改善人类皮肤健康的组合物及其在制备产品中的用途的制作方法

相关申请本申请要求于2014年5月12日提交的美国临时申请号61/992,055的优先权和权益，其内容通过引用整体并入本文。发明领域本发明涉及含有益生元、益生菌和postbiotic物质的混合物的组合物及其在促进人类健康和营养方面的用途。
背景技术：
：益生元、益生菌和postbiotic是相对新的术语，用于描述已经证明对人类健康有益的一系列物质。通常，术语益生元是指刺激消化系统中细菌的生长和/或活性的物质，导致有益的健康效果。益生元可以是选择性发酵或非发酵成分，其允许胃肠道微生物群落的组成和/或活性的特定变化，其赋予宿主健康益处。益生菌通常是指有助于肠微生物平衡的微生物，其继而在维持健康中起作用。许多种类的乳酸菌(lab)，例如乳杆菌和双歧杆菌通常被认为是益生菌，但是一些芽孢杆菌属物种和一些酵母也被发现是合适的候选物。postbiotic指来自在宿主中具有生物活性的益生菌生物体的非活的细菌产物或代谢副产物。益生菌用于改善人类和/或动物健康的用途在文献中有详细记载。此外，益生元和postbiotic为活微生物及其代谢物的使用提供潜在的替代或辅助疗法。这些物质有益地影响人类/动物健康的机制通常分为两种一般类别中的一种。第一，调节免疫应答，和第二，通过抗微生物化合物的产生或通过对粘膜结合位点的竞争来拮抗病原体。这导致病原体生长或上皮结合的抑制，并且因此减少病原菌的侵入，并且改善营养物的生物利用度和吸收，并且作为对人类健康的营养干预起作用。越来越多地认识到益生元、益生菌和postbiotic对调节免疫应答的影响，更具体地它们在调节调控炎症反应的细胞因子的表达中的作用，其可以在局部和系统水平测量。益生菌的摄入，例如，可以通过减少局部促炎细胞因子的产生潜在地稳定肠粘膜中的免疫屏障。通过益生菌治疗改变固有微生物群落的性质已经显示逆转急性综合征中的一些免疫学紊乱，例如失调(dysbiosis)，其是消化系统的最常见的病症之一，并且减轻克罗恩病、食物过敏和特应性湿疹特有的一些慢性状况。几种益生菌物种或它们的postbiotic产物在健康患者、炎性肠病患者和小鼠模型的粘膜中诱导保护性细胞因子，包括il-10和tgf-β，并抑制促炎细胞因子，例如tnf。虽然对于这些主张中的每一个存在暗示性证据，但是这些机制背后的分子细节几乎完全仍未确定。益生菌应用中的主要临床兴趣在于预防和治疗感染性疾病，包括细菌和病毒相关性腹泻。益生菌用于控制慢性炎性疾病例如囊炎和溃疡性结肠炎的用途也已受到相当大的关注。此外，益生元、益生菌和postbiotic的消耗与改善各种各样的健康状况，包括高胆固醇、类风湿性关节炎和乳糖不耐症有关。尽管关于各种“biotic”疗法的益处的文献越来越多，但是组合的益生元、益生菌和postbiotic疗法的有益效果未得到充分记载。仍然需要组合这些疗法的治疗组合物以提供一系列健康益处。发明概述在一个方面，本发明提供了含有益生元、包含由固体基质和深层液体发酵产生的乳杆菌和/或双歧杆菌微生物的混合物的益生菌和源自乳杆菌和/或双歧杆菌微生物的液体发酵培养基的postbiotic的混合物的组合物，以下称为微生物复合物tm(microbioticcompositestm)。益生元例如是菊糖、低聚果糖和低聚葡萄糖。乳杆菌微生物包括例如乳酸片球菌(pediococcusacidilactici)、戊糖片球菌(pediococcuspentosaceus)、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)。双歧杆菌是例如动物双歧杆菌。在一些实施方案中，乳杆菌微生物的混合物通过组合以下而制备：乳酸片球菌、戊糖片球菌和植物乳杆菌的固体基质发酵；以及通过深层液体发酵产生的包括乳酸片球菌、戊糖片球菌和植物乳杆菌的细菌的混合物。将混合物中的每种细菌各自厌氧发酵，收获，干燥并研磨以产生平均粒度为295微米的粉末，其中60％的混合物的尺寸范围在175-900微米之间。在一些方面，来自固体基质和液体发酵的乳杆菌以相等重量比混合。