一种具有保湿功能的化妆品及其制备方法和用途与流程

[0001]
本发明涉及化妆品以及药物领域，更具体的涉及一种具有保湿活性的多肽以及其制备的化妆品中的用途。


背景技术：

[0002]
皮肤是人体最大的器官，健康皮肤角质层含水量(10％～20％)的维持有赖于表皮天然保湿屏障系统结构与功能的完整，但受环境因素的影响和疾病发生常导致该系统功能的紊乱，如冬季气候干燥、肾功能衰竭、应用分子靶向药物等，常常导致角质层含水量低于10％，皮肤出现干燥、粗糙、皲裂等表现，甚至诱发或加重某些皮肤疾病。因此针对皮肤保湿变得尤为重要，特别是针对女生，拥有吹弹可破的皮肤是梦寐以求的追求，而这和皮肤保湿有紧密的关联。
[0003]
天然保湿剂有助于皮肤屏障的修复，补充细胞内的脂质，形成一个封闭的环境，改善角质层细胞的水合作用，减少炎症，减少微生物。人工合成的保湿剂含有较多过敏性和刺激性的化学物质，如防腐剂和香料，易致皮肤过敏或产生其他不良反应，有的甚至致癌以及对下一代产生不利影响。而在天然保湿剂中，植物来源的保湿剂具有安全性高，获得成本低等天然的有点，是保湿化妆品重点的研究方向。
[0004]
植物来源的天然保湿剂包含许多天然植物油，如橄榄油、椰子油、坚果油、芦荟、多肽等。天然植物油通过模拟天然保湿屏障系统，延缓经表皮水分流失并促进病损部位的修复，增强皮肤屏障的功能，从而维持角质层的水合状态。最终修复皮肤屏障，减少经皮丢失水(twel)，起到保湿作用。主要通过下面两个机制锁水:
①
通过增加亲水性成分如甘油，来加强表皮细胞的水合作用；
②
通过疏水性成分如凡士林油的封闭作用来减少角质层水分蒸发。还有证据表明有些疏水成分的植物油可能会扩散进入到角质层的细胞间隙来加强屏障结构的完整性。天然油中各类必需脂肪酸所占的比例是影响其屏障修复效益的主要因素。具有较高浓度亚油酸(linoleic acid，la)的天然油比一般天然油有较好的屏障修复的潜力，而刺激性的油酸(oleic acid，oa)含量过多反而会损害皮肤屏障功能。据报道，天然植物油例如葡萄籽油(grape seed oil，gso)中亚油酸(la)所占脂肪酸谱的比例超60％，因此天然植物油有助于皮肤屏障的修复。冷压法是天然植物油提取的首选方法，其以无热、无化学的过程能保留有益油脂，并限制刺激性副产品，通过冷压法提取的天然植物油具有抗氧化、抗菌、皮肤屏障修复的特性。一些研究已经初步证明了天然油在新生儿皮肤护理方案中的良好作用，平均而言，研究使用小剂量的油(2～4ml/次)按摩到指定的皮肤区域，或全身应用，2～4次/d，有助于保护和改善未成熟皮肤屏障的完整性。精选天然、冷压油可用于常规保湿、提高角质细胞水合能力和改善皮肤屏障功能。虽然局部应用冷压油似乎是安全的，但不良反应也可能包括烧伤、红斑或过敏反应。据报道，植物油也可能在某些人体内引起过敏性接触性皮炎，但通过冷压法提取的天然植物油比精油发病率低。总的来说，天然油被证明具有抗炎和止痒性能，以及抗菌性能。
[0005]
植物活性多肽被广泛应用于美容、保健.皮肤抗衰老等各个领域特别是它们所具
有天然的皮肤美白祛斑、抗皱.保湿去皮脂、祛痘等生理作用、以及它们具有良好的抗氧化及清除过多过剩自由基、皮肤组织营养和促进皮肤细胞新陈代谢方面具有积极作用.可作为皮肤美容保湿化妆品的功效原料和理想添加剂，也必将在未来皮肤美容化妆品的应用中取得积极进展并备受关注。但是目前针对植物活性肽用于保湿的研究还比较少。


技术实现要素：

[0006]
本发明克服现有技术的局限，针对具有极好保水功能的仙人掌进行研究，提供工艺优化获得了五种分子量区段的仙人掌保湿多肽，通过干燥细胞模型实验筛选得到了2个区段的保湿多肽具有较好的保湿效果。
[0007]
