本发明涉及畜牧业的
技术领域：
：，具体涉及一种具有提高免疫力和改善胴体性状的猪用发酵中药及其制备方法。
背景技术：
：：在畜牧业生产中，饲用抗生素的长期添加使用导致了动物胃肠道菌群的严重失衡，进而导致有害细菌产生耐药性、动物免疫力下降、畜禽内源性感染和二重感染的发生,与此同时抗生素在畜产品中的残留,也严重威胁到食品安全和人类的健康。因此,具有无毒副作用，无药物残留等优点的饲用抗生素替代品倍受关注，尤其是兽用中药类。传统中药虽然具有提高畜禽免疫力、抗病毒的功效，但在实际应用过程中有适口性差、疗程长、见效慢、利用率低等缺陷，如果能把中药进行有效发酵，就可以克服以上缺点。而中药的发酵是一种比较严谨和苛刻的技术过程，有些中药可以用来发酵，而有些中药不能用来发酵，这就需要根据不同中药材原料的特性去严格筛选相对应的益生菌菌株组合，还需要在一定的温度、湿度、密闭、培养基、发酵时间等条件下，才能模拟动物肠道环境，对中药进行预消化，加快中药有效成分的释放、提高中药的利用率、改善口感，最终达到提高免疫力或调整健康的作用。技术实现要素：为了克服上述缺陷，本发明提供了一种具有提高免疫力和改善胴体性状的猪用发酵中药及其制备方法，能在良好的饲养管理措施的基础上，达到提高猪的机体免疫力、改善猪胴体性状的作用，从而提高养猪生产的经济效益。本发明的有益效果是：本发明通过严格筛选高性能酵母菌、芽孢菌和乳酸菌，针对特定中药的生物学特性，进行科学配伍，成功研制出一种具有提高免疫力和改善胴体性状的猪用发酵中药制剂，能在正常养猪生产管理条件下，实现提高猪机体免疫力、改善猪胴体性状的效果。具体实施方式一种具有提高免疫力和改善胴体性状的猪用发酵中药，其特征在于，包括以下质量份数的组分：酿酒酵母菌(saccharomycescerevisiae，菌株编号：cgmcc2.3973)1份、凝结芽孢杆菌(bacilluscoagulans，菌株编号：cgmcc1.10302)3份、枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis，菌株编号：cgmcc1.15792)3份、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum，菌株编号：cgmcc1.16089)2份、嗜酸乳杆菌(lactobacillusacidophilus，菌株编号：cgmcc1.12735)2份、戊糖片球菌(pediococcuspentosaceus，菌株编号：cgmcc1.12961)4份、党参60份、黄芪80份、茯苓60份、白术60份、当归40份、山楂40份、莱菔子40份、酵母膏10份、牛肉膏10份、糖蜜80份、玉米粉80份、蒸馏水200份。上述具有提高免疫力和改善胴体性状的猪用发酵中药的制备方法，包括以下步骤：步骤1，培养基制作：a培养基的制作：首先，将蛋白胨2份、酵母粉4份、葡萄糖4份、麦芽汁2份、蒸馏水100份，加热至45～50℃，搅拌使各原料充分溶解；再以121℃、0.15mpa灭菌30分钟后，将温度降至37℃以下，获得灭菌的a培养基；b培养基的制作：首先，将蛋白胨1.5份、葡萄糖4份、酵母膏2份、磷酸氢二钾0.02份、硫酸锰0.02份、氯化钠0.01份、蒸馏水100份，加热至45～50℃，搅拌使各原料溶解；然后，以20％氢氧化钠溶液调ph值至7.0～7.2，完成配料；再以121℃、0.15mpa灭菌30分钟后，温度冷却至37℃以下，获得灭菌的b培养基；c培养基的制作：首先，将胰蛋白胨4.5份、牛肉膏4份、酵母粉2份、葡萄糖1份、乙酸钠1份、轻质碳酸钙2份、柠檬酸铵0.4份、吐温800.2份、氯化钾0.1份、硫酸镁0.1份、硫酸锰0.1份、蒸馏水100份，加热至45～50℃，搅拌使各原料充分溶解；再以121℃、0.15mpa灭菌30分钟后，将温度降至37以下，获得灭菌的c培养基；步骤2，菌种的活化及扩大培养：将严格筛选过并冷藏的酿酒酵母菌接种于100ml上述灭菌的a培养基进行一次摇床活化，温度为30～32℃，24