本发明涉及中药保健品
技术领域：
：，具体涉及一种增强抗肿瘤和抗氧化活性的三叶青富硒复方组合物及其制备方法。
背景技术：
：：随着城市化、工业化的加速发展，环境污染日趋严重，加上不良生活方式和行为习惯的影响，恶性肿瘤已成为危害人类生命与健康的重大疾病之一。目前，西医尚无有效药品治疗，大多采用放疗和化疗方治疗，这些药物大多为合成药，但疗效不一、没有靶向性、且副作用明显，因此从天然中草药内提取有效抗肿瘤活性是国际的研究热点。另一方面，“预防为主”是我国卫生事业和医疗保健的国策，因此开发具有抗氧化和提高免疫功能的中药复方产品是人民群众的迫切需要。三叶崖爬藤(又名：三叶青)是葡萄科崖爬藤属植物，是中国特有的珍稀药用植物，主要分布于我国的南部地区。作为一种民间流行的中草药，其具有祛风化痰、清热解毒、活血止痛等多种活性。根据现代药理学研究表明三叶青具有显著的抗肿瘤、抗炎症和保肝作用，且毒副作用小，被誉为“植物抗生素”。而有关三叶青在抗肿瘤方面的应用研究已引起越来越多关注，展现了十分广阔的开发利用前景。然而，三叶青虽无毒，但其性凉，需要根据药性进行配伍，达到药性平和协同、互补增效的目的。根据中医“清热解毒、扶正固本、活血消炎、化瘀散结”的抗肿瘤理论，通过原料成分的科学配伍，使三叶青的抗肿瘤产品既抑杀肿瘤细胞又具备养气血、补五脏、健脾胃、助睡眠的功效。因此，本发明基于“扶正祛邪”的基本治则，参考肿瘤病的古今用药，结合现代药理研究，以解毒抗癌中草药(三叶青:微苦，平。清热解毒、祛风化痰、活血止痛)为主要原料；配以软坚散结抗癌中草药(夏枯草：辛，苦，寒。入肝胆二经。清热泻火、软坚散结。适应症胃癌，甲状腺癌、乳腺癌、肝癌、及恶性淋巴瘤等)；活血化瘀抗癌中草药(莪术：辛，苦，温。入肝，脾二经。破血祛瘀，行气止痛)；止血抗癌中草药(仙鹤草：苦、涩、平。归肝经。收敛止血，解毒，杀虫。蔷薇科植物花芽草的全草)。即以三叶青、夏枯草、莪术、仙鹤草四药组方，一方面利用三叶青和莪术攻瘤、夏枯草散瘤；另一方面利用仙鹤草的收敛、补益之性，既可集中人体的正气，又可集中药物的攻散之力，从而达到散中有收，以收促散的目的。从而为预防和治疗肿瘤提供客观依据。另一方面，l-硒甲基硒代半膀氨酸(semsc)被加入复方中以期提高抗肿瘤和抗氧化活性。其以提供硒元素的形式在体内作为多种抗氧化酶的活性中心，抗氧化酶催化氧化还原反应来减轻ros系统给机体带来的氧化损伤。semsc具有毒性小、补硒效果好、抗癌生物活性强等优点。semsc已于2009年被卫生部批准为新型营养强化剂，因此可以广泛应用于食品和医疗保健品等方面。我国规定人体对硒的安全摄入量为500μg/d，中毒摄入量为750μg/d。本发明拟根据临床实践和现代分子生物学的研究成果，应用分子药理学原理，选择三叶青为主要原料，辅以夏枯草、莪术和仙鹤草等中草药，并加入一定量的semsc组成具有抗肿瘤和抗氧化功能的新型植物提取物富硒复方。该富硒复方和已有三叶青产品比有如下优点：(1)新增了3味中药和semsc，因此增强了复方产品抗氧化和抗肿瘤的功能；(2)根据君臣佐使的原则，确定三叶青、夏枯草、莪术、仙鹤草之间的比例为4:1:1:1，并通过超声法对其进行提取和喷雾干燥得到复方粉末；(3)通过动物模型验证了该复方产品具有较好的抗肿瘤和抗氧化活性。技术实现要素：本发明的目的是提供一种以三叶青为主体的抗肿瘤和抗氧化富硒复方组合物及其制备方法，能预防和辅助治疗癌症，三叶青能与其他中药及新型硒补充剂协同作用，通过将传统中医药和现代科技结合充分发挥三叶青的抗肿瘤和抗氧化效用。本发明的技术方案为：一种增强抗肿瘤和抗氧化活性的三叶青复方组合物，该复方包含按重量份的下述组分，三叶青3-5份，夏枯草1份、莪术1份、仙鹤草1份和l-甲基硒代半胱氨酸，所述l-甲基硒代半胱氨酸为经过二次包埋和稀释后的微囊微末，其中硒的质量分数为1‰。