本发明一方面，提供一种从仙人掌中分离保湿多肽的方法，所述方法包括取仙人掌粉，与正己烷按照体积比1：3比例混合，40℃水浴震荡萃取30min，10000g/min离心3min，弃去上清液，重新加入正己烷，重复1次，以充分去除脂肪，置于恒温干燥箱中，65℃烘干至恒重(4h过夜)得到粉末；随后按照粉末体积比加入10倍去离子水，调ph值至8.5，加入0.2％粉末重量比的纤维素酶和0.3％粉末重量比的果胶酶，于50℃水解60min，酶灭活，降至室温；加入0.5％粉末重量比的中性蛋白酶，于40℃水解100min，酶灭活，降至室温；加入0.5％粉末重量比的碱性蛋白酶，于40℃水解100min，酶灭活，降至室温；加入粉末重量0.5％的活性碳脱色半小时，离心过滤，收集滤液，滤液为淡绿色澄清液体。将所述液体过0.22μm微孔滤膜除去杂质后，分别过截留量为10kda、5kda、3kda的中空纤维膜以及1kda的超滤膜，分子量在1kda以下的组分过200da的超滤膜除杂。将得到的各分子量段的多肽低温旋蒸，冷干。即得分子量段为mr>10kda、5kda<mr<10kda、3kda<mr<5kda、1kda<mr<3kda、mr<1kda的五种保湿多肽样品。其中，3kda<mr<5kda和mr<1kda这两个多肽组的保湿效果最好，
[0008]
本发明进一步的，提供保湿多肽在制备保湿化妆品中的用途。
[0009]
更进一步的，本发明提供的化妆品为润肤沐浴露，所述润肤沐浴露的制备方法，包括以下步骤：
[0010]
(i)将去离子水加入到反应釜中，升温至70℃，边以35转/分搅拌边加入癸基葡糖苷、椰油酰胺丙基甜菜碱、十二烷基硫酸钠、甘油、二十二醇、辛甘醇、羧甲基纤维素钠、角鲨烷、l-岩藻糖，再以100转/分搅拌10分钟，得到混合液；
[0011]
(ii)混合液降温至35℃，加入透明质酸钠、保湿多肽，以50转/分搅拌20分钟，得到润肤沐浴露。
[0012]
润肤沐浴露得原料(配比)：癸基葡糖苷2-5％、椰油酰胺丙基甜菜碱1-3％、十二烷基硫酸钠0.5-1.5％、甘油1-5％、二十二醇0.5-1.5％、辛甘醇0.5-1.5％、羧甲基纤维素钠1-3％、角鲨烷3-5％、l-岩藻糖1-2％、透明质酸钠0.25-1％、保湿多肽1-2％，余量去离子水。
[0013]
本发明还提供一种润肤沐浴露，润肤沐浴露得原料(配比为)：癸基葡糖苷2-5％、椰油酰胺丙基甜菜碱1-3％、十二烷基硫酸钠0.5-1.5％、甘油1-5％、二十二醇0.5-1.5％、辛甘醇0.5-1.5％、羧甲基纤维素钠1-3％、角鲨烷3-5％、l-岩藻糖1-2％、透明质酸钠0.25-1％、保湿多肽1-2％，余量去离子水。
[0014]
本发明还提供了所述的保湿多肽在制备用于修复皮肤损伤的化妆品或者药物中的用途。
[0015]
所述的保湿多肽为分离自仙人掌，采用如上的分离方法制备获得的。
[0016]
本发明进一步的，所述的化妆品可以是面霜、面膜、洗面奶、肥皂、保湿水、护手霜等。
[0017]
更进一步的，本发明的化妆品中还可以添加其他的保湿因子来增加保湿效果。包括但不限于甘油。
[0018]
更进一步的，本发明的化妆品中还含有公认的杀菌剂。
[0019]
有益效果
[0020]
本发明针对具有极好保水功能的仙人掌进行研究，提供工艺优化获得了五种分子量区段的仙人掌保湿多肽，通过干燥细胞模型实验筛选得到了2个区段的保湿多肽具有较好的保湿效果，选择其应用于干燥细胞的修复，结果发现其具有较好的修复干燥细胞的效果，通过小鼠模型以及人体实验也证明了所述多肽具有较好的保湿效果。
附图说明
[0021]
图1保湿多肽对干燥损伤的hacat细胞的保护效果图
具体实施方式
[0022]
为了更进一步的说明本发明的目的、技术方案和优点，我们结合以下具体实施例来阐述本发明，这些实施例仅为了更好的说明本发明专利，而不用于限制本发明范围。基于本发明中的实施例，本领域的技术人员在没有做出创造性的情况下所得到的其他所有实施方式均属于本发明所保护的范围。
[0023]
实施例1保湿多肽提取物的制备
[0024]