postbiotic例如如下制备：收集来自乳酸片球菌、戊酸片球菌、植物乳杆菌和任选的动物双歧杆菌的各自厌氧发酵的离心的上清液；将上清液混合在一起；冷冻干燥混合的上清液至水分含量小于约5重量％；将步骤(c)的干燥的上清液研磨至平均粒度为295微米，其中60％的混合物的尺寸范围为175-900微米。在各种实施方案中，益生元、益生菌和postbiotic组分的微生物复合物tm以相等重量比和/或三种组分的优选混合比组合。本发明还包括含有根据本发明的组合物，以及维生素、矿物质、糖、植物或真菌组分的微生物复合物tm。维生素例如是维生素a，维生素b1，b2，b3，b5，b6，b7，b9，b12，维生素c，维生素d，维生素e或维生素k。矿物质是例如碳酸钙，乳酸钙，氯化钙，磷酸氢二钙，氯化钠，一水合柠檬酸钾，硫酸钾，磷酸二氢钾，氧化镁，碳酸锰，葡萄糖酸锰，柠檬酸铁，碳酸锌，葡萄糖酸锌，碳酸铜，碘酸钾，五水合亚硒酸钠，十二水合硫酸铬钾，四水合仲钼酸铵，九水合偏硅酸钠，氯化锂，硼酸，氟化钠，碳酸氢氧化镍四水合物，或偏钒酸铵。糖是例如葡萄糖，蔗糖，果糖，菊糖，海藻糖或葡糖酸的盐。植物组分是例如红景天(rhodiolarosea)提取物，巴巴多斯芦荟(aloebarbedensis)，丝兰(yuccaschidigera)，真芦荟(aloevera)，乳香(boswellia)提取物，儿茶(acaciacatechu)，黄芩(scutellariabaicalensis)，辣木(moringa)或姜黄(turmeric)。真菌组分是例如gandodermalucidium，lentinusedodes，hericiumerinaceous，agaricusblazei，cordycepssinensis，grifolafrondosa，coriolusveriscolor，coprinuscomatus或grifolafrondosa。在另一方面，本发明提供了通过向受试者给予根据本发明的组合物来改善人类健康的方法。优选地，组合物通过片剂、胶囊、粉末或颗粒口服给予。各片剂、胶囊、粉末或颗粒含有约5-800毫克。任选地，将本发明的组合物配制成护肤霜、洗剂、液体、分散体、凝胶或软膏，以局部给予。另外，将组合物配制成液体、霜剂、洗剂、分散体、凝胶或软膏。在一些方面，组合物以0.1-10重量％，优选1-5重量％存在。本发明还包括通过口服给予本发明的组合物来治疗失调、便秘和慢性腹泻的方法。本发明还包括通过口服给予本发明的组合物降低与代谢综合征x相关的同病的方法。另外，本发明提供了治疗红斑痤疮、痤疮、湿疹、皮炎或银屑病的方法，包括通过霜剂、洗剂、凝胶、软膏和/或喷雾剂局部给予本发明的组合物。在另一方面，本发明提供了用于改善伤口愈合的方法，包括向伤口给予本发明的组合物。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。虽然与本文所述的方法和材料相似或等同的方法和材料可用于本发明的实践中，但下文描述了合适的方法和材料。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献通过引用明确地整体并入。在冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。此外，本文所述的材料、方法和实施例仅是说明性的，而并非旨在限制性的。从下面的详细描述和权利要求中，本发明的其它特征和优点将是显而易见的并且包括在其中。附图简述图1：受试者在摄入微生物复合物实施例2e12周后的体重变化。图2：受试者在摄入微生物复合物实施例2e12周后重量特征的变化。图3：受试者在摄入微生物复合物实施例2e12周后的身体质量指数特征。图4：在摄入微生物复合物实施例2e12周后的复合血糖(fbs)、胆固醇(ldl、vldl、hdl)和甘油三酯水平。图5：在摄入微生物复合物实施例2e12周后的复合肝酶(alt和ggt)水平。图6：受试者在摄入微生物复合物实施例2e12周后的丙氨酸转氨酶水平。