小时后检测，检测达标后将100ml菌液全部接入5000ml上述灭菌的a培养基进行二次摇床活化，温度为30～32℃，24小时后检测达标后，接入上述灭菌的a培养基进行摇床扩大培养24小时；将严格筛选过并冷藏的凝结芽孢杆菌接种于100ml上述灭菌的b培养基进行一次摇床活化，温度为37～39℃，24小时后检测，检测达标后将100ml菌液全部接入5000ml上述灭菌的b培养基进行二次摇床活化，温度为37～39℃，24小时后检测达标后，接入上述灭菌的b培养基进行摇床扩大培养24小时；严格筛选过并冷藏的枯草芽孢杆菌的活化及扩大培养同凝结芽孢杆菌；将严格筛选过并冷藏的植物乳杆菌接种于100ml上述灭菌的c培养基进行一次静止活化，温度为37～39℃，36小时后检测，检测达标后将100ml菌液全部接入5000ml上述灭菌的c培养基进行二次静止活化，温度为37～39℃，36小时后检测达标后，接入上述灭菌的c培养基进行静止扩大培养48小时；严格筛选过并冷藏的嗜酸乳杆菌的活化及扩大培养同植物乳杆菌；严格筛选过并冷藏的戊糖片球菌的活化及扩大培养同植物乳杆菌；步骤3，菌泥的收集：用离心机对发酵后的酿酒酵母菌菌液进行离心，并收集菌泥；凝结芽孢杆菌菌泥的收集方法同酿酒酵母；枯草芽孢杆菌菌泥的收集方法同酿酒酵母；植物乳杆菌菌泥的收集方法同酿酒酵母；嗜酸乳杆菌菌泥的收集方法同酿酒酵母；戊糖片球菌菌泥的收集方法同酿酒酵母；步骤4，菌泥的干燥：将步骤3所收集的酿酒酵母菌菌泥进行冷冻干燥制备，具体步骤为：a.盛入冷冻平皿在-30℃冷冻50分钟，b.在-80℃冷冻60分钟，c.在冷冻真空干燥机上冷冻干燥13～15小时，d.冻干粉密闭保存-4℃冰箱中；以喷雾干燥处理工艺将步骤3所收集的凝结芽孢杆菌菌泥进行喷雾干燥制备，具体步骤为：a.菌泥加入15％的β-环糊精，混匀；b.设定喷雾干燥机参数为：出口温度75～78℃，入口温度125～128℃，入料速度600ml/h，进行喷雾干燥制粉；c.制得的菌粉密闭保存-4℃冰箱中；枯草芽孢杆菌菌泥喷雾干燥方法同凝结芽孢杆菌；以包被菌粉处理工艺将步骤3所收集的植物乳杆菌菌泥进行冷冻干燥制备，具体步骤为：a.菌泥加入混合保护剂(蔗糖浓度10％、脱脂乳浓度10％、海藻糖浓度10％、谷氨酸钠浓度5％)混匀，b.盛入冷冻平皿在-30℃冷冻50分钟，c.在-80℃冷冻60分钟，d.在冷冻真空干燥机上冷冻干燥13～15小时，e.冻干粉密闭保存-4℃冰箱中；嗜酸乳杆菌菌泥的冷冻干燥方法同植物乳杆菌；戊糖片球菌菌泥的冷冻干燥方法同植物乳杆菌；步骤5，中药的加工与粉碎：首先，将党参60份、黄芪80份、茯苓60份、白术60份、当归40份、山楂40份、莱菔子40份称重混合，然后进行加工粉碎，粉碎粒度为80目；步骤6，加培养基：首先，将酵母膏10份、牛肉膏10份、糖蜜80份、玉米粉80份称重，然后与步骤5所得的中药进行均匀搅拌；步骤7，复合菌剂及水的投放：首先，将冷冻干燥保存好的的酿酒酵母菌(活菌数为1×1010cfu/g)1份、凝结芽孢杆菌(活菌数为3×1010cfu/g)3份、枯草芽孢杆菌(活菌数为3×1010cfu/g)3份、植物乳杆菌(活菌数为2×1010cfu/g)2份、嗜酸乳杆菌(活菌数为2×1010cfu/g)2份、戊糖片球菌(活菌数为2×1010cfu/g)4份分别用37℃的水混合，然后与步骤6所得的中药培养基混合物进行均匀搅拌混合；步骤8，发酵中药成品的制备：首先，将步骤7所得的原料在37℃±0.5℃的状态下连续发酵168个小时后，待ph降至3.5以下；然后，在无菌状态下分装，获得一种具有提高免疫力和改善胴体性状的猪用发酵中药。本发明的作用原理为：猪用的传统中药,由于免疫多糖、总黄酮等有效成份被半纤维素、纤维素和木质素包裹，进入消化道后，不能充分与动物消化液、微生物、微生物胞外酶接触，会直接影响中药药效的发挥和中药的利用率；中药本身的有效单体物质没有发生任何改变，所以气味浓、口感差，对于嗅觉敏感的猪来说，会极大的影响采食量；而通过研究不同中药的特性、成分和抗营养因子，通过筛选动物肠道内的益生菌，在体外模拟猪肠道微生物的作用原理，把中药进行微生物发酵，分解半纤维素、纤维素和部分木质素，暴露出中药的有效成份，然后通过微生物的转化，把大分子转化为小分子，多糖类转化为有活性的化学成分；中药经微生物发酵后能极大的增加中药药效、提高中药利用率、改善适口性，所以猪食用以后，能达到提高猪机体免疫力、改善猪胴体性状的良好效果。