糖基修饰多酚化合物预防和治疗急性肾损伤的新用途的制作方法

[0001]
本发明属于药物领域，具体涉及糖基修饰多酚化合物预防和治疗急性肾损伤的用途，特别是涉及木糖修饰邻苯三酚在制备预防和治疗碘海醇、顺铂、脂多糖造成的急性肾损伤药物中的应用。


背景技术：

[0002]
急性肾损伤(acute kidney injury，aki)是由不同原因引起肾脏滤过功能短期内急性减退或丧失导致的临床综合征，院内病死率高，医疗资源消耗大。aki病因很多，包括脓毒症(脂多糖)、缺血再灌注、肾毒性药物(如：造影剂、顺铂)等。尽管临床诊治水平有了明显提高，然而在过去的50年，aki患者的结局改善并不明显
[1]
。aki患者总住院死亡率高达50％，在危重患者中可增至75％，预后仍然较差
[2]
，造成严重的医疗、社会和经济负担，并且临床诊疗中存在严重的漏误诊与治疗不充分问题。
[0003]
在aki的早期防治方面，由于目前尚无有效药物可减轻肾脏损伤或促进组织恢复，因此aki的早期防治至关重要，并应根据aki病程进行治疗调整
[3]
。在高风险期应全面开展积极的肾脏保护措施，纠正肾脏低灌注、贫血、低蛋白血症，控制感染，改善氧供，合理选择和应用药物治疗，并密切监测肾功能变化。在已经发生肾功能损害的患者，需要注意加强监护、调整药物剂量、加强营养支持、防治感染、水、电解质、酸碱失衡等并发症，并适时开始肾脏替代治疗(renal replacement therapy，rrt)。近20余年来，肾脏病学界致力于研制可能的aki治疗药物，但是很多在动物研究中有效的药物在人类aki疾病中没有治疗效果[4,
5]
。在美国nih官方网站注册的aki临床治疗试验研究有500余项，涉及手术模式调整、不同的液体疗法、透析治疗时机-剂量-模式、肢体远端预缺血、多普勒超声、重组红细胞生成素、重组血栓调节素、一氧化氮、他汀类药物、骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，msc)等众多治疗手段和药物。同时大量研究证明，抗氧化剂在预防肾毒性aki中具有一定潜力。
[0004]
本项目组前期设计合成了32个糖基修饰多酚化合物，并评价了它们的抗氧化活性，发现木糖-邻苯三酚轭联物(xp)具有很强的清除自由基能力，对过氧化氢导致的evc304细胞氧化损伤具有明显的保护作用
[6]
。xp是一种水溶性的糖基修饰多酚化合物，前期研究表明该类化合物具有很好的抗氧化、减肥、降血脂、治疗急性百草枯中毒和博来霉素诱导肺纤维化的功效，我们申请了相应的发明专利
[7-8]
。本专利我们将其用于急性肾损伤的预防和治疗，结果显示糖基修饰多酚化合物xp对碘海醇、顺铂、脂多糖诱导的大鼠急性肾损伤具有明显的预防和治疗作用，机制可能是通过调节线粒体功能，氧化应激和细胞凋亡，而对大鼠aki模型起到保护作用。参考文献
[0005]
[1]slocum j l,heung m,pennathur s.marking renal injury:can we move beyond serum creatinine？[j].transl res,2012,159(4):277-289.
[0006]
[2]yang f,zhang l,wu h,et al.clinical analysis of cause,treatment and prognosis in acute kidney injury patients[j].plos one,2014,9(2):e85214.
[0007]
[3]khwaja,arif.kdigo clinical practice guidelines for acute kidney injury[j].nephron clinical practice,2012,120(4):179-184.
[0008]
[4]swaminathan s,rosner m h,okusa m d.emerging therapeutic targets of sepsis-associated acute kidney injury[j].semin nephrol,2015,35(1):38-54.
[0009]
[5]bianchi f,sala e,donadei c,et al.potential advantages of acute kidney injury management by mesenchymalstem cells[j].world j stem cells,2014,6(5):644-650.
[0010]
[6]刘天军，杨澍，杨晓姣.一种糖基修饰的多酚类化合物的制备方法和用途:中国，2012105195079[p].2012-12-6.
[0011]
[7]刘天军，杨晓姣，洪阁，杨澍.一种含有糖基修饰多酚化合物的口服药物制剂和用途:中国，2013103895061[p].2013-12-11.
[0012]
[8]刘天军，曹波，洪阁.糖基修饰多酚化合物的新用途:中国，2017111526387[p].2017-11-19.