一种增强抗肿瘤和抗氧化活性的三叶青复方组合物的制备方法，包括以下工艺步骤：s1.以重量份表示，将三叶青3-5份，夏枯草1份、莪术1份、仙鹤草1份分别粉碎、干燥、混匀后得三叶青复方粉末；s2.准确称取三叶青复方粉末，采用多极性分级提取法，按1:5-15：5-15：5-15的料液比依次加入90-95％乙醇、50-60％乙醇和25-30％乙醇，并依次在50-70℃下间歇式聚能超声20min-1h，合并提取液，过滤，滤液浓缩为浸膏，获得不同醇溶度活性组分；s3.将上述滤渣，按1:5-10料液比，加入蒸馏水，在50-70℃下间歇式聚能超声提取20min-1h，过滤，滤液浓缩为浸膏，获得水溶性活性组分；s4.将上述醇溶和水溶浸膏混合均匀，按1:2-3的料液比复溶，并按5％重量份的辅料比添加麦芽糊精，溶解、混合，在进风温度170-200℃、出风温度70-100℃下喷雾干燥得到粉末；s5.将所得上述喷雾干燥粉末与含硒1‰的l-甲基硒代半胱氨酸微囊微末和淀粉、硬脂酸镁辅料混合，得三叶青复方组合物。所述的步骤s2、s3中间歇式聚能超声提取法的超声条件为：超声功率1500w，超声间隔20-40s，超声温度50-70℃，超声时间20min-1h。所述最终每100g三叶青复方组合物各种配料配方为：三叶青复方粉末70g、l-甲基硒代半胱氨酸有机硒：24g；淀粉：4g；硬脂酸镁：2g；三叶青复方组合物功效成分含量为：总酚150-200mggae/g、总黄酮60-120mggae/g、多糖100-160mg/g和硒0.1042mg/g。其每日功效成分每日食用量：总酚：360-480mg；总黄酮：144-288mg；总多糖：240-384mg；硒：250.08μg。所述该三叶青复方组合物为散剂、颗粒剂或胶囊剂。本发明的主要特点是：将传统中药与现代新型营养补充剂进行配伍，结合先进的提取和制备工艺，得到具有显著抗肿瘤和抗氧化效果的中药复方产品。本发明的有益效果是：1、本发明涉及中药提取物复方产品，有利于提取物中绝大多数活性成分的释放，可以对健康人群和癌症患者提供预防和辅助治疗肿瘤以及提高抗氧化活性和免疫力等功效；2、本发明中三叶青与其他中药和新型有机硒补充剂协同作用，充分发挥了三叶青的抗肿瘤和抗氧化效用；3、本发明尤其对癌症患者的辅助治疗和康复大有益处，可消除放疗、化疗的毒副作用，增加免疫力；4、本发明同样适用于普通人预防肿瘤和提高机体抗氧化活性之用。附图说明图1为各组对荷瘤小鼠血浆中mda含量的影响的柱状图，图中model指模型组；ctx(25mg/kg)指环磷酰胺组；syq(250，500和1000mg/kg)分别指产品低、中和高剂量组。图2为各组对荷瘤小鼠血浆中sod影响的柱状图，图中model指模型组；ctx(25mg/kg)指环磷酰胺组；syq(250，500和1000mg/kg)分别指产品低、中和高剂量组。图3为各组对荷瘤小鼠血浆中gsh-px活力的影响的柱状图，图中model指模型组；ctx(25mg/kg)指环磷酰胺组；syq(250，500和1000mg/kg)分别指产品低、中和高剂量组。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步详细说明，但应理解本发明的范围非仅限于这些实施例的范围。实施例1一种增强抗肿瘤和抗氧化活性的三叶青复方组合物，该复方包含按重量份的下述组分，三叶青4份，夏枯草1份、莪术1份、仙鹤草1份和l-甲基硒代半胱氨酸，所述l-甲基硒代半胱氨酸为经过二次包埋和稀释后的微囊微末，其中硒的质量分数为1‰。一种增强抗肿瘤和抗氧化活性的三叶青复方组合物的制备方法，其特征在于，包括以下工艺步骤：s1.将三叶青800g，夏枯草200g、莪术200g、仙鹤草200g分别粉碎、干燥、混匀后得三叶青复方粉末；s2.