取仙人掌粉1.0kg，与正己烷按照体积比1：3比例混合，40℃水浴震荡萃取30min，10000g/min离心3min，弃去上清液，重新加入正己烷，重复1次，以充分去除脂肪，置于恒温干燥箱中，65℃烘干至恒重(4h过夜)得到粉末；随后按照粉末体积比加入10倍去离子水，调ph值至8.5，加入0.2％粉末重量比的纤维素酶和0.3％粉末重量比的果胶酶，于50℃水解60min，酶灭活，降至室温；加入0.5％粉末重量比的中性蛋白酶，于40℃水解100min，酶灭活，降至室温；加入0.5％粉末重量比的碱性蛋白酶，于40℃水解100min，酶灭活，降至室温；加入粉末重量0.5％的活性碳脱色半小时，离心过滤，收集滤液，滤液为淡绿色澄清液体。将所述液体过0.22μm微孔滤膜除去杂质后，分别过截留量为10kda、5kda、3kda的中空纤维膜以及1kda的超滤膜，分子量在1kda以下的组分过200da的超滤膜除杂。将得到的各分子量段的多肽低温旋蒸，冷干。即得分子量段为mr>10kda、5kda<mr<10kda、3kda<mr<5kda、1kda<mr<3kda、mr<1kda的五种保湿多肽样品。结果如下表1所示。
[0025]
表1酶解保湿多肽的特性
[0026]
保湿多肽类型水分％总蛋白％纯度％mr>10kda1.13
±
0.0298.23
±
0.7998.31
±
0.655kda<mr<10kda1.39
±
0.0197.66
±
1.0397.26
±
0.443kda<mr<5kda2.05
±
0.0496.87
±
1.1197.52
±
0.361kda<mr<3kda1.19
±
0.0395.63
±
0.7398.02
±
0.81mr<1kda0.96
±
0.0296.95
±
0.8697.65
±
1.03
[0027]
由表1可知，经过分离纯化后的保湿多肽的总蛋白含量以及纯度都比本领域常规的提取方法得到的含量都要高，均在95％以上，有利于后续试验的进行。
[0028]
实施例2保湿多肽对干燥损伤的hacat细胞的保护作用
[0029]
hacat细胞位于皮肤表皮层，是本领域公认的可用来评价保湿,舒缓炎症,抗氧化等功效。将hacat细胞接种到96孔板中,按本领域公知的方法培养24h,待细胞贴壁后,加入100μl用dmem培养基配制的待测的实施例1制备的5种保湿多肽样品,培养24h后,移去孔中培养液,将96孔板置于洁净工作台中,在风速为0.4m/s条件下干燥20min(细胞死亡率接近50％)。实验中样品浓度为1μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml。实验中以仅加入dmem培养基的孔为对照组。测定细胞存活率。细胞存活率按细胞存活率(％)＝(od450样品-od450空白)/(od450对照-od450空白)x100％的公示计算。结果如图1所示。
[0030]
通过对hacat细胞进行先加样后干燥的损伤处理,探究样品对干燥损伤细胞的保护作用。由图1可知,3kda<mr<5kda和mr<1kda这两个多肽组能够较好的对损伤细胞具有保护作用。二个多肽组在浓度为50μg/ml时即可达到较高的抵抗细胞干燥损伤的作用,细胞存活率分别为97.3％
±
2.5％和98.25％
±
2.1％。因此，分别以3kda<mr<5kda和mr<1kda这两个多肽组进行后续的研究。
[0031]
实施例3 mr<1kda多肽对hacat细胞内ha的生成作用的影响
[0032]
使用ha elisa试剂盒利用双抗体夹心法测定标本中ha的含量，试验中选用的抗体为人透明质酸。分别检测实施例2中50μg/ml mr<1kda多肽对hacat细胞处理后的ha含量。结果显示，干燥损伤的hacat细胞内ha含量为104.28
±
3.41ng/l，而处理后的细胞的ha含量达到了226.81
±
6.02ng/l，显示ha的含量得到了显著的提高。
[0033]
实施例4mr<1kda多肽组对干燥小鼠模型影响
[0034]
把70只实验小鼠随机分为7组：1)空白组，皮下注射生理盐水，皮肤不涂抹任何产品；2)模型组，皮下注射d-半乳糖，皮肤不涂抹任何产品；3)阳性对照组，皮下注射d-半乳糖，皮肤涂抹10％甘油溶液；4)mr<1kda低剂量组，皮下注射d-半乳糖，皮肤涂抹剂量为0.25mg/cm2；5)mr<1kda高剂量组，皮下注射d-半乳糖，皮肤涂抹剂量为1mg/cm2。各组小鼠饲养一周后，开始进行实验。所有小鼠均用6％硫化钠脱毛，露出背部3
