使用贝那利珠单抗改善哮喘症状的方法与流程

序列表的引用

本申请含有已经以ascii格式电子递交的序列表并且该序列表通过引用以其全文结合在此。所述ascii副本创建于2014年7月16日，名称为il5r-605wo1_sl.txt并且大小为15,940字节。

背景

全世界有超过3亿人患有哮喘。尽管使用了长效支气管扩张药和吸入用皮质类固醇，但是哮喘仍然是全球发病率的主要来源。(马索利(masoli)m等人，变态反应(allergy)59:469-78(2004))。

已经报道了尽管在出院时使用全身性类固醇，但急性哮喘恶化后的复发在12周时介于41％至52％的范围内(莱德利(lederle)f等人，内科学文献(archintmed)147:2201-03(1987))。由于严重的难治病或不能和/或不愿意配合医学治疗，已经证明这些患者的管理存在问题。在入院患者(其中一些患有几乎致命的哮喘)的一个研究中，在出院7天后，50％不配合继续使用全身性皮质类固醇(克里斯南(krishnan)j等人，美国呼吸与危重监护杂志(ajrccm)170:1281-85(2004))。许多因素可能造成不依从，包括难以获得常规质量的医疗服务(特别是在市中心)，缺乏对其疾病的教育或理解，不愿意接受其疾病的慢性性质，或不能获得药物。

许多条证据都暗示嗜酸性粒细胞是导致哮喘气道炎症的主要细胞之一(詹姆斯(james)a.，肺部医学新观点(curropinpulmmed)11(1):1-6(2005))。外周血(pb)嗜酸性粒细胞增多是急性哮喘复发的一个风险因素(詹森(janson)c和海拉拉(herala)m，呼吸道医学(respmed)86(2):101-104(1992))。在患有外周血嗜酸性粒细胞增多症的受试者中，因哮喘而死亡的风险比没有嗜酸性粒细胞增多症的那些受试者大7.4倍(置信区间，2.8-19.7)(乌尔里克(ulrik)c和弗雷德里克森(fredericksen)j，胸部杂志(chest)108:10-15(1995))。尸检结果已经识别出致命哮喘的2种相异的病原性发炎机制(雷斯特雷波(restrepo)r和彼得斯(peters)j，肺部医学新观点杂质(j.curropinpulmmed)14:13-23(2008))。在突然死亡(大致在症状发作2小时内)的那些受试者中，嗜中性粒细胞浸润更突出，而在死于更持久的哮喘危机的那些受试者中，嗜酸性粒细胞浸润更为常见。在送到ed的患有哮喘症状快速发作的患者中，痰和血液嗜酸性粒细胞也可能增加(贝里多-卡萨多(bellido-casado)j等人，呼吸道疾病文献(archbronconeumol)46(11):587-93(2010))。与临床指南的使用相比，靶向嗜酸性粒细胞的疗法导致哮喘恶化的次数和严重性降低(格林(green)r等人，柳叶刀(lancet)，360:1715-21(2002)；哈尔达(haidar)p等人，新英格兰医学杂志(nejm)360:973-84(2009))。

贝那利珠单抗(medi-563)是结合到白介素-5受体α(il-5rα)的α链上的一种人源化单克隆抗体(mab)，其在嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞上表达。它通过抗体依赖性细胞毒性来诱导这些细胞凋亡。向具有轻度哮喘的成人给予单次静脉内(iv)剂量的贝那利珠单抗引起长期的pb嗜酸性粒细胞减少，这可能归因于对表达靶标的嗜酸性粒细胞/嗜碱性粒细胞骨髓祖细胞的作用(布塞(busse)w等人，过敏与临床免疫学杂志(jaci)125:1237-1244e2(2010))。此外，贝那利珠单抗的单个剂量显著降低了被送往急诊部的具有严重哮喘恶化的受试者中的血液嗜酸性粒细胞计数，但并不影响哮喘控制问卷(acq)分数，该哮喘控制问卷分数提供了哮喘症状的评估(wo2013/066780)。

该acq是评估哮喘症状的患者报告(夜间醒来，醒来时的症状，活动受限，气促，喘息)和日常救援支气管扩张药的使用以及每秒用力呼气量(fev1)的问卷。朱尼珀(juniper)等人，欧洲呼吸杂志(eur.respir.j.)14:902-7(1999)和朱尼珀(juniper)等人，胸科杂志(chest)，115:1265-70(1999)。问题是等加权的，并且从0(被完全控制)至6(严重失控)进行评分。平均acq分数是响应的均值。≤0.75的平均分数表示控制良好的哮喘；在0.75和≤1.5之间的分数表示部分控制的哮喘；并且>1.5的分数表示未控制的哮喘。朱尼珀(juniper)等人，呼吸道医学(respir.med.)100:616-21(2006)。至少0.5的个体变化被认为是具有临床意义的。朱尼珀(juniper)等人，呼吸道医学(respir.med.)99:553-8(2005)。该acq-6是评估哮喘症状(夜间醒来，醒来时的症状，活动受限，气促，喘息，和短效β2激动剂使用)的acq的简化版本，其从原acq分数省略了fev1测量。其他问卷，例如哮喘治疗评估问卷(ataq)、哮喘控制测试(act)、哮喘生命质量问卷(aqlq)、和哮喘日记也可以用来评估哮喘症状。

因此，鉴于改善哮喘症状的高度未满足的需要，例如，如使用acq所测量的，并且鉴于一些患有哮喘的患者具有嗜酸性粒细胞组分，检测了贝那利珠单抗对成人受试者的哮喘问卷的影响。

概述

在此提供了改善哮喘患者的哮喘问卷分数的方法。在某些方面，改善哮喘患者的哮喘问卷分数的方法包括向患者给予有效量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在某些方面，该问卷评估了选自下组的至少一种症状，该组由以下各项组成：夜间醒来，醒来时的症状，活动受限，气促，喘息，救援药物的使用，日间症状频率及严重性，夜间症状频率及严重性，活动回避和活动受限，哮喘相关的焦虑，和疲劳。在某些方面，该问卷评估了：夜间醒来，醒来时的症状，活动受限，气促，喘息，和救援药物的使用。在某些方面，该问卷评估了日间症状频率、日间症状严重性、和夜间严重性。在某些方面，该问卷是哮喘控制问卷(acq)。在某些方面，该哮喘问卷是哮喘控制问卷-6(acq-6)。在某些方面，该哮喘问卷是哮喘生活质量问卷(aqlq)。

