一种用于皮肤创面修复的凝胶的制作方法

本发明涉及生命科学
技术领域：
，具体是指一种用于皮肤创面修复的凝胶。
背景技术：
：糖尿病是威胁人类的重大疾病之一，伤口愈合不良是糖尿病的一个并发症,严重时可能导致截肢,已成为糖尿病患者住院率最高的疾病。糖尿病溃疡是糖尿病的常见并发症之一，是目前临床治疗性的难题，也是当前创伤医学的研究热点之一。由于糖尿病患者的血糖高、免疫力低下，导致糖尿病患者的伤口、刀口、疮口久不收口，难以愈合。目前，治疗方法多是通过吃降血糖西药、打胰岛素，或者注射抗生素，配合外用中药来治疗伤口愈合，然而疗效不够显著，治疗时间较长。而伤口长时间不愈合，容易给患者造成感染，诱发其他疾病，或截肢等严重后果。目前研究发现糖尿病发生时有多种分子和细胞功能受损,最终导致糖尿病伤口愈合不良。针对糖尿病溃疡的药物研究，在临床上具有广泛的应用前景和重要的社会意义，至今仍未发现治疗糖尿病伤口愈合的专用高效药物。在cn101293062中公开一种治疗糖尿病伤口愈合的药物，是以西洋参、冬虫夏草、乳香、没药、血竭、麝香、三七、川贝母、植物降糖素为原料组方，按常规制剂方法制成的散剂或膏剂，但是该发明并未深入探究糖尿病伤口不易愈合的真正影响因素，因此该药物仅仅能做到活血止痛、排脓抗炎的功效，而对于糖尿病伤口愈合速度上似乎并无太大功效。目前国内外对糖尿病皮肤伤口愈合速度慢的原因有过相关报道，但是相对较少，科研工作者对于糖尿病患者伤口愈合速度慢的真正原因还是没有找到。spravchikovn报道高血糖可以抑制角质形成层细胞增增殖，促进角质形成层细胞分化，高血糖对角质形成层细胞的形态也会产生影响。烟酰胺单核苷酸(英文名β-nicotinamidemononucleotide，缩写英文名nmn，分子结构(如图3所示)是体内存在的一种内源性物质，也可以通过体外化学合成。目前，国内外对于烟酰胺单核苷酸的研究较少，一篇发表在2007年的美国著名学术期刊《cellmetabolism》上的论文(revollo，jretal.nampt/pbef/visfatinregulatesinsulinsecretioninβcellsasasystemicnadbiosyntheticenzyme.cellmetabolism，6(5)：363-75(2007))提到使用烟酰胺单核苷酸可以改善小鼠因单倍性缺陷和nampt的化学抑制导致烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad，细胞能量转化的重要辅酶)合成和葡萄糖刺激导致胰岛胰岛素分泌缺陷。烟酰胺单核苷酸是生物细胞内存在的一种生化物质，在人体细胞能量生成中扮演重要角色，它参与细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的合成。目前，对于烟酰胺单核苷酸在生物医药领域的用途的研究工作已经展开，已见关于烟酰胺单核苷酸在延缓衰老(cn104814974a)、脑卒中(cn101601679b)、听力修复(cn105456286a)等方面的报道，这些报道指出烟酰胺单核苷酸是人体内存在的一种内源性物质，毒副作用非常小，人体服用高剂量2克/公斤体重未发现明显毒副作用。但文献中尚未发现关于烟酰胺单核苷酸在皮肤创面修复方面的任何报道。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是克服以上技术缺陷，提供一种能快速治疗糖尿病创面修复的药物，该发明药物针对性强，疗效显著，能使伤口快速愈合的一种用于皮肤创面修复的凝胶。为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种用于皮肤创面修复的凝胶，包括水凝胶基质，所述水凝胶基质煮沸灭菌30min后，20℃条件下配成浓度为2％的凝胶，之后加入烟酰胺单核苷酸，配成浓度为2-6浓度的凝胶。