化香树果序醇提物的肠溶固体分散体及其制备方法与流程

本发明涉及医药领域，具体涉及一种化香树果序醇提物的肠溶固体分散体及其制备方法。

背景技术：

化香树(p.strobilaceasieb.etzucc.)来源于胡桃科化香树属(platycaryas.)，广泛分布于陕西、甘肃、河南及长江以南各省，又名必栗香、烧为香、杀虫鱼(《本草纲目》)。化香树果序，别名化香树球，性味辛、温，具有清热解毒、活血化瘀、清肿排脓、通窍止痛的功效。化香树果序中含有多酚类、黄酮类、皂苷等化学成分。现代药理研究显示，化香树果序总酚和总黄酮类化合物对感染鼻炎、鼻窦炎的细菌有较强的抑制作用；所含没食子酸、鞣花酸和熊果酸具有抗氧化、抗癌和抗诱变活性的作用，没食子酸和鞣花酸均可以抑制npc-bm1细胞中转录因子ap-1的表达，而熊果酸的部分衍生物可以导致npc-bm1细胞出现大量囊泡。但是，由于化香树果序的醇提物主要含有没食子酸、鞣花酸、熊果酸、谷甾醇等多酚类化合物和黄酮类化合物，因此，水溶性和化学稳定性差(鞣花酸水溶性ph7.4时9.3μg/ml)，被胃、肝脏、肠道代谢容易破坏，导致了其较低的口服生物利用度，影响其功能活性，在临床上应用时具有一定的局限性。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种化香树果序醇提物的肠溶固体分散体及其制备方法，将化香树果序醇提物制备成肠溶固体分散体，减少胃酸的破坏，提高药物的生物利用度。

本发明的一种化香树果序醇提物的肠溶固体分散体，以醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯为载体，化香树果序醇提物分散于醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯载体上形成无定型态固体分散体；

进一步，所述化香树果序醇提物与醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯载体的质量比为1：3或1：9；

进一步，所述醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯载体为hpmcas-hf、hpmcas-lf、hpmcas-mf中的至少一种；

进一步，采用溶剂法将化香树果序醇提物分散于醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯载体上。

本发明还公开一种化香树果序醇提物的肠溶固体分散体的制备方法，包括以下步骤：

将醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯和化香树果序醇提物加入到溶剂中搅拌溶解，然后水浴蒸发至浸膏状，并将析出物干燥；

进一步，所述溶剂为乙醇和二氯甲烷；

进一步，所述乙醇和二氯甲烷的体积比为1：1；

进一步，所述水浴温度为55-65℃；

进一步，干燥温度为55-65，干燥时间为22-26h；

进一步，干燥后研磨过100目筛。

本发明的有益效果是：本发明公开的化香树果序醇提物的肠溶固体分散体及其制备方法，减少消化系统的破坏，提高化香树果序醇提物的体外溶出度，增强治疗效果，通过醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯来提高化香树果序醇提物的溶解度和化学稳定性、降低代谢清除率。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明作进一步描述：

图1为eps与载体hf、lf、mf分别按照1:1，1:3，1:9制备eps固体分散体；

图2为eps、鞣花酸(ellagicacid)、没食子酸(gallicacid)紫外扫描图谱；

图3为固体分散体玻璃转变温度dsc曲线；

图4为eps-hf固体分散体和eps的dsc曲线；

图5为eps-lf固体分散体和eps的dsc曲线；

图6为eps-mf固体分散体和eps的dsc曲线；

图7为eps固体分散体体ir分析(a.hf组；b.lf组；c.mf组)

图8为eps固体分散体体溶出度分析(a.酸中溶出度；b.ph6.8中的溶出度分析)；

图9为eps固体分散体体溶出度分析(a.酸中溶出度；b.ph6.8中的溶出度分析)

图10为平衡溶解度分析(a.酸中溶出度；b.ph6.8中的溶出度分析)

