替唑尼特药物组合物及其医药用途的制作方法

1.本发明涉及含有替唑尼特和胆碱的药物组合物及其医药用途。


背景技术：

2.硝唑尼特(化学名：邻-n-(5-硝基噻唑-2-基)氨基甲酰基-苯酚-乙酸酯；英文名：nitazoxanide)是一种硝基噻唑水杨酸酰胺衍生物，具有抗原虫、抗肠道寄生虫、抗菌等药效。
3.进一步的研究发现，硝唑尼特还具有广谱的抗病毒活性(rossignol jf.antiviral research 2014；110：94-103)，对甲型流感病毒、乙型流感病毒、禽流感、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、冠状病毒、轮状病毒、诺如病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、登革热病毒、黄热病病毒、乙型脑炎病毒及人免疫缺陷病毒等均有抑制作用。
4.硝唑尼特对结核杆菌(ranjbar s，et al.iscience.2019；22：299-313.)和幽门螺旋杆菌(basu pp，et al.am j gastroenterol 2011；106：1970-1975)也有较好的抑制作用。
5.中国发明专利(cn109069648a)公开了硝唑尼特治疗胆汁淤积和纤维化疾病的用途；所述的纤维化疾病包括肝纤维化、肺纤维化等。
6.硝唑尼特还具有抗肿瘤作用(di santo n and ehrisman j..mutationresearch 2014；768：16-21)，对卵巢癌(di santo n and ehrisman j. cancers 2013；5：1163-1176)和结肠癌(senkowski w，zhang x，et al.mol cancer ther 2015；14：1504-1516)等均有较强的抑制作用。
7.但是与大多数具有新用途前景的老药一样，硝唑尼特的这些新的药理作用的临床疗效还有待提高。硝唑尼特难溶于水(水中溶解度0.000189mg/ml)，剂量较大(500mg/次，2次/天)，口服生物利用度低，在肺中难以达到有效的抗病毒浓度，因此其口服给药对呼吸道病毒感染的治疗作用受到限制。
8.如何提高老药的疗效，成为制约其发挥新的药效用途的瓶颈。
9.硝唑尼特口服后，在体内转化为活性代谢产物替唑尼特(英文名： tizoxanide)和非活性代谢产物葡萄糖醛酸结合物：
[0010][0011]
人口服硝唑尼特后，血液中检测不出硝唑尼特原型，只能检测到替唑尼特和葡萄糖醛酸结合物，葡萄糖醛酸的系统暴露高于替唑尼特。