准确称取步骤s1得到的三叶青复方粉末500g，采用多极性分级提取法，按1:10：10：10的料液比依次加入95％乙醇5000ml、60％乙醇5000ml和30％乙醇5000ml，并依次在60℃下间歇式聚能超声40min，合并提取液，过滤，滤液浓缩为浸膏，获得不同醇溶度活性组分；s3.将上述滤渣，按1:10料液比加入蒸馏水，在80℃下间歇式聚能超声提取40min，过滤，滤液浓缩为浸膏，获得水溶性活性组分；s4.将上述醇溶和水溶浸膏混合均匀，按1:2的料液比(g浸膏/ml水)复溶，并按5％重量份的辅料比添加麦芽糊精，溶解、混合，在进风温度180℃、出风温度90℃下喷雾干燥得到粉末；s5.将所得上述喷雾干燥粉末与l-甲基硒代半胱氨酸微囊微末(含硒1‰)和辅料(淀粉和硬脂酸镁)混合，得三叶青复方产品。步骤s2、s3中间歇式聚能超声提取法的超声条件为：超声功率1500w。本实施例中的三叶青复方组合物制成散剂。所述最终每100g三叶青复方组合物各种配料配方为：三叶青复方粉末70g、l-甲基硒代半胱氨酸有机硒(1:1000包埋后)：24g；淀粉：4g；硬脂酸镁：2g。功效成分含量为：总酚175mggae/g、总黄酮100mggae/g、多糖137.5mg/g和硒0.1042mg/g。其每日功效成分每日食用量：总酚：420mg；总黄酮：240mg；总多糖：330mg；硒：250.08μg。实施例2一种增强抗肿瘤和抗氧化活性的三叶青复方组合物，该复方包含按重量份的下述组分，三叶青3份，夏枯草1份、莪术1份、仙鹤草1份和l-甲基硒代半胱氨酸，所述l-甲基硒代半胱氨酸为经过二次包埋和稀释后的微囊微末，其中硒的质量分数为1‰。一种增强抗肿瘤和抗氧化活性的三叶青复方组合物的制备方法，包括以下工艺步骤：s1.将三叶青600g，夏枯草200g、莪术200g、仙鹤草200g分别粉碎、干燥、混匀后得三叶青复方粉末；s2.准确称取步骤s1得到的三叶青复方粉末500g，采用多极性分级提取法，按1:5：5：5的料液比依次加入90％乙醇2500ml、50％乙醇2500ml和25％乙醇2500ml，并依次在50℃下间歇式聚能超声20min，合并提取液，过滤，滤液浓缩为浸膏，获得不同醇溶度活性组分；s3.将上述滤渣，按1:5料液比加入蒸馏水，在50℃下间歇式聚能超声提取20min，过滤，滤液浓缩为浸膏，获得水溶性活性组分；s4.将上述醇溶和水溶浸膏混合均匀，按1:2的料液比(g浸膏/ml水)复溶，并按5％重量份的辅料比添加麦芽糊精，溶解、混合，在进风温度170℃、出风温度70℃下喷雾干燥得到粉末；s5.将所得上述喷雾干燥粉末与l-甲基硒代半胱氨酸微囊微末(含硒1‰)和辅料(淀粉和硬脂酸镁)混合，得三叶青复方组合物。本实施例中的组合物制成颗粒剂。所述最终每100g三叶青复方组合物各种配料配方为：三叶青复方粉末70g、l-甲基硒代半胱氨酸有机硒(1:1000包埋后)：24g；淀粉：4g；硬脂酸镁：2g。本实施例中，三叶青复方组合物制成颗粒剂，功效成分含量为：总酚150mggae/g、总黄酮60mggae/g、多糖100mg/g和硒0.1042mg/g。其每日功效成分每日食用量：总酚：360mg；总黄酮：144mg；总多糖：240mg；硒：250.08μg。实施例3一种增强抗肿瘤和抗氧化活性的三叶青复方组合物，该复方包含按重量份的下述组分，三叶青5份，夏枯草1份、莪术1份、仙鹤草1份和l-甲基硒代半胱氨酸，所述l-甲基硒代半胱氨酸为经过二次包埋和稀释后的微囊微末，其中硒的质量分数为1‰。一种增强抗肿瘤和抗氧化活性的三叶青复方组合物的制备方法，其特征在于，包括以下工艺步骤：s1.将三叶青1000g，夏枯草200g、莪术200g、仙鹤草200g分别粉碎、干燥、混匀后得三叶青复方粉末；s2.准确称取步骤s1得到的三叶青复方粉末500g，采用多极性分级提取法，按1:15：15：15的料液比依次加入95％乙醇、60％乙醇和30％乙醇，并依次在70℃下间歇式聚能超声1h，合并提取液，过滤，滤液浓缩为浸膏，获得不同醇溶度活性组分；s3.