在此还提供了治疗哮喘的方法。在某些方面，治疗哮喘的方法包括向哮喘患者给予有效量的抗白介素-5受体(il-5r)贝那利珠单抗或其抗原结合片段，其中该患者在给予前具有至少300个细胞/μl的血液嗜酸性粒细胞计数。

在某些方面，治疗哮喘的方法包括向哮喘患者给予有效量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段，其中该患者在给予前具有至少75％预测值的每秒用力呼气量(fev1)。

在某些方面，治疗哮喘的方法包括向哮喘患者给予至少两个剂量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段。

在此处提供的方法的某些方面中，该给予改善了患者的哮喘症状。在某些方面，该哮喘症状选自下组，该组由以下各项组成：夜间醒来，醒来时的症状，活动受限，气促，喘息，救援药物的使用，日间症状频率及严重性，夜间症状频率及严重性，活动回避和活动受限，哮喘相关的焦虑，和疲劳。

在此处提供的方法的某些方面中，该患者的acq分数降低。在某些方面，该患者的acq-6分数降低。在某些方面，在第一次给予的7周内，该患者的acq-6分数降低。在某些方面，该acq-6分数降低至少0.5。在某些方面，该acq-6分数降低至少1。在某些方面，该acq-6分数降低至少2。

在此处提供的方法的某些方面中，该哮喘是嗜酸粒细胞性哮喘。在某些方面，该患者具有至少300个细胞/μl的血液嗜酸性粒细胞计数。

在此处提供的方法的某些方面中，该患者在给予之前具有至少75％预测值的每秒用力呼气量(fev1)。在某些方面，该患者使用高剂量的吸入用皮质类固醇(ics)。在某些方面，该患者在给予前具有至少1.5的哮喘控制问卷分数。在某些方面，该患者使用长效的β2激动剂(laba)。在某些方面，该患者具有恶化史。在某些方面，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之前的那年中，恶化史包括至少两次恶化。在某些方面，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之前的那年中，恶化史包括不超过六次恶化

在此处提供的方法的某些方面中，向患者给予了至少两个剂量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段。

在此处提供的方法的某些方面中，以约2mg至约100mg/剂量给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在某些方面，以约20mg/剂量给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在某些方面，以约30mg/剂量给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在某些方面，以约100mg/剂量给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段。

在此处提供的方法的某些方面中，每四周一次至每十二周一次给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在某些方面，每四周给予一次贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在某些方面，每八周给予一次贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在某些方面，每四周给予一次贝那利珠单抗或其抗原结合片段持续12周，并且然后每八周给予一次。

在此处提供的方法的某些方面中，胃肠外给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在某些方面，皮下给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段。

在此处提供的方法的某些方面中，除了皮质类固醇疗法之外，还给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段。

在某些方面，改善哮喘患者的哮喘问卷分数的方法包括向哮喘患者给予20-100mg的贝那利珠单抗或其抗原结合片段，其中该患者在给予前具有至少300个细胞/μl的血液嗜酸性粒细胞计数。在某些方面，该方法包括给予20mg的贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在某些方面，每四周给予一次20mg的贝那利珠单抗持续12周，并且然后每八周给予一次。在某些方面，该方法包括给予30mg的贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在某些方面，每四周给予一次30mg的贝那利珠单抗持续8周，并且然后每八周给予一次。在某些方面，每四周给予一次30mg的贝那利珠单抗。在某些方面，该方法包括给予100mg的贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在某些方面，每四周给予一次100mg的贝那利珠单抗持续12周，并且然后每八周给予一次。

在某些方面，治疗哮喘患者中哮喘的方法包括向患者给予至少2并且少于100mg剂量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在某些方面，该方法包括给予20mg的贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在某些方面，该方法包括给予30mg的贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在某些方面，该方法治包括给予至少20并且少于100mg剂量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在某些方面，该方法治包括给予至少30并且少于100mg剂量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在某些方面，该方法降低了哮喘的恶化率。在某些方面，该方法降低了哮喘的年恶化率。在某些方面，给予是皮下给予。

在所提供的方法的某些方面中，贝那利珠单抗或其抗原结合片段的给予引起了如图2-10中所示的哮喘症状的改善。

在所提供的方法的某些方面中，贝那利珠单抗或其抗原结合片段的给予导致实例1-2中所示的哮喘症状的改善。

附图/图简要说明

图1显示出了研究流程图。

图2显示出了，在用安慰剂、2mg贝那利珠单抗、20mg贝那利珠单抗、或100mg贝那利珠单抗治疗后的24周时，在具有少于300个嗜酸性粒细胞/μl的患者中以及具有至少300个嗜酸性粒细胞/μl的患者中，偏离基线acq-6的变化。

图3显示出了，在用安慰剂、2mg贝那利珠单抗、20mg贝那利珠单抗、或100mg贝那利珠单抗治疗后，在具有少于300个嗜酸性粒细胞/μl的患者中以及具有至少300个嗜酸性粒细胞/μl的患者中，间歇期(24周)和阶段i(52周)的偏离基线acq-6的变化。

图4显示出了，在用安慰剂、2mg贝那利珠单抗、20mg贝那利珠单抗、或100mg贝那利珠单抗治疗后，在中等或高吸入用皮质类固醇(ics)使用的患者中，间歇期(24周)和阶段i(52周)自基线acq-6的变化。

图5显示出了，在用安慰剂、2mg贝那利珠单抗、20mg贝那利珠单抗、或100mg贝那利珠单抗治疗后，在具有少于300个嗜酸性粒细胞/μl的以及(i)中等ics使用或(ii)高ics使用的患者中，间歇期(24周)和阶段i(52周)的偏离基线acq-6的变化。

图6显示出了，在用安慰剂、2mg贝那利珠单抗、20mg贝那利珠单抗、或100mg贝那利珠单抗治疗后，在具有至少300个嗜酸性粒细胞/μl的以及(i)中等ics使用或(ii)高ics使用的患者中，间歇期(24周)和阶段i(52周)的偏离基线acq-6的变化。

图7a和7b显示出了，具有各种嗜酸性粒细胞计数的患者的偏离基线acq-6的变化。

图8显示出了，在具有至少300个嗜酸性粒细胞/μl的患者中平均acq-6变化的时程。

图9显示出了，在具有至少300个嗜酸性粒细胞/μl的患者中平均总日记症状分数变化的时程。

图10显示出了，在具有至少300个嗜酸性粒细胞/μl的患者中平均aqlq变化。

详细说明

应注意，术语“一个(a/an)”或“一种(a/an)”实体是指一个或多个或一种或多种该实体；举例来说，“一种抗il-5α抗体”应被理解为表示一种或多种抗il-5α抗体。因此，术语“一个”(或“一种”)、“一个或多个/一种或多种(oneormore)”以及“至少一个/至少一种(atleastone)”在此可以互换使用。