作为改进，所述水凝胶基质选取纤维素、透明质酸、海藻酸、胶原蛋白或其他医学上常用的水凝胶基础材料作为基质。作为改进，在烟酰胺单核苷酸后加入阿奇霉素、红霉素、青霉素或其他常见抗菌药物构成混合凝胶。本发明与现有技术相比的优点在于：通过选择稳定性、重复性强的ii型糖尿病leprdb/db基因型小鼠作为创面模型，作为该类药物研究与评价的一个重要途径。本研究首次将烟酰胺单核苷酸用于调节糖尿病小鼠皮肤创面修复实验，在糖尿病小鼠皮肤伤口愈合过程中的作用提供有效的实验数据。本发明人经过大量试验研究，实验发现，烟酰胺单核苷酸不仅具有促进糖尿病小鼠创面起到排脓抗炎、活血止痛、抗渗出、使伤口局部迅速降低血糖，还能促进组织修复。可使肉芽组织大量形成，毛细血管及纤维母细胞明显增多，上皮细胞再生迅速、敛疮生肌、显著缩短伤口愈合的时间的作用。本发明为进一步研究人体糖尿病伤口愈合的机制提供理论基础，且开发了一种新型用于糖尿病患者皮肤创口修复的水凝胶药物。本发明将烟酰胺单核苷酸混合于常用的医用水凝胶里面，制成专用创口修复凝胶。可选的凝胶基质材料包括纤维素、淀粉、海藻酸、透明质酸，壳聚糖、胶原、聚l-赖氨酸、聚l-谷胺酸、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚n-聚代丙烯酰胺等，但也不限于这些材料，其他的具有良好生物相容性的凝胶基质材料也可以选用。所发明的创口修复凝胶可以加入阿奇霉素、红霉素、青霉素或其他常见抗菌药物，进一步提高疗效。本发明研究的烟酰胺单核苷酸在糖尿病小鼠的皮肤伤口愈合中起着关键作用，在实验过程中烟酰胺单核苷酸能促进角质形成层细胞的增殖，能够加快糖尿病皮肤的愈合。本发明通过实验得到大量数据，为进一步探究烟酰胺单核苷酸在皮肤伤口愈合中的作用机理打下了良好的研究基础。本发明还对二十几例糖尿病人和正常病人的皮肤创口进行了应用测试，发现在促进伤口愈合方面疗效显著，并无明显毒副作用。本发明将会有广阔的应用前景，所制备的修复凝胶可以减轻广大糖尿病患者的皮肤创伤后难以愈合的痛苦，在正常病人的皮肤创口修复上也表现出十分优异的疗效，同时也将会产生十分可观的社会经济效益。附图说明图1是分子结构示意。图2是给药组(含4％烟酰胺单核苷酸的羟乙基纤维素(hec)凝胶)和对照组(单纯的羟乙基纤维素凝胶)的小鼠创面愈合率随时间变化曲线图。图3是给药组和对照组小鼠创面愈合随时间变化的照片。具体实施方式选取羟乙基纤维素作为水凝胶基质并添加烟酰胺单核苷酸，用于治疗糖尿病皮肤创面模型小鼠，对创面修复情况进行监测，综合分析烟酰胺单核苷酸凝胶对皮肤创面修复效果。用所制备含有烟酰胺单核苷酸和其他抗菌药物的凝胶对二十几例糖尿病人和正常病人的皮肤创口进行了治疗应用测试，发现在促进伤口愈合方面疗效显著。案例1、对照组1.凝胶的配制：选取羟乙基纤维素(粘度为800-1500mpa.s)作为水凝胶基质，煮沸灭菌30min后，20℃条件下配成2％的凝胶。2.建立糖尿病小鼠皮肤创面模型：选取ii型糖尿病leprdb/db基因型小鼠(20只)，用磷酸缓冲盐溶液(pbs溶液)处理作为对照组。于7-12周龄时建立伤口模型：将小鼠麻醉、脱毛、2％碘伏消毒背部正中皮肤后，用手术刀切除1.0×1.0cm2正方形皮肤(包括表皮和真皮层)；仅于伤口表面涂布磷酸缓冲盐溶液溶液，常规医用敷料固定。术后每天分别进行换药观察伤口愈合情况与测量。3.创面修复情况监测：小鼠皮肤创面模型建立完成后，立即照相，并在透明膜上沿伤口边缘画出创面的形状，并扫描至计算机，用photoshop软件测量创面的面积，计算创面愈合率。按照以下公式计算创面愈合率：创面愈合率＝(原始创面面积-未愈合创面面积)/原始创面面积х100％，并应用spss19.0软件进行统计学分析。