将上述滤渣，按1:10料液比加入蒸馏水，在80℃下间歇式聚能超声提取1h，过滤，滤液浓缩为浸膏，获得水溶性活性组分；s4.将上述醇溶和水溶浸膏混合均匀，按1:2的料液比(g浸膏/ml水)复溶，并按5％重量份的辅料比添加麦芽糊精，溶解、混合，在进风温度180℃、出风温度90℃下喷雾干燥得到粉末；s5.将所得上述喷雾干燥粉末与l-甲基硒代半胱氨酸微囊微末(含硒1‰)和辅料(淀粉和硬脂酸镁)混合，得三叶青复方组合物。本实施例中的组合物制成胶囊剂。功效成分含量为：总酚200mggae/g、总黄酮120mggae/g、多糖160mg/g和硒0.1042mg/g。其每日功效成分每日食用量：总酚：480mg；总黄酮：288mg；总多糖：384mg；硒：250.08μg。动物实验最终每100g三叶青富硒复方产品各种添加物含量：三叶青复方提取物：70g；有机硒(1:1000包埋后)：24g；淀粉：4g；硬脂酸镁：2g。其功效成分含量：总酚150-200mggae/g、总黄酮60-120mggae/g、多糖100-160mg/g和硒0.1042mg/g。其每日功效成分每日食用量：其每日功效成分每日食用量：总酚：360-480mg；总黄酮：144-288mg；总多糖：240-384mg；硒：250.08μg。采用建模成功的h22荷瘤小鼠25只，体重20±2g，随机分成5组，每组5只，组间小鼠体重无显著性差异。第一组：模型组；给予相应体积蒸馏水；第二组：阳性对照组(环磷酰胺)；25mg/kgbw第三组：三叶青富硒复方低剂量组；250mg/kgbw；第四组：三叶青富硒复方中剂量组；500mg/kgbw；第五组：三叶青富硒复方高剂量组；1000mg/kgbw；小鼠自由饮水摄食。按照分组，每只动物每日灌胃0.4ml的不同物质，连续灌胃15天。并于第16天处死，并测定荷瘤小鼠的体重变化、抑瘤率以及对小鼠肿瘤组织形态学的影响，结果如表1、2所示。表1荷瘤小鼠的初体重和末体重注：同列中肩注不同字母者表示组间有显著性差异(p<0.05)表2各组小鼠肿瘤质量及抑制率比较注：同列中肩注不同字母者表示组间有显著性差异(p<0.05)通过对荷瘤小鼠灌胃低中高剂量的三叶青富硒复方组合物后，小鼠的生长状态良好，正常的生理活动没有改变。根据末体重/初体重是否大于0.80来判断有无毒性，可知环磷酰胺组、产品各剂量组(1.24、1.37、1.44和1.38)均大于0.80，说明各组处理对小鼠体重的影响并不显著。说明三叶青富硒复方产品对实验小鼠无毒副作用性，较为安全。此外结果显示，模型组小鼠肿瘤的平均重量为3.91g。给予环磷酰胺(25mg/kgbw)和各产品组灌胃后，肿瘤的大小和质量有了显著变化，其中产品低中高剂量组分别为3.15，2.67g和2.32g。肿瘤抑制率分别为51.92％、19.50％、31.62％和40.74％。结果表明本复方产品能显著地抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长并且诱导其肿瘤细胞的凋亡。由结果可判定该复方产品抗肿瘤功能阳性，产品具有抗肿瘤功能。三叶青富硒复方产品对h22荷瘤小鼠的免疫活性的影响：最终每100g三叶青富硒复方产品各种添加物含量：三叶青复方提取物：70g；有机硒(1:1000包埋后)：24g；淀粉：4g；硬脂酸镁：2g。其功效成分含量：总酚150-200mggae/g、总黄酮60-120mggae/g、多糖100-160mg/g和硒0.1042mg/g。其每日功效成分每日食用量：其每日功效成分每日食用量：总酚：360-480mg；总黄酮：144-288mg；总多糖：240-384mg；硒：250.08μg。