在此提供用于改善哮喘症状的方法，例如，使用哮喘问卷所评估的，如哮喘控制问卷(acq)、acq-6、哮喘治疗评估问卷(ataq)、哮喘控制测试(act)、哮喘生命质量问卷(aqlq)、或哮喘症状日记。该症状可以是，例如，夜间醒来，醒来时的症状，活动受限，气促，喘息，和/或救援药物(例如，支气管扩张药)的使用。该症状还可以是，例如，日间症状频率及严重性、夜间症状频率及严重性、活动回避和活动受限、哮喘相关的焦虑、疲劳和/或救援药物的使用。这些症状还可以是，例如，日间症状频率、日间症状严重性、和/或夜间症状严重性。所提供的方法包括给予有效量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段。

用于在此提供的方法中的关于贝那利珠单抗(或其片段)的信息可以发现于美国专利申请公开号us2010/0291073a1，该文献的披露内容通过引用以其全文结合在此。用于在此提供的方法中的贝那利珠单抗及其抗原结合片段包括重链和轻链或重链可变区和轻链可变区。在另一个方面中，用于在此提供的方法中的贝那利珠单抗或其抗原结合片段包括seqidno:1-4的氨基酸序列中的任何一种。在一个特定方面，用于在此提供的方法中的贝那利珠单抗或其抗原结合片段包括seqidno:1氨基酸序列的轻链可变区和seqidno:3氨基酸序列的重链可变区。在一个特定方面，用于在此提供的方法中的贝那利珠单抗或其抗原结合片段包括seqidno:2氨基酸序列的轻链和seqidno:4氨基酸序列的重链。在一个特定方面，用于在此提供的方法中的贝那利珠单抗或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，其中该重链可变区包括卡巴特(kabat)所定义的seqidno:7-9的cdr1、cdr2、和cdr3序列，并且其中该轻链可变区包括卡巴特所定义的seqidno:10-12的cdr1、cdr2、和cdr3序列。本领域普通技术人员将很容易就能鉴别乔西亚(chothia)所定义的、艾伯姆(abm)所定义的或其他cdr。在一个特定方面，用于在此提供的方法中的贝那利珠单抗或其抗原结合片段包括如在u.s.6,018,032中所披露的km1259抗体的可变重链和可变轻链cdr序列，该参考文件通过引用以其全部内容结合在此。

在某些方面，向送到医师办公室或ed的患有哮喘的患者给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段。鉴于贝那利珠单抗能够减少或耗尽嗜酸性粒细胞计数持续长达12周或更长时间(参见us2010/0291073)，可以仅一次或不频繁地给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段，同时仍为患者提供改善acq和/或acq-6的益处。在另一个方面，向患者给予另外的后继剂量。取决于患者的年龄、重量、配合医生指示的能力、临床评价、嗜酸性粒细胞计数(血液或痰嗜酸性粒细胞)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白质(ecp)测量值、来源于嗜酸性粒细胞的神经毒素测量值(edn)、主要碱性蛋白(mbp)测量值以及其他因素，包括主治医生的判断，可以按不同时间间隔来给予后续剂量。剂量之间的时间间隔可以是每四周、每五周、每6周、每8周、每10周、每12周或更长的时间间隔。在某些方面，剂量之间的时间间隔可以是每4周、每8周或每12周。在某些方面，在哮喘患者呈现出急性恶化(例如，轻度、中度和重度恶化)后不久，向该患者给予单个剂量或第一剂量。举例来说，可以在送到诊所或前往就诊期间，或在极严重恶化的情况下，在急性恶化的1、2、3、4、5、6、7或更多天，例如7天内，给予单个或第一剂量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段，使患者的症状在给予贝那利珠单抗之前即稳定。

在一些实施例中，向患者给予了至少两个剂量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段。在一些实施例中，向患者给予了至少三个剂量、至少四个剂量、至少五个剂量、至少六个剂量、或至少七个剂量。在一些实施例中，在四周的过程中、在八周的过程中、在十二周的过程中、在二十四周的过程中、或在一年的过程中给予了贝那利珠单抗或其抗原结合片段。

向患者给予的贝那利珠单抗或其抗原结合片段的量将取决于各种参数，例如，患者的年龄、体重、临床评价、嗜酸性粒细胞计数(血液或痰的嗜酸性粒细胞)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白质(ecp)测量值、来源于嗜酸性粒细胞的神经毒素测量值(edn)、主要碱性蛋白(mbp)测量值和其他因素，包括主治医生的判断。在某些方面，给药或给药间隔不取决于痰的嗜酸性粒细胞水平。

在某些方面，该患者被给予一个或多个剂量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段，其中该剂量是约2mg至约100mg，例如约20mg至约100mg、或约30mg至约100mg。在某些特定方面，患者被给予一个或多个剂量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段，其中该剂量是约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、或约100mg。在一些实施例中，该剂量是约20mg。在一些实施例中，该剂量是约30mg。在一些实施例中，该剂量是约100mg。

在某些方面，根据在此提供的方法，贝那利珠单抗或其抗原结合片段的给予是通过胃肠外给予。例如，贝那利珠单抗或其抗原结合片段可以通过静脉内输注或通过皮下注射给予。

在某些方面，根据在此提供的方法，贝那利珠单抗或其抗原结合片段与额外哮喘疗法组合或一起给予。这些疗法包括但不限于吸入用皮质类固醇疗法、长期或短期支气管扩张剂治疗、氧气补充或例如naepp指南中所描述的其他标准疗法。在某些方面，使用在此提供的方法，即，在对哮喘管理标准形式的依从性差的情况下，对具有急性恶化史的哮喘患者给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段作为辅助疗法。

在此提供的方法可以显著降低哮喘患者acq或acq-6分数。acq或acq-6的变化可以用基于庞大患者群体所预期的acq或acq-6来测量，基于对照群体中所测量的acq或acq-6来测量、或基于在给予前的单个患者的acq或acq-6来测量。在某些方面，患者群体是那些在过去的一年中具有≥2次恶化，需要口服的全身皮质类固醇的患者。在某些方面，患者群体是那些在过去的一年中具有≥2次的恶化，需要全身皮质类固醇爆发并且在过去的一年中具有≤6次的恶化，需要全身皮质类固醇爆发的患者。在某些方面，该患者群体是具有至少300个细胞/μl的嗜酸性粒细胞计数的患者。

