新型药物组合物及其用途的制作方法

本发明涉及一种新型药物组合物及其用途。

背景技术：

tp53(或p53)是一种肿瘤抑制因子，在细胞遇到环境压力或基因组不稳定时，其在调控细胞周期、凋亡和防止肿瘤发生方面发挥重要作用。tp53在很多类型的癌症中经常发生突变，且在携带野生型p53基因的癌症中，p53可能由于mdm2(一种调控p53蛋白降解的e3连接酶)的扩增而失活。因此，抑制tp53和mdm2之间的相互作用可以恢复野生型p53的功能，成为癌症治疗的新靶点。

细胞周期蛋白依赖性激酶4(cdk4)是一种ser/thr蛋白激酶，并且是细胞周期蛋白依赖性激酶家族的成员。cdk4在g1-s期发挥重要作用。考虑到cdk4在细胞周期中的重要功能，cdk4基因扩增和过表达很可能在肿瘤发生中起重要作用。口服的高选择性cdk抑制剂，包括帕博西尼(palbociclib)、瑞博西尼(ribociclib)和阿贝西尼(abemaciclib)，代表了肿瘤学中重要的治疗进展。但是这些抑制剂在治疗癌症如去分化脂肪肉瘤方面仍存在一些缺陷。

技术实现要素：

一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包括

(i)式(i)化合物或其药学上可接受的盐；和

(ii)cdk抑制剂或其药学上可接受的盐；

选自

环b为c4-7碳环；

r1为h、取代或未取代的c1-4烷基、取代或未取代的c3-8环烷基、取代或未取代的4-12元杂环烷基、or^a或nr^ar^b；所述杂环烷基的杂原子独立地选自氮、氧和硫，杂原子的数目是1-4个；

n为0、1或2；

r2、r3、r4、r5、r7、r8、r9和r10独立地选自h、f、cl、ch3和cf3；

r6为

每个r^a独立地为h或取代或未取代的c1-4烷基；

每个r^b独立地为h或取代或未取代的c1-4烷基；

r^c和r^d为环b的一个碳原子上的取代基，其中

r^c为h、c1-3烷基、c1-3亚烷基-or^a、or^a或卤素；

r^d为h、c1-3烷基、c1-3亚烷基-or^a、or^a或卤素；或

r^c和r^d与它们所连接的碳原子一起形成4-6元的螺环取代基，任选地包含氧原子；

r^e为-c(＝o)or^a、-c(＝o)nr^ar^b或-c(＝o)nhso2ch3。

在一些实施方案中，为

在一些实施方案中，环b为在一些实施方案中，环b、r^c和r^d为

在一些实施方案中，r^c和r^d独立地为h、卤素、oh、ch3、ch2ch3或ch2oh。在一些实施方案中，r^c和r^d为f和f；h和h；oh和ch3；oh和h；ch3和ch3；ch3和oh；h和oh；ch2ch3和ch2ch3；或，ch2oh和ch2oh。

在一些实施方案中，r^c和r^d与环b一起形成螺环，所述螺环选自

在一些实施方案中，r^c和r^d与环b一起形成

在一些实施方案中，r^a和r^b独立地为h、ch3或ch2ch3。

在一些实施方案中，r⁶为

在一些实施方案中，n为0或1。在一些实施方案中，r1为h或ch3。在一些实施方案中，为h、ch3或ch2ch3。

在一些实施方案中，r2为h。

在一些实施方案中，r4为h。在一些实施方案中，r5为h。在一些实施方案中，r3为卤素，优选为氯。

在一些实施方案中，r4和r5为h。

在一些实施方案中，r7为氟。

在一些实施方案中，r8、r9和r10均为h。

在一些实施方案中，r^e为-c(＝o)oh、-c(＝o)nh2或-c(＝o)nhso2ch3。

在一些实施方案中，所述式(i)化合物选自

在一些实施方案中，所述式(i)化合物为(化学名称为4-((3’r,4’s,5’r)-6”-氯-4’-(3-氯-2-氟苯基)-1’-乙基-2”-氧代二螺环[环己烷-1,2’-吡咯烷-3’,3”-吲哚啉]-5’-甲酰胺基)双环[2.2.2]辛烷-1-羧酸)。

另一方面，本发明提供了一种药物组合，其包括

(i)式(i)化合物或其药学上可接受的盐；和

(ii)cdk抑制剂或其药学上可接受的盐。

在上述药物组合物或药物组合中，组分(i)(即式(i)化合物)和组分(ii)(即cdk抑制剂)可以存在于一种单位剂型中，或者分开存在于两种或更多的单位剂型中。所述单位剂型也可以是一种固定组合。

本发明还提供了一种试剂盒，其包含在单个包装中独立容器内的药物组合物，该药物组合物包括在第一容器中的含有式(i)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，以及在第二容器中的含有cdk抑制剂或其药学上可接受的盐的药物组合物。当各组分需要以不同的剂型(例如式(i)化合物的口服制剂和cdk抑制剂的肠外给药制剂)或在不同的时间间隔(例如式(i)的化合物是每两天施用一次，而cdk抑制剂是每天施用一次)施用时，该试剂盒形式有很大的优势。