图7：在摄入微生物复合物实施例2e之前受试者的肠行为。图8：在摄入微生物复合物实施例2e之后受试者的肠行为。图9：在使用包含实施例2e的微生物复合物的局部皮肤治疗期间痤疮的发生率。图10：在使用包含实施例2e的微生物复合物的局部皮肤治疗期间皮炎的发生率。图11：在使用包含实施例2e的微生物复合物的局部皮肤治疗期间皮肤敏感性的发生率。图12：回答关于在使用包含实施例2e的微生物复合物的局部皮肤治疗期间皮肤状况的问卷的小组成员的数量。图13：当使用包含实施例2e的微生物复合物的局部皮肤治疗时，皮肤健康的临床改善的时间。图14：描绘局部益生菌剂对腿部湿疹的影响的照片图像。左图(图a)示出从腿的后面拍摄的照片。上面的图像是在应用产品之前拍摄的，而下面的图像是在研究完成时拍摄的。类似地，对同一患者的腿的内侧面拍摄的照片显示出类似的改善(图b)。图15：描述局部益生菌剂对组合皮肤(痤疮和皮炎)的影响的照片图像。左图是在应用局部药剂之前拍摄的患者之一。右图是在研究完成后拍摄的。图16：患有痤疮的患者在给予局部益生菌之前和之后的照片图像。左侧所示的图像描绘了在开始治疗之前疾病的程度。右侧的图像显示在研究完成后与痤疮相关的炎症变化的消退。图a(侧视图)，图b(斜视图)。发明详述本发明提供了由特定微生物复合物tm(益生元、益生菌和postbiotic)的混合物组成的组合物，所述微生物复合物tm当作为营养干预口服给予时可用于促进总体人类健康。例如，本发明的组合物可用于促进消化系统健康、体重控制和代谢(即营养健康)。如由生化标记物所指示的促进人类健康，所述生化标记物包括例如血糖水平、脂质化学、肝功能、全血计数、甲状腺功能、炎症标记(esr和c反应蛋白)和粪便分类。此外，当局部应用时，本发明的组合物还可用于促进皮肤健康。本文所用的术语“益生元”包括刺激细菌生长和/或活性的化合物。如本文所用的术语“益生细菌”或“益生菌”或“微生物复合物tm”是指当以足够的量用于营养干预给予时赋予消费者健康益处的微生物。可以通过本领域已知的任何方法测量健康益处，例如由生化标记物所指示的，包括例如血糖水平、脂质化学、肝脏功能、全血计数、甲状腺功能，炎症标记(esr和c反应蛋白)和粪便分类。根据本发明的益生菌可以是存活的或非存活的。在益生菌是非存活的情况下，它们必须是基本上结构完整的，这意味着这些非存活微生物仍然足够完整，以避免或延迟在远端肠道中的崩解，从而使得非存活微生物(的保守结构)能够与免疫系统，特别是粘膜免疫系统相互作用。非存活益生菌是代谢活性的。“代谢活性”是指它们表现出对该类型的益生菌特征性的至少一些残留酶活性。如本文所用的术语“postbiotic”是指来自益生生物的非存活细菌产物或代谢副产物。本文所用的术语“非存活”是指在任何已知条件下不能复制的细菌群体。然而，应当理解，由于群体中的正常生物学变化，小部分群体(即5％或更少)仍然可以存活，因此能够在合适的生长条件下在另外定义为非存活的群体中复制。本文所用的术语“活细菌”是指能够在可能复制的合适条件下复制的细菌群体。不满足“非存活”(如上面给出的)的定义的细菌群体被认为是“活的”。本文所用的术语“生物活性成分”是指当以足够的量消耗时对身体具有生理作用的成分。除非另有说明，本文件中提及的所有百分比均以基于组合物的总重量的重量计。在根据本发明的产品中使用的益生元可以是任何常规的益生元。益生元是食品级。优选的益生元是菊糖、低聚果糖或低聚葡萄糖。在根据本发明的产品中使用的益生细菌可以是任何常规的益生细菌。益生细菌是gras(通常认为安全)。优选益生细菌选自乳杆菌科和/或双歧杆菌科。可以使用的合适类型的益生细菌包括乳酸片球菌、戊糖片球菌、植物乳杆菌和动物双歧杆菌。在优选的组合物中，益生细菌乳酸片球菌、戊糖片球菌和植物乳杆菌以相等的比例存在。根据本发明使用的益生细菌的水平将取决于其类型。优选本发明产品每克含有105至1011个菌落形成单位的量的益生细菌。在本发明的一些实施方案中，所用的益生细菌是活的益生细菌。使用活的益生细菌提供了这些益生细菌可以成为肠道微生物群落的一部分，从而提供额外的健康益处的优点。