在某些方面，使用在此提供的方法，即，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之后经24周，相比于患者的基线acq或acq-6，给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段改善了acq或acq-6分数。在某些方面，患者以周期性间隔接受后续剂量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段，例如，每4周、每5周、每6周、每8周、每12周、或如基于患者年龄、体重、配合医生指示的能力、临床评价、嗜酸性粒细胞计数(血液或痰嗜酸性粒细胞)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白质(ecp)测量值、来源于嗜酸性粒细胞的神经毒素测量值(edn)、主要碱性蛋白(mbp)测量值和其他因素，包括主治医生的判断所安排的。经24周，使用在此提供的方法可以降低acq或acq-6分数至少0.4、至少0.5、至少0.6、至少0.7、至少0.8、至少0.9、至少1.0、至少1.1、至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少1.6、至少1.7、至少1.8、至少1.9、至少2.0、至少2.1、至少2.2、至少2.3、至少2.4、至少2.5、至少2.6、至少2.7、至少2.8、至少2.9、或至少3.0。

在其他方面，使用在此提供的方法，即，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之后经52周，向哮喘患者给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段改善了acq或acq-6分数。在某些方面，患者以周期性间隔接受后续剂量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段，例如，每4周、每5周、每6周、每8周、每12周、或如基于患者年龄、体重、配合医生指示的能力、临床评价、嗜酸性粒细胞计数(血液或痰嗜酸性粒细胞)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白质(ecp)测量值、来源于嗜酸性粒细胞的神经毒素测量值(edn)、主要碱性蛋白(mbp)测量值和其他因素，包括主治医生的判断所安排的。在某些方面，间隔是每4周、每8周或每12周。使用在此提供的方法可以降低acq或acq-6分数至少0.4、至少0.5、至少0.6、至少0.7、至少0.8、至少0.9、至少1.0、至少1.1、至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少1.6、至少1.7、至少1.8、至少1.9、至少2.0、至少2.1、至少2.2、至少2.3、至少2.4、至少2.5、至少2.6、至少2.7、至少2.8、至少2.9、或至少3.0。

在某些方面，使用在此提供的方法，即，给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段在4周内、在7周内、在8周内、在9周内、在10周内、在12周内、在16周内、在20周内、在24周内、在28周内、在32周内、在36周内、在40周内、在44周内、在48周内、或在52周内降低了acq或acq-6分数。

在此提供的方法还可显著改善测量日间症状频率、日间症状严重性、和夜间症状严重性的哮喘症状日记分数中的分数。此类日记症状分数的变化可以用基于庞大患者群体所预期的日记症状分数来测量，基于对照群体中所测量的日记症状分数来测量、或基于在给予前的单个患者的日记症状分数来测量。在某些方面，患者群体是那些在过去的一年中具有≥2次恶化，需要口服的全身皮质类固醇的患者。在某些方面，患者群体是那些在过去的一年中具有≥2次的恶化，需要全身皮质类固醇爆发并且在过去的一年中具有≤6次的恶化，需要全身皮质类固醇爆发的患者。在某些方面，该患者群体是具有至少300个细胞/μl的嗜酸性粒细胞计数的患者。

在某些方面，使用在此提供的方法，即，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之后经24周，相比于患者的基线日记症状分数，给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段改善了日记症状分数。在某些方面，患者以周期性间隔接受后续剂量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段，例如，每4周、每5周、每6周、每8周、每12周、或如基于患者年龄、体重、配合医生指示的能力、临床评价、嗜酸性粒细胞计数(血液或痰嗜酸性粒细胞)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白质(ecp)测量值、来源于嗜酸性粒细胞的神经毒素测量值(edn)、主要碱性蛋白(mbp)测量值和其他因素，包括主治医生的判断所安排的。经24周，使用在此提供的方法可以减少日记症状分数至少0.5。

在其他方面，使用在此提供的方法，即，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之后经52周，向哮喘患者给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段改善了日记症状分数。在某些方面，患者以周期性间隔接受后续剂量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段，例如，每4周、每5周、每6周、每8周、每12周、或如基于患者年龄、体重、配合医生指示的能力、临床评价、嗜酸性粒细胞计数(血液或痰嗜酸性粒细胞)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白质(ecp)测量值、来源于嗜酸性粒细胞的神经毒素测量值(edn)、主要碱性蛋白(mbp)测量值和其他因素，包括主治医生的判断所安排的。在某些方面，间隔是每4周、每8周或每12周。使用在此提供的方法可以降低日记症状分数至少0.5。

在某些方面，使用在此提供的方法，即，给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段在4周、5周内、在6周内、在7周内、在8周内、在9周内、在10周内、在12周内、在16周内、在20周内、在24周内、在28周内、在32周内、在36周内、在40周内、在44周内、在48周内、或在52周内降低了日记症状分数。

在此提供的方法可以显著提高哮喘患者的aqlq分数。aqlq的变化可以用基于庞大患者群体所预期的aqlq来测量，基于对照群体中所测量的aqlq来测量、或基于在给予前的单个患者的aqlq来测量。在某些方面，患者群体是那些在过去的一年中具有≥2次恶化，需要口服的全身皮质类固醇的患者。在某些方面，患者群体是那些在过去的一年中具有≥2次的恶化，需要全身皮质类固醇爆发并且在过去的一年中具有≤6次的恶化，需要全身皮质类固醇爆发的患者。在某些方面，该患者群体是具有至少300个细胞/μl的嗜酸性粒细胞计数的患者。

在某些方面，使用在此提供的方法，即，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之后经24周，相比于患者的基线aqlq，给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段改善了aqlq分数。在某些方面，患者以周期性间隔接受后续剂量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段，例如，每4周、每5周、每6周、每8周、每12周、或如基于患者年龄、体重、配合医生指示的能力、临床评价、嗜酸性粒细胞计数(血液或痰嗜酸性粒细胞)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白质(ecp)测量值、来源于嗜酸性粒细胞的神经毒素测量值(edn)、主要碱性蛋白(mbp)测量值和其他因素，包括主治医生的判断所安排的。经24周，用在此提供的方法可以提高aqlq分数至少0.5、至少0.6、至少0.7、至少0.8、至少0.9、至少1.0、至少1.1、至少1.2、或至少1.3。

