一种能够抑制痤疮丙酸杆菌的乳酸菌面膜及制备方法与流程

本发明涉一种生物菌种领域，具体涉及一种能够抑制痤疮丙酸杆菌的乳酸菌面膜及制备方法。
背景技术：
：痤疮是一种毛囊皮脂腺的慢性炎症性皮肤病，发病率70％-87％，好发于青春期，临床表现主要以颜面部及胸背部黑头、白头粉刺，炎症性丘疹、脓疱为主。在痤疮的发生过程中，痤疮丙酸杆菌的过度增殖起到了至关重要的作用。而微粉刺及粉刺的形成为具有厌氧生长特性的痤疮丙酸杆菌增殖创造了良好的局部环境。目前认为，痤疮丙酸杆菌可以通过天然免疫、获得性免疫及直接诱导参与了痤疮炎症的发生发展。痤疮早期炎症可能是toll样受(tlr)介导的天然免疫反应所致，诱导促炎症因子尤其是il-1α释放；随着疾病发展，获得性免疫反应放大了炎症过程，进一步导致炎症因子释放及中性粒细胞聚集；痤疮丙酸杆菌还可产生多肽类物质，直接诱发或加重炎症。在疾病后期，毛囊壁断裂，毛囊中的脂质、毛发等物质进入真皮，进一步加重了炎症反应。部分痤疮患者皮肤屏障受损，且长期口服或外用抗生素等抗痤疮药物往往会加重皮肤屏障的破坏，导致皮肤敏感。我们研制的面膜添加了鼠李糖乳杆菌lr863发酵产物灭活冻干粉，其含有乳酸、乙酸和细菌素等抑菌物质和活性成分，能够在抑制痤疮丙酸杆菌的同时起到修复皮肤屏障的作用，从而达到祛除痤疮的效果。技术实现要素：本发明的目的是提供了一种能够抑制痤疮丙酸杆菌的乳酸菌面膜精华液及其制备方法。第一方面，本发明是通过以下技术方案实现的：本发明涉及一种能够抑制痤疮丙酸杆菌的乳酸菌面膜精华液，包括如下份数的各组分：第二方面，本发明还涉及前述的一种能够抑制痤疮丙酸杆菌的乳酸菌面膜精华液的制备方法，所述方法包括如下步骤：步骤一，a料:权利要求1中各组分，除卡波姆、羟乙基纤维素和灭活冻干粉外，其余各组分混合均匀；步骤二，b料:权利要求1中各组分中的卡波姆和羟乙基纤维素须分别溶于水经搅拌加热80℃充分溶解后晾至室温备用；步骤三，c料：权利要求1中各组分中的灭活冻干粉用纯净水充分溶解并搅拌均匀；步骤四，将a料、b料和c料混合均匀即得乳酸菌面膜精华液。优选地，所述灭活冻干粉鼠李糖乳杆菌lr863(分类命名：鼠李糖乳杆菌lactobacilusrhamnosus其中，该菌种的保藏登记入册编号为cgmccno.14410，保藏日期为：2017年07月12日，保藏地址中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心北京市朝阳区北辰西路1号院3号)发酵产物灭活冻干粉。优选地，所述鼠李糖乳杆菌lr863发酵产物灭活冻干粉的制备：用改良mrs培养基培养，37℃恒温培养箱过夜；具体步骤为，取鼠李糖乳酸杆菌lr863种子液按3％的接种量接种到10ml改良mrs液体培养基，震荡混匀，37℃培养24h，依次连续活化三代，再按3％的接种量接种到250ml改良mrs液体培养基中扩大培养，培养好的发酵液以70℃灭菌3h后离心收集菌泥，经乳化后冷冻干燥即得lr863发酵产物灭活冻干粉。优选地，所述mrs培养基：葡萄糖20g，蛋白胨10g，牛肉粉6.5g，酵母浸粉5g，乙酸钠5g，柠檬酸氢二铵2g，磷酸氢二钾2g，mgso4·7h2o0.58g，mnso4·h2o0.25g，半胱氨酸盐酸盐0.5g，吐温801ml，蒸馏水1000ml。在本发明的方法有以下优点：(1)本发明提供一种可用于祛痘的乳酸菌面膜精华液，经试验证明此乳酸菌面膜精华液对与痤疮丙酸杆菌的抑制效果明显，抑菌圈直径可达到17.94mm，且其对温度和光照不敏感，在室温条件和自然光照下具有良好的稳定性，在室温和自然光照条件下保存两个月其抑菌圈直径变化均小于2mm。(2)本发明采用的添加鼠李糖乳杆菌lr863发酵产物灭活冻干粉的乳酸菌面膜精华液相较于抗生素更安全温和，能够在抑制痤疮丙酸杆菌的同时起到修复皮肤屏障的作用，从而达到祛除痤疮的效果。