采用建模成功的h22荷瘤小鼠25只，体重20±2g，随机分成5组，每组5只，组间小鼠体重无显著性差异。第一组：模型组；给予相应体积蒸馏水；第二组：阳性对照组(环磷酰胺)；25mg/kgbw第三组：三叶青富硒复方低剂量组；250mg/kgbw；第四组：三叶青富硒复方中剂量组；500mg/kgbw；第五组：三叶青富硒复方高剂量组；1000mg/kgbw；小鼠自由饮水摄食。按照分组，每只动物每日灌胃0.4ml的不同物质，连续灌胃15天。并于第16天处死，并测定荷瘤小鼠的各脏器指数的变化，结果如表。表3胸腺和脾脏重量及脏器指数table3thymusandspleenweightandorganindexofh22tumor-bearingmice.a注：同列中肩注不同字母者表示组间有显著性差异(p<0.05)免疫器官是动物体内细胞免疫和体液免疫的基础，通过免疫器官指数的变化可以初步判断机体免疫功能的变化，而体内最主要的免疫器官是胸腺和脾脏。结果表明，模型组小鼠的胸腺受到肿瘤细胞的攻击引起组织损害，出现一定程度的萎缩。而三叶青富硒复方产品各剂量组的胸腺指数和脾脏指数都有一定程度的上升，表明富硒复方产品对胸腺和脾脏组织有一定的改善和保护作用，使免疫器官内淋巴细胞免受肿瘤细胞的影响和攻击，促进淋巴细胞成熟和增殖，发挥对肿瘤的抑制作用。三叶青富硒复方产品对h22荷瘤小鼠的抗氧化活性的影响：最终每100g三叶青富硒复方产品各种添加物含量：三叶青复方提取物：70g；有机硒(1:1000包埋后)：24g；淀粉：4g；硬脂酸镁：2g。其功效成分含量：总酚150-200mggae/g、总黄酮60-120mggae/g、多糖100-160mg/g和硒0.1042mg/g。其每日功效成分每日食用量：其每日功效成分每日食用量：总酚：360-480mg；总黄酮：144-288mg；总多糖：240-384mg；硒：250.08μg。采用建模成功的h22荷瘤小鼠25只，体重20±2g，随机分成5组，每组5只，组间小鼠体重无显著性差异。第一组：模型组；给予相应体积蒸馏水；第二组：阳性对照组(环磷酰胺)；25mg/kgbw第三组：三叶青富硒复方低剂量组；250mg/kgbw；第四组：三叶青富硒复方中剂量组；500mg/kgbw；第五组：三叶青富硒复方高剂量组；1000mg/kgbw；小鼠自由饮水摄食。按照分组，每只动物每日灌胃0.4ml的不同物质，连续灌胃15天。并于第16天处死，并测定荷瘤小鼠的血浆中的sod和gsh-px活性和mda的含量的变化，结果如图1、2和3所示。图1示出了各组对荷瘤小鼠血浆中mda含量的影响，图中model指模型组；ctx(25mg/kg)指环磷酰胺组；syq(250，500和1000mg/kg)分别指产品低、中和高剂量组。图2示出了各组对荷瘤小鼠血浆中sod影响，图中model指模型组；ctx(25mg/kg)指环磷酰胺组；syq(250，500和1000mg/kg)分别指产品低、中和高剂量组。图3示出了各组对荷瘤小鼠血浆中gsh-px活力的影响，图中model指模型组；ctx(25mg/kg)指环磷酰胺组；syq(250，500和1000mg/kg)分别指产品低、中和高剂量组。内源性的抗氧化酶(如sod和gsh-px等)是一种非常重要的机体的抗氧化防御机制。天然植物化学物可以通过增加它们的活力，来达到防止氧化损伤从而预防细胞癌变的目的。此外，脂质过氧化可以引起氧化应激，而mda是脂质过氧化的一种生物标志物。因此，通过测量mda的含量，sod和gsh-px的活力来判断机体的氧化应激水平。本研究中，三叶青富硒复方产品能够显著降低mda的含量以及提高sod和gsh-px的活性，从而提高机体整体抗氧化水平，预防由氧化应激引起的生物损伤，从而预防癌症发生。由结果可判定该复方产品抗氧化功能阳性，产品具有抗氧化功能。当前第1页12当前第1页12