本发明涉及疤痕修复技术领域，具体涉及水蛭体表分泌物在制备疤痕修复药物中的应用。
背景技术：
水蛭，俗名蚂蟥，在《神农本草经》中已有记载，具有很高的药用价值；在内陆淡水水域内生长繁殖，是中国传统的特种药用水生动物，其干制品泡制后中医入药，具有治疗中风、高血压、清瘀、闭经、跌打损伤等功效。近年新发现水蛭制剂在防治心脑血管疾病和抗癌方面具有特效。它在历史上以自然捕捞为主，因近年农药、化肥等滥用，及工农业“三废”对环境的污染，野生自然资源锐减，随着水蛭药用价值的深度开发，其市场需求潜力巨大。
现阶段对水蛭的研究多集中于其抗血栓活性，在其体内的水蛭素被认为是安全的抗血栓药物。目前水蛭的药用方式主要是：1、干燥后整体作为中药原药与其它中药配伍服用；2、电刺激取唾液并从唾液中分离出水蛭素；3、直接活体使用，利用其吸血活性进行疾病治疗。随着分子生物学及分离纯化手段的发展，水蛭中的活性物质有待进一步开发。
水蛭在遇到危险或者处于低温、干燥环境时，其体表会分泌凝胶状的粘液。水蛭体表粘液的主要作用是：湿润体表、维持呼吸、调节身体水分、避免和其他物质直接接触，水蛭体表粘液还可以起到防紫外线辐射的作用。水蛭体表分泌物具有透气保湿的特性，具有开发成皮肤保湿修复产品的潜能。
疤痕是物理、生物、化学等因素的损害作用于人体皮肤软组织，导致皮肤软组织的严重损伤而不能完全自行正常修复，转由纤维组织替代修复留下的既影响外观又影响功能的局部症状。“疤痕”给患者带来的是巨大的肉体痛苦和精神痛苦，尤其是烧伤、烫伤、严重外伤后遗留的疤痕。疤痕增生期的几年时间几乎让患者苦不堪言。而后的萎缩期又使患者面目全非，功能障碍，造成患者极大的身、心双重障碍。青春期留下的痘疤，更是给人留下不可磨灭的“青春印记”。
技术实现要素：
针对上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供水蛭体表分泌物在制备疤痕修复药物中的应用，将低温收集并经过处理的水蛭体表分泌物冻干粉应用到实验造成的兔子的创伤疤痕中，疤痕的厚度和硬度较阴性对照显著性减少。
本发明的技术方案是：
本发明提供水蛭体表分泌物在制备疤痕修复药物中的应用。
本发明还提供一种含有水蛭体表分泌物的疤痕修复啫喱，其中的成分是：无菌水、水蛭体表分泌物、凡士林、山梨(糖)醇、苯氧乙醇、抗坏血酸、透明质酸钠。
进一步，所述含有水蛭体表分泌物的疤痕修复啫喱，使用时将其均匀涂抹在疤痕表面。
本发明再提供上述含有水蛭体表分泌物的疤痕修复啫喱的制备方法，包括以下步骤：
(1)取体重20g以上的活水蛭，静置于刺激缓冲液(150mmnacl，1mml-arginine)中，每200ml缓冲液浸泡5只菲牛蛭，温度3-8℃，浸泡5小时，浸泡完成后收集呈凝胶状的缓冲液，其中包含水蛭体表分泌液；对收集的呈凝胶状的缓冲液进行低温冷冻干燥处理，得到干燥的粉末，121℃灭菌15min；
(2)用无菌水溶解步骤为(1)得到的冻干粉，无菌水与冻干粉的重量比是：无菌水：冻干粉＝3:2，轻轻搅拌，直到混合液呈均匀的糊状；
(3)在糊状混合液中加入的成分及重量百分比分别为：凡士林5％、山梨(糖)醇3％、苯氧乙醇3％、抗坏血酸2％、透明质酸钠2％，混合均匀即得含有水蛭体表分泌物的疤痕修复啫喱。
进一步，上述方法中的水蛭是菲牛蛭。
有益效果
关于水蛭，现有的研究热点大多集中在其抗血栓活性上。水蛭的生命力顽强，其体表分泌的粘液可以有效隔绝液体环境中的有害物质，当环境温度降低或存在刺激性物质时，体表的分泌细胞大量分泌粘液以保护机体。已有研究表明，水蛭体表黏液中含有共生菌，为了避免其中的微生物通过疤痕感染机体，本发明提供的应用方法中将所得到的分泌物进行高温灭菌处理。
获得水蛭的体表分泌物仅需将水蛭置于低温环境即可，收集完分泌液后，对水蛭的存活没有影响，可以反复大量的获得其分泌液，有利于控制生产成本，节约资源。