技术实现要素：

[0012]
本发明意外发现，替唑尼特与一定比例的胆碱形成的组合物，口服给药，替唑尼特的生物利用度显著提高。
[0013]
因此，本发明提供含有替唑尼特和胆碱的药物组合物。
[0014]
本发明进一步提供含有替唑尼特和胆碱的药物组合物，其中替唑尼特和胆碱的摩尔比例为1∶4～1∶0.25。
[0015]
优选地，本发明提供含有替唑尼特和胆碱的药物组合物，其中替唑尼特和胆碱的摩尔比例为1∶2～1∶0.5。
[0016]
本发明更意外地发现，替唑尼特与胆碱能够形成摩尔比例为1∶1的复合物。
[0017]
因此，本发明还提供含结构式i所示的替唑尼特和胆碱的组合物：
[0018][0019]
本发明还提供式i所示的替唑尼特和胆碱的复合物，其特征在于使用cu-k α辐射，以2θ角度表示的其粉末x-射线衍射图谱，包含2θ角值为9.92
±
0.10； 11.78
±
0.10；15.10
±
0.10；16.16
±
0.10；19.72
±
0.10；19.88
±
0.10；20.69
±
0.10； 25.66
±
0.10；27.59
±
0.10和28.88
±
0.10的峰，其中9.92
±
0.10的峰为最强峰。
[0020]
上述含有替唑尼特和胆碱的药物组合物中还含有非毒性药学上可接受的药用载体或赋形剂。
[0021]
上述含有替唑尼特和胆碱的药物组合物为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、混悬剂、溶液剂或锭剂。
[0022]
上述含有替唑尼特和胆碱的药物组合物可以通过口服或注射的途径给药。
[0023]
本发明提供含有替唑尼特和胆碱，以及非毒性药学上可接受的药用载体或赋形剂的药物组合物，在制备抗病毒药物中的用途；所述的抗病毒药物选自抗肝炎病毒药物、抗呼吸道病毒药物；所述的抗肝炎病毒药物包含抗乙肝病毒药物、抗丙肝病毒药物；抗呼吸道病毒药物包含抗流感病毒药物、抗冠状病毒药物。
[0024]
本发明还提供含有替唑尼特和胆碱，以及非毒性药学上可接受的药用载体或赋形剂的药物组合物，在制备治疗抗纤维化药物中的用途；所述的抗纤维化药物选自抗肝纤维化药物、抗肺纤维化药物。
[0025]
本发明还提供含有替唑尼特和胆碱，以及非毒性药学上可接受的药用载体或赋形剂的药物组合物，在制备抗细菌药物中的用途；所述的抗细菌药物选自抗幽门螺旋杆菌药物、抗结核杆菌药物。
[0026]
本发明还提供含有替唑尼特和胆碱，以及非毒性药学上可接受的药用载体或赋形剂的药物组合物，在制备抗肿瘤药物中的用途；所述的抗肿瘤药物包括抗卵巢癌药物和抗结肠癌药物。
[0027]
本发明还提供含有替唑尼特和胆碱，以及非毒性药学上可接受的药用载体或赋形
剂的药物组合物，在制备抗肠道寄生虫药物中的用途；所述的抗肠道寄生虫药物选自抗微小隐孢子虫药物、抗蓝氏贾第鞭毛虫药物。
附图说明
[0028]
附图1为i的粉末x衍射图谱；横坐标为2θ角，纵坐标为吸收峰的强度。
具体实施方式
[0029]
下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，这些实施例不应作为对本发明的范围的限制。
[0030]
替唑尼特胆碱复合物可以按照如下合成路线制备：
[0031][0032][0033]
硝唑尼特在盐酸作用下水解脱去乙酰基，得到去乙酰化硝唑尼特即替唑尼特；后者与氢氧化胆碱作用，得到替唑尼特胆碱复合物(i)。
[0034]
实施例1替唑尼特的制备
[0035]
在500ml三口瓶中加入300毫升浓盐酸，搅拌下加入50克硝唑尼特；加完后，将反应混合物于50℃搅拌反应20小时。将反应混合物冷却至室温，过滤，滤饼依次用少量水和丙酮洗涤，抽干，于45℃干燥，得42.6克淡黄色粉末。
[0036]
实施例2替唑尼特胆碱复合物(i)的制备
[0037]
在1000毫升三口瓶中加入500毫升甲醇，搅拌下加入50克替唑尼特，搅拌均匀；于室温下搅拌，滴加57.2克40％的胆碱水溶液；加毕，将体系升温至45℃搅拌反应1小时。趁热过滤，将滤液于-5℃下放置过夜；过滤，将滤饼用100ml甲醇淋洗，抽干，干燥，得到49.03克黄色结晶性粉末(i)。核磁共振氢谱s(ppm，dmso-d6，600mhz)：3.10(9h，s)；3.38-3.40(2h，dd)；3.81-3.85 (2h，m)；5.26-5.27(1h，t)；6.79-6.82(2h，m)；7.29-7.32(1h，m)；7.90-7.91(1h，m)； 8.50(1h，s)；14.70(1h，s)。