根据本发明的益生细菌可以使用本领域已知的任何标准发酵方法产生。例如，固体基质或深层液体发酵。发酵培养物可以是混合培养物、微生物复合物tm或单一分离物。益生细菌被厌氧发酵。益生细菌是固体基质和深层液体发酵的组合。在优选的组合物中，通过固体基质发酵和深层液体发酵产生的乳杆菌科以相同的比例混合。在一些实施方案中，益生细菌在碳水化合物存在下厌氧发酵。合适的碳水化合物包括菊糖、低聚果糖和低聚葡萄糖。发酵后，通过本领域任何已知的方法收获细菌。例如，细菌通过过滤或离心收获，或者简单地作为发酵物提供。通过本领域已知的任何方法干燥细菌。例如，细菌通过液氮干燥，然后冻干。根据本发明的组合物已经冷冻干燥至水分含量小于20％，15％，10％，9％，8％，7％，6％，5％，4％，3％，2％或1％。优选地，根据本发明的组合物已经冷冻干燥至水分含量小于5％。在一些实施方案中，将冷冻干燥的粉末研磨以降低粒度。在低于10℃，9℃，8℃，7℃，6℃，5℃，4℃，3℃，1℃，0℃或更低的温度下通过锥形研磨研磨细菌。优选温度低于4℃。例如，粒度小于1500，1400，1300，1200，1100，1000，900，800，700，600或500微米。优选地，将冷冻干燥的粉末研磨以降低粒度，使得粒度小于800微米。最优选的是小于约400微米的粒度。在最优选的实施方案中，冷冻干燥的粉末具有295微米的平均粒度，其中60％的混合物的尺寸范围在175-900微米之间。在各种实施方案中，将冷冻干燥的粉末均质化。通过收集各自厌氧发酵每个的上清液并干燥混合物来产生postbiotic。优选地，在干燥前将上清液合并。通过本领域已知的任何方法干燥postbiotic。例如，可以将postbiotic冷冻干燥。将上清液冷冻干燥至水分含量小于20％，15％，10％，9％，8％，7％，6％，5％，4％，3％，2％或1％。优选地，根据本发明的组合物已经冷冻干燥至水分含量小于5％。将本发明的组合物配制用于口服给予，包括咀嚼食品，饮料，液体，片剂，胶囊，粉末和颗粒。在优选的实施方案中，将组合物配制成片剂。在另一个优选的实施方案中，将组合物配制成胶囊。在另一个优选的实施方案中，将组合物配制成粒状或水溶性粉末。更优选的组合物可以配制成液体，霜剂，洗剂，凝胶分散体或软膏用于局部给予。当配制时，组合物可以含有其它成分，包括对健康、风味、配制或压片具有有利影响的成分。可以合适地掺入本发明组合物中的其它成分的非限制性实例是：维生素，矿物质，营养补充剂(例如纤维)，真菌提取物，植物提取物，甜味剂，流动助剂和填充剂。当配制用于口服给予时，组合物包含至少0.1，1，5，10，15，20，25，30，35，40，45，50，55或更多w/w％的益生元、益生菌和postbiotic混合物。在优选的实施方案中，本发明的组合物配制成片剂并包含矿物质，维生素，糖，压片助剂和调味剂。矿物质包括例如碳酸钙，乳酸钙，氯化钙，磷酸氢二钙，氯化钠，一水合柠檬酸钾，硫酸钾，磷酸二氢钾，氧化镁，碳酸锰，葡萄糖酸锰，柠檬酸铁，碳酸锌，葡萄糖酸锌，碳酸铜，碘酸钾，五水合亚硒酸钠，十二水合硫酸铬钾，四水合仲钼酸铵，九水合偏硅酸钠，氯化锂，硼酸，氟化钠，碳酸氢氧化镍四水合物，或偏钒酸铵。矿物质以约0.1％至10％w/w，0.1％至5.0％w/w或在所述范围内的任何具体值的浓度配制。在具体实施方案中，矿物质以约5％w/w，4％，3％w/w，2％w/w，1％w/w，0.9％w/w，0.8％w/w，0.7％w/w，0.6％w/w，0.5％w/w，0.4％w/w，0.3％w/w，0.2％w/w，0.1％w或更小浓度配制。维生素包括例如维生素b1，b2，b3，b5，b6，b7，b9，b12，维生素c，维生素d，维生素e，维生素a和/或k。优选的是维生素b1，b3，b6，b12，维生素c，维生素d3或维生素e乙酸酯。维生素以约0.01％-10％w/w，0.1％-5w/w％或所述范围内的任何具体值的浓度配制。