发明人通过兔子疤痕模型实验，证明了水蛭的体表分泌物具有减少创伤后疤痕的形成的作用，其效果甚至好于现有的常用的疤痕修复药硅酮凝胶。本发明为水蛭的药用价值开发了新的方向。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一：获得水蛭体表分泌液
取体重20g以上的活菲牛蛭，静置于刺激缓冲液(150mmnacl，1mml-arginine)中，每200ml缓冲液浸泡5只菲牛蛭，温度3-8℃，浸泡5小时，浸泡完成后收集呈凝胶状的缓冲液，其中包含水蛭体表分泌液。
对收集的分泌液进行冷冻干燥处理，得到干燥的粉末，121℃灭菌15min。
实施例二：疤痕修复实验
1实验动物：健康成年新西兰大白兔40只，雌雄各20只，体重1.5～2.0kg。
2实验材料：将实施例一所得的水蛭体表分泌物冻干粉用少量生理盐水溶解，搅拌均匀，得到糊状物，含水量约为50％。
3动物模型的制作：选用健康成年新西兰大白兔40只，分笼饲养1周。常规术前准备，2％利多卡因局部麻醉，严格无菌操作技术下，在兔耳腹侧手术切除全层皮肤并刮去软骨膜，形成4～6个1cm×1cm～1cm×1.5cm大小的创面，其间相距1.5cm，术后1周去除创面痂皮，3周创面上皮化，待痂皮自行脱落，形成早期增生性疤痕动物模型。
4动物分组及处理：增生性疤痕形成后切取一组标本，然后将其余的随机分为三个实验组和一个对照组，每组10只。实验组在创面上皮化后开始采用水蛭分泌物治疗，将糊状的水蛭分泌物涂抹在增生性疤痕的表面，每个疤痕涂抹1g，每只大白兔使用相应的受试物12周。阴性对照采用生理盐水，阳性对照采用硅酮凝胶，具体治疗方法同实验组。
5观察指标：分别在治疗后1、4、12周后，切取标本，10％的福尔马林固定，hf染色切片：
①外观形态：大体观察疤痕生长情况，对比治疗组与对照组疤痕组织颜色、质地、厚度的差异。
②疤痕厚度：用彩色超声诊断仪(探头超声频率为13mhz)，于同一测定人在相同条件下测定各组创面形成疤痕的厚度。
③疤痕硬度：用疤痕硬度测量仪测定疤痕硬度：将硬度计垂直放置于待测的疤痕和皮肤上，靠硬度计本身重量作用于测定部位，根据测定不同疤痕和皮肤的硬度不同，仪表上即显示不同的数据。每个疤痕、皮肤分别测定3次，计算平均值，将读数换算成硬度值，单位为n/mm2。
2、结果：
2.1外观形态变化：治疗前兔耳腹侧创面的愈合，具有增生性疤痕的特点，上皮化时即能触到硬块，此硬块不断高于皮面，呈鲜红色，增生范围不超过原创缘，增生块的厚度为耳腹侧面正常皮肤的2～3倍，大约20-28天增生到最高峰。部分兔耳增生块挛缩，使兔耳耳廓畸形，类似人疤痕挛缩所致的畸形。实验组治疗后4周，疤痕组织开始出现软化表现，增生块渐呈淡红色，略高出皮面，质地渐软化。治疗后12周，疤痕明显软化，颜色和质地接近正常皮肤。实验组兔耳疤痕质地较对照组柔软平整。
2.2疤痕硬度和厚度
分别于治疗后1、4、12周记录不同组实验兔子的疤痕硬度和厚度，结果如表1和2。
表1疤痕硬度对比
注：*与阴性对照组比较：*p＜0.01
表2疤痕厚度对比
注：*与阴性对照组比较：*p＜0.01
实验证明：水蛭体表分泌物能够促进伤口愈合、减小疤痕形成，实验结果与阴性对照相比，有显著性差异；水蛭体表分泌物修复疤痕的效果甚至好于现有常用的疤痕修复药物硅酮凝胶。
实施例三：疤痕修复啫喱制备方法
(1)按实施例一的方法制备水蛭体表分泌物的冻干粉；
(2)用无菌水溶解冻干粉，无菌水与冻干粉的重量比是：无菌水：冻干粉＝3:2，轻轻搅拌，直到混合液呈均匀的糊状；
(3)在糊状混合液中加入的成分及重量百分比分别为：凡士林5％、山梨(糖)醇3％、苯氧乙醇3％、抗坏血酸2％、透明质酸钠2％，混合均匀。
实施例三公布了水蛭体表分泌物作为主要成分应用于疤痕修复啫喱的方法，通过添加常见护肤品保湿修复成分配合使用，可以达到更好的疤痕修复效果。
本发明未详述之处，均为本技术领域技术人员的公知技术。最后说明的是，以上实施例仅用于说明解释本发明的技术方案而非限制，对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。