本发明涉及医学美容
技术领域：
，特别是涉及一种含snap25-htt150q融合基因纳米脂质体的面部抗皱冻干粉及其制备方法。
背景技术：
：皮肤皱纹是女性皮肤老化的最主要特征，最早且最明显出现老化症状的部位便是面部。随着日新月异的科技发展，最有效的面部除皱方式经历了从传统的除皱术到现在的微创注射除皱术，技术越来越成熟、先进。然而，不管是传统的切口还是微创手术干预都对患者带来许多不可控的风险。面部皮肤老化与面部表情肌的过度活动密切相关，当面部肌肉收缩时，面部皮肤也会随之移动，形成垂直于肌肉收缩方向的动态皱纹。随着年龄的增长，面部的肌肉纤维会增加常见的表情纹，在30岁之后会变得尤为明显。减少肌肉收缩，可以避免皱纹的产生或是延迟他们的出现。然而，目前市面上还未有一款真实有效的外用除皱化妆品。肌肉收缩是神经和肌肉在突触部位发生的一个生理过程。突触是一个神经元的冲动传到另一个神经元或传到另一个细胞间的相互接触的结构，是神经元之间在功能上发生联系的部位，也是信息传递的关键部位。神经元的轴突末梢经过多次分支，最后每一小枝的末端膨大呈杯状或球状，称为突触小体。突触小体可以与多个神经元的细胞体或树突相接触，形成突触。突触由突触前膜、突触间隙和突触后膜三部分组成。神经冲动通过轴突传导到突触小体时，突触前膜对钙离子的通透性增加，突触间隙中的钙离子进入突触小体内，促使突触小泡与突触前膜紧密融合，并出现破裂口。突触小泡内的神经递质释放到突触间隙中，经过弥散到达突触后膜与突触后膜上的蛋白质受体结合，传递兴奋或抑制信号。技术实现要素：本发明的目的是提供一种含snap25-htt150q融合基因纳米脂质体的面部抗皱冻干粉及其制备方法，能够将snap25-htt150q融合基因轻易地传递到突触部位发挥作用，最后再采用真空冷冻干燥的方式制作成冻干粉，以便长时间保持snap25-htt150q融合基因的活性，具有良好的抗皱和去皱作用。为实现上述目的，本发明提供了一种含snap25-htt150q融合基因纳米脂质体的面部抗皱冻干粉，包括以下原料：按质量百分比计，snap25-htt融合基因纳米脂质体为0.1％、甘露糖醇为5.5％，其余为无菌水。优选的所述snap25-htt融合基因纳米脂质体由snap25-htt融合基因、无菌水、大豆卵脂、胆固醇和聚乙烯醇组成。优选的，大豆卵脂和胆固醇的质量比为8∶5，聚乙烯醇与无菌水的体积比为3∶2。一种含snap25-htt150q融合基因纳米脂质体的面部抗皱冻干粉的制备方法，包括以下步骤：s1、提取snap25-htt融合基因；s2、将提取到的snap25-htt融合基因采用纳米脂质体技术包裹，具体为将得到的snap25-htt融合基因溶解在无菌水中，加入大豆卵磷脂和胆固醇，大豆卵脂与胆固醇的质量比为8∶5，使用聚乙烯醇作为溶剂混匀，聚乙烯醇溶剂与无菌水的体积比为3∶2，制备得到snap25-htt融合基因纳米脂质体；s3、将制备好的snap25-htt融合基因纳米脂质体和甘露糖醇加入到无菌水溶液中，搅拌均匀，其中snap25-htt融合基因纳米脂质体的添加量为0.1％，甘露糖醇的添加量为5.5％；s4、将s3中的溶液在-20℃预冷冻24h，然后放入倒真空冷冻干燥机中冻干得到冻干粉；s5、将上述冻干粉进行质量检测，检测合格后封装。优选的，所述步骤s1中的snap25-htt150q融合基因的提取方法如下：首先，将150q的htt基因第一外显子与snap25基因融合；其次，对prk5载体进行改造，插入小鼠朊病毒启动子和pmel、spel酶切位点，然后将snap25-htt融合基因构建到改造后的prk5载体上；再次，将质粒载体转化入top10感受态细胞，涂氨苄抗性平板24h后挑3-5个克隆，摇菌，用质粒小提试剂盒提取质粒，用pmel和spel对3-5个克隆所提的质粒进行酶切鉴定，酶切鉴定过正确的细菌克隆再次接种并扩大到250ml的菌液，用质粒大提试剂盒进行质粒提取；最后，将提取到的质粒用pmel和spel进行酶切，并用凝胶电泳法回收snap25-htt融合基因片段。优选的，所述酶切鉴定的鉴定引物分为正向引物和反向引物；其中正向引物为5′-atgaaggccttcgagtccctcaagtccttc-3′，反向引物5′-aaactcacggtcggtgcagcggctcctcag-3′。优选的所述步骤s2中的制备得到的snap25-htt融合基因脂质体的粒径为30nm。