间为8h；所述步骤3)中得到的地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊包衣增重31.3％。
实施例7
一种地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊的制备方法，至少包括以下步骤：
1)制备地衣芽孢杆菌活菌胶囊：将填充剂乳糖5.9kg、淀粉16.1kg，粉碎过80目筛后，加入95％的乙醇水溶液5kg、纯化水3.6kg，混合均匀后，干燥，加入地衣芽孢杆菌活菌粉1kg，再进行混合均匀，装入胶囊，得到所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊；所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备方法中胶囊为明胶空心胶囊；
2)将薄膜包衣预混剂3.14kg分散于乙醇水溶液25.36kg、2.98kg纯化水中，得到包衣液；所述薄膜包衣预混剂为
3)包衣：用步骤2)配制的包衣液对置于不锈钢包衣锅中的地衣芽孢杆菌活菌胶囊7.0kg，进行底喷包衣，干燥，得到所述地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊；
所述步骤2)中包衣液的固含量为10％，所述乙醇水溶液的体积分数为85％；所述步骤3)中包衣液温度为65℃，喷速为10-70ml/min；所述步骤3)中包衣液喷射时间为8h；所述步骤3)中得到的地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊包衣增重31.5％。
实施例8
一种地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊的制备方法，至少包括以下步骤：
1)制备地衣芽孢杆菌活菌胶囊：将填充剂乳糖5.9kg、淀粉16.1kg，粉碎过80目筛后，加入95％的乙醇水溶液5kg、纯化水3.6kg，混合均匀后，干燥，加入地衣芽孢杆菌活菌粉1kg，再进行混合均匀，装入胶囊，得到所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊；所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备方法中胶囊为明胶空心胶囊；
2)第一层附着层：将薄膜包衣预混剂3.14kg分散于乙醇水溶液25.36kg、2.98kg纯化水中，得到第一包衣液；然后用配制的第一包衣液对地衣芽孢杆菌活菌胶囊置于不锈钢包衣锅中，进行底喷包衣，得到第一层包衣层的地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊；
3)第二层包衣层：将薄膜包衣预混剂3.14kg分散于乙醇水溶液25.36kg、2.98kg纯化水中，得到第二包衣液；然后用配制的第二包衣液对第一层包衣层的地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊置于不锈钢包衣锅中，进行底喷包衣，干燥，得到所述地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊；
所述步骤2)中所述薄膜包衣预混剂为
对比例1
一种地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备方法，至少包括以下步骤：
将填充剂乳糖5.9kg、淀粉16.1kg，粉碎过80目筛后，加入95％的乙醇水溶液5kg、纯化水3.6kg，混合均匀后，干燥，加入地衣芽孢杆菌活菌粉1kg，再进行混合均匀，装入胶囊，得到所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊；所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备方法中胶囊为肠溶空心胶囊。
对比例2
一种地衣芽孢杆菌活菌肠溶胶囊的制备方法，至少包括以下步骤：
将填充剂乳糖5.9kg、淀粉16.1kg，粉碎过80目筛后，加入95％的乙醇水溶液5kg、纯化水3.6kg，混合均匀后，干燥，加入地衣芽孢杆菌活菌粉1kg，再进行混合均匀，装入胶囊，得到所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊；所述地衣芽孢杆菌活菌胶囊的制备方法中胶囊为明胶空心胶囊。
对比例3
活菌粉。
1、肠瘘实验
将两组雄性sd大鼠(每组两笼，每笼5只)用地衣芽孢杆菌进行饲养，分别标记4h、12h；一组进行灌胃给予地衣芽孢杆菌(2.4*109cfu/ml，2ml)，另一组大鼠进行肠瘘手术恢复一天后经肠瘘管给予地衣芽孢杆菌(2.4*109cfu/ml,2ml)，再给地衣芽孢杆菌后4h，24h分别取粪便、十二指肠和结肠，运用荧光定量pcr检测粪便、十二指肠和结肠中地衣芽孢杆菌的数量。
空白组实验：雄性sd大鼠(每组两笼，每笼5只)不用地衣芽孢杆菌进行饲养。
经过肠瘘实验发现，与外源性给予地衣芽孢杆菌的雄性sd大鼠粪便、结肠和十二指肠中地衣芽孢杆菌的量有所增加；经肠瘘方式给予地衣芽孢杆菌，能使动物体内有更高水平的地衣芽孢杆菌。
2、耐酸力测试
无菌人工胃液：取稀盐酸(盐酸234ml，加纯化水稀释至1000ml)16.4ml，加纯化水至900ml，121℃灭菌。取胃蛋白酶10.0g，加纯化水100ml，37℃水浴溶解后过滤除菌。将100ml无菌蛋白酶溶液与上述900ml盐酸溶液混合，即得无菌人工胃液。
将实施例1至对比例2中胶囊及对比例3中活菌粉，置于150ml无菌人工胃液中，于37℃摇床中100rpm处理120min后，取样测定活菌数。活菌数测定方法如下：用无菌镊子将溶液中胶囊取出，放置于无菌纱布中擦干水分，再无菌称取胶囊内容物3.0g，加入0.9％无菌氯化钠溶液27.0ml，置于振荡器上振摇30min，充分混匀，制成1：10供试液，再取1：10供试液3ml，加稀释液7ml，制成3：100供试液，然后按10倍梯度关系稀释，稀释制成3：107供试液；取最终稀释度3：107供试液100μl加至营养琼脂平板上，采用玻璃棒涂布均匀，置于36-38℃倒置培养18-24h后进行计数，并观察胶囊的外观。
3、存活率
将实施例1至对比例2中胶囊及对比例3中活菌粉，置于人工胃液中处理4h后，比较活菌存活率。
4、释放度
将实施例1至对比例2中胶囊，置于人工肠液中进行释放情况的研究。
表1性能测试结果1
从上述数据可以看出，本发明提供的地衣芽孢杆菌肠溶胶囊具有较好的耐受性，在酸性环境中不易溶出，有利于地衣芽孢杆菌顺利经过胃环境。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。