特别地，维生素以约5％w/w，4％，3％w/w，2％w/w，1％w/w，0.9％w/w，0.8％w，0.7％w/w，0.6％w/w，0.5％w/w，0.4％w/w，0.3％w/w，0.2％w/w，0.1％w或更小浓度配制。糖包括例如葡萄糖，蔗糖，果糖，菊糖，海藻糖或葡糖酸的盐。优选的糖包括葡萄糖，果糖，菊糖，低聚果糖，低聚葡萄糖，低聚半乳糖，取代的甘露聚糖，例如乙酰甘露聚糖和半乳甘露聚糖，或三氯蔗糖(sucralose)。糖以约10％至50％w/w，20％至40％w/w或在所述范围内的任何具体值的浓度配制。特别地，维生素以约50％w/w，45％w/w，40％，35％w/w，30％w/w，25％w/w，20％w，15％w/w，10％w/w或更小浓度配制。压片助剂包括例如羧酸例如苹果酸，马来酸，柠檬酸，异柠檬酸和琥珀酸及其盐，sio2，真芦荟，饱和以及不饱和的直链和支链脂肪酸及其盐或脂肪醇。优选的压片助剂是苹果酸，柠檬酸，硬脂酸或硬脂酸镁。压片助剂以约1％-10％w/w，2.5％-7.5w/w％或所述范围内的任何具体值的浓度配制。特别地，维生素以约10％w/w，7.5％，5％w/w，4％，3％w/w，2％w/w，1％w/w或更小浓度配制。可以使用任何天然或人造食品级调味剂，包括香蕉，肉桂，葡萄，橙，柑橘，桃，梨，菠萝，苹果，浆果，椰子，巧克力，香草，草莓，冬青，留兰香，薄荷或姜。优选的调味剂是姜或天然浆果调味剂。调味剂以约0.1％-10％w/w，0.5％-5w/w％或所述范围内的任何具体值的浓度配制。特别地，调味剂以约5％w/w，4％，3％w/w，2％w/w，1％w/w，0.9％w/w，0.8％w/w，0.7％w/w，0.6％w/w，0.5％w/w，0.4％w/w，0.3％w/w，0.2％w/w，0.1％w或更小浓度配制。在特别优选的实施方案中，将本发明的益生菌组合物配制成片剂，并且包含58.0％w/w的益生元、益生菌和postbiotic混合物；0.58％w/w乳酸钙，2.95％w/w维生素，2.11％w/w矿物质，31.70％w/w糖，2.66％w/w压片助剂和2.00％调味剂。在另一个优选的实施方案中，本发明的组合物配制成胶囊并包含真菌提取物，植物组分，维生素，矿物质，纤维和填充剂。真菌提取物可以包括来自以下的全部成分或特定提取物：gandodermalucidium，lentinusedodes，hericiumerinaceous，agaricusblazei，cordycepssinensis，grifolafrondosa，coriolusveriscolor，coprinuscomatus或grifolafrondosa。植物组分可以包括：红景天(rhodiolarosea)提取物，巴巴多斯芦荟(aloebarbedensis)，丝兰(yuccaschidigera)，真芦荟(aloevera)，乳香(boswellia)提取物，儿茶(acaciacatechu)，黄芩(scutellariabaicalensis)，辣木(moringa)或姜黄(turmeric)。填充剂可包括菊糖，低聚果糖，低聚葡萄糖，米粉，[米糠，木薯]二氧化硅，硬脂酸或硬脂酸镁和半乳糖。在另一个优选的实施方案中，将本发明的组合物配制成仅含有微生物复合物tm的胶囊，其浓度范围为5-500mg，递送105-1011cfu/g，优选106-1010cfu/g。本发明的组合物可以包括另外的营养补充剂，例如盐酸葡萄糖胺或硫酸软骨素。它们还可以包括用于缓解慢性疼痛和炎症的物质，例如甲基磺酰基甲烷。本发明的组合物可用于治疗各种病症及其体征和症状的方法。具体地，当口服给予时，所述组合物用于促进消化健康，代谢(营养健康)和体重控制。例如，所述组合物用于治疗或减轻消化病症的体征和症状，例如便秘(例如便秘型肠易激综合征(ibs-c)或慢性特发性便秘(cic)，腹泻(例如慢性腹泻)，失调，克罗恩病，食物过敏，乳糖不耐症和慢性胃肠炎性疾病例如囊炎和溃疡性结肠炎的体征和症状。所述组合物还用于减少与代谢综合征x相关的病态。此外，当局部给予时，本发明的组合物用于促进皮肤健康和伤口愈合。例如，所述组合物用于治疗或减轻皮肤病症例如红斑痤疮，痤疮，皮炎，湿疹和银屑病的体征或症状。