另一方面，本发明提供了一种所述药物组合物或药物组合在制备用于预防和/或治疗由mdm2和/或cdk活性介导的疾病的药物中的用途。

另一方面，本发明提供了一种预防和/或治疗由mdm2和/或cdk活性介导的疾病的方法，其包括向有此需要的受试者给予治疗有效量的所述药物组合物或药物组合。本发明的药物组合物或药物组合的每种组分可以同时或以任何顺序分开施用。

另一方面，本发明提供了一种预防和/或治疗由mdm2和/或cdk活性介导的疾病的方法，其包括向有此需要的受试者给予治疗有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，以及治疗有效量的cdk抑制剂或其药学上可接受的盐。所述式(i)化合物和cdk抑制剂可以同时或以任何顺序分开施用。

所述cdk抑制剂可以选自肯帕罗酮(kenpaullone)、丁内酯i(butyrolactonei)、夫拉平度(即flavopiridol或alvocidib)(例如，夫拉平度盐酸盐)、n9-异丙基-奥罗莫星(n9-isopropyl-olomoucine)、靛玉红-3'-单肟(indirubin-3’-monoxime)、nu2058、olomoucineii、9-cyanopaullone、5-碘-靛玉红-3'-单肟(5-iodo-indirubin-3’-monoxime)、nu6102、oxindolei、su9516、roscovitine、ro-3306、10z-hymenialdisine、azd5438、at7519、at7519hcl、dinaciclib、r547、cgp74514a、sns-032(bms-387032)、xl413(bms-863233)、bms-265246、jnj-7706621、pha-793887、p276-00、pha-767491、milciclib(pha-848125)、nu6027、ldc000067、ldc4297(ldc044297)、mk-8776(sch900776)、atuveciclib(bay-1143572)、skp2抑制剂c1(skpinc1)、bs-181-hcl、thz12hcl、senexina、msc2530818、汉黄芩素(wogonin)、purvalanola、ly2857785、k03861、ml167、on123300、瑞博西尼(ribociclib，)、帕博西尼(palbociclib，)和阿贝西尼(abemaciclib，)中的一种或多种。

在一些实施方案中，所述cdk抑制剂为cdk4和/或cdk6抑制剂，例如化合物a(也称为瑞博西尼)和/或化合物b(也称为帕博西尼)：

在一些实施方案中，所述cdk抑制剂为化合物a或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，所述cdk抑制剂为化合物b或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，所述式(i)化合物为化合物c或其药学上可接受的盐，且所述cdk抑制剂为化合物a或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，所述式(i)化合物为化合物c或其药学上可接受的盐，且所述cdk抑制剂为化合物b或其药学上可接受的盐。

所述由mdm2和/或cdk活性介导的疾病可以为癌症。所述癌症包括但不限于肾上腺皮质癌、晚期癌症、肛门癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、成人脑/中枢神经系统肿瘤、儿童脑/中枢神经系统肿瘤、乳腺癌，男性乳腺癌、儿童癌症、原发灶不明癌、巨大淋巴结增生症(castlemandisease)、宫颈癌、结肠/直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(ewingfamilyoftumor)、眼癌、胆囊癌、胃肠道类癌瘤(gastrointestinalcarcinoidtumor)、胃肠道间质瘤(gist)、妊娠滋养细胞疾病、霍奇金病(hodgkindisease)、卡波西肉瘤(kaposisarcoma)、肾癌、喉癌和下咽癌、成人急性淋巴细胞白血病(all)、急性髓细胞性白血病(aml)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性髓细胞性白血病(cml)、慢性髓单核细胞白血病(cmml)、儿童白血病、肝癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺类癌瘤、皮肤淋巴瘤、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合症、鼻腔鼻窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、儿童非霍奇金淋巴瘤、口腔口咽癌、骨肉瘤、脂肪肉瘤(例如高分化脂肪肉瘤或去分化脂肪肉瘤)、平滑肌肉瘤、肺泡横纹肌肉瘤和胚胎型横纹肌肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、阴茎癌、垂体瘤、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、成人软组织肉瘤、皮肤基底细胞癌和鳞状细胞癌、皮肤癌-黑色素瘤、小肠癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌、华氏巨球蛋白血症和肾母细胞瘤。

在一些实施方案中，所述由mdm2和/或cdk活性介导的疾病为平滑肌肉瘤、肺泡横纹肌肉瘤、胚胎型横纹肌肉瘤、高分化脂肪肉瘤或去分化脂肪肉瘤。在一些实施方案中，所述由mdm2和/或cdk活性介导的疾病为去分化脂肪肉瘤。在一些实施方案中，所述由mdm2和/或cdk活性介导的疾病为高分化脂肪肉瘤。