附图说明通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：图1为本发明乳酸菌面膜精华液的抑菌效果图；图2为本发明乳酸菌面膜精华液对温度稳定性效果图；图3为本发明乳酸菌面膜精华液对光照稳定性效果图。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。应当指出的是，以下的实施实例只是对本发明的进一步说明，但本发明的保护范围并不限于以下实施例。实施例1本实施例涉及一种能够抑制痤疮丙酸杆菌的乳酸菌面膜精华液，包括如下份数的各组分：第二方面，本发明还涉及前述的一种能够抑制痤疮丙酸杆菌的乳酸菌面膜精华液的制备方法，所述方法包括如下步骤：步骤一，a料:权利要求1中各组分，除卡波姆、羟乙基纤维素和灭活冻干粉外，其余各组分混合均匀；步骤二，b料:权利要求1中各组分中的卡波姆和羟乙基纤维素须分别溶于水经搅拌加热80℃充分溶解后晾至室温备用；步骤三，c料：权利要求1中各组分中的灭活冻干粉用纯净水充分溶解并搅拌均匀；步骤四，将a料、b料和c料混合均匀即得乳酸菌面膜精华液。试验材料和方法1试验材料(1)菌株：鼠李糖乳杆菌lr863；其中，该菌种的保藏登记入册编号为cgmccno.14410保藏地址中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心北京市朝阳区北辰西路1号院3号。痤疮丙酸杆菌购买自北纳生物，编号bncc336649。(2)培养基改良mrs液体培养基：葡萄糖20g，蛋白胨10g，牛肉粉6.5g，酵母浸粉5g，乙酸钠5g，柠檬酸氢二铵2g，磷酸氢二钾2g，mgso4·7h2o0.58g，mnso4·h2o0.25g，半胱氨酸盐酸盐0.5g，吐温801ml，蒸馏水1000ml。硫乙醇酸盐培养基(含琼脂)：酪胨15.0g,酵母浸出粉5.0g，葡萄糖5.0g，硫乙醇酸钠0.5g，l-胱氨酸0.5g，刃天青0.001g，氯化钠2.5g，蒸馏水1000ml，ph7.1±0.2。2试验方法2.1菌株培养方法及样品准备鼠李糖乳杆菌lr863发酵产物灭活冻干粉的制备：用改良mrs培养基培养，37℃恒温培养箱过夜。具体步骤为，取鼠李糖乳酸杆菌lr863种子液按3％的接种量接种到10ml改良mrs液体培养基，震荡混匀，37℃培养24h，依次连续活化三代，再按3％的接种量接种到250ml改良mrs液体培养基中扩大培养，培养好的发酵液以70℃灭菌3h后离心收集菌泥，经乳化后冷冻干燥即得lr863发酵产物灭活冻干粉(以下简称灭活冻干粉)。痤疮丙酸杆菌的培养：用液体硫乙醇酸盐培养基(含琼脂)于37℃恒温培养箱厌氧培养48h。具体步骤为：取痤疮丙酸杆菌种子液按3％的接种量接种到10ml液体硫乙醇酸盐培养基(含琼脂)震荡混匀，37℃厌氧培养48h，依次连续活化三代后备用。2.2乳酸菌面膜的制备：面膜配方：5份丙二醇，2份peg-40氢化蓖麻油，1.4份透明质酸钠，2份甘草酸二甲，0.2份卡波姆，0.1份羟乙基纤维素，0.2份氯苯甘醚，0.05份香叶天竺葵油，0.2份苯氧乙醇，2.1份三乙醇胺，0.5份菊粉，0.84份灭活冻干粉，余量水。配制方法：a料:以上组分除卡波姆、羟乙基纤维素和灭活冻干粉外可提前混合均匀备用。b料:卡波姆和羟乙基纤维素须分别溶于水经搅拌加热80℃充分溶解后晾至室温备用。c料：灭活冻干粉须用纯净水充分溶解并搅拌均匀。将a、b和c料分别配制后混合均匀即得乳酸菌面膜精华液。3.