在其他方面，使用在此提供的方法，即，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之后经52周，向哮喘患者给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段改善了aqlq分数。在某些方面，患者以周期性间隔接受后续剂量的贝那利珠单抗或其抗原结合片段，例如，每4周、每5周、每6周、每8周、每12周、或如基于患者年龄、体重、配合医生指示的能力、临床评价、嗜酸性粒细胞计数(血液或痰嗜酸性粒细胞)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白质(ecp)测量值、来源于嗜酸性粒细胞的神经毒素测量值(edn)、主要碱性蛋白(mbp)测量值和其他因素，包括主治医生的判断所安排的。在某些方面，间隔是每4周、每8周或每12周。使用在此提供的方法可以提高aqlq分数至少0.4、至少0.5、至少0.6、至少0.7、至少0.8、至少0.9、至少1.0、至少1.1、至少1.2、或至少1.3。

在某些方面，使用在此提供的方法，即，给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段在4周内、在8周内、在9周内、在10周内、在12周内、在16周内、在20周内、在24周内、在28周内、在32周内、在36周内、在40周内、在44周内、在48周内、或在52周内提高了aqlq分数。

在某些方面，使用在此提供的方法，即，向哮喘患者给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段，改善了哮喘问卷分数(例如，哮喘控制问卷(acq))、降低了年恶化率和/或升高了每秒用力呼气量(fev1)。

在某些方面，患者是“嗜酸性粒细胞阳性”，意指哮喘可能是嗜酸粒细胞性哮喘的患者。

在某些方面，例如，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之前，该哮喘患者具有特定的血液嗜酸性粒细胞计数。例如，可以使用具有细胞分化的全血计数(cbc)来测量血液嗜酸性粒细胞计数。

在某些方面，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之前，该哮喘患者具有至少300个细胞/μl的血液嗜酸性粒细胞计数。在某些方面，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之前，该哮喘患者具有至少350个细胞/μl、至少400个细胞/μl、至少450个细胞/μl、或至少500个细胞/μl的血液嗜酸性粒细胞计数。

在某些方面，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之前，该哮喘患者具有少于300个细胞/μl的血液嗜酸性粒细胞计数。在某些方面，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之前，该哮喘患者具有至少100个细胞/μl、至少150个细胞/μl、至少180个细胞/μl、至少200个细胞/μl、或至少250个细胞/μl的血液嗜酸性粒细胞计数。

在某些方面，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之前，对该哮喘患者开处方或其已经在使用中等剂量的吸入用皮质类固醇(ics)。中等剂量的ics可以是每日至少600μg至1,200μg的布地奈德或等效剂量的另一种ics。

在某些方面，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之前，对该哮喘患者开处方或其已经在使用高剂量的ics。高剂量的ics可以是每日至少1,200μg的布地奈德或等效剂量的另一种ics。高剂量的ics还可以是每日大于1,200μg至2000μg的布地奈德或等效剂量的另一种ics。

在某些方面，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之前，对该哮喘患者开处方或其已经在使用口服皮质类固醇。在某些方面，贝那利珠单抗或其抗原结合片段的给予降低了哮喘患者的口服皮质类固醇的使用。在某些方面，该给予降低哮喘患者的口服皮质类固醇的使用至少50％。

在某些方面，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之前，对该哮喘患者开处方或其已经在使用长效β激动剂(laba)。

在某些方面，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之前，对该哮喘患者开处方或其已经在使用ics和laba二者。

在某些方面，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之前，该哮喘患者具有至少300个细胞/μl的血液嗜酸性粒细胞计数并且使用高ics。

在某些方面，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之前，该哮喘患者具有至少1.5、至少2.0、至少2.5、至少3.0、或至少3.5的acq或acq-6分数。在某些方面，在给予贝那利珠单抗或其抗原结合片段之前，该哮喘患者具有不超过3.2、不超过3.0、不超过2.9、或不超过2.8的acq或acq-6分数。

实例

实例1：患者与方法

(a)受试者

本研究中的受试者需要是18到75周岁，具有大于45kg并小于或等于150kg(大于100磅，但是小于或等于330磅)的体重。他们还必须在筛选之前已经具有持续哮喘最少12个月的医师诊断，连同在筛选之前医师开处方持续至少12个月每日使用中等剂量或高剂量吸入用皮质类固醇(ics)加长效β激动剂(laba)或中等剂量或高剂量的ics/laba的连续给药的任何组合。如本研究中所定义的中等和高剂量的ics显示于下表1中。

表1：估计的吸入用皮质类固醇的比较性日剂量

cfc＝含氯氟烃；dpi＝干粉吸入剂；hfa＝氢氟烷；mdi＝剂量计量化吸入剂。

在筛选之前，其他哮喘控制药物的剂量在受试者中必须已经稳定至少30天。受试者在筛选之前的12个月中，一定有至少2次，但不超过6次的记录的哮喘恶化，该受试者需要全身皮质类固醇爆发的使用。在筛选/准备期(下述)过程中，受试者还必须具有至少40％并且少于90％的预测的早间支气管扩张药前1秒用力呼气量(fev1)。受试者还必须满足以下标准之一：

a)具有在随机化之前36个月内记录的气流阻塞≥12％和≥200ml的支气管扩张药后逆转的证明，或具有在随机化之前36个月内记录的对乙酰甲胆碱激发有正向应答[pc20≤8mg/ml]的证明；或

b)在第3周筛选访问时，支气管扩张药后fev1≥12％和≥200ml的增长；或

c)若果a)和b)都不满足，并且所有其他入选/排除标准也不满足，那么具有在第2周筛选访问时所预计的≥1.5l和≥60％的fev1的受试者有资格在第2周筛选访问时、在可以使用乙酰甲胆碱测试的场所接受乙酰甲胆碱激发。如果该受试者获得了正向应答(pc20≤8mg/ml)，那么该入选标准符合。

受试者还必须在筛选/准备期过程中至少两次具有至少1.5的的哮喘控制问卷(acq)分数。

如果受试者具有10包每年或更高的香烟暴露，或在筛选之前12个月内曾一直吸烟，或具有任何就调查者或医疗监测者而言将干扰评估的病症(例如，除哮喘外的任何嗜酸粒细胞性下呼吸道疾病、慢性阻塞性肺病(copd)或囊性纤维病)，那么这些受试者不可以参加。如果受试者在筛选前30天内或在筛选/准备期过程中接受口服皮质类固醇爆发或短效全身皮质类固醇，那么这些受试者不可以参加。