本发明还提供了一种预防和/或治疗癌症的方法，其包括向有此需要的受试者给予治疗有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，和治疗有效量的cdk抑制剂或其药学上可接受的盐。所述癌症包括但不限于肾上腺皮质癌、晚期癌症、肛门癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、成人脑/中枢神经系统肿瘤、儿童脑/中枢神经系统肿瘤、乳腺癌，男性乳腺癌、儿童癌症、原发灶不明癌、巨大淋巴结增生症(castlemandisease)、宫颈癌、结肠/直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(ewingfamilyoftumor)、眼癌、胆囊癌、胃肠道类癌瘤(gastrointestinalcarcinoidtumor)、胃肠道间质瘤(gist)、妊娠滋养细胞疾病、霍奇金病(hodgkindisease)、卡波西肉瘤(kaposisarcoma)、肾癌、喉癌和下咽癌、成人急性淋巴细胞白血病(all)、急性髓细胞性白血病(aml)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性髓细胞白血病(cml)、慢性髓单核细胞白血病(cmml)、儿童白血病、肝癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺类癌瘤、皮肤淋巴瘤、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合症、鼻腔鼻窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、儿童非霍奇金淋巴瘤、口腔口咽癌、骨肉瘤、脂肪肉瘤(例如高分化脂肪肉瘤或去分化脂肪肉瘤)、平滑肌肉瘤、肺泡横纹肌肉瘤和胚胎型横纹肌肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、阴茎癌、垂体瘤、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、成人软组织肉瘤、皮肤基底细胞癌和鳞状细胞癌、皮肤癌-黑色素瘤、小肠癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌、华氏巨球蛋白血症和肾母细胞瘤。

本发明的药物组合物或药物组合还可包含药物载体。

在上述药物组合物或药物组合中，所述式(i)化合物与cdk抑制剂的重量比可为50:1至1:50，例如50:1、45:1、40:1、35:1、30:1、25:1、20:1、15:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、0.8:1、1:1、1.6:1、8:15、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35、1:40、1:45或1:50。

治疗有效量的式(i)化合物和cdk抑制剂可以50:1至1:50(例如50:1、45:1、40:1、35:1、30:1、25:1、20:1、15:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、0.8:1、1:1、1.6:1、8:15、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35、1:40、1:45或1:50)的重量比给予受试者。

在一些实施方案中，所述式(i)化合物(例如化合物c)和cdk抑制剂(例如帕博西尼)可以1.6:1的重量比给予受试者。在一些实施方案中，所述式(i)化合物和cdk抑制剂(例如帕博西尼)可以0.8:1的重量比给予受试者。在一些实施方案中，所述式(i)化合物(例如化合物c)和cdk抑制剂(例如帕博西尼)可以2:1的重量比给予受试者。

在一些实施方案中，所述式(i)化合物(例如化合物c)和cdk抑制剂(例如瑞博西尼)可以8:15的重量比给予受试者。

本发明化合物的剂量优选为治疗有效量，尤其是市场上已有的剂量。

化合物或组合物的“治疗有效量”是指足以治愈、减轻或部分抑制特定疾病或病症及其并发症的临床表现的量。某一特定治疗目的的治疗有效量将取决于疾病或损伤的严重程度以及受试者的体重和一般状态。应当理解，合适的剂量可以通过使用常规实验确定，如通过构建值矩阵并测试矩阵中的不同点来确定合适的剂量，所有这些都是在受过训练的医师或临床科学家的普通技能范围内。应当理解，每一单位剂型中包含的每种活性成分的含量本身不需要构成治疗有效量，因为可以通过施用多个该单位剂型来达到需要的治疗有效量。

例如，作为本发明药物组合物或药物组合的一部分的式(i)化合物可以1-1000mg(例如1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475或500mg)的剂量经口服给予受试者。在一些实施方案中，作为本发明的药物组合物或药物组合的一部分的式(i)化合物(例如化合物c)可以经口服给予受试者(例如人)，剂量可为1-500mg，例如1-200mg，例如100-200mg，例如150-200mg。上述剂量可以每天施用一次、两次或三次。上述剂量也可以每两天施用一次。例如，式(i)化合物可以1-500mg(例如1-200mg，例如100-200mg，例如150-200mg)的剂量经口服给予受试者，每两天一次。

例如，作为本发明药物组合物或药物组合的一部分的cdk抑制剂(如化合物a或化合物b)可以0.1-1000mg(例如0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475或500mg)的剂量经口服给予受试者。上述剂量可以每天施用一次、两次或三次。例如，cdk抑制剂(如化合物a或化合物b)可以每天经口服施用一次。

所述式(i)化合物已在wo2015161032a1中公开，其全文通过引用并入本文中。

所述式(i)化合物和cdk抑制剂可以同时或以任何顺序分开施用。“同时”是指在同一时间点施用。如果不同时施用，则意味着它们依次给予受试者，并且在时间上足够接近从而它们能够共同作用以达到期望的治疗效果。例如，cdk抑制剂可以在施用式(i)化合物之前(例如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之前)、同时或之后(例如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之后)给予有需要的受试者。在各种实施方案中，cdk抑制剂和式(i)化合物可以间隔1分钟、间隔10分钟、间隔30分钟、间隔小于1小时、间隔1小时、间隔1小时至2小时、间隔2小时至3小时、间隔3小时至4小时、间隔4小时至5小时、间隔5小时至6小时、间隔6小时至7小时、间隔7小时至8小时、间隔8小时至9小时、间隔9小时至10小时、间隔10小时至11小时、间隔11小时至12小时、间隔不超过24小时或间隔不超过48小时施用。