×
3cm2大小的皮肤。皮下注射剂量为1000mg
·
kg-1
·
d-1。小鼠饲养8周后，实验结束。禁食一天后，清洁皮肤，脱颈椎处死小鼠。将取下的皮肤进行含水量检测。结果如表2所示。
[0035]
表2 mr<1kda多肽组对小鼠皮肤水分含量影响
[0036]
组别皮肤水分含量(％)空白组66.48
±
1.98模型组56.42
±
2.01
##
阳性对照组60.79
±
1.36
*
mr<1kda低剂量组65.13
±
2.13
*
mr<1kda高剂量组65.97
±
1.38
**
[0037]
##p<0.01与空白组比较；**p<0.01与模型组比较。
[0038]
实验结果显示(表2)，模型组小鼠皮肤水分含量明显低于空白组(p<0.01)，证实了衰老会导致皮肤水分含量降低。与模型组相比，各mr<1kda组和阳性对照组小鼠皮肤水分含量均得到明显的提高，差异具有统计学意义(p<0.01)，而高剂量mr<1kda组皮肤水分含量与
模型组相比存在极显著差异(p<0.01)。实验说明了mr<1kda肽对提高衰老皮肤水分含量有很好的效果，其中高剂量mr<1kda肽效果最明显。
[0039]
实施例5 mr<1kda多肽人体实验
[0040]
(1)实验化妆品的制备
[0041]
所述实验化妆品为润肤沐浴露，所述润肤沐浴露的制备方法，包括以下步骤：
[0042]
(i)将去离子水加入到反应釜中，升温至70℃，边以35转/分搅拌边加入癸基葡糖苷、椰油酰胺丙基甜菜碱、十二烷基硫酸钠、甘油、二十二醇、辛甘醇、羧甲基纤维素钠、角鲨烷、l-岩藻糖，再以100转/分搅拌10分钟，得到混合液；
[0043]
(ii)混合液降温至35℃，加入透明质酸钠、mr<1kda多肽，以50转/分搅拌20分钟，得到润肤沐浴露。
[0044]
润肤沐浴露得原料(配比)：癸基葡糖苷2％、椰油酰胺丙基甜菜碱1％、十二烷基硫酸钠0.5％、甘油1％、二十二醇0.5％、辛甘醇0.5％、羧甲基纤维素钠1％、角鲨烷3％、l-岩藻糖1％、透明质酸钠0.25％、mr<1kda多肽1％，余量去离子水。
[0045]
(2)对照化妆品的制备
[0046]
所述对照化妆品为润肤沐浴露，所述润肤沐浴露的制备方法，包括以下步骤：
[0047]
(i)将去离子水加入到反应釜中，升温至70℃，边以35转/分搅拌边加入癸基葡糖苷、椰油酰胺丙基甜菜碱、十二烷基硫酸钠、甘油、二十二醇、辛甘醇、羧甲基纤维素钠、角鲨烷、l-岩藻糖，再以100转/分搅拌10分钟，得到混合液；
[0048]
(ii)混合液降温至35℃，加入透明质酸钠，以50转/分搅拌20分钟，得到润肤沐浴露。
[0049]
润肤沐浴露得原料(配比)：癸基葡糖苷2％、椰油酰胺丙基甜菜碱1％、十二烷基硫酸钠0.5％、甘油1％、二十二醇0.5％、辛甘醇0.5％、羧甲基纤维素钠1％、角鲨烷3％、l-岩藻糖1％、透明质酸钠0.25％，余量去离子水。
[0050]
(3)对照2润肤沐浴露为市售的润肤化妆品。
[0051]
挑选20-40岁成年人，男女各半，身体健康，生活规律，无皮肤病，随机分为3组，每组20人，每组分别使用实施例中得到的润肤沐浴露进行沐浴，然后在测试环境温度为25℃，相对湿度为60％的环境中测定颈部的水分含量，同时让被检者保持平静。在后颈上划出2个4cm
×
4cm的正方形实验区域，作为润肤沐浴露的测试区，使用皮肤水分测定仪分别测定沐浴后1小时、5小时的皮肤含水率，记录结果。具体结果见表3。
[0052]
表3润肤沐浴露保湿效果测试结果表
[0053]
组别1h皮肤含水量(％)5h皮肤含水量(％)实验实验化妆品62.6
±
2.159.4
±
1.0对照化妆品46.4
±
1.440.8
±
0.9对照2润肤沐浴露52.9
±
1.544.2
±
1.5
[0054]
从表中结果可以看出，添加了mr<1kda肽的润肤沐浴露的保湿性能优于没有添加mr<1kda肽的沐浴露，也比市售的润肤沐浴露的效果要好。而且，1h和5h的含水量差别不大，表明本发明的润肤肽能较好的提高皮肤的含水量有利于保持皮肤滋润。