(b)本研究的设计

本研究是2b期随机化、双盲、安慰剂对照、剂量变化、多中心研究(临床试验编号(clinicaltrials.govnumber)：nct01238861)，其中向哮喘患者皮下给予多剂量的贝那利珠单抗。以2、20、或100mg的剂量给予贝那利珠单抗，并且对患者随访1年。本研究的流程图示于图1中。

先于贝那利珠单抗或安慰剂的给予进行3周筛选/准备期。在3周期间，受试者在参与本研究之前持续使用相同的中等剂量或高剂量的ics/laba组合产品(ics/laba的剂量需要在3周筛选/准备期之前持续稳定30天)。受试者在整个研究中保持相同剂量的ics/laba。

所给予的贝那利珠单抗组合物包含贝那利珠单抗(50mg/ml)、10mm组氨酸、10mm组氨酸hcl一水合物、9％(w/v)海藻糖二水合物、和0.004％(w/v)聚山梨酯-20，其ph为6。所给予的安慰剂组合物包含10mm组氨酸、10mm组氨酸盐酸化物一水合物、9％(w/v)海藻糖二水合物、和0.02％(w/v)聚山梨酯-20，其ph为6。

受试者接受1ml的贝那利珠单抗或安慰剂的两次皮下(sc)注射，针对头3次剂量在第1周(第1天)、第4周、和第8周每四周进行一次，并且此后针对后4次剂量在第16周、第24、第32周、和第40周每8周进行一次。在第40周后，对受试者进行另一个12周的随访(至第52周)。接受第一剂量的贝那利珠单抗或安慰剂的那天被认为是第1天。

在每次筛选访问时以及每周在家完成acq-6，一直到第52周访问。每次访问时现场检查受试者坚持完成acq-6的情况，直至第52周。确切地说，在第1次筛选访问时进行acq-6(即，在第-21天的第1次访问)并且然后每周在家完成。如果存在第2次访问，那么在第2次筛选访问时(即，在第-14天的第2次访问)回顾acq-6，并且如果存在第3次访问，那么在第3次筛选访问时(即，在第-7天的第3次访问)回顾acq-6。在第1周(第1天)、第4周、第8周、第12周、第16周、第24周、第40周、和第52周回顾坚持在家坚持完成acq-6的情况。受试者被要求通过回答一个支气管扩张药使用的问题和5个症状问题，回忆起在前一周他们的哮喘状况如何。

通过治疗和访问总结在平均acq-6中偏离基线的变化(在第1天第一次给予调研产品前的最后一次有效评估)。在多次访问中的平均acq-6偏离基线的变化可以通过使用治疗和基准值作为可能的协变量的ancova来进行分析。

受试者还要每天早晨在家完成哮喘症状日记。这些日记在每次筛选访问时(不包括第一次筛选访问)进行回顾，每周一次直到第52周。在这些日记中，要求受试者回忆起他们的经历：日间和夜间症状频率和严重性、活动回避和活动受限、哮喘相关的焦虑和疲劳连同救援药物的使用。日间频率、日间严重性、和夜间严重性各自由受试者从0(没有症状)至4(最频繁/严重的症状)进行评分。将整体症状分数计算为这3个症状问题的平均值。

受试者还需完成哮喘生活质量问卷(标准版)。该aqlq[s]是32项的问卷，测量哮喘患者经历的健康相关生活质量。朱尼珀(juniper)等人，胸科杂志(chest.)115:1265-70(1999)。该aqlq[s]是在第-3周的筛选访问并且是在第1天完成，并且然后每四周一次在家完成，一直到第52周的访问。在选择访问时检查坚持情况，一直到第52周的访问。该问卷包括4个独立的部分(症状、活动受限、情感功能、和环境刺激)。受试者被要求回忆其在前2周内的经历，并且基于范围从7(无损害)至1(重度损害)的7分尺度，对32个问题中的每个进行评分。将整体分数计算为所有问题的平均应答。这4个单个部分的分数(症状、活动受限、情感功能、和环境刺激)是每个部分中对问题的平均应答。0.5的整体分数和单个部分分数的个体改善已经被确定为最小重要变化，其中将>1.5的分数变化确定为大有意义的变化。朱尼珀(juniper)等人，临床流行病学期刊(jclinepidemiol.)47:81-7(1994)。

(c)安全性评估

在给予安慰剂或贝那利珠单抗后对不良事件进行监测。其他评估包括体格检查、生命体征监测、和实验室测量。

实例2：结果

(a)招募与基线特征

所有随机化受试者的基线特征将提供于下表2中，这些受试者接受任一剂量的调研产品。平均群体ics剂量是1100总体布地奈德等效物，中等剂量组是700布地奈德等效物，并且高剂量组是1600布地奈德等效物。

表2：基线嗜酸性粒细胞(eos)的群体统计

ocs＝口服皮质类固醇；fev1＝1秒用力呼气量；acq＝哮喘控制问卷；并且feno＝呼出的一氧化氮部分

将随机化的受试者的基线特性示于下表3中，这些受试者接受任一剂量的调研产品，并且具有至少300个细胞/μl的基线嗜酸性粒细胞计数。

表3：具有至少300个细胞/μl的基线eos的ics群体统计

ocs＝口服皮质类固醇；fev1＝1秒用力呼气量；acq＝哮喘控制问卷；并且feno＝呼出的一氧化氮部分

(b)疗效

将给予贝那利珠单抗对acq-6的作用示于图2-8中。举例来说，图2的数据证实在24周时，具有至少300个细胞/μl的血液嗜酸性粒细胞计数的患者显示出了acq-6分数降低，这些患者接受2、20、或100mg的贝那利珠单抗。在52周时，也观察到了相似的结果(图3)。图4中的数据证实，在接受中等或高剂量ics的患者中改善了acq-6分数，但是在接受高剂量ics的患者中改善较大。图5中的数据将具有少于300个细胞/μl的血液嗜酸性粒细胞计数的接受中等剂量ics的患者中的acq-6分数的变化与接受高剂量ics的那些患者进行比较，并且图6中的数据将具有至少300个细胞/μl的血液嗜酸性粒细胞计数的接受中等剂量ics的患者中的acq-6分数的变化与接受高剂量ics的那些患者进行比较。按嗜酸性粒细胞数目更详细的分类提供于图7中。如图8中所显示的，早在第7周的时候，在具有至少300个细胞/μl的血液嗜酸性粒细胞计数的患者中，观察到了接受贝那利珠单抗和安慰剂的患者之间的acq-6分数的差异。