4.结果比照表1按照测量和计算数据分析可得，对照组糖尿病小鼠皮肤创面愈合缓慢，前后将近一个月的时间，其创面才能缓慢全部愈合。案例2、2％的烟酰胺单核苷酸凝胶实验组1.烟酰胺单核苷酸凝胶的配制：选取羟乙基纤维素(粘度为800-1500mpa.s)作为水凝胶基质，煮沸灭菌30min后，20℃条件下配成2％的凝胶；再与烟酰胺单核苷酸粉剂(购于aladdin，货号n131850)配成浓度为2％的凝胶备用。2.建立糖尿病小鼠皮肤创面模型：选取ii型糖尿病leprdb/db基因型小鼠(20只)，使用2％浓度烟酰胺单核苷酸凝胶作为治疗组。于7-12周龄时建立伤口模型：将小鼠麻醉、脱毛、2％碘伏消毒背部正中皮肤后，用手术刀切除1.0×1.0cm2正方形皮肤(包括表皮和真皮层)；于伤口表面涂布2％的烟酰胺单核苷酸凝胶，常规医用敷料固定。术后每天分别进行换药观察与测量。3.创面修复情况监测：小鼠皮肤创面模型建立完成后，立即照相，并在透明膜上沿伤口边缘画出创面的形状，并扫描至计算机，用photoshop软件测量创面的面积，计算创面愈合率。按照以下公式计算创面愈合率：创面愈合率＝(原始创面面积-未愈合创面面积)/原始创面面积х100％，并应用spss19.0软件进行统计学分析。4.结果比照表2按照测量和计算数据分析可得，与案例1的对照组28天愈合率才能达到100％相比，2％的烟酰胺单核苷酸凝胶实验组将全部愈合时间提早了6天，有较好的疗效。案例3、4％的烟酰胺单核苷酸凝胶实验组1.烟酰胺单核苷酸凝胶的配制：选取羟乙基纤维素(粘度为800-1500mpa.s)作为水凝胶基质，煮沸灭菌30min后，20℃条件下配成2％的凝胶；再与烟酰胺单核苷酸粉剂(购于aladdin，货号n131850)配成浓度为4％的凝胶备用。2.建立糖尿病小鼠皮肤创面模型：选取ii型糖尿病leprdb/db基因型小鼠(20只)，使用4％浓度烟酰胺单核苷酸凝胶作为治疗组。于7-12周龄时建立伤口模型：将小鼠麻醉、脱毛、2％碘伏消毒背部正中皮肤后，用手术刀切除1.0×1.0cm2正方形皮肤(包括表皮和真皮层)；于伤口表面涂布4％的烟酰胺单核苷酸凝胶，常规医用敷料固定。术后每天分别进行换药观察与测量。3.创面修复情况监测：小鼠皮肤创面模型建立完成后，立即照相，并在透明膜上沿伤口边缘画出创面的形状，并扫描至计算机，用photoshop软件测量创面的面积，计算创面愈合率。按照以下公式计算创面愈合率：创面愈合率＝(原始创面面积-未愈合创面面积)/原始创面面积х100％，并应用spss19.0软件进行统计学分析。4.结果比照表3时间/天01357911131415161718愈合率/％03.08.318.146.562.078.679.189.989.994.399.7100按照测量和计算数据分析可得，将4％的烟酰胺单核苷酸凝胶实验组和对照组以及2％的烟酰胺单核苷酸凝胶实验组相比，明显缩短治疗时间，具有十分显著的疗效。案例4、6％的烟酰胺单核苷酸凝胶实验组1.烟酰胺单核苷酸凝胶的配制：选取羟乙基纤维素(粘度为800-1500mpa.s)作为水凝胶基质，煮沸灭菌30min后，20℃条件下配成2％的凝胶；再与烟酰胺单核苷酸粉剂(购于aladdin，货号n131850)配成浓度为6％的凝胶备用。2.建立糖尿病小鼠皮肤创面模型：选取ii型糖尿病leprdb/db基因型小鼠(20只)，使用6％浓度烟酰胺单核苷酸凝胶作为治疗组。于7-12周龄时建立伤口模型：将小鼠麻醉、脱毛、2％碘伏消毒背部正中皮肤后，用手术刀切除1.0×1.0cm2正方形皮肤(包括表皮和真皮层)；于伤口表面涂布6％的烟酰胺单核苷酸凝胶，常规医用敷料固定。术后每天分别进行换药观察与测量。3.