以下结合实施例对本发明的效果做详细说明。1、实验材料1)试验地点：饲养试验在广东省高州市宝来生态农业有限公司、河南省新密市白寨镇欣磊养猪场；屠宰试验在河南省商丘市贵友食品有限公司。2)实验产品：一种具有提高免疫力和改善胴体性状的猪用发酵中药。3)使用方法：1000kg猪用全价配合饲料加入本发明发酵中药1000g，1000kg猪用全价配合饲料加入本发明发酵中药3000g，1000kg猪用全价配合饲料加入本发明发酵中药5000g。2、实验设计实验设对照组(未添加本发明发酵中药)、试验组(添加本发明发酵中药)，每组4个重复，每个重复10头猪。其中，试验组分三个处理组：试验组1(添加本发明发酵中药1000g)、试验组2(添加本发明发酵中药3000g)、试验组3(添加本发明发酵中药5000g)。其中，试验组实施例依据表1中所示的原料配方及本发明所述工艺步骤获取。表1.实施例3、实验方法1)试验结束后，对所有试验猪禁食12h，耳缘静脉采血10ml，静置2h析出血清后，3000r/min离心15min，制备血清样品。2)血清中免疫球蛋白(igg、iga、igm)和补体c3、c4含量均采用免疫比浊法测定，仪器为rt-9900半自动生化分析仪，具体操作步骤按试剂盒说明书进行。3)血清中细胞因子(il-2、il-6、tnf-α)均采用elisa法测定，仪器为stat-fax2100全自动酶标仪，具体操作步骤按试剂盒说明书进行。4)屠宰流程严格按照我国《生猪屠宰操作规程》(gb/t17236-2008)进行。5)测量胴体重、眼肌面积和背膘厚，计算屠宰率参照《瘦肉型种猪性能测定技术规程》(gb8467-1987)进行。4、数据处理与分析数据统计方式采用excel2013软件处理基础数据，采用spss软件17.0版本对数据进行方差分析，以p＜0.05为差异显著性标准，结果数据用“平均值±标准差”表示。5、结果与分析实验一：广东省高州市宝来生态农业有限公司猪场试验本发明的发酵中药对育肥猪体液免疫的影响结果(见表2)：由于猪血清中免疫球蛋白(igg、iga、igm)和补体c3、c4的浓度可以反应猪体液免疫的高低。从表2我们可以看出，试验组1、试验组2、试验组3育肥猪血清中免疫球蛋白(igg、iga、igm)的浓度和补体(c3、c4)的浓度均显著高于对照组(p＜0.05)，并且以试验组2育肥猪血清中免疫球蛋白、补体浓度最高，说明本发明的发酵中药具有提高育肥猪体液免疫的效果。表2发酵中药对育肥猪体液免疫的影响table1effectsoffermentedchinesemedicineonhumoralimmunityoffinishingpigs注：相同行右上角不同小写字母表示平均数差异显著(p＜0.05)，下表同。note：differentlowercaselettersintheupperrightcornerofthesamerowindicatesignificantdifferencesinthemean(p＜0.05)，sameasinthefollowingtable.本发明的发酵中药对育肥猪细胞免疫的影响结果(见表3)：由于猪血清中细胞因子(il-2、il-6、tnf-α)的浓度可以反应猪细胞免疫的高低。从表3我们可以看出，试验组1、试验组2、试验组3育肥猪血清中细胞因子(il-2、il-6、tnf-α)的浓度均显著高于对照组(p＜0.05)，并且以试验组2育肥猪血清中细胞因子(il-2、il-6、tnf-α)的浓度最高，说明本发明的发酵中药具有提高育肥猪细胞免疫的效果。