将给予贝那利珠单抗对哮喘症状日记中整体症状分数的作用示于图9中。具有至少300个细胞/μl的血液嗜酸性粒细胞计数的患者(这些患者接受了100mg的贝那利珠单抗)显示出了大于0.5整体日记分数的降低。

将给予贝那利珠单抗对aqlq分数的作用示于图10中。具有至少300个细胞/μl的血液嗜酸性粒细胞计数的患者(这些患者接受了贝那利珠单抗)显示出了大于0.5或1.0的aqlq分数的增加。

(c)安全性

与用安慰剂处理的那些患者进行比较，在用贝那利珠单抗治疗的患者中，以约10个百分点较高频率发生治疗突发不良事件(teae)。在用贝那利珠单抗和安慰剂所治疗的患者中，以相似频率发生治疗突发严重不良事件(te-sae)。在用贝那利珠单抗所治疗的患者中，teae和te-sae是不具有剂量依赖性的。

(d)抗药物抗体

贝那利珠单抗的抗药物抗体(ada)的产生与剂量呈负相关，在2mg剂量下具有最高比例的ada阳性受试者(参见下表4)。在20和100mg剂量的组中，高效价ada(≥400)的发病率分别为12％和9％。当存在时，高效价ada与降低的贝那利珠单抗浓度相关并且改变了嗜酸性粒细胞恢复的程度。高效价ada的药物代谢动力学/药效(pk/pd)的影响在较高的药物暴露量下降低。在teae和ada之间没有观察到联系。

表4：在第24周的抗药物抗体

基于pk和免疫学的考虑，额外的患者将接受30mg贝那利珠单抗的给药。在一些患者中，每四周给予30mg贝那利珠单抗剂量。在一些患者中，将每四周给予一次30mg的贝那利珠单抗剂量持续三个剂量，并且然后每八周给予一次。

(e)讨论

本研究证实了贝那利珠单抗改善了使用acq-6所测量的哮喘症状。所有剂量都观察到了改善，但是相对于2mg剂量，较大幅度的收益在20和100mg剂量中是明显的。此外，比起中等剂量的ics/laba的那些，在那些高剂量的ics/laba中，acq-6分数改善了更多。基于日间症状频率、日间症状严重性、和夜间症状严重性，哮喘症状日记也报告了整体症状分数的改善。患者中增长的aqlq分数也表示症状的改善。

实例3：额外剂量的评估

进行剂量疗效建模以鉴别降低年恶化率和安全的并耐受良好的额外剂量的贝那利珠单抗。建模表示，约30mg的剂量是产生90％最大治疗效果的最小有效剂量。因此，患有未控制哮喘的患者接受了30mg的贝那利珠单抗或安慰剂的皮下注射。该30mg剂量(i)每四周或(ii)每四周持续八周(3次剂量)，并且然后每八周(即，包括在第4周额外剂量的每八周)进行给予。将接受30mg贝那利珠单抗的患者的恶化次数与接受安慰剂的患者的恶化次数相比较，以便证实30mg剂量的贝那利珠单抗降低了年恶化率。此外，分析具有至少300个细胞/μl的基线血液嗜酸性粒细胞计数的患者中的恶化次数，以便证实30mg剂量的贝那利珠单抗可以有效降低此类患者的年恶化率。

