本发明属于中药饮片技术领域，尤其是一种增强免疫力的复方超微中药饮片的制备方法。
背景技术：
免疫机能是机体防御抗病能力的主要力量，免疫系统分为非特异性免疫和特异性免疫，二者相互作用，相互补充；非特异性免疫是第一道屏障，特异性免疫是在非特异性免疫后更有针对性、更强烈的免疫反应，是清除病毒或细菌更有效的防御机制；特异性免疫包括体液免疫和细胞免疫，二者相互配合共同发挥免疫效应；病毒感染过程中，通常是先通过体液免疫来阻止病毒在机体内传播，若病毒已经侵染到寄主细胞中，就要通过细胞免疫来清除；许多传染病都是在机体免疫力较弱的情况下感染发病，引起免疫抑制，使疾病更加严重；因此，恢复和提高机体各种免疫功能是保证其防御抗病能力的关键。
中药饮片指的是中药根据需要，经过炮制处理而形成的供配方用的中药，或可直接用于中医临床的中药，传统中药饮片以常规方式炮制，药材有效成分流失或无法充分释放出来，细胞的破壁率极低，其生物利用率较低，药材资源浪费；由于其溶出率低，因此必须要足量，而且坚持较长时间持续服用才会有效，但是这种情况会造成用药成本高；而且现有技术中也不存在能够直接用于增强免疫能力的中药饮片，使其中药饮片使用范围狭窄、不能直接得到充分利用且利用率差、利用效果不明显；因此，本发明提供一种增强免疫力的复方超微中药饮片。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明旨在提供一种增强免疫力的复方超微中药饮片的制备方法。
本发明通过以下技术方案实现：
一种增强免疫力的复方超微中药饮片的制备方法，具体包括以下步骤：
（1）金银花超微粉的制备
a.将新鲜金银花置入温度为-20~-15℃的条件下恒温冷冻处理40~50min，取出，置入温度为72~80℃的条件下恒温蒸汽处理22~26min，取出，粉碎打浆，进行发酵处理，得发酵金银花浆；
b.将发酵金银花浆进行冷冻干燥处理，在压力为12~14mpa、温度为31~35℃、气流速度为110~120m/s的条件下粉碎处理22~28min，在压力为20~22mpa、温度为26~28℃、气流速度为320~340m/s的条件下粉碎处理18~22min，得金银花超微粉；
（2）辅料浆的制备
将6.7~7.5重量份的新鲜橙皮、3.4~3.8重量份的新鲜紫薯皮、5.8~6.2重量份的新鲜蒲公英叶片和10.1~10.9重量份的新鲜火龙果皮混合粉碎，置入温度为67~69℃的条件下恒温蒸汽处理14~16min、以2.4~2.8℃/min的升温速率升温至93~97℃继续恒温蒸汽处理10~12min，取出，进行超声处理，置入温度为1~2℃的条件下恒温冷藏处理20~24h，得辅料浆；
（3）将金银花超微粉和辅料浆混合，进行高压均质处理，在压力为8~10mpa、温度为21~23℃、气流速度为260~280m/s的条件下粉碎处理18~22min，制片，真空干燥，得增强免疫力的复方超微中药饮片。
作为发明进一步的方案：步骤a所述的发酵处理，在温度为37~39℃的条件下恒温密闭发酵48~58h，在温度为25~27℃的条件下恒温密闭发酵100~110h，在温度为32~34℃的条件下恒温密闭发酵48~58h，在温度为27~29℃的条件下恒温密闭发酵32~38h。
作为发明进一步的方案：步骤b所述的冷冻干燥处理，在温度为-29~-27℃的条件下恒温冷冻干燥处理8~10min，以0.7~0.9℃/min的升温速率升温至-11~-9℃继续恒温冷冻干燥处理14~16min，以1.3~1.5℃/min的降温速率降温至-38~-36℃继续恒温冷冻干燥处理14~16min。