除非另有说明，本文件中提及的所有百分比均以基于组合物的总重量的重量计。可以用下列实施例更好理解本发明，所述实施例用于说明，但不解释为限制本发明。实施例实施例1：微生物组合物的制备本发明的微生物复合物tm组合物通过深层液体发酵和固体基质发酵的组合制备。预混合物a：乳杆菌的固体基质发酵：使用标准厌氧深层液体发酵方案，将乳酸片球菌，戊糖片球菌和植物乳杆菌的各自纯化分离物在分开的发酵罐中生长。通过离心从发酵罐中回收各生物，以相等重量比混合在一起，然后加入到下列混合物中：1份菊糖，2.2份分离的大豆蛋白，8份含0.25％w/w氯化钠的米粉，0.045％w/w碳酸钙，0.025％w/w硫酸镁，0.025％w/w磷酸钠，0.012％w/w硫酸亚铁和29.6％水。使该混合物在30℃下发酵至多5天。发酵完成后，将整个混合物冷冻干燥至水分含量小于5％，研磨至平均粒度为295微米，其中60％产物的粒度范围为175-840微米，并均质化。粉末产品的最终微生物浓度在109至1011cfu/g之间。预混合物b：乳杆菌的深层发酵：使用标准厌氧深层液体发酵方案，在菊糖存在下，将乳酸片球菌，戊糖片球菌和植物乳杆菌的各自纯化分离物在分开的发酵罐中生长。发酵后，将各个培养物过滤，离心，冷冻干燥至水分含量小于约5％，然后研磨至平均粒度为295微米，其中60％产物的粒度范围在175-840微米之间，并均质化。粉末产品的最终微生物浓度在109至1011cfu/g之间。预混合物c：发酵上清液：收集从上述预混合物b的深层发酵中产生的生物体离心后剩余的上清液，混合在一起，冷冻干燥至水分含量小于约5％，然后研磨成平均粒度为295微米，其中60％产物的粒度范围在175-840微米之间，并均质化。通过以相等重量混合预混合物a，b和c并将该组合物混合均匀来制备最终组合物。实施例2：配制用于临床研究的剂量根据以下组成，将来自实施例1的最终组合物配制成用于人临床研究的片剂，胶囊和粉末：来自组合物a的片剂的最终特征是：外观白色至中等棕色尺寸0.555x0.555in2平均片剂重量1.2克硬度32-38kp易碎性<=2%损失实施例3：所要求保护的组合物对营养健康的影响概述：小型基础对照研究，包括30名年龄在18岁-53岁之间的男性和女性患者，被分类为具有代谢综合征征兆的肥胖。基于医学从业人员，针对整体健康和身体质量指数(bmi)筛选患者。设计：给予参与者500mg/天(两个250mg胶囊)的含有实施例2e的微生物复合物tm的产品。另外建议参与者不要改变其身体活动或运动水平的正常饮食。在三个月的使用之后，访问小组成员以确定他们对产品益处的总体感觉。此外，在试验前和试验后对受试者进行临床测试。这包括：体重变化(身体质量指数(bmi)，身体脂肪，腰部和臀部)血液代谢特征(血糖和血脂异常)肝功能排便习惯和粪便稠度的变化(基于布里斯托粪便图)材料：根据实施例2e中的组合物，将微生物复合物tm配制在250mg大小的胶囊中。结果：a)体重减轻：总的来说，在摄入产品12周后对体重减轻和/或腰围减少有显著影响。受试者在测试的12周内损失平均为2.4kg(图1、2和3)。关键学习在该组中总共有27个参与者。12名受试者表现出体重减轻以及腰部测量的减少。其余参与者仅显示体重减轻。将两者分组在一起，这种情况下考虑了将外周脂肪转化为肌肉。两个参与者在体重以及腰部测量方面保持中性。一个参加者增加了体重。b)血液标记水平的结果：在受试者中观察到血糖(fbs)，胆固醇和ldl的显著减少(图4)。c)肝功能结果：在肝酶alt和ggt中也观察到显著减少，这与肝应激减少相关(图5和6)。肝酶标记alt/ggt：丙氨酸转氨酶(alt)和γ-谷氨酰转移酶(ggt)与肥胖，胰岛素抵抗和代谢综合征强烈相关。研究已经将显著更高的2型糖尿病的风险与alt和ggt水平的增加相关联，特别是在男性中。d)消化健康结果：在100％的受试者的排便习惯中观察到显著的改善。在便秘或松弛的肠中以及在粪便稠度中观察到改善；如通过受试者使用工业标准工具，布里斯托粪便图(bristolstoolchart,bsc)所测量的。