本发明化合物可以经口服施用。口服施用可涉及吞咽使得化合物进入胃肠道、和/或经颊、舌或舌下施用，藉此化合物直接从口腔进入血液。例如，式(i)化合物可以经口服施用。例如，cdk抑制剂(如化合物a或化合物b)可以经口服施用。

适于口服给药的制剂包括固体、半固体和液体体系，例如片剂，含有多纳米微粒、液体或粉末的软或硬胶囊，锭剂(包括液体填充的)，咀嚼剂，凝胶剂，快速分散剂型，膜剂，胚珠剂型(ovules)，喷雾剂，和颊/黏附贴剂。此外，本发明的化合物可以喷雾干燥分散体的形式施用。用于口服给药的固体制剂可以配制成立即和/或调控释放。调控释放制剂包括延迟、持续、脉冲、控制、靶向和程序释放。

液体制剂包括悬浮液、溶液、糖浆和酏剂。此类制剂可用作软或硬胶囊(例如由明胶或羟丙基甲基纤维素制成)中的填料，并且通常包含载体，例如水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纤维素或合适的油，和一种或多种乳化剂和/或悬浮剂。液体制剂也可以通过固体(例如从药囊中)的重制(reconstitution)来制备。

本发明的化合物也可以直接给予至血液、肌肉或内脏器官中。用于肠外给药的合适方式包括静脉内、动脉内、腹腔内、鞘内、心或脑室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内、滑膜内和皮下。用于肠外给药的合适装置包括针(包括微针)注射器、无针注射器和输液技术。肠外制剂通常是水溶液，其可以含有赋形剂，例如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选ph值为3至9)，但是对于某些应用而言，它们可能更适合配制成无菌非水溶液，或作成干燥形式与适当的赋形剂(如无菌、无热原的水)一起使用。

用于肠外给药的制剂可以配制成立即和/或调控释放。调控释放制剂包括延迟、持续、脉冲、控制、靶向和程序释放。因此，本发明的化合物可以配制成悬浮液或固体、半固体或触变液体，作为植入贮库提供活性化合物的调控释放。此类制剂的实例包括药物涂层支架和包含载药聚(dl-乳酸-乙醇酸共聚物)(pgla)微球的半固体和悬浮液。

本发明的化合物也可以经局部、经皮内或经皮肤施用于皮肤或粘膜。用于该目的典型制剂包括凝胶、水凝胶、洗剂、溶液、面霜、软膏、撒粉、敷料、泡沫、薄膜、皮肤贴片、薄片、植入物、海绵、纤维、绷带和微乳液。也可以使用脂质体。典型的载体包括酒精、水、矿物油、液体矿脂、白矿脂、甘油、聚乙二醇和丙二醇。可以掺入渗透促进剂，参见，例如，jpharmsci,88(10),955-958,finnin和morgan(1999年10月)。

用于局部给药的制剂可以配制成立即和/或调控释放。调控释放制剂包括延迟、持续、脉冲、控制、靶向和程序释放。

术语“载体”是指与化合物一起施用的稀释剂、佐剂或赋形剂。合适的药物载体在e.w.martin的“remington'spharmaceuticalsciences”中有描述。典型的药用载体如下：糖如乳糖、蔗糖、甘露醇和山梨醇；淀粉如玉米淀粉、木薯淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；钙的磷酸盐如磷酸氢钙和磷酸三钙；硫酸钠；硫酸钙；聚乙烯吡咯烷酮；聚乙烯醇；硬脂酸；碱土金属的硬脂酸盐如硬脂酸镁和硬脂酸钙；硬脂酸；植物油如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油和玉米油；非离子、阳离子和阴离子表面活性剂；乙二醇聚合物；β-环糊精；脂肪醇；水解的谷物固体；以及其他无毒的相容的填充剂、粘合剂、崩解剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、调味剂等常用于药物制剂中的载体。

术语“药物组合”在此用于表示一种包含本发明的活性成分(例如化合物c、cdk抑制剂)的产品。药物组合所包含的活性成分可以存在于单一实体(例如单一剂型，例如一个注射剂、一个片剂或一个胶囊)中，因此它们可以同时施用于受试者。药物组合所包含的活性成分也可以分开地存在于单独的实体中(例如，一种活性成分存在于片剂中，而另一种活性成分存在于胶囊中)，因此它们可以彼此独立地施用于受试者，无论是同时施用还是无时间限制地分开施用。如果药物组合包含的活性成分分开地存在于单独的实体中，则它们可以彼此独立地出售，并且仅在包装(例如传单等)或其他信息(例如提供给医师和医务人员的信息，例如口头交流)中提供有关它们组合使用可能性的说明。

术语“组合”在此用于表示同时施用、或以任何方式按次序分别施用治疗有效量的式(i)化合物和cdk抑制剂或其药物上可接受的盐。优选地，如果不是同时施用，则化合物在彼此接近的时间内施用。此外，化合物是否以相同的剂型施用是无关紧要的，例如，一种化合物可以局部施用且另一种化合物可以口服施用。适当地，两种化合物均口服施用。