作为发明进一步的方案：步骤（2）所述的超声处理，在温度为34~36℃、功率为200~210w的条件下超声处理6~7min，暂停3~4min，在在温度为49~51℃、功率为330~340w的条件下超声处理6~7min，上述为一个循环处理，共循环处理3次。
作为发明进一步的方案：步骤（3）所述的金银花超微粉和辅料浆的重量比为1:2.2~2.6。
作为发明进一步的方案：步骤（3）所述的高压均质处理，在压力为22~24mpa、温度为28~30℃的条件下高压均质处理16~18min，在压力为40~42mpa、温度为37~39℃的条件下高压均质处理22~24min，上述为一个循环处理，共循环处理2次。
作为发明进一步的方案：步骤（3）所述的真空干燥，在温度为71~75℃、压力为0.4~0.5mpa的条件下真空干燥至含水率为43%~49%，在温度为86~92℃、压力为-0.3~-0.2mpa的条件下真空干燥至含水率为5%~9%。
本发明的有益效果：本发明提供的一种增强免疫力的复方超微中药饮片的制备方法，将金银花经冷冻、蒸汽处理后发酵，提高了机体发酵的化学反应速度，增加金银花营养成分的生物利用，利于机体对营养成分的吸收，然后冷冻干燥后超微粉碎，将有效成分保护起来避免粉碎过程中有效成分的流失，使得粒径细且分布均匀，提高金银花有效成分的利用率，更有利于人体的健康吸收；将辅料浆和金银花超微粉混合进行高压均质处理后超微粉碎、真空干燥，安全性好，无毒副作用，配方科学合理，经超微粉碎后细胞破壁，胞内有效成分的溶出阻力减小，溶出速率增大，可最大限度地保留生物活性物质和营养成分，使得有效成分在没进入机体前就暴露出来，进入体内后可溶性成分迅速溶解，即使溶解度低的成分也因超微粉具有较强的附着力而紧紧粘附在胃肠内壁的黏膜上，使在胃肠道停留时间延长，吸收更充分，吸收量也会增加，粒度更加细微均匀，比表面积增加，孔隙率增大，由于药物细胞壁大部分在粉碎时被破坏，有效成分则不需通过细胞壁和细胞膜的释放过程，药物能更好地分散、溶解在胃肠液里，且与胃肠黏膜的接触面积增大，更易被胃肠道吸收，增加药物吸收率，从而提高其生物利用度，全面恢复和增强机体的免疫功能，具有明显的免疫增强功效，可增加机体胸腺、脾脏和淋巴结等免疫器官的重量，促进巨噬细胞、t淋巴细胞、b淋巴细胞、骨髓干细胞和nk细胞增殖和增强其活性，还可通过改善微循环、抗应激、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤作用，拮抗感染和创伤引起的免疫细胞减少和保护脾脏、肝脏等器官损伤等多种药理功效，能够有效提高药效，使其具有抗菌抑菌、抗老防衰、抗癌防癌、保护肠胃、抗氧化、调节中枢神经、抗炎、调节解毒酶、促进血液循环等功效。
具体实施方式
下面用具体实施例说明本发明，但并不是对本发明的限制。
实施例1
本发明实施例中，一种增强免疫力的复方超微中药饮片的制备方法，具体包括以下步骤：
（1）金银花超微粉的制备
a.将新鲜金银花置入温度为-20℃的条件下恒温冷冻处理40min，取出，置入温度为72℃的条件下恒温蒸汽处理22min，取出，粉碎打浆，进行发酵处理，得发酵金银花浆；
b.将发酵金银花浆进行冷冻干燥处理，在压力为12mpa、温度为31℃、气流速度为110m/s的条件下粉碎处理22min，在压力为20mpa、温度为26℃、气流速度为32m/s的条件下粉碎处理18min，得金银花超微粉；
（2）辅料浆的制备