创面修复情况监测：小鼠皮肤创面模型建立完成后，立即照相，并在透明膜上沿伤口边缘画出创面的形状，并扫描至计算机，用photoshop软件测量创面的面积，计算创面愈合率。按照以下公式计算创面愈合率：创面愈合率＝(原始创面面积-未愈合创面面积)/原始创面面积х100％，并应用spss19.0软件进行统计学分析。4.结果比照表4按照测量和计算数据分析可得，将6％的烟酰胺单核苷酸凝胶实验组与对照组和2％的烟酰胺单核苷酸凝胶实验组相比，治疗效果具有明显的提升，但是和4％的烟酰胺单核苷酸凝胶实验组比较起来疗效有所降低。案例54％的烟酰胺单核苷酸凝胶用于糖尿病人皮肤创口愈合烟酰胺单核苷酸凝胶的配制：选取羟乙基纤维素(粘度为800-1500mpa.s)作为水凝胶基质，煮沸灭菌30min后，20℃条件下配成2％的凝胶；再与烟酰胺单核苷酸粉剂(购于aladdin，货号n131850)配成浓度为4％的凝胶备用。将上述皮肤修复凝胶对广东医科大学附属医院(湛江)皮肤科的8例有皮肤创口的糖尿病人进行了治疗应用，每天换一次凝胶膜。应用结果发现所有病例均有显著效果，对比以往不做治疗的糖尿病人的皮肤创口愈合时间可以提早6-10天，联系非常显著。案例64％的烟酰胺单核苷酸凝胶用于正常病人皮肤创口愈合烟酰胺单核苷酸凝胶的配制：选取羟乙基纤维素(粘度为800-1500mpa.s)作为水凝胶基质，煮沸灭菌30min后，20℃条件下配成2％的凝胶；再与烟酰胺单核苷酸粉剂(购于aladdin，货号n131850)配成浓度为4％的凝胶备用。将上述皮肤修复凝胶对广东医科大学附属医院(湛江)皮肤科的10例有皮肤创口的正常(非糖尿病)病人进行了治疗应用，每天换一次凝胶膜。应用结果发现所有病例均有显著效果，对比以往不做治疗的皮肤创口愈合时间可以提早4-7天，疗效显著。案例74％烟酰胺单核苷酸凝胶+2％阿奇霉素用于糖尿病人皮肤创口愈合烟酰胺单核苷酸凝胶的配制：选取羟乙基纤维素(粘度为800-1500mpa.s)作为水凝胶基质，煮沸灭菌30min后，20℃条件下配成2％的凝胶；再与烟酰胺单核苷酸粉剂(4％浓度)和阿奇霉素粉剂(2％浓度)配制成混合凝胶备用。将上述皮肤修复凝胶对广东医科大学附属医院(湛江)皮肤科的7例有皮肤创口的糖尿病进行了治疗应用，每天换一次凝胶膜。应用结果发现所有病例均有显著效果，对比以往不做治疗的糖尿病人皮肤创口愈合时间可以提早8-12天，疗效非常显著，优于案例5所用4％烟酰胺单核苷酸的配方。这里阿奇霉素主要起到抗菌消炎作用，烟酰胺单核苷酸起到促进表皮细胞再生作用。综上所述，本发明的实验实例中选取羟乙基纤维素作为水凝胶基质材料，再与烟酰胺单核苷酸粉剂配成合适浓度的创口修复凝胶，在糖尿病模型小鼠、糖尿病人、正常病人身上应用均取得了显著的疗效。本发明的实例还在修复凝胶中加入了一种常见的抗生素阿奇霉素，发现可以一步提高凝胶对皮肤创口的修复疗效。本发明首次将烟酰胺单核苷酸作为活性成分应用皮肤创口修复，发现可以明显缩短创面愈合时间。因此，可将烟酰胺单核苷酸用于各类治疗创面修复的复合药物，具有广泛的应用前景。本发明可选的凝胶基质材料包括纤维素、淀粉、海藻酸、透明质酸，壳聚糖、胶原、聚l-赖氨酸、聚l-谷胺酸、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚n-聚代丙烯酰胺等，但也不限于这些材料，其他的具有良好生物相容性的凝胶基质材料也可以选用。所发明的创口修复凝胶可以加入阿奇霉素、红霉素、青霉素或其他常见抗菌药物，进一步提高疗效。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以简单的改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。当前第1页12