紫杉叶素在治疗或预防脂肪移植术后脂肪液化坏死的用途

本发明主要涉及包含紫杉叶素的药物组合物在治疗和预防脂肪移植术后感染、脂肪液化和脂肪坏死的用途。

背景技术：

脂肪移植(lipofilling)是通过吸脂术收获的患者的自体脂肪进行移植，通过注射大量生理盐水并于无菌条件下抽吸出大腿等脂肪含量较高部位的脂肪，再填充于所需部位。患有先天性缺陷，创伤或手术切除的患者，包括三级烧伤患者和在乳腺癌治疗后接受乳房肿瘤切除术的妇女均可受益于自体脂肪移植，而乳腺癌是全球女性中发病率最高的癌症。

在现代医疗保健中，自体脂肪移植的应用日益广泛，人们随之越来越关注用于辅助脂肪组织再生及重塑的药物，目前有法国acmetea类人肽胶原蛋白作为营养膳食补充剂在售用于医美行业辅助脂肪移植，但市面上并未有促进脂肪移植存活的药物在售。根据已有研究报道，中药丹参注射液和西药他莫昔芬通过动物实验证明具有提高脂肪移植存活率的功效。

虽然丹参注射液具有提高脂肪移植存活率的功效，但其中药注射液成分复杂、致敏率高，研究者们但并未明确具体起效的化学成分使得应用受限。另外虽然研究表明他莫昔芬具有一定的促进脂肪存活的功效，但由于其为乳腺癌的的化疗药，细胞毒性较强，对于患者来说其应用受限。因此临床上开发新的治疗预防药物至关重要。

技术实现要素：

针对现有技术中存在的缺陷和技术问题，本发明提供了一种紫杉叶素或其药学上可接受的盐或者包含所述紫杉叶素或其药学上可接受的盐的组合物在治疗或预防个体脂肪移植手术后感染、脂肪液化或脂肪坏死的用途。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：紫杉叶素或其药学上可接受的盐或者包含所述紫杉叶素或其药学上可接受的盐的组合物在治疗或预防个体脂肪移植手术后感染、脂肪液化或脂肪坏死的用途。

作为优选方案，所述药学上可接受的剂型为口服液、注射剂、胶囊、片剂或颗粒剂。

作为优选方案，所述药物经过口服、腹腔内、皮下或肌肉给药。

作为优选方案，所述个体为哺乳动物，所述哺乳动物包括非灵长类和灵长类动物。

作为优选方案，所述紫杉叶素或其药学上可接受的盐的给药剂量为腹腔注射每天100～300mg/kg体重。

作为优选方案，所述紫杉叶素或其药学上可接受的盐的给药剂量为腹腔注射每天30mg/kg体重。

本发明揭示了紫杉叶素在脂肪移植中辅助治疗的应用价值，发现紫杉叶素能够提高移植后脂肪的存活率。本发明发现经过紫杉叶素给药的裸鼠的脂肪细胞，其脂肪细胞的大小较对照组小，微血管密度较对照组高，核增殖情况较对照组更明显。此外，本发明发现紫杉叶素能够促进胶原蛋白的生成，该现象一方面解释了移植后脂肪存活率的上升，另一方面暗示了紫杉叶素在美容保健护肤方面的应用价值。

附图说明

图1为本发明实施例中裸鼠进行人源脂肪移植后注射紫杉叶素组与空白对照组的21天脂肪直观图。

图2a为本发明实施例中裸鼠进行人源脂肪移植后注射dhq组、ssi组与空白对照组的21天的裸鼠体重曲线图；

图2b为本发明实施例中裸鼠进行人源脂肪移植后注射dhq组、ssi组与空白对照组的21天的裸鼠移植后的脂肪体积统计图。

图3a本发明实施例中裸鼠进行人源脂肪移植后注射dhq组、ssi组与空白对照组的脂肪组织he染色对照图；

图3b本发明实施例中裸鼠进行人源脂肪移植后注射dhq组、ssi组与空白对照组的脂肪组织he染色后细胞数目统计图。

图4a本发明实施例中裸鼠进行人源脂肪移植后注射dhq组、ssi组与空白对照组的pcna免疫组化染色对比图；

图4b本发明实施例中裸鼠进行人源脂肪移植后注射dhq组、ssi组与空白对照组的pcna阳性细胞数目统计图。

图5a为本发明实施例中裸鼠进行人源脂肪移植后注射dhq组、ssi组与空白对照组的cd31免疫组化染色对比图；

图5b为本发明实施例中裸鼠进行人源脂肪移植后注射dhq组、ssi组与空白对照组的cd31阳性血管数目统计图。、

图6a为本发明实施例中裸鼠进行人源脂肪移植后注射dhq组、ssi组与空白对照组的油红o染色对比图；

图6b为本发明实施例中裸鼠进行人源脂肪移植后注射dhq组、ssi组与空白对照组的油红o染色后油红o染色区域统计图。

图7a本发明实施例中裸鼠进行人源脂肪移植后注射dhq组、ssi组与空白对照组的天狼星红染色对比图；

图7b本发明实施例中裸鼠进行人源脂肪移植后注射dhq组、ssi组与空白对照组的天狼星红染色区域统计图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

除非另外指明，本申请中所有术语均具有本领域技术人员通常所理解含义。本申请所述的包含所述紫杉叶素或其药学上可接受的盐的组合物为紫杉叶素和/或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体一起配制成药学上可接受的剂型，包括注射剂、口服液、胶囊、片剂或颗粒剂。