将6.7重量份的新鲜橙皮、3.4重量份的新鲜紫薯皮、5.8重量份的新鲜蒲公英叶片和10.1重量份的新鲜火龙果皮混合粉碎，置入温度为67℃的条件下恒温蒸汽处理14min、以2.4℃/min的升温速率升温至93~97℃继续恒温蒸汽处理10min，取出，进行超声处理，置入温度为1℃的条件下恒温冷藏处理20h，得辅料浆；
（3）将金银花超微粉和辅料浆混合，进行高压均质处理，在压力为8mpa、温度为21℃、气流速度为260m/s的条件下粉碎处理18min，制片，真空干燥，得增强免疫力的复方超微中药饮片。
作为发明进一步的方案：步骤a所述的发酵处理，在温度为37℃的条件下恒温密闭发酵48h，在温度为25℃的条件下恒温密闭发酵100h，在温度为32℃的条件下恒温密闭发酵48h，在温度为27℃的条件下恒温密闭发酵32h。
作为发明进一步的方案：步骤b所述的冷冻干燥处理，在温度为-29℃的条件下恒温冷冻干燥处理8min，以0.7℃/min的升温速率升温至-11℃继续恒温冷冻干燥处理14min，以1.3℃/min的降温速率降温至-38℃继续恒温冷冻干燥处理14min。
作为发明进一步的方案：步骤（2）所述的超声处理，在温度为34℃、功率为200w的条件下超声处理6min，暂停3min，在在温度为49℃、功率为330w的条件下超声处理6min，上述为一个循环处理，共循环处理3次。
作为发明进一步的方案：步骤（3）所述的金银花超微粉和辅料浆的重量比为1:2.2。
作为发明进一步的方案：步骤（3）所述的高压均质处理，在压力为22mpa、温度为28℃的条件下高压均质处理16min，在压力为40mpa、温度为37℃的条件下高压均质处理22min，上述为一个循环处理，共循环处理2次。
作为发明进一步的方案：步骤（3）所述的真空干燥，在温度为71℃、压力为0.4~mpa的条件下真空干燥至含水率为43%~49%，在温度为86℃、压力为-0.3mpa的条件下真空干燥至含水率为5%~9%。
实施例2
本发明实施例中，一种增强免疫力的复方超微中药饮片的制备方法，具体包括以下步骤：
（1）金银花超微粉的制备
a.将新鲜金银花置入温度为-17.5℃的条件下恒温冷冻处理45min，取出，置入温度为76℃的条件下恒温蒸汽处理24min，取出，粉碎打浆，进行发酵处理，得发酵金银花浆；
b.将发酵金银花浆进行冷冻干燥处理，在压力为13mpa、温度为33℃、气流速度为115m/s的条件下粉碎处理25min，在压力为21mpa、温度为27℃、气流速度为330m/s的条件下粉碎处理20min，得金银花超微粉；
（2）辅料浆的制备
将7.1重量份的新鲜橙皮、3.6重量份的新鲜紫薯皮、6重量份的新鲜蒲公英叶片和10.5重量份的新鲜火龙果皮混合粉碎，置入温度为68℃的条件下恒温蒸汽处理15min、以2.6℃/min的升温速率升温至95℃继续恒温蒸汽处理11min，取出，进行超声处理，置入温度为1.5℃的条件下恒温冷藏处理22h，得辅料浆；
（3）将金银花超微粉和辅料浆混合，进行高压均质处理，在压力为9mpa、温度为22℃、气流速度为270m/s的条件下粉碎处理20min，制片，真空干燥，得增强免疫力的复方超微中药饮片。
作为发明进一步的方案：步骤a所述的发酵处理，在温度为38℃的条件下恒温密闭发酵53h，在温度为26℃的条件下恒温密闭发酵105h，在温度为33℃的条件下恒温密闭发酵53h，在温度为28℃的条件下恒温密闭发酵35h。
作为发明进一步的方案：步骤b所述的冷冻干燥处理，在温度为-28℃的条件下恒温冷冻干燥处理9min，以0.8℃/min的升温速率升温至-10℃继续恒温冷冻干燥处理15min，以1.4℃/min的降温速率降温至-37℃继续恒温冷冻干燥处理15min。