在大多数西方国家，1或2的布里斯托粪便图水平通常代表失调，而值为5-7的松弛粪便在大多数发展中国家相当普遍。总体结果显示排便习惯的正常化，主要转变为以改善的粪便稠度注意到的水平3-4。图7：临床前3-人报告便秘，并且具有分开的硬块至香肠形但是块状23-人在正常范围内，具有香肠形，带有表面裂缝的香肠形，光滑和柔软4-人报告柔软，蓬松或水样稠度图8：临床后：100％的人具有改善的肠功能2-人的稠度有轻微变化1-人改善了其粪便稠度，从分开的硬块到理想的粪便稠度23-人在正常范围内，但改善了其粪便稠度4-人从柔软，蓬松或水样改善为理想的粪便稠度实施例4：面部和身体皮肤护理研究。对各种皮肤类型的影响-病例对照研究。概述在包括痤疮，皮炎，湿疹的各种皮肤病症中以及包括炎症和红斑痤疮的敏感性皮肤类型中试验包含实施例2e的微生物复合物tm的局部益生菌制剂。所记录的有益效果包括改善皮肤色素沉着，水分和质地，以及在研究的各个亚组中的色素沉着。例如，在湿疹亚组中，色素沉着，水分和质地有显著改善。这个结果也在痤疮和皮炎亚组中被注意到。该制剂显示了临床效果，大多数反应(60％)在使用本研究产品的最初五天内。这也反映在总体趋势中，表明75％的患者报告了一些改善。设计该研究被设计为病例-对照研究，寻求改善皮肤状况，例如痤疮，皮炎，湿疹以及对敏感皮肤和红斑痤疮的一般信息。方案和材料：从位于澳大利亚悉尼的皮肤护理诊所招募总共25名受试者进行研究。研究的参与者是常规的就诊者，他们都展示了一些形式的皮肤状况，所述皮肤状况对传统在先治疗，使用他们目前的皮肤护理方案不可改良。所有参与者在开始研究之前由医学从业人员审查。建议受试者使用两种护肤产品，深层保湿霜和局部凝胶，用于面部和身体应用。使用两种产品，这是由于受试者通常将这样的产品应用于有问题的皮肤区域，但被指示至少每天使用产品一次，持续四周。深层保湿霜由以下材料构成：65％水2％辛酸/癸酸甘油三酯2％丙二醇2％淀粉辛烯基琥珀酸铝3％微生物复合物tm(实施例2e组合物)2％糖异构体2％硬脂酸2％十六烷基磷酸钾(以下成分总计为按重量计的20％配方，并以各自小于1％的量加入)乙二胺四乙酸二钠，氢化棕榈酸甘油酯，乳油木果脂(butyrospermumparkii(shea)butter)，氢氧化钠，丙烯酰基二甲基牛磺酸铵/vp共聚物，黄葵(hibiscusabelmoschus)籽提取物，丁二醇，黄原胶，甘油，卡波姆，聚山梨醇酯20，棕榈酰基低聚肽，棕榈酰基四肽-7，citrusaurantiumdulcis（橙）果实提取物，citrusaurantiumdulcis（橙）果皮提取物，薰衣草花/叶/茎提取物，小豆蔻种子提取物，栀子花提取物，苹果果实提取物，杏果实提取物，黄葵(hibiscusabelmoschus)提取物，丁香花提取物，茉莉花/叶提取物，香草果实提取物，晚香玉(polianthestuberosa)提取物，草果药(hedychiumspicatum)提取物，鸡蛋花(plumeriarubaflower)提取物，苯氧乙醇，辛酰乙二醇，乙基己基甘油，己二醇。局部凝胶由以下材料构成：65％水5％甘油3％微生物复合物tm(实施例2e组合物)3％聚山梨醇酯20(以下成分总计为24％，并且各自以小于1％的量加入)乙二胺四乙酸二钠，尿囊素，黄原胶，苯氧乙醇，辛酰乙二醇，乙基己基甘油，己二醇，丙烯酰基二甲基牛磺酸铵/vp共聚物，辛酸/癸酸甘油三酯，citrusaurantiumdulcis(橙)果实提取物，citrusaurantiumdulcis(橙)果皮提取物，薰衣草花/叶/茎提取物，小豆蔻种子提取物，栀子花提取物，苹果果实提取物，杏果实提取物，黄葵(hibiscusabelmoschus)提取物，丁香花提取物，茉莉花/叶提取物，香草果实提取物，晚香玉(polianthestuberosa)提取物，草果药(hedychiumspicatum)提取物，鸡蛋花(plumeriarubaflower)提取物，氢氧化钠。本研究的排除标准基于先前暴露于系统性维生素a治疗。