一种促肿瘤细胞ROS表达的药物组合物及其应用的制作方法

本发明涉及医疗药物技术领域，特别涉及一种促肿瘤细胞ros表达的药物组合物，以及该组合物的应用方式。

背景技术：

肿瘤是危害人类健康重大疾病之一，目前治疗手段主要有化学治疗、手术治疗、中药治疗、放射治疗和免疫治疗，其中药物治疗是使用最广泛的治疗方式。随着科学的进步和社会的发展，传统手段中的中药治疗越来越受到重视，植物来源的生物活性化合物主要通过细胞周期停滞和凋亡途径的激活拥有抗癌生物活性。中国具有丰富的中药及天然植物资源，为抗肿瘤药物的开发提供了丰富的宝库。

ros作为一类活性较强的离子和自由基，在许多生理过程中起着不可或缺的作用，是生物体正常代谢过程的产物。在较低浓度下，ros可作为体内重要的调节细胞信号、粘附、迁移和稳态的第二信使。而高水平ros能够通过氧化脂质、蛋白质氨基酸中的不饱和脂肪酸或其它生物分子，导致重要细胞器和dna的不可逆损伤，最终导致细胞凋亡和坏死，发挥细胞毒性作用。肿瘤细胞内处于较高ros浓度，这也就意味着肿瘤细胞对氧化应激较正常细胞更为敏感。所以，可以通过提高肿瘤细胞内ros水平，用于癌症的治疗。

短小蛇根草(ophiorrhizapumila)，为茜草科(rubiaceae)蛇根草属(ophiorrhiza)植物，又叫荷包草、鸡冠草、白丁香、金锁匙等，为双子叶多年生草本植物。短小蛇根草全草都可入药，它性味苦、寒，具有清热解毒的功效，福建民间会用短小蛇根草的全草用来治疗高热、外伤感染、百日咳、疽、痈、毒蛇咬伤等症，广东、广西民间则会用它的叶子来消肿毒。现有文献资料未见报道有短小蛇根草提取物及总生物碱提取物在制备促肿瘤细胞ros表达药物方面的应用研究。

技术实现要素：

现有技术中培育短小蛇根草只用于提取喜树碱，并未见报道短小蛇根草的提取物及总生物碱提取物的药物组合物对促进肿瘤细胞ros表达的应用研究。

一种促肿瘤细胞ros表达的药物组合物，主要成分包括：短小蛇根草苷、去氧短小蛇根草苷、羧基异胡豆苷、异长春花苷内酰胺、汝兰酮碱和β-豆甾醇。

可以通过乙醇/水提取或是总生物碱提取的方法制备上述促肿瘤细胞ros表达的药物组合物。

乙醇/水提取制备促肿瘤细胞ros表达的药物组合物的方法包括步骤：每次用3～10倍质量的乙醇或水回流提取短小蛇根草，共3次，每次2小时，合并后减压浓缩。制得的组合物主要成分含量为：短小蛇根草苷15～20％、去氧短小蛇根草苷10～20％、羧基异胡豆苷15～25％、异长春花苷内酰胺20～30％、汝兰酮碱5～10％和β-豆甾醇5～10％。

总生物碱提取制备促肿瘤细胞ros表达的药物组合物的方法包括步骤：每次用3～10倍质量的乙醇或水回流提取短小蛇根草，共3次，每次2小时，合并后减压浓缩；然后水混悬后，加入氢氧化钠调价ph至8～10，加入氯仿萃取，取水层，加稀盐酸调节ph至2～3，氯仿萃取，合并氯仿层，减压浓缩得所述组合物。制得的组合物主要成分含量为：短小蛇根草苷15～25％、去氧短小蛇根草苷15～25％、羧基异胡豆苷10～20％、异长春花苷内酰胺5～15％、汝兰酮碱10～15％和β-豆甾醇5～10％。

上述制得的促肿瘤细胞ros表达的药物组合物可以应用于制备治疗肝癌、肺癌、食道癌、结肠癌或乳腺癌的药物。特别适用于制备治疗肝癌的药物。所述药物可以为片剂，胶囊剂，口服剂，颗粒剂丸剂等。

附图说明

图1短小蛇根草提取物hplc色谱图及主要化学成分结构式；

图2短小蛇根草乙醇/水提取物对人源smmc-7721、hepg2肝癌细胞ros表达的作用。

具体实施方式

下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细说明。但本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1含有短小蛇根草总生物碱提取物的药物组合物

制备过程包括以下步骤：

短小蛇根草100g，每次用800g的95％乙醇/水，热回流提取3次，每次2小时，合并后减压浓缩，获得短小蛇根草乙醇/水提取物。然后加水混悬，再加入氢氧化钠调价ph至8-10，最后加入氯仿萃取。取水层，加稀盐酸调节ph至2-3，氯仿萃取，合并氯仿层，减压浓缩得总生物碱提取物。

经hplc检测，得到短小蛇根草苷(pumiloside)、去氧短小蛇根草苷(deoxypumiloside)、羧基异胡豆苷(carboxystrictosidine)、异长春花苷内酰胺(strictosamide)、汝兰酮碱(aknadinine)和β-豆甾醇(β-stigmasterol)含量为78％。

实施例2含有短小蛇根草总生物碱提取物的药物组合物

制备过程包括以下步骤：

短小蛇根草100g，每次用500g的80％乙醇/水，热回流提取3次，每次2小时，合并后减压浓缩，获得短小蛇根草乙醇/水提取物。然后加水混悬，再加入氢氧化钠调价ph至8-10，最后加入氯仿萃取。取水层，加稀盐酸调节ph至2-3，氯仿萃取，合并氯仿层，减压浓缩得总生物碱提取物。

经hplc检测，得到pumiloside、deoxypumiloside、carboxystrictosidine、strictosamide、aknadinine和β-stigmasterol含量为85％。

实施例3含有短小蛇根草总生物碱提取物的药物组合物

制备过程包括以下步骤：

短小蛇根草100g，每次用1000g的95％乙醇/水，热回流提取3次，每次2小时，合并后减压浓缩，获得短小蛇根草乙醇/水提取物。然后加水混悬，再加入氢氧化钠调价ph至8-10，最后加入氯仿萃取。取水层，加稀盐酸调节ph至2-3，氯仿萃取，合并氯仿层，减压浓缩得总生物碱提取物。

经hplc检测，得到pumiloside、deoxypumiloside、carboxystrictosidine、strictosamide、aknadinine和β-stigmasterol含量为82％。

上述各实施例所得组合物的主要成分结构式如下上述：

实施例4对人肝癌细胞株smmc-7721、hepg2细胞内ros表达的影响

dcfh-da可被细胞内ros氧化为荧光物质二氯荧光素(dcf)，故检测dcf的荧光强度可反映细胞内ros水平。细胞按照上述实验分组及处理结束后，在培养液中加入终浓度为10μmol/l的dcfh-da，37℃孵育15min，吸弃培养液，胰酶消化细胞，pbs漂洗及重悬后于冰上通过流式细胞仪检测。激发光波长为488nm，发射光波长为525nm。实验重复3次

细胞培养：

人肝癌细胞株smmc-7721、hepg2培养于rpmi-1640培养液，内含10％小牛血清、100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素，置37℃，5％co2,恒温密闭式孵箱内培养传代。

图1和图2结果显示，与空白组相比，所述促肿瘤细胞ros表达的药物组合物可增加人源smmc-7721肝癌细胞、hepg2肝癌细胞中ros的表达，并呈剂量与时间依赖性。

上述实验表明，短小蛇根草提取物可促进人肝癌细胞中ros的表达。