具体实施方式

本实施例的一种化香树果序醇提物的肠溶固体分散体，以醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯为载体，化香树果序醇提物分散于醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯载体上形成无定型态固体分散体；减少消化系统的破坏，提高化香树果序醇提物的体外溶出度，增强治疗效果，通过醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯来提高化香树果序醇提物的溶解度和化学稳定性、降低代谢清除率。醋酸羟丙甲纤维素琥珀(hydroxypropylmethylcelluloseacetatesuccinate，hpmcas)是一种纤维素类聚合物，包含有4个在羟基上的随机取代的基团，包括甲氧基(12-18wt％)、羟丙基(4-23wt％)、乙酰基(2-16wt％)以及琥珀酰基(4-28wt％)。hpmcas是一种白色或类白色，略有醋酸味或没有味道的物质。醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯可以作为一种高分子载体应用于化香树果序醇提物的固体分散体，以提高难溶性药物的溶解度。这种聚合物在多种溶剂中具有两亲性、高玻璃化温度和低粘度等独特属性，是制备固体分散体的常用水溶性载体材料，使药物高度分散于载体中从而增加了疏水性药物的可润湿性，溶出度和生物利用度得以改善。由于eps为95％乙醇提取物，因此也非常适合做成无定型态固体分散体。在该体系中，eps可以作为亲水性载体内的分子分散体或以无定形态存在，从而通过减小药物粒径和增加药物表面积来改善药物溶解度和溶解速度。

本实施例中，所述化香树果序醇提物与醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯载体的质量比为1：3或1：9；当化香树果序醇提物与醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯载体的比例为1：3和1：9时，化香树果序醇提物可以很好的分散于载体中，药物与载体之间存在相互作用，对药物形成有效饱和，形成膜片状制备物。

本实施例中，所述醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯载体为hpmcas-hf、hpmcas-lf、hpmcas-mf中的至少一种；超饱和测试表明高分子抑制化香树果序醇提物结晶的能力顺序为mf>hf>lf。以鞣花酸为检测指标，溶出结果显示，三种固体分散体在酸中基本不释放，化香树果序醇提物-mf型态固体分散体药物释放率最高，溶出速度也最快。

本实施例中，采用溶剂法将化香树果序醇提物分散于醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯载体上。

本发明还公开一种化香树果序醇提物的肠溶固体分散体的制备方法，包括以下步骤：

将醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯和化香树果序醇提物加入到溶剂中搅拌溶解，然后水浴蒸发至浸膏状，并将析出物干燥；将药物和载体共溶于有机溶剂中，回收溶剂使药物与载体材料同时析出，即得到药物与载体混合成的固体分散体，该法适合于易挥发、热不稳定、易溶于有机溶剂的药物和载体材料。

本实施例中，所述溶剂为乙醇和二氯甲烷；所述乙醇和二氯甲烷的体积比为1：1；

本实施例中，所述水浴温度为55-65℃；干燥温度为55-65，干燥时间为22-26h；干燥后研磨过100目筛。

实施例一

固体分散体制备

eps的制备按eps-载体1：1、1：3、1：9分别称取总质量2.0g，加入到100ml乙醇与二氯甲烷(1：1)的混合溶液中，搅拌1h充分溶解。将其转移到旋转蒸发仪中，60℃水浴旋转蒸发至浸膏状，析出物置于60℃真空干燥箱内干燥24h。取出研磨后过100目筛，即得eps无定型态固体分散体，放入干燥器中备用。

差示扫描量热法(differentialscanningcalorimeter，dsc)测试

以空铝坩锅为参比，在另一铝锅中放入5mg样品，保护气体为n2，升温范围35～220℃；升温速率10℃·min^-1；氮气流速10ml·min^-1。将eps和eps固体分散体进行dsc分析，记录dsc曲线。

红外光谱(infraredspectroscopy，ir)测试

对eps提取物原料，载体(hf，mf，lf)和eps固体分散体进行红外光谱检测。扫描范围400～4000cm^-1，记录ir曲线。

标准工作曲线

取eps、鞣花酸溶于无水乙醇中配成4g·l^-1溶液，另外将适量载体分别溶于无水乙醇中，于200～800nm波长对上述溶液进行波长扫描，以无水乙醇作空白，确定鞣花酸在360nm处有最大吸收，且载体在此波长处无吸收，因此，选择360nm为eps的测定波长。配制2～50mg·l^-1的鞣花酸乙醇溶液，在360nm处用紫外分光光度计测定其对应的吸光度a。

平衡溶解度测定

称取载体各100mg分别加入200mlph6.8pbs缓冲液，待充分搅拌溶解后再加入100mgeps在37℃下继续搅拌24h，吸取4ml溶液离心(12000r·min^-1，10min)，取上清液1.5ml，用紫外分光光度计确定eps浓度，重复3次。