***

本领域的普通技术人员仅使用常规实验就将认识到或能够确定在此所描述披露内容的这些具体方面的许多等效形式。此类等效物意图由以下权利要求书涵盖。

在此引用了各种公开，其披露通过引用以其全文结合。

尽管本发明在上文中出于理解清楚的目的、通过展示和实例已经相当详细地进行说明，应当清楚地是可以在所附的权利要求书的范围内实行某些改变和修饰。

序列表

seqidno:1

>us20100291073_1序列1，来自专利us20100291073生物：智人

seqidno:2

>us20100291073_2序列2，来自专利us20100291073生物：智人

seqidno:3

>us20100291073_3序列3，来自专利us20100291073生物：智人

seqidno:4

>us20100291073_4序列4，来自专利us20100291073生物：智人

seqidno:5

>us20100291073_5序列5，来自专利us20100291073生物：智人

seqidno:6

>us20100291073_6序列6，来自专利us20100291073生物：小鼠

seqidno：7-vhcdr1

seqidno：8-vhcdr2

seqidno：9-vhcdr3

seqidno：10-vlcdr1

seqidno：11-vlcdr2

seqidno：12-vlcdr3

序列表

<110>阿斯特拉捷利康股份公司（astrazenecaab）

<120>使用贝那利珠单抗改善哮喘症状的方法

<130>il5r-605wo1

<140>

<141>

<150>61/864,950

<151>2013-08-12

<160>12

<170>patentin3.5版本

<210>1

<211>107

<212>prt

<213>智人

<400>1

aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly

151015

aspargvalthrilethrcysglythrsergluaspileileasntyr

202530

leuasntrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile

354045

tyrhisthrserargleuglnserglyvalproserargphesergly

505560

serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro

65707580

gluaspphealathrtyrtyrcysglnglnglytyrthrleuprotyr

859095

thrpheglyglnglythrlysvalgluilelys

100105

<210>2

<211>214

<212>prt

<213>智人

<400>2

aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly

151015

aspargvalthrilethrcysglythrsergluaspileileasntyr

202530

leuasntrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile

354045

tyrhisthrserargleuglnserglyvalproserargphesergly

505560

serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro

65707580

gluaspphealathrtyrtyrcysglnglnglytyrthrleuprotyr

859095

thrpheglyglnglythrlysvalgluilelysargthrvalalaala

100105110

proservalpheilepheproproseraspgluglnleulyssergly

115120125

thralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrproarggluala

130135140

lysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnserglyasnsergln

145150155160

gluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyrserleuser

165170175

serthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshislysvaltyr

180185190

alacysgluvalthrhisglnglyleuserserprovalthrlysser

195200205

pheasnargglyglucys

210

<210>3

<211>121

<212>prt

<213>智人

<400>3

gluvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyala

151015

servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr

202530

valilehistrpvalargglnargproglyglnglyleualatrpmet

354045

glytyrileasnprotyrasnaspglythrlystyrasngluargphe

505560

lysglylysvalthrilethrseraspargserthrserthrvaltyr

65707580

metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrleucys

859095

glyarggluglyileargtyrtyrglyleuleuglyasptyrtrpgly

100105110

glnglythrleuvalthrvalserser

115120

<210>4

<211>451

<212>prt

<213>智人

<400>4

gluvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyala

151015

servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr

202530

valilehistrpvalargglnargproglyglnglyleualatrpmet

354045

glytyrileasnprotyrasnaspglythrlystyrasngluargphe

505560

lysglylysvalthrilethrseraspargserthrserthrvaltyr

65707580

metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrleucys

859095

glyarggluglyileargtyrtyrglyleuleuglyasptyrtrpgly

100105110

glnglythrleuvalthrvalserseralaserthrlysglyproser

115120125

valpheproleualaproserserlysserthrserglyglythrala

130135140

alaleuglycysleuvallysasptyrpheprogluprovalthrval

145150155160

sertrpasnserglyalaleuthrserglyvalhisthrpheproala

165170175

valleuglnserserglyleutyrserleuserservalvalthrval

180185190

proserserserleuglythrglnthrtyrilecysasnvalasnhis

195200205

lysproserasnthrlysvalasplyslysvalgluprolyssercys

210215220

asplysthrhisthrcysproprocysproalaprogluleuleugly

225230235240

glyproservalpheleupheproprolysprolysaspthrleumet

245250255

ileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalserhis

260265270

gluaspprogluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalgluval

275280285

hisasnalalysthrlysproargglugluglntyrasnserthrtyr

290295300

argvalvalservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasngly

305310315320

lysglutyrlyscyslysvalserasnlysalaleuproalaproile

325330335

glulysthrileserlysalalysglyglnproarggluproglnval

340345350

tyrthrleuproproserargaspgluleuthrlysasnglnvalser

355360365

leuthrcysleuvallysglyphetyrproseraspilealavalglu

370375380

trpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrpropro

385390395400

valleuaspseraspglyserphepheleutyrserlysleuthrval

405410415

asplysserargtrpglnglnglyasnvalphesercysservalmet

420425430

hisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleuser

435440445

proglylys

450

<210>5

<211>400

<212>prt

<213>智人

<400>5

aspleuleuproaspglulysileserleuleuproprovalasnphe

151015

thrilelysvalthrglyleualaglnvalleuleuglntrplyspro

202530

asnproaspglngluglnargasnvalasnleuglutyrglnvallys

354045

ileasnalaprolysgluaspasptyrgluthrargilethrgluser

505560

lyscysvalthrileleuhislysglypheseralaservalargthr

65707580

ileleuglnasnasphisserleuleualasersertrpalaserala

859095

gluleuhisalaproproglyserproglythrserilevalasnleu

100105110

thrcysthrthrasnthrthrgluaspasntyrserargleuargser

115120125

tyrglnvalserleuhiscysthrtrpleuvalglythraspalapro

130135140

gluaspthrglntyrpheleutyrtyrargtyrglysertrpthrglu

145150155160

glucysglnglutyrserlysaspthrleuglyargasnilealacys

165170175

trppheproargthrpheileleuserlysglyargasptrpleuala

180185190

valleuvalasnglyserserlyshisseralaileargpropheasp

195200205

glnleuphealaleuhisalaileaspglnileasnproproleuasn

210215220

valthralagluilegluglythrargleuserileglntrpglulys

225230235240

provalseralapheproilehiscyspheasptyrgluvallysile

245250255

hisasnthrargasnglytyrleuglnileglulysleumetthrasn

260265270

alapheileserileileaspaspleuserlystyraspvalglnval

275280285

argalaalavalsersermetcysargglualaglyleutrpserglu

290295300

trpserglnproiletyrvalglyasnaspgluhislysproleuarg

305310315320

glutrpphevalilevalilemetalathrilecyspheileleuleu

325330335

ileleuserleuilecyslysilecyshisleutrpilelysleuphe

340345350

proproileproalaprolysserasnilelysaspleuphevalthr

355360365

thrasntyrglulysalaglysersergluthrgluilegluvalile

370375380

cystyrileglulysproglyvalgluthrleugluaspservalphe

385390395400

<210>6

<211>398

<212>prt

<213>小鼠

<400>6

aspleuleuasnhislyslyspheleuleuleuproprovalasnphe

151015

thrilelysalathrglyleualaglnvalleuleuhistrpasppro

202530

asnproaspglngluglnarghisvalaspleuglutyrhisvallys

354045

ileasnalaproglngluaspglutyraspthrarglysthrgluser

505560

lyscysvalthrproleuhisgluglyphealaalaservalargthr

65707580

ileleulysserserhisthrthrleualasersertrpvalserala

859095

gluleulysalaproproglyserproglythrservalthrasnleu

100105110

thrcysthrthrhisthrvalvalserserhisthrhisleuargpro

115120125

tyrglnvalserleuargcysthrtrpleuvalglylysaspalapro

130135140

gluaspthrglntyrpheleutyrtyrargpheglyvalleuthrglu

145150155160

lyscysglnglutyrserargaspalaleuasnargasnthralacys

165170175

trppheproargthrpheileasnserlysglyphegluglnleuala

180185190

valhisileasnglyserserlysargalaalailelyspropheasp

195200205

glnleupheserproleualaileaspglnvalasnproproargasn

210215220

valthrvalgluilegluserasnserleutyrileglntrpglulys

225230235240

proleuseralapheproasphiscyspheasntyrgluleulysile

245250255

tyrasnthrlysasnglyhisileglnlysglulysleuilealaasn

260265270

lyspheileserlysileaspaspvalserthrtyrserileglnval

275280285

argalaalavalserserprocysargmetproglyargtrpglyglu

290295300

trpserglnproiletyrvalglylysgluarglysserleuvalglu

305310315320

trphisleuilevalleuprothralaalacysphevalleuleuile

325330335

pheserleuilecysargvalcyshisleutrpthrargleuphepro

340345350

provalproalaprolysserasnilelysaspleuprovalvalthr

355360365

glutyrglulysproserasngluthrlysilegluvalvalhiscys

370375380

valglugluvalglyphegluvalmetglyasnserthrphe

385390395

<210>7

<211>5

<212>prt

<213>智人

<400>7

sertyrvalilehis

15

<210>8

<211>17

<212>prt

<213>智人

<400>8

tyrileasnprotyrasnaspglythrlystyrasngluargphelys

151015

gly

<210>9

<211>12

<212>prt

<213>智人

<400>9

gluglyileargtyrtyrglyleuleuglyasptyr

1510

<210>10

<211>11

<212>prt

<213>智人

<400>10

glythrsergluaspileileasntyrleuasn

1510

<210>11

<211>7

<212>prt

<213>智人

<400>11

histhrserargleuglnser

15

<210>12

<211>9

<212>prt

<213>智人

<400>12

glnglnglytyrthrleuprotyrthr

15