[0038]
实施例3结晶型的表征
[0039]
采用粉末x-射线衍射法和差示扫描量热法(dsc)对替唑尼特胆碱复合物(i)结晶型进行表征。
[0040]
粉末x-射线衍射测试条件及方法：仪器型号：dmax-2500；实验方法：将待测样品研
细为200-300目，扫描角度范围3.0-60.0度，扫描速度为0.15 度/秒计数。
[0041]
附图1为i的粉末x衍射图谱；横坐标为2θ角，纵坐标为吸收峰的强度。
[0042]
实施例4大鼠口服药代动力学评价
[0043]
将34.75mg硝唑尼特加于10ml 0.5％的羧甲基纤维素钠溶液中，混合均匀，备用；
[0044]
将41.67mg替唑尼特胆碱复合物(i)加于10ml 0.5％的羧甲基纤维素钠溶液中，混合均匀，备用；
[0045]
将30mg替唑尼特加于5ml 0.5％的羧甲基纤维素钠溶液中，加入一定比例的40％的胆碱水溶液，混合均匀，然后再加入0.5％的羧甲基纤维素钠溶液至终体积10ml，得到替唑尼特胆碱混合物备用。
[0046]
sd雄性大鼠，体重为180至220g，每组3只；所有动物给药前禁食12 小时。分别灌胃给予硝唑尼特、替唑尼特胆碱复合物(i)或替唑尼特胆碱混合物(10ml/kg)。于给药前和给药后15min，30min，1h，2h，4h，6h，8h，24 h，经颈静脉采血，0.2ml/次，肝素钠抗凝，离心分离血浆，置于-80℃保存待测定。用lc-ms/ms测定血浆中替唑尼特的含量(仪器：lc-ms/ms-19，tq5500 triple quad)；内标(is)：甲苯磺丁脲；质谱条件：电喷雾离子源，负离子多重反应检测(tizoxanide：q1/q3 masses：263.80/217.00da，内标：q1/q3masses：269.20/106.10da)；液相条件：流动相a：0.3％甲酸水溶液，流动相b：0.1％甲酸乙腈溶液；色谱柱：acquity uplc cortecs t3 2.7μm (2.1*100mm)；柱温：40℃；流速：0.6ml/min。
[0047]
通过不同时间点的血药浓度数据，运用winnonlin计算药代动力学参数。结果见表1：
[0048]
表1大鼠口服药代动力学评价结果
[0049][0050]
实施例5体内抗乙肝病毒作用的评价
[0051]
将垂直传播感染、dhbv dna检测阳性的麻鸭随机分组，每组8只。将待测化合物以0.1％的羧甲基纤维素钠配制成悬浮液，灌胃给药，每天一次。分别在给药前(t0天)、给药7天(t7天)、给药14天(t
14
天)、给药21天(t
21
天)和给药28 天(t
28
天)时静脉采血，分离血清，-70℃冻存待检。
[0052]
应用斑点分子杂交法测定血清中dhbv dna含量：取上述鸭血清，每批同时点膜，测定鸭血清中dhbv dna水平的变化，按缺口翻译试剂盒说明书方法，用
32
p标记dhbv dna探针，
并作鸭血清斑点杂交(dot blot)实验。放射自显影后，用酶联免疫测定仪测定放射自显影x胶片上斑点的光谱吸光度(滤光片波长为490nm)od
490
，od
490
值越高，说明病毒含量越高。
[0053]
测定结果见表2：
[0054]
表2体内抗鸭乙肝病毒作用的评价结果
[0055][0056]
注：药物组给药不同时间与给药前(t0)比较：**p＜0.01 *p＜0.05 药物组与对照组相同时间比较：
δδ
p＜0.01 δ
p＜0.05
[0057]
实施例6用小鼠模型评价抗流感病毒的作用
[0058]
雄性昆明种小鼠，体重为18-22克，随机分为正常组、模型组和给药组，每组10只。将模型组和给药组小鼠以10倍ld
50
剂量的甲型流感病毒小鼠肺适应株a/pr/8/34滴鼻染毒；将待测化合物以0.1％的羧甲基纤维素钠配制成悬浮液，在感染后1小时灌胃给药，每天2次，连续给药5天。观察小鼠死亡情况，连续记录14天，考察存活率。
[0059]
实验结果见表3：
[0060]
表3目标化合物对流感病毒感染小鼠的保护作用
[0061]