一种提高稀有皂苷含量的多成分西洋参茎叶提取物的制备方法与流程

本发明涉及医疗保健领域，也是一种对西洋参的综合利用，具体涉及一种多成分西洋参茎叶提取物的提取方法。

背景技术：

西洋参（panaxquinquefoliuml.）又名美国参、花旗参、洋参，属五加科，属多年生草本植物，其原产区为北美洲加拿大地区，威海市文登区是中国西洋参主产区，由于特殊环境，极适于西洋参的生长养殖，其总皂苷含量高于5%，甚至高达8%，远高于其原产区。目前西洋参多是以其根入药，茎叶和根须多作为农业废弃物，但我们前期实验证据表明，西洋参根中人参皂苷ro和re为主要成分，但其他种类皂苷在根茎叶中含量差距不大，且在茎叶中多酚含量显著高于根部（图1-2），稀有人参皂苷是指西洋参（人参）中天然存在量很少或没有的人参皂苷，其生物活性更强、更易被人体吸收利用，已成为当前研究的热点，前期实验证明，西洋参经em菌群联合发酵后，多种稀有人参皂苷含量显著升高，且产生许多本来没有的人参皂苷种类（表1-2）。多酚是极为优质的抗氧化成分，其抗氧化能力甚至高于vc和ve，已有大量报道揭示了天然多酚的清除自由基能力，而自由基与人体很多重大疾病的发生发展有关，如衰老和癌症，因此多酚也有其十分重要的应用价值。西洋参茎叶是皂苷和多酚的优质来源。目前虽然已有大量文献报道西洋参的提取，但都是以人参皂苷为标志成分，在西洋参多酚的提取方面还鲜有报道，我们通过实验发现，西洋参皂苷和多酚有共同提取的可能。因此本发明旨在报道一种多成分西洋参提取物的提取方法。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种提高稀有皂苷含量的多成分西洋参茎叶提取物的制备方法，具体实施方法如下：

一种提高稀有皂苷含量的多成分西洋参茎叶提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）西洋参茎叶em菌原位发酵；

（2）西洋参茎叶烘干，粉碎，过筛；

（3）乙醇提取西洋参总皂苷和总多酚，提取液脱脂，过大孔吸附树脂柱子；

（4）检测总皂苷和总多酚及稀有皂苷rh1、f1、rd、rh3、rk3。

一种提高稀有皂苷含量的多成分西洋参茎叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述em菌为酵母菌、乳酸菌、芽孢杆菌、丝状真菌组成的混合菌种，所用菌种皆为商品化市售菌种。

一种提高稀有皂苷含量的多成分西洋参茎叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述酵母菌为啤酒酵母、毕赤氏酵母中的一种或两种；乳酸菌为双歧杆菌、乳酸链球菌中的一种或两种；芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌中的一种或几种，丝状真菌为根酶菌和毛霉菌中的一种或两种组成的混合菌种，所用菌种皆为商品化市售菌种。

一种提高稀有皂苷含量的多成分西洋参茎叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤（1）中的原位发酵方法为西洋参茎叶直接喷施em菌液，待其湿润，放置于室温自然发酵10天。

一种提高稀有皂苷含量的多成分西洋参茎叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述发酵西洋参茎叶目数为40目。

一种提高稀有皂苷含量的多成分西洋参茎叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤（3）中所述乙醇浓度为40%~60%，料液比为1:10~1:20，脱脂采用石油醚萃取。

一种提高稀有皂苷含量的多成分西洋参茎叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤（3）中所述大孔吸附树脂型号为ab-8,d101或xad-7p。

一种提高稀有皂苷含量的多成分西洋参茎叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤（4）中总皂苷测定方法采用中国药典人参总皂苷的比色法测定；总多酚采用国标gb/t31740.2-2015测定。

一种提高稀有皂苷含量的多成分西洋参茎叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤（4）中稀有皂苷的检测方法为hplc外标法，液相方法为0.5%甲酸（a）/乙腈（b），0~10min：75%~54%a；13~33min：54%~30%；45~55min：30%~0%；60~63min：0%~75%，紫外检测波长203nm，流速1ml/min。

附图说明

图1西洋参根茎叶总皂苷（a）和总多酚（b）含量测定。a：根；b：茎；叶；1：20%乙醇提取；2：40%乙醇提取；3：60%乙醇提取；4：80%乙醇提取；5：95%乙醇提取。

图2西洋参总皂苷和总多酚测定标准曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明，但不限于此。

同时下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例1：

一种提高稀有皂苷含量的多成分西洋参茎叶提取物的制备方法，具体工艺参数如下：

(1)称取西洋参茎叶100g，中药粉碎机粉碎，过40目标准筛；

(2)加入1l40%乙醇搅拌提取三次，每次30分钟，合并提取液，旋蒸除去多余乙醇，等体积加入石油醚萃取，弃去石油醚相。纯水平衡ab-8柱子，上样，用纯水、10%乙醇分别依次洗脱三个柱体积，用60%乙醇洗脱，并收集，旋蒸浓缩，冻干得提取物；

(3)利用中国药典人参总皂苷下比色法测定提取物中总皂苷的含量，利用国标gb/t31740.2-2015中第二部分比色法测定总多酚含量；

实施例2：

一种提高稀有皂苷含量的多成分西洋参茎叶提取物的制备方法，具体工艺参数如下：

(1)称取西洋参茎叶100g，中药粉碎机粉碎，过40目标准筛；

(2)加入2l的40%乙醇搅拌提取三次，每次30分钟，合并提取液，旋蒸除去多余乙醇，等体积加入石油醚萃取，弃去石油醚相。纯水平衡d101柱子，上样，用纯水、10%乙醇分别依次洗脱三个柱体积，用60%乙醇洗脱，并收集，旋蒸浓缩，冻干得提取物；

(3)利用中国药典人参总皂苷下比色法测定提取物中总皂苷的含量，利用国标gb/t31740.2-2015中第二部分比色法测定总多酚含量；

实施例3：

一种提高稀有皂苷含量的多成分西洋参茎叶提取物的制备方法，具体工艺参数如下：

(1)称取西洋参茎叶100g，中药粉碎机粉碎，过40目标准筛；

(2)加入1.5l的60%乙醇搅拌提取三次，每次30分钟，合并提取液，旋蒸除去多余乙醇，等体积加入石油醚萃取，弃去石油醚相。纯水平衡xad-7p柱子，上样，用纯水、10%乙醇分别依次洗脱三个柱体积，用60%乙醇洗脱，并收集，旋蒸浓缩，冻干得提取物；

(3)利用中国药典人参总皂苷下比色法测定提取物中总皂苷的含量，利用国标gb/t31740.2-2015中第二部分比色法测定总多酚含量；

上述的具体3种实施方式是示例性的，目的在于使得技术人员能够理解本专利，在本专利的基础上的所作的任何同等变更或修改，均在本专利包括的范围内。

实施例结果：

表1各实施例总皂苷和总多酚含量

表2西洋参茎叶发酵前后五种稀有皂苷含量对比

可见三种大孔吸附树脂都可以对皂苷和多酚有较好的分离效果，而且xad-7p对于多酚和皂苷的保留最强，尤其是多酚含量，有显著上升。同时，发酵前后稀有皂苷含量变化较大，其中发酵后新产生了四种稀有皂苷rh1、f1、rh3、rk3。