本文中使用的术语“协同作用”是指使用本发明的方法、组合和组合物实现的效果大于分别单独使用包含本发明活性成分的各个方法和组合物的效果之和。本文通过clarker.issuesinexperimentaldesignandendpointanalysisinthestudyofexperimentalcytotoxicagentsinvivoinbreastcancerandothermodels[j].breastcancerresearch&treatment,1997,46(2-3):255-278描述的方法评价组合的协同作用，其全文通过引用并入本文中。另见gouldseetal.translationalvalueofmousemodelsinoncologydrugdevelopment.naturemedicine.201521,431-439，其全文通过引用并入本文中。

术语“药学上可接受的盐”是指常用于制药工业的无毒盐，其可以根据本领域熟知的方法制备。

本文中所使用的术语“药学上可接受的”是指那些在合理的医学判断范围内，适于接触哺乳动物，尤其是人类的组织，而没有过度的毒性、刺激性、过敏反应或其它有问题的并发症，具有合理的利益/风险比的化合物、材料、组合物和/或剂型。

术语“预防”是指对健康患者进行预防性治疗，以防止形成本文提及的病症。此外，“预防”一词还指对处于所要治疗疾病前期的患者预防性地给药。

术语“治疗”指对患者的管理和护理以达到对抗疾病、病症或病症的目的。

术语“受试者”指任何动物，包括哺乳动物，例如小鼠、大鼠、其他啮齿动物、兔、狗、猫、猪、牛、绵羊、马、灵长类动物或人。优选的受试者是人。

术语“cdk”是“细胞周期蛋白依赖性激酶”的缩写，指能够与细胞周期蛋白络合并能够催化底物磷酸化的蛋白质家族。细胞周期蛋白依赖性激酶(也称为cdks)是本领域已知的，包括例如cdk1、cdk2、cdk3、cdk4、cdk5、cdk6、cdk7、cdk8和cdk9。

术语“cdk抑制剂”是指能够降低或抑制(部分或完全)cdk活性的任何化合物。cdk抑制剂可以直接或间接降低或抑制一种或多种特定cdk的活性。例如，cdk4和cdk6的抑制剂可以同时抑制cdk4和cdk6的活性。

术语“由mdm2介导的疾病”是指某一疾病，其中mdm2的活性导致调控通路的异常活性，包括过表达、突变或细胞内其他调控通路活性的相对缺乏，引起细胞过度增殖，例如癌症。。

术语“cdk介导的疾病”是指某一疾病，其中cdk的活性导致调控通路的异常活性，包括过表达、突变或细胞内其他调控通路活性的相对缺乏，引起细胞过度增殖，例如癌症。

术语“容器”是指适用于储存、运输、分配和/或处理药品的任何容器和封盖。

除非另有说明，术语“一个”、“一种”、“所述”和在本发明的上下文中(特别是权利要求的内容中)类似的用语，应被理解为涵盖单数和复数。除非另有说明外，本文对数值范围的表述仅旨在用作分别单独提及落入该范围的每个单独值的简写方法，并且落入数值范围的每个单独值被并入说明书中，如同其在本文中单独地被描述一样。除非另有说明外，本文提供的任何和所有示例或示例性语言(例如，“例如”)的使用旨在更好地说明本发明，而不对本发明的范围构成限制。说明书中的语言不应被解释为指示任何未要求保护的元件对于实施本发明是必要的。

药物组合物和制剂可以通过常规的混合、制粒、制糖衣、溶解或冻干的方法制造。

本发明的化合物可以以药学上可接受的盐存在。如果这些化合物具有例如至少一个碱性中心，则它们可以形成酸加成盐。如果需要，还可以形成具有另外存在的碱性中心的相应酸加成盐。具有至少一个酸性基团(例如cooh)的化合物也可以与碱形成盐。如果化合物包括例如羧基和氨基，则可进一步形成相应的内盐。

本发明的化合物可以水合物的形式存在，或者其它溶剂化形式存在。

本发明的化合物可以以一种或多种多晶型的形式存在。

本发明还包括化合物的所有可能的立体异构体和几何异构体。本发明包括外消旋化合物和光学活性异构体。当化合物需要作为单一对映体时，可通过最终产物的拆分或通过异构纯起始材料的立体定向合成或使用手性辅助试剂来获得，例如，参见z.ma等，tetrahedron:asymmetry,8(6),883-888(1997)。最终产物、中间体或原料的拆分可通过本领域已知的任何合适方法实现。另外，在式(i)化合物的互变异构体是可能存在的情况下，本发明旨在包括化合物的所有互变异构形式。