所述“药学上可接受的载体”是指不干扰活性成分的生物活性有效性的载体，可以为固体或液体，包括药学上可接受的赋形剂、缓冲剂、乳化剂、稳定剂、防腐剂、稀释剂、封装剂等。例如缓冲剂为磷酸盐、醋酸盐、硼酸盐或碳酸盐等。本申请药物组合物可以采用常规的混合、溶解、制粒、制锭、研磨、乳化、包装、捕获或冻干方法制备。

紫杉叶素dihydroqurcetin，又称taxifolin，简称为dhq，分子量大小为304.25，易溶于热水，可使用去离子水配置10mm/ldhq。

本申请紫杉叶素组药物(dhq组)配制：称取3.14mgtax并加入10ml的去离子水，拟配制10mmol/l浓度的药液，并将液体70℃水浴加热充分溶解混匀转移到新的ep管中，分装成1ml/ep管，-20℃冰箱保存备用。

ssi组对比例配制：取丹参酮iia磺酸钠注射液，稀释至2mg/ml，-20℃冰箱保存备用。

空白对照组(ctrl组)：生理盐水。

本申请实施例药理学试验方法和试验结果

①对裸鼠进行人源脂肪移植

将30只裸鼠随机平均分为6组:control组，裸鼠背部移植人源脂肪组织0.5ml,腹腔注射生理盐水0.2ml；dhq组，裸鼠背部移植人源脂肪组织0.5ml,腹腔注射紫杉叶素0.2ml；ssi组，裸鼠背部移植人源脂肪组织0.5ml,丹参酮iia磺酸钠0.2ml，连续给药21天。然后将脂肪组织取出拍照，观测脂肪体积。

如图1所示，经过紫杉叶素组药物dhq组脂肪均有不同程度的增长，且未出现脂肪液化、坏死现象。

如图2a和2b所示，过移植人源脂肪组织至裸鼠背部，给药21天，期间裸鼠体重无明显差异，移植后脂肪块体积dhq组明显大于对照组(p<0.05)。

②he染色

将烘烤后的组织切片依次侵入二甲苯i，二甲苯ii进行脱蜡各10min，脱蜡后的组织切片依次浸入无水乙醇i、无水乙醇ii、95％酒精、80％酒精、70％酒精中各2min，pbs冲洗2次，每次5min。苏木素染色3min，自来水冲洗3min，1％盐酸酒精分色2s，自来水冲洗2min，依次浸入50％、70％、80％的酒精中各2min，伊红浸泡5s，自来水冲洗3min。再将组织切片依次侵入95％酒精、无水乙醇i、无水乙醇ii中各3min，最后再依次侵入二甲苯i，二甲苯ii各5min。中性树胶封片，镜检。分别于200×、400×镜下拍照。

如图3a和3b所示：he染色结果显示，dhq组单位面积下脂肪数目大于对照组(p<0.05)。

③免疫组织化学染色

将标本蜡块装在切片机上，切成5μm的薄片，然后把切片放在温水皿中展开。将展开的组织切片移到载玻片上，放在60℃温箱中2h，烘干。将切片架分别浸于i级和ii级二甲苯中脱蜡各15min。取出切片，依次浸入95％、85％、75％乙醇各1min。取出切片，浸泡在pbs中5min×3次。取出切片，置于抗原修复液中，高温低火修复10min。取出切片，浸泡在pbs中5min×3次。每张切片用吸水纸擦干，免疫组化笔在组织周围画圈，防止滴加液体时外溢。滴加山羊血清至完全覆盖组织，湿盒内室温15min。一抗用pbs按1:200稀释，滴加至完全覆盖组织，湿盒内4℃过夜。取出切片，摆放在切片架上，浸泡在pbs中5min×3次。滴加荧光二抗，用pbs1:200稀释(以下操作注意避光)，滴加至完全覆盖组织，室温孵育60min。取出切片，摆放在切片架上，浸泡在pbs中5min×3次。擦干周围液体，滴加dapi至完全覆盖组织以复染核。摆放在切片架上，浸泡在pbs中5min×3次。依次取出切片，擦干周围液体，滴加抗荧光淬灭剂，盖玻片封片。于荧光显微镜下观察染色效果。分别于200×、400×镜下拍照。

如图4a和4b，以及5a和5b所示：pcna免疫组化结果显示，dhq组pcna阳性面积大于对照组，dhq组单位面积下核增殖能力较强的细胞数目大于对照组(p<0.05)；cd31免疫组化结果显示，dhq组微血管密度大于对照组(p<0.05)。

④油红o染色

将冰冻切片(厚度为4-8um)常温干燥15-20min。100％异丙醇孵育5分钟(避免把水带入油红o)。0.5％的油红o溶液孵育7-8分钟(在60℃烤箱)85％异丙醇溶液洗3分钟，双脱水洗。苏木素染1-1.5min。双脱水洗。封片剂封片。结果:脂质呈红色或者橘黄色细胞核呈淡蓝色

如图6a和6b所示：油红o染色结果显示，dhq组单位面积下油红o染色区域较对照组更大(p<0.05)，提示dhq组单位面积下脂肪细胞数目较对照组更多。

⑤天狼星红染色

组织固定于10％福尔马林中，常规脱水包埋。切片厚6μm，常规脱蜡至水。天狼星红染色液滴染1小时。流水冲洗。常规脱水透明，中性树胶封固。染色结果：偏振光显微镜观察,ⅰ型胶原纤维呈橙黄色或红色,ⅲ型胶原纤维呈绿色。

如图7a和7b所示：：天狼星红染色结果显示，dhq组单位面积下天狼星红染色区域较对照组更大(p<0.05)，提示dhq通过促进胶原纤维的生成，促进脂肪组织间结缔组织的生成，保护脂肪组织。