表3发酵中药对育肥猪细胞免疫的影响table2effectsoffermentedchineseherbsoncellularimmunityinfinishingpigs实验二：河南省新密市白寨镇欣磊养猪场试验本发明的发酵中药对育肥猪体液免疫的影响结果(见表4)：由于猪血清中免疫球蛋白(igg、iga、igm)和补体c3、c4的浓度可以反应猪体液免疫的高低。从表4我们可以看出，试验组1、试验组2、试验组3育肥猪血清中免疫球蛋白(igg、iga、igm)的浓度和补体(c3、c4)的浓度均显著高于对照组(p＜0.05)，并且以试验组2育肥猪血清中免疫球蛋白、补体浓度最高，由此说明本发明的发酵中药具有提高育肥猪体液免疫的效果。表4发酵中药对育肥猪体液免疫的影响table3effectsoffermentedchinesemedicineonhumoralimmunityoffinishingpigs本发明的发酵中药对育肥猪细胞免疫的影响结果(见表5)：由于猪血清中细胞因子(il-2、il-6、tnf-α)的浓度可以反应猪细胞免疫的高低。从表5我们可以看出，试验组1、试验组2、试验组3育肥猪血清中细胞因子(il-2、il-6、tnf-α)的浓度均显著高于对照组(p＜0.05)，并且以试验组2育肥猪血清中细胞因子(il-2、il-6、tnf-α)的浓度最高，由此可说明本发明的发酵中药具有提高育肥猪细胞免疫的效果。表5发酵中药对育肥猪细胞免疫的影响table4effectsoffermentedchineseherbsoncellularimmunityinfinishingpigs实验三：河南省商丘市贵友食品有限公司屠宰试验本发明的发酵中药对广东省高州市宝来生态农业有限公司育肥猪胴体性状的影响结果(见表6)：由于育肥猪屠宰后胴体性状具有代表性的包括胴体重、瘦肉率、眼肌面积、背膘厚度等，从表6中可以看出，试验组1、试验组2、试验组3育肥猪屠宰后的胴体重、瘦肉率、眼肌面积、背膘厚度与对照组均差异显著(p＜0.05)，并且以试验组2育肥猪屠宰后的胴体重、瘦肉率、眼肌面积最高，试验组2育肥猪屠宰后的背膘厚度最低，由此说明本发明的发酵中药具有明显的改善育肥猪屠宰后的胴体性状和提高瘦肉率的效果。表6发酵中药对育肥猪胴体性状的影响table5effectsoffermentedchinesemedicineoncarcasstraitsoffinishingpigs本发明的发酵中药对河南省新密市白寨镇欣磊养猪场育肥猪胴体性状的影响结果(见表7)：由于育肥猪屠宰后胴体性状具有代表性的包括胴体重、瘦肉率、眼肌面积、背膘厚度等，从表7中可以看出，试验组1、试验组2、试验组3育肥猪屠宰后的胴体重、瘦肉率、眼肌面积、背膘厚度与对照组均差异显著(p＜0.05)，并且以试验组2育肥猪屠宰后的胴体重、瘦肉率、眼肌面积最高，试验组2育肥猪屠宰后的背膘厚度最低，由此说明本发明的发酵中药具有明显的改善育肥猪屠宰后的胴体性状和提高瘦肉率的效果。表7发酵中药对育肥猪胴体性状的影响table6effectsoffermentedchinesemedicineoncarcasstraitsoffinishingpigs6、实验结论由实验一、实验二、实验三的6个试验数据分析可知：本发明的发酵中药所有试验组的育肥猪血清中免疫球蛋白(igg、iga、igm)的浓度和补体(c3、c4)的浓度均显著高于对照组(p＜0.05)，证明本发明的发酵中药对育肥猪具有提高体液免疫的效果；本发明的发酵中药所有试验组的育肥猪血清中细胞因子(il-2、il-6、tnf-α)的浓度均显著高于对照组(p＜0.05)，证明本发明的发酵中药对育肥猪具有提高细胞免疫的效果；育肥猪屠宰后的胴体重、瘦肉率、眼肌面积、背膘厚度与显著优于对照组(p＜0.05)，由此说明本发明的发酵中药具有明显的改善育肥猪屠宰后的胴体性状和提高瘦肉率的效果。综上所述，本发明一种具有提高免疫力和改善胴体性状的猪用发酵中药，可以在正常的养猪饲养管理生产条件下，可以达到提高育肥猪免疫力、改善育肥猪屠宰后胴体性状和提高瘦肉率的效果。当前第1页12当前第1页12