本发明包括所有药学上可接受的同位素标记的化合物，例如式(i)化合物，其中一个或多个原子被具有相同原子序数但不同于通常在自然界中发现的原子质量或质量数的原子取代。

适合包含在本发明化合物中的同位素的实例包括氢的同位素，例如²h和³h；碳，例如¹¹c、¹³c和¹⁴c；氮，例如¹³n和¹⁵n；氧，例如¹⁵o、¹⁷o和¹⁸o。

用较重的同位素如氘(即²h)替代可能由于代谢稳定性更高带来某些治疗优势，例如体内半衰期增加或所需剂量减少，因此在某些情况下可能是优选的。

本发明化合物可以前药形式存在。因此，当施用到身体内或身体上时，某些可能几乎没有或没有药理活性的衍生物可以转化成具有所需活性的本发明化合物，例如通过水解裂解，可将其转化为具有所需活性的本发明化合物。这种衍生物被称为“前药”。关于前药的更多信息，可参照‘pro-drugsasnoveldeliverysystems,vol.14,acssymposiumseries(thiguchi和wstella)和‘bioreversiblecarriersindrugdesign’,pergamonpress,1987(ed.ebroche,americanpharmaceuticalassociation)。

例如，前药可以通过将本发明化合物中存在的适当官能团替换为本领域技术人员已知的某些部分作为“前体部分”来制备，例如“designofprodrugs”，hbundgaard(elsevier,1985)中所述。

此类前药的一些实例包括：

(i)若化合物含有醇官能团(-oh)，其醚，例如，用(c1-c6)烷酰氧基甲基替代氢；

(ii)如果化合物包含二级氨基官能团，其酰胺，例如，用(c1-c10)烷酰基取代氢。

如本文所用，术语“烷基”是指直链和支链的饱和烃基，包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、2,2-二甲基丙基、正己基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,2-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基和2-乙基丁基。术语cm-n是指烷基具有“m”至“n”个碳原子。术语“亚烷基”是指具有取代基的烷基。烷基，例如甲基或亚烷基，例如-ch2-，可以被一个或多个(通常是1-3个)独立选自卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、烷氧基、硝基、氰基、烷基氨基和氨基的基团取代，。

如本文所用，术语“卤代”是指氟、氯、溴和碘。

术语“羟基”是指-oh。

术语“烷氧基”是指-or，其中r是烷基。

术语“氨基”是指-nh2，并且术语“烷基氨基”是指-nr2，其中至少一个r为烷基，第二个r为烷基或氢。

术语“氨基甲酰基”是指-c(＝o)nr2。术语“硝基”是指-no2。

术语“氰基”是指-cn。

术语“三氟甲基”定义为-cf3。

术语“三氟甲氧基”定义为-ocf3。

如本文所用，术语“芳基”是指单环或多环芳族基团，优选单环或双环芳族基团。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、芴基、薁基、蒽基、菲基、芘基、联苯基和三联苯基。芳基还指双环和三环碳环，其中一个环为芳香性的而另一个为饱和、部分不饱和或芳香性的，例如二氢萘基、茚基、茚满基或四氢萘基。除非另有说明，芳基可以是未取代的或被一个或多个(特别是1-4个)独立选自例如卤素、烷基、烯基、-ocf3、-no2、-cn、-nc、-oh、烷氧基、氨基、烷基氨基、-co2h、-co2烷基、-oco烷基、芳基和杂芳基的基团取代。

如本文所用，术语“杂环的”是指杂芳基和杂环烷基的环系。

如本文所用，术语“杂芳基”是指包含一个或两个芳环并且在芳环中包含至少一个氮、氧或硫原子的单环或双环系统。杂芳基的每个环可以包含一个或两个o原子，一个或两个s原子和/或1-4个n原子，前提是每个环中的杂原子总数少于四个并且每个环包含至少一个碳原子。在某些实施方案中，杂芳基具有5至20、5至15或5至10个环原子。单环杂芳基的实例包括但不限于呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异恶唑基、恶二唑基、恶唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基和三唑基。双环杂芳基基团的实例包括但不限于苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并异恶唑基、苯并吡喃基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并三唑基、苯并恶唑基、呋喃并吡啶基、咪唑并吡啶基、咪唑并噻唑基、吲哚嗪基、吲哚基、吲唑基、异苯并呋喃基、异苯并噻吩基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、萘啶基、恶唑并吡啶基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡啶并吡啶基、吡咯并吡啶基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噻二唑并嘧啶基和噻吩并吡啶基。除非另有说明，杂芳基可以是未取代的或被一个或多个(特别是1-4个)独立选自例如卤素、烷基、烯基、-ocf3、-no2、-cn、-nc、-oh、烷氧基、氨基、烷基氨基、-co2h、-co2烷基、-oco烷基、芳基和杂芳基的基团取代。

如本文所用，术语“环烷基”是指含有三至八个碳原子的、单环或双环的、饱和或部分不饱和的环状系统，包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基，任选地被一个或多个(通常是1-3个)独立选自卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、烷氧基、硝基、氰基、烷基氨基或氨基的基团取代。

如本文所用，术语“杂环烷基”是指含有4至12个原子的、单环或双环的、饱和或部分不饱和的环状系统，其中1-5个原子独立地选自氮、氧和硫且其余原子为碳。杂环烷基的非限制性实例是氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、二氢吡咯基、吗啉基、硫代吗啉基、二氢吡啶基、氧杂环庚基、二氧杂环庚基、硫代环庚基、二氮杂环庚基，各自任选被一个或多个(通常是1-3个)独立选自卤素、c1-6烷基、c1-6烷氧基、氰基、氨基、氨基甲酰基、硝基、羧基、c2-7烯基、c2-7炔基等基团取代。