因此，本发明采用上述一种含snap25-htt150q融合基因纳米脂质体的面部抗皱冻干粉及其制备方法，能够将snap25-htt150q融合基因轻易地传递到突触部位发挥作用，最后再采用真空冷冻干燥的方式制作成冻干粉，以便长时间保持snap25-htt150q融合基因的活性，具有良好的抗皱和去皱作用。下面通过实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。具体实施方式下面对本发明的实施方式做进一步的说明。本发明提供了一种含snap25-htt150q融合基因纳米脂质体的面部抗皱冻干粉，包括以下原料：按质量百分比计，snap25-htt融合基因纳米脂质体为0.1％、甘露糖醇为5.5％，其余为无菌水，snap25-htt融合基因纳米脂质体由snap25-htt融合基因、无菌水、大豆卵脂、胆固醇和聚乙烯醇组成，大豆卵脂和胆固醇的质量比为8∶5，聚乙烯醇与无菌水的体积比为3∶2。一种含snap25-htt150q融合基因纳米脂质体的面部抗皱冻干粉的制备方法，包括以下步骤：s1、提取snap25-htt融合基因，具体的提取方法如下：首先，将150q的htt基因第一外显子与snap25基因融合；其次，对prk5载体进行改造，插入小鼠朊病毒启动子和pmel、spel酶切位点，然后将snap25-htt融合基因构建到改造后的prk5载体上；再次，将质粒载体转化入top10感受态细胞，涂氨苄抗性平板24h后挑3-5个克隆，摇菌，用质粒小提试剂盒提取质粒，用pmel和spel对3-5个克隆所提的质粒进行酶切鉴定，酶切鉴定的鉴定引物分为正向引物和反向引物，其中正向引物为5′-atgaaggccttcgagtccctcaagtccttc-3′，反向引物5′-aaactcacggtcggtgcagcggctcctcag-3′，酶切鉴定过正确的细菌克隆再次接种并扩大到250ml的菌液，用质粒大提试剂盒进行质粒提取；最后，将提取到的质粒用pmel和spel进行酶切，并用凝胶电泳法回收snap25-htt融合基因片段。s2、将提取到的snap25-htt融合基因采用纳米脂质体技术包裹，具体为将得到的snap25-htt融合基因溶解在无菌水中，加入大豆卵磷脂和胆固醇，大豆卵脂与胆固醇的质量比为8∶5，使用聚乙烯醇作为溶剂混匀，聚乙烯醇溶剂与无菌水的体积比为3∶2，制备得到snap25-htt融合基因纳米脂质体，粒径为30nm。s3、将制备好的snap25-htt融合基因纳米脂质体和甘露糖醇加入到无菌水溶液中，搅拌均匀，其中snap25-htt融合基因纳米脂质体的添加量为0.1％，甘露糖醇的添加量为5.5％。s4、将s3中的溶液在-20℃预冷冻24h，然后放入倒真空冷冻干燥机中冻干得到冻干粉。s5、将上述冻干粉进行质量检测，检测合格后封装。实施例1效果实验：挑选35-45岁的健康女性200人进行为期30天的试验。将200人随机分为2组，每组100人。设置为对照组和实验组。对照组使用仅含有甘露糖醇的冻干粉，实验组使用含有snap25-htt150q融合基因的冻干粉。30天后采用visa测量仪测试试验人员的口周及眼眶周围的抗皱效果。皱纹以如下3个标准作为衡量。浅皱纹：弹性组织轻度变性，即细微的组织改变伴皮纹略加深。重度皱纹：弹性组织中度变性，即出现明显的丘疹样弹性组织变性，黄色半透明丘疹，皮肤变色。重度皱纹：弹性组织重度变性，即多丘疹样及融合的弹性组织变性，菱形皮肤增厚、黄或苍白。组别显著良好一般无效过敏对照组01113760实验组7617520运用统计学方法进行分析，发现实验数据具有明显的统计学差异，snap25-htt150q融合基因纳米脂质体冻干粉具有良好的抗皱和去皱作用。因此，本发明采用上述一种含snap25-htt150q融合基因纳米脂质体的面部抗皱冻干粉及其制备方法，能够将snap25-htt150q融合基因轻易地传递到突触部位发挥作用，最后再采用真空冷冻干燥的方式制作成冻干粉，以便长时间保持snap25-htt150q融合基因的活性，具有良好的抗皱和去皱作用。最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其进行限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而这些修改或者等同替换亦不能使修改后的技术方案脱离本发明技术方案的精神和范围。当前第1页12