超饱和测试

将0.56geps溶解在10ml二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，dmso)中，药物浓度为56mg/ml。称取三种载体各200mg分别加入200mlph6.8的pbs缓冲液，在37℃磁力搅拌下充分溶解1h达平衡，得到高分子溶液(1.0g/l)。在上述高分子溶液或不含高分子的ph6.8pbs缓冲液中加入400μl56g/l的epsdmso溶液(112mg/l，高于eps的平衡溶解度89.7mg/l，获得超饱和溶液)。此时dmso在溶液中的浓度为0.2％，通过溶解度测试，发现低的dmso含量对eps的溶解度没有影响。在溶液混合后的1，5，15，30，45，60，90，120，240min，各吸取2ml，离心(12000r·min^-1，10min)，用紫外分光光度计确定eps浓度，重复3次测试，计算平均值及标准偏差。

体外溶出测试

参照2015版《中国药典》第四部体外溶出实验篮法^[7]，量取0.1mol盐酸溶液200ml，注入rc806d溶出试验仪的样品杯中，加温使溶液温度保持在37.0℃，按照篮法的要求，转速稳定在100rpm·min^-1。称取eps32mg与eps固体分散体(1：3)样品128mg，分别加入200mlph6.8pbs缓冲液中，在37℃下搅拌。从加入样品的5min，10min，20min，30min，45min，1h，1.5h，2h，3h取样，每次取样2ml同时补充同温同体积的0.1mol盐酸溶液。上述酸液中加入温度为37±0.5℃的0.2mol/l磷酸钠溶液68ml，用2.0mol/l氢氧化钠溶液调节ph值至6.8，按照以上时间点取样，同时补充同温同体积的pbs溶液。用紫外分光光度计测定eps浓度，重复3次测试。

结果分析

1、eps固体分散体

当eps：载体＝1:1时，载体无法对eps进行饱和，部分药物成粉末状；eps：载体＝1:3和eps：载体＝1:9均可以对药物形成有效饱和，形成膜片状制备物(如图1)。

以吸光度a对浓度进行线性回归，回归方程为y＝0.0314x+0.0723，r²＝0.9992，eps、鞣花酸(ellagicacid)、没食子酸(gallicacid)的紫外扫描图谱如图2所示。

2、dsc结果分析

eps和载体的比例为1：3或1：9时制备的固体分散体没有出现吸热峰，表明eps完全以无定型态分散于载体中，见图3。eps-lf(1：3，1：9)，eps-hf(1：3，1：9)和eps-mf(1：3，1：9)固体分散体的dsc曲线分别在35-110℃与相应的载体曲线相似；在110-160℃以上固体分散体与eps均不同，只有1个玻璃化转变温度，表明药物与高分子载体之间存在较好的相容性(图4，图5和图6)。

随着温度进一步升高，结晶的部分开始熔融，补偿器测量出必须增加热流克服熔融所需的相变焓才能保持温度一致，于是在dsc曲线上就会出现吸热峰。eps在67.07℃和129.16℃下各有1个吸热峰，由此可判断此为其中两种成分的熔融峰，eps-hf(1：1)、eps-lf(1：1)和eps-mf(1：1)固体分散体显示了更加明显的药物玻熔融，表明在药物：载体＝1:1时固体分散体中出现了更大程度的相分离。eps-lf(1：1,169.25℃)，eps-hf(1：1，174.26℃)和eps-mf(1：1，171.09℃)均出现放热峰，为eps重结晶现象，重结晶峰大小顺序为eps-hf(1：1)>eps-mf(1：1)>eps-lf(1：1)，这也说明了在eps-hf(1：1)存在更大的相分离。图2和图3可以发现，与eps的熔点相比，固体分散体在药物：载体＝1：3，1：9时未出现129.16℃的熔融峰，只有与载体类似的第一个峰，并且熔点升高，说明了eps与载体之间存在相互作用，其主要是通过扰乱eps的重结晶从而升高熔点。

3、红外分析

五条曲线中1620cm^-1-1450cm^-1处的吸收是苯环或碳环中c-c收缩振动产生的，1055cm^-1是环氧醚键的对称收缩吸收峰，其末端吸收峰是分子中c-c面内弯曲产生的。以上是五条曲线中均存在的吸收峰，而图中已经标注了原料药和辅料的特征吸收峰：eps中1715cm^-1处的吸收是熊果酸羧基中c＝o收缩振动产生，1662cm^-1处是各成分分子中其余c＝o键振动造成的，而1199cm^-1处的吸收是酚羟基中c-o的吸收峰；eps中1654cm^-1处同样是c＝o的吸收峰。各样品中eps与载体1：1时其图谱与eps相似，存在eps的特征峰，当eps与载体1：3，1：9时eps吸收峰消失了，图谱与各载体相似，说明eps载体材料相互作用形成复合物，其中以eps与载体mf1：3，1：9时与载体图谱相似。