缩写“p.o”(即口服)，“q.d”或“qd”(即每天一次)，“q.2d”或“q2d”(即每两天一次)等以其一般含义用于描述给药途径或给药方案。

本文中引用的所有出版物和专利申请均通过将其全文以引用的方式并入本文中，如同每个单独的出版物或专利申请被具体地和单独地指明通过引用并入。

本领域技术人员完全能够选择相关的测试模型来证明本发明的组合物在上述和以下所示的治疗适应症中的疗效。代表性的研究采用了式(i)化合物和帕博西尼或瑞博西尼的组合。

令人惊讶地发现，在脂肪肉瘤患者来源的异种移植模型中，与单独施用化合物c或帕博西尼相比，化合物c和帕博西尼的组合达到了更好的治疗效果，显著降低了肿瘤生长并提高了缓解率，显示出显著的协同效应。

进一步的优势可以是，根据本发明的组合可减少单个药物的剂量，例如，剂量不仅可以减少，而且应用的频率也能降低，或者可用于减少副作用。

附图说明

图1示出了实施例2中化合物c作为单一药剂或与帕博西尼组合在脂肪肉瘤患者来源异种移植模型中的抗肿瘤活性(平均值±sem)。

图2示出了实施例2中化合物c和帕博西尼治疗载有脂肪肉瘤患者异种移植瘤的小鼠的体重变化(％)(平均值±sem)。

图3示出了实施例3中化合物c作为单一药剂或与帕博西尼、瑞博西尼组合在脂肪肉瘤患者来源异种移植模型中的抗肿瘤活性(平均值±sem)。

图4示出了实施例3中化合物c、帕博西尼、瑞博西尼或其组合治疗载有脂肪肉瘤患者来源异种移植瘤的小鼠的体重变化(％)(平均值±sem)。

图5示出了实施例4中化合物c、帕博西尼或其组合治疗载有肺癌患者来源异种移植瘤的小鼠的体重变化(％)(平均值±sem)。

图6示出了实施例4中化合物c作为单一药剂或与帕博西尼组合在肺癌患者来源异种移植模型中的抗肿瘤活性(平均值±sem)。

具体实施方式

以下实施例进一步说明本发明，但本发明不限于此。

实施例1：化合物c的合成

化合物c的合成参照wo2015161032a1。

实施例2：化合物c作为单一药剂或与帕博西尼组合在脂肪肉瘤患者来源异种移植模型中的抗肿瘤活性

动物：balb/c裸鼠，雌性，6-8周，重约18-22g。研究总共需要40只小鼠(20+100％)，从上海斯莱克实验动物有限责任公司购买。

脂肪肉瘤患者来源的皮下异种移植(lp-19-0029pdx)模型的建立：lp-19-0029pdx模型最初从手术切除的临床样品(肿瘤类型：脂肪肉瘤；病理诊断：去分化脂肪肉瘤)建立，将其移植于裸鼠体内，定义为第0代(p0)。在小鼠连续移植过程中，p0肿瘤的下一代被定义为第1代(p1)，以此类推。冻存的肿瘤碎片将在nodscid小鼠体内复苏，当肿瘤生长到合适的大小后，再传至balb/c裸鼠体内。p4-p7肿瘤将用于本次研究。

肿瘤植入与动物分组

将lp-19-0029p4肿瘤切片(约30mm³)在小鼠右翼进行皮下接种，以形成肿瘤。当平均肿瘤体积达到约150mm³，开始治疗。使用基于excel的随机化软件，根据肿瘤体积进行分层随机分组。每组5只荷瘤小鼠。按照表1中所示的预定方案将实验样品给予小鼠。

表1分组和给药方案

注：n：动物数量；给药体积：10μl/g，根据体重调整给药体积。如果体重减轻>15％可调整治疗方案。q2d：每两天一次；qd：每天一次。p.o.：口服。

观察

本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有过程均按照药明康德(wuxiapptec)实验动物管理与使用委员会批准的指南执行，遵循国际实验动物管理评估与认证协会(aaalac)的规定。在常规监测时，每天检查肿瘤生长和治疗对动物正常行为的影响，如活动性、食物和水的消耗量(目测)、体重增加/减少(体重每周测量两次)、眼睛/毛发光泽和方案中规定的任何其他异常影响。根据每个亚群内的动物数量记录死亡数和观察到的临床症状。

肿瘤测量和终点

接种肿瘤后，每天检查动物的发病率和死亡率。在常规监测时，检查肿瘤生长和治疗对动物正常行为的任何影响，例如活动性、食物和水的消耗量(目测)、体重增加/减少(体重每周测量两次)、眼睛/头发光泽和其他任何异常影响。根据每个亚群中的动物数量记录死亡数和观察到的临床症状。整个给药过程以及肿瘤和体重测量均在层流柜中进行。