抑菌试验(1)含有2.0％素琼脂培养基冷至50℃左右，取10ml倾倒在无菌平皿中，洁净工作台中晾干；(2)无菌镊子取灭菌牛津杯放在倒有素琼脂的平皿中，静置10min；(3)将1ml痤疮丙酸杆菌加入到100ml冷却至50℃的液体硫乙醇酸盐培养基(含琼脂)中并充分混匀；(4)在放好牛津杯的平板上倾倒10ml上述液体硫乙醇酸盐培养基(含琼脂)，待凝固后将牛津杯夹出，形成牛津杯孔；(5)在各牛津杯孔中注入0.1ml试验样品，并以的盐酸四环素为阳性对照，以生理盐水为阴性对照，于37℃静置厌氧培养48-72h，用游标卡尺测量抑菌圈直径大小，每组设置两个平行。优选地，所述灭活冻干粉鼠李糖乳杆菌lr863发酵产物灭活冻干粉或痤疮丙酸杆菌灭活冻干粉。优选地，所述鼠李糖乳杆菌lr863发酵产物灭活冻干粉的制备：用改良mrs培养基培养，37℃恒温培养箱过夜；具体步骤为，取鼠李糖乳酸杆菌lr863种子液按3％的接种量接种到10ml改良mrs液体培养基，震荡混匀，37℃培养24h，依次连续活化三代，再按3％的接种量接种到250ml改良mrs液体培养基中扩大培养，培养好的发酵液以70℃灭菌3h后离心收集菌泥，经乳化后冷冻干燥即得lr863发酵产物灭活冻干粉。优选地，所述mrs培养基：葡萄糖20g，蛋白胨10g，牛肉粉6.5g，酵母浸粉5g，乙酸钠5g，柠檬酸氢二铵2g，磷酸氢二钾2g，mgso4·7h2o0.58g，mnso4·h2o0.25g，半胱氨酸盐酸盐0.5g，吐温801ml，蒸馏水1000ml。4.本实施例试验结果：4.1乳酸菌面膜精华液的抑菌效果，见图1。乳酸菌面膜精华液的抑菌效果。a为市售面膜精华液，b为本发明乳酸菌面膜精华液，c为未加灭活冻干粉的面膜精华液，“n”为阴性对照(生理盐水)，“p”为阳性对照(35μg/ml的盐酸四环素)。其中上述各种精华液的抑菌圈直径如表1所示。表14.2乳酸菌面膜精华液对温度稳定性，见图2。图2.乳酸菌面膜精华液温度稳定性。a和c分别为室温放置0个月和2个月的乳酸菌面膜精华液抑菌效果，b为未加灭活冻干粉的面膜精华液，“n”为阴性对照(生理盐水)，“p”为阳性对照(35μg/ml的盐酸四环素)。其中上述各种精华液的抑菌圈直径如表2所示。表2抑菌圈直径(mm)a20.52b10.86c19.98p29.64n04.3乳酸菌面膜精华液对光照稳定性，见图3。图3.乳酸菌面膜精华液光照稳定性。a、b和c分别为自然光照0天、1个月和2个月的乳酸菌面膜精华液抑菌效果，“n”为阴性对照(生理盐水)，“p”为阳性对照(35μg/ml的盐酸四环素)。其中上述各种精华液的抑菌圈直径如表3所示。表3抑菌圈直径(mm)a19.56b18.00c17.96p30.88n0在本发明的方法有以下优点：(1)本发明提供一种可用于祛痘的乳酸菌面膜精华液，经试验证明此乳酸菌面膜精华液对与痤疮丙酸杆菌的抑制效果明显，抑菌圈直径可达到17.94mm，且其对温度和光照不敏感，在室温条件和自然光照下具有良好的稳定性，在室温和自然光照条件下保存两个月其抑菌圈直径变化均小于2mm。(2)本发明采用的添加鼠李糖乳杆菌lr863发酵产物灭活冻干粉的乳酸菌面膜精华液相较于抗生素更安全温和，能够在抑制痤疮丙酸杆菌的同时起到修复皮肤屏障的作用，从而达到祛除痤疮的效果。本发明的目的是提供一种可用于祛痘的乳酸菌面膜精华液，经试验证明此乳酸菌面膜精华液对与痤疮丙酸杆菌的抑制效果明显，抑菌圈直径可达到17.94mm，且其对温度和光照不敏感，在室温条件和自然光照下具有良好的稳定性，在室温和自然光照条件下保存两个月其抑菌圈直径变化均小于2mm。本发明采用的添加鼠李糖乳杆菌lr863发酵产物灭活冻干粉的乳酸菌面膜精华液相较于抗生素更安全温和，能够在抑制痤疮丙酸杆菌的同时起到修复皮肤屏障的作用，从而达到祛除痤疮的效果。以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质。当前第1页12