作为发明进一步的方案：步骤（2）所述的超声处理，在温度为35℃、功率为205w的条件下超声处理6.5min，暂停3.5min，在在温度为50℃、功率为335w的条件下超声处理6.5min，上述为一个循环处理，共循环处理3次。
作为发明进一步的方案：步骤（3）所述的金银花超微粉和辅料浆的重量比为1:2.4。
作为发明进一步的方案：步骤（3）所述的高压均质处理，在压力为23mpa、温度为29℃的条件下高压均质处理17min，在压力为41mpa、温度为38℃的条件下高压均质处理23min，上述为一个循环处理，共循环处理2次。
作为发明进一步的方案：步骤（3）所述的真空干燥，在温度为73℃、压力为0.45mpa的条件下真空干燥至含水率为43%~49%，在温度为89℃、压力为-0.25mpa的条件下真空干燥至含水率为5%~9%。
实施例3
本发明实施例中，一种增强免疫力的复方超微中药饮片的制备方法，具体包括以下步骤：
（1）金银花超微粉的制备
a.将新鲜金银花置入温度为-15℃的条件下恒温冷冻处理50min，取出，置入温度为80℃的条件下恒温蒸汽处理22~26min，取出，粉碎打浆，进行发酵处理，得发酵金银花浆；
b.将发酵金银花浆进行冷冻干燥处理，在压力为14mpa、温度为35℃、气流速度为120m/s的条件下粉碎处理28min，在压力为22mpa、温度为28℃、气流速度为340m/s的条件下粉碎处理22min，得金银花超微粉；
（2）辅料浆的制备
将7.5重量份的新鲜橙皮、3.8重量份的新鲜紫薯皮、6.2重量份的新鲜蒲公英叶片和10.9重量份的新鲜火龙果皮混合粉碎，置入温度为69℃的条件下恒温蒸汽处理16min、以2.8℃/min的升温速率升温至97℃继续恒温蒸汽处理12min，取出，进行超声处理，置入温度为2℃的条件下恒温冷藏处理24h，得辅料浆；
（3）将金银花超微粉和辅料浆混合，进行高压均质处理，在压力为10mpa、温度为23℃、气流速度为280m/s的条件下粉碎处理22min，制片，真空干燥，得增强免疫力的复方超微中药饮片。
作为发明进一步的方案：步骤a所述的发酵处理，在温度为39℃的条件下恒温密闭发酵58h，在温度为27℃的条件下恒温密闭发酵110h，在温度为34℃的条件下恒温密闭发酵58h，在温度为29℃的条件下恒温密闭发酵38h。
作为发明进一步的方案：步骤b所述的冷冻干燥处理，在温度为-27℃的条件下恒温冷冻干燥处理10min，以0.9℃/min的升温速率升温至-9℃继续恒温冷冻干燥处理14~16min，以1.5℃/min的降温速率降温至-36℃继续恒温冷冻干燥处理16min。
作为发明进一步的方案：步骤（2）所述的超声处理，在温度为36℃、功率为210w的条件下超声处理7min，暂停4min，在在温度为51℃、功率为340w的条件下超声处理7min，上述为一个循环处理，共循环处理3次。
作为发明进一步的方案：步骤（3）所述的金银花超微粉和辅料浆的重量比为1:2.6。
作为发明进一步的方案：步骤（3）所述的高压均质处理，在压力为24mpa、温度为30℃的条件下高压均质处理18min，在压力为42mpa、温度为39℃的条件下高压均质处理24min，上述为一个循环处理，共循环处理2次。
作为发明进一步的方案：步骤（3）所述的真空干燥，在温度为75℃、压力为0.5mpa的条件下真空干燥至含水率为43%~49%，在温度为92℃、压力为-0.2mpa的条件下真空干燥至含水率为5%~9%。
对比例1
一种增强免疫力的复方超微中药饮片的制备方法，与实施例1的区别在于，步骤（1）不进行所述的发酵处理，其他条件均相同。