肿瘤体积通过使用卡尺在两个维度上测量，每周两次，并且使用以下公式计算体积(mm³)：

肿瘤体积(mm³)＝0.5a×b²

其中a和b分别是肿瘤的长径和短径。

使用以下公式计算相对肿瘤体积(rtv)：

rtv＝vt/v1

其中v1和vt是治疗第一天(d1)的平均肿瘤体积和某一时间点(dt)的平均肿瘤体积。

协同分数通过clarker.issuesinexperimentaldesignandendpointanalysisinthestudyofexperimentalcytotoxicagentsinvivoinbreastcancerandothermodels[j].breastcancerresearch&treatment,1997,46(2-3):255-278描述的公式计算，其全文通过引用并入本文：

协同分数＝((a/c)×(b/c))/(ab/c)；

其中a为药物a的rtv值；b为药物b的rtv值；c为溶剂对照组的rtv值；ab为a、b联合疗法的rtv值。协同分数：>1表示协同效应，＝1为叠加效应，<1为拮抗效应(参照gouldse等，translationalvalueofmousemodelsinoncologydrugdevelopment.naturemedicine.201521,431-439)。

使用nci的标准方案计算肿瘤参数。肿瘤生长抑制百分比(％t/c)为治疗组肿瘤的平均rtv(t)除以对照组肿瘤的平均rtv(c)×100％。t/c百分比值是抗肿瘤有效性的指标：t/c<42％被认为表示显著抗肿瘤活性(依据nci)。t/c<10％被认为表示高度显著的抗肿瘤活性，并且是nci用于证明临床试验合理性的标准，如果满足毒性和某些其他要求(称为dn-2水平活性)。体重减轻(组的平均值)大于20％，或死亡大于20％被认为表示过度毒性剂量。

统计分析

统计分析各组各时间点的肿瘤体积，包括平均值和平均值的标准差(sem)。根据最终剂量后最佳治疗时间点获得的数据对各组之间的肿瘤体积差异进行统计学分析。采用单因素方差分析比较各组之间的肿瘤体积和肿瘤重量，当获得显著的f-统计量(处理方差与误差方差之比)时，使用games-howell检验进行组间比较。所有数据用spss17.0统计软件进行分析。p<0.05被认为具有统计学意义。

结论

在雌性balb/c裸鼠的脂肪肉瘤患者来源皮下异种移植模型中测试了化合物c与帕博西尼的组合。如图1和表2所示，化合物c以80mg/kg、p.o.给药16天，对脂肪肉瘤有良好的抑制作用，在d21(即第21天)的t/c值为22％(p<0.01)。帕博西尼以50mg/kg(p.o.，q.d×3w)给药显示出中等的抗肿瘤活性，t/c值为70％(p<0.05)。然而，化合物c联合帕博西尼取得了更高的抗肿瘤活性，t/c值为7％(p<0.01)。协同分数为2.21，表明组合疗法产生协同作用。组合治疗后，五分之二的小鼠表现出部分缓解(pr)。如图2所示，所有治疗组动物体重均无明显变化。

表2：在关键时间点的rtv、t/c(％)值和协同得分

实施例3

在实施例2中描述的同一脂肪肉瘤患者来源异种移植模型中，进一步测试了化合物c与两种cdk4/6抑制剂，帕博西尼和瑞博西尼的组合。如图3和表3所示，帕博西尼的剂量为50mg/kg(p.o，q.d×3w)和瑞博西尼剂量为75mg/kg(p.o，q.d×3w)对肿瘤生长的抗肿瘤活性有限，t/c值分别为83.5％(p>0.05)和71.7％(p>0.05)。在d22，剂量为40mg/kg的化合物c(p.o，q.d×3w)表现出较强的抗肿瘤活性，t/c值为38.4％(p<0.05)。化合物c(40mg/kg，p.o，q.2d×3w)和帕博西尼(50mg/kg，p.o，q.d×3w)或瑞博西尼(75mg/kg，p.o，q.d×3w)的组合疗法显著抑制了肿瘤生长，在d22，t/c值分别为16.87％和27.09％。协同分数大于1，证明了化合物c和帕博西尼或瑞博西尼的组合具有协同作用。重要的是，两个组合疗法组均出现部分缓解。如图4所示，在所有治疗组中均未观察到明显的体重变化。

表3：关键时间点rtv、t/c值及协同分数

实施例4

本实验进一步在另一种患者来源的异种移植模型(lu-01-0448pdx模型)中测试了化合物c与帕博西尼组合的效果。lu-01-0448pdx模型是肺癌患者来源的皮下异种移植模型，根据实施例2中的lp-19-0029pdx模型描述的步骤建立。

本实验根据表4和实施例2中描述的步骤进行。

表4：分组和给药方案

如图5所示，各组动物治疗期间体重均无明显变化。如图6所示，化合物c和帕博西尼的组合疗法显著抑制了肿瘤生长，在d33(即第33天)的t/c值为11.30％。协同分数大于1表明化合物c和帕博西尼的组合具有协同效应，如表5所示。

表5：关键时间点rtv、t/c值及协同分数

应当理解，前文对优选实施例的描述旨在纯粹地说明本发明的原理，而并非穷举，并且其变化和改动对于本领域技术人员来说是显而易见的，因此除了在权利要求中明确阐述之外，本发明不限于此。