此外，参与者被要求在研究的月份内在他们的面部停止使用任何其它局部治疗。建议就诊者在研究期间避免使用消融技术(包括微磨皮和皮肤针刺)，光基疗法(包括ipl和激光)或化学剥皮(例如乳酸，tca或jessner's)。通过问卷，基线和研究完成时的照片的手段收集数据。在测试期间，通过电话访谈每周评估参与者。数据包括关于皮肤改善的主观问卷参数。目标参数包括皮肤色素沉着，细线和粗线减少，整体皮肤保湿，以及皮肤质地的评估。基于参与者反应，通过直接观察或主观评估使用产品后的红斑或疼痛来监测不良事件。医学从业人员审查了所有不良事件。结果：15名参与者完成了全部的研究要求。在痤疮亚组中，观察到对皮肤色素沉着，皮肤水分以及皮肤质地的有益效果(n=6)。事实上，在研究完成时，n=5人报告皮肤水分改善，n=4报告皮肤质地改善。此外，占优势的n=5报告色素沉着的益处。如在所有亚组(以下讨论)中所指出的，细线和粗线有细微改进。然而，大多数参与者报告没有变化或有微小变化。在皮炎亚组(n=3)中，注意到相似的结果。使用该产品后，皮肤水分(n=3)有显著改善和皮肤质地和皮肤色素沉着(n=2)有中等改善。在湿疹亚组(n=6)中，当使用产品时，色素沉着，水分和质地有显著改善(n分别为5，5和6)。敏感性皮肤(包括炎症和红斑痤疮)的结果并不显著，但在皮肤水分，皮肤质地和色素沉着中观察到有利的总体趋势。结果不如在其它皮肤状况中观察到的那么明显。所描述的结果如下图所示。当将所有数据合并在一起时，可以最好地了解关于皮肤色素沉着，皮肤水分和皮肤质地的结果。如下面的图2所示，与没有显示出改变的3个参与者相比，总共12个参与者报告了皮肤色素沉着的改善。也注意到关于皮肤水分的类似结果。当观察皮肤质地时，结果更好，总共13个参与者显示改善，两个显示没有变化。细线和粗线的结果不显著。研究中注意到的另一个吸引人的方面是观察到临床反应的时间。大多数局部药剂可以在几天至几个月内变化。事实上，通常仅观察到皮质类固醇制剂的快速反应。然而，在本具体研究中，至临床反应的时间相当快。例如，在前72小时内，20％的参与者报告了临床反应的时间。另外40％在研究的第5天显示皮肤质量的改善。另外10％在第七天有一些变化。到两周时，另外30％显示出对他们的皮肤的生理变化。总体而言，完成研究的所有参与者的100％在两周内具有临床反应。这个结果总结在下面的圆图中。使用这种局部药剂时注意到最引人注目的特征是对特定皮肤状况的改善。例如，图14显示了局部药剂对其腿上具有湿疹的患者的效果。显示腿后视的左侧图，基于前(上)和后(下)视图，显示与湿疹相关的红斑的显著消退。在同一图像的右侧所示的腿的侧面，注意到类似的效果。这些效应不仅在湿疹上注意到。例如，图15显示了在她面部具有痤疮和皮炎组合的患者的摄影图像。左侧所示的图像显示治疗前在面部颊部以及泪液槽的显著皮炎(左)及其消退(右)。此外，在下巴上注意到的囊性痤疮在研究完成时显著改善，并且在右边的图中注意到。在囊性痤疮上观察到类似的效果。图16显示了应用局部益生菌剂之前(左)和之后(右)的痤疮的图像。如图所示，当从侧面(上面的图a)以及斜视面(下面的图b)观察皮肤时，注意到显著的变化。注意：选择所示的图以代表研究的大多数参与者所记录的皮肤状况的改善。结论总的来说，小组成员受益于将该产品用于多种皮肤状况，包括痤疮，皮炎，湿疹以及敏感性皮肤。大多数参与者报告色素沉着，皮肤水分以及皮肤质地的改善。细线和粗线上的结果不显著。然而，重要的是注意，该试验制剂不包括各种局部赋形剂，例如维生素a，维生素b，维生素c，α-羟基酸，艾地苯醌。这些试剂已经显示对皮肤生长具有有益效果，通常称为药妆品(cosmeceuticals)。预期该技术的将来重复将包含这样的赋形剂，目的在于提高整体生理学益处。其它实施方案虽然已经结合其详述描述了本发明，但是前面的描述旨在说明而不是限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求的范围限定。其它方面，优点和修改在所附权利要求的范围内。当前第1页12