4、溶出度分析

采用紫外-可见光谱法研究了eps在ph1.0和ph6.8条件下的化学稳定性。在ph值为1.0的eps孵育不同时间后，360nm波长检测结果(图8a)表明，eps在1.0下孵育90min，溶出度为7.36mg/l。在固体分散体体系中中，eps的降解率为0。说明以hf、lf、mf为载体的eps固体分散在酸性溶液中性质稳定。在ph值为6.8的eps孵育不同时间后，360nm波长检测结果(图7a)表明，eps及其固体分散体系在ph6.8下孵育，其中内含物快速释放。其中180min时，eps、eps-hf、eps-lf、eps-mf在360nm波长下检测分别27.20mg·l^-1、27.94mg/l、32.09mg/l、34.46mg/l。在固体分散体体系中中，eps的hpmcas-mf对eps溶出度帮助最大。

5、超饱和实验结果

超饱和溶液是指溶液中所含溶质的量大于在这个温度下饱和溶液中溶质的含量的溶液(即超过了正常的溶解度)。超饱和实验分析了高分子载体对药物超饱和度的维持能力，无定型态固体分散体溶出过程中形成药物超饱和溶液，如果同时溶出的高分子通过抑制结晶能维持超饱和溶液，那么就能较好地增强药物的溶出，从而提高药物的小肠吸收和生物利用度。但是在实验中，我们在360nm波条件下检测，发现各样品相差不大，高分子稳定超饱和的能力可用超饱和参数(ssp)评价，mf的ssp最大，因此其稳定eps超饱和溶液的能力最强。

6、平衡溶解度实验结果

eps在hf、lf、mf存在条件下的平衡溶解度见图10。溶解24h后，eps在320nm波长的平衡溶解度为96.17mg/l，加入hf后药物的平衡溶解度增大，平衡溶解度为142.18mg/l表明高分子hf对eps中的某些物质有一定的增溶作用，但是lf、mf的没有增溶的效果。这可能与hpmcas中的羧基含量有关，hf中羧基含量最低，lf、mf羧基含量高，高的羧基含量抑制了eps中酚羟基的解离，降低了320nm条件下某些物质的平衡溶解度。但是在360nm波长检测时eps-mf平衡溶解度为最高，达到94.17mg/l。

讨论：药物的溶出速率受高分子载体的影响很大。本实验选用lf、mf、hf三种亲水性高分子为载体，采用溶剂法制备eps固体分散体。hpmcas固体分散体，不仅抑制了溶液中ea的结晶，还保护了其不易受到化学降解的影响，cur-pvp无定型态固体分散体比eps-mf固体分散体更能增强鞣花酸的溶出。

dsc是通过将样品和参比物在同等环境中程序升温和降温，测量使两者的温度差保持为零时所必须的补偿热量。固体分散体中若存在有药物晶体，则会出现吸热峰，药物晶体的含量越多，则吸热峰的总面积就越大。聚合物达到玻璃化转变温度时，热容增大，需要吸收更多热量来保持温度一致，因此常表现为dsc基线的转折。玻璃化转变温度可以判断无定型态固体分散体中药物与高分子载体的相容性，固体分散体中若出现多个玻璃化转变温度则表明其药物与载体的相容性差，反之则具有良好的相容性。经过过冷处理形成的非晶态聚合物加热时会开始结晶，放出结晶热，dsc测量到必须减少热流才能保持样品和参照物温度一致，在dsc曲线上就出现了一个放热峰。

本发明的化香树果序醇提物(eps)固体分散体，可减少消化系统的破坏，提高eps的体外溶出度。通过超饱和测试考察醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(hf，mf，lf)维持eps超饱和溶液的能力。采用溶剂法制备eps固体分散体。采用差示扫描量热法和红外光谱对eps固体分散体进行表征，并对其体外溶出效果进行考察。dsc和ir结果表明在1：3和1：9eps固体分散体中eps均可以分散于载体中，药物与载体之间存在相互作用。超饱和测试表明高分子抑制eps结晶的能力顺序为mf>hf>lf。以鞣花酸为检测指标，溶出结果显示，三种固体分散体在酸中基本不释放，eps-mf型态固体分散体药物释放率最高，溶出速度也最快；eps-hf固体分散体的溶出速率较慢。制备的eps固体分散体显著地增强了eps的溶出，提高了eps的化学稳定性。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。