对比例2
一种增强免疫力的复方超微中药饮片的制备方法，与实施例1的区别在于，步骤（1）不进行所述的粉碎处理，其他条件均相同。
对比例3
一种增强免疫力的复方超微中药饮片的制备方法，与实施例1的区别在于，步骤（2）不进行所述的超声处理，其他条件均相同。
对比例4
一种增强免疫力的复方超微中药饮片的制备方法，与实施例1的区别在于，步骤（2）制备过程中不加入新鲜紫薯皮和新鲜火龙果皮，其他条件均相同。
对比例5
一种增强免疫力的复方超微中药饮片的制备方法，与实施例1的区别在于，步骤（2）制备过程中不加入新鲜橙皮和新鲜蒲公英叶片，其他条件均相同。
对比例6
一种增强免疫力的复方超微中药饮片的制备方法，与实施例1的区别在于，步骤（3）不进行所述的高压均质处理，其他条件均相同。
实验1
急性毒性实验
实验材料：昆明种小鼠，体重20±2g，雌雄各半；本发明实施例制得的增强免疫力的复方超微中药饮片，用蒸馏水配成所需的供试药液；
实验条件：温度20~22℃，湿度为50%~60%；
实验方法：动物分组：每个实施例设两个剂量组，每组8只小鼠，雌雄各半；剂量和给予方式：实验设5000、15000mg/kg两个剂量组，采用经口灌胃方式给药,每天灌胃2次,连续观察20天；实验结果如表1：
表1小鼠急性毒性实验结果
由表1可知，观察期内未见实验小鼠出现中毒症状和死亡情况，本发明制得的增强免疫力的复方超微中药饮片对小鼠的ld50值大于15000mg/kg，根据急性毒性分级标准，其急性毒性属于实际无毒类。
实验2
增强免疫力实验
实验材料：昆明种小鼠，体重20±2g,雌雄各半；实施例和对比例制得的增强免疫力的复方超微中药饮片；
实验方法：按《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)进行；每日连续灌胃受试物20天,到期测定小鼠脏器/体重比值、cona诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验(mtt)法、绵羊红细胞(srbc)诱导小鼠dth试验、小鼠血清溶血素测定(血凝法)、抗体生成细胞检测(jerne改良玻片法)、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(半体内法)、小鼠碳廓清试验及nk细胞活性测定(ldh测定法)；实验结果分别如表2、表3、表4和表5（剂量均为80mg/kg）：
表2实施例和对比例对小鼠脏器/体重比值的影响
从表2可以看出，本发明制得的增强免疫力的复方超微中药饮片能显著提高胸腺/体重比值和脾脏/体重比值。
表3实施例和对比例对细胞免疫功能的影响
从表3可以看出，本发明制得的增强免疫力的复方超微中药饮片能显著提高cona诱导的小鼠脾淋巴细胞的增殖能力和小鼠左后足跖部厚度差值。
表4实施例和对比例对体液免疫功能及nk细胞活性的影响
从表4可以看出，本发明制得的增强免疫力的复方超微中药饮片能显著提高小鼠血清溶血素抗体积数值、小鼠溶血空斑数和nk细胞活性。
表5实施例和对比例对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响
从表5可以看出，本发明的制得的增强免疫力的复方超微中药饮片能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数及小鼠吞噬碳末的吞噬指数。
综上，本发明制得的增强免疫力的复方超微中药饮片能显著提高小鼠细胞免疫、体液免疫功能和nk细胞杀伤能力。