技术实现要素：

[0013]
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供糖基修饰多酚化合物作为急性肾损伤预防和治疗药物的用途。
[0014]
本发明的目的主要通过以下技术方案实现：
[0015]
糖基修饰多酚化合物在制备急性肾损伤预防和治疗药物的应用，所述的糖基修饰多酚化合物具有下述结构：
[0016][0017]
实验证明：本发明的糖基修饰多酚化合物xp具有良好的急性肾损伤预防和治疗效果，对碘海醇造成的急性肾损伤具有明显的保护作用，对顺铂和脂多糖诱导的急性肾损伤也具有明显的预防和治疗作用，机制与调节线粒体功能，减轻氧化应激和细胞凋亡有关。
附图说明
[0018]
图1为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对碘海醇致大鼠急性肾损伤的生长曲线和肾脏指数的影响。
[0019]
图2为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对碘海醇致大鼠急性肾损伤的心脏指数、肝脏指数、脾脏指数和肺脏指数的影响。
[0020]
图3为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对碘海醇致大鼠急性肾损伤的肾功能的影响。
[0021]
图4为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对碘海醇致大鼠急性肾损伤的肝
功能的影响。
[0022]
图5为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对碘海醇致大鼠急性肾损伤的肾脏组织形态的影响。
[0023]
图6为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对碘海醇致大鼠急性肾损伤的肾脏he染色和肾小管组织学评分。
[0024]
图7为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对顺铂致大鼠急性肾损伤的生长曲线。
[0025]
图8为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对顺铂致大鼠急性肾损伤的第3天肾功能的影响。
[0026]
图9为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对顺铂致大鼠急性肾损伤的肾脏组织形态的影响。
[0027]
图10为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对顺铂致大鼠急性肾损伤的第3天肾脏he染色和肾小管组织学评分。
[0028]
图11为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对顺铂致大鼠急性肾损伤的第3天肾脏pas染色和肾小管组织学评分。
[0029]
图12为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对顺铂致大鼠急性肾损伤的第21天肾功能的影响。
[0030]
图13为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对顺铂致大鼠急性肾损伤的第21天肾脏he染色和肾小管组织学评分。
[0031]
图14为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对顺铂致大鼠急性肾损伤的第21天肾脏masson染色和纤维化面积计算。
[0032]
图15为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对脂多糖致大鼠急性肾损伤的生长曲线。
[0033]
图16为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对脂多糖致大鼠急性肾损伤的4小时肾功能的影响。
[0034]
图17为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对脂多糖致大鼠急性肾损伤的肾脏组织形态的影响。
[0035]
图18为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对脂多糖致大鼠急性肾损伤的4小时肾脏he染色和肾小管组织学评分。
[0036]
图19为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对脂多糖致大鼠急性肾损伤的4小时肾脏pas染色和肾小管组织学评分。
[0037]
图20为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对脂多糖致大鼠急性肾损伤的第7天肾功能的影响。
[0038]
图21为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对脂多糖致大鼠急性肾损伤的第21天肾功能的影响。
[0039]
图22为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对脂多糖致大鼠急性肾损伤的第21天肾脏he染色和肾小管组织学评分。
[0040]
图23为本发明实施例1的糖基修饰多酚化合物xp对脂多糖致大鼠急性肾损伤的第21天肾脏masson染色和纤维化面积计算。
具体实施方式
[0041]
下面通过实施例对本发明作进一步说明，其目的仅在于更好的理解本发明的内容而非限制本发明的保护范围：
[0042]
实施例1糖基修饰多酚化合物xp的制备
[0043]
取1.8g d-木糖，9.4g焦性没食子酸，氮气保护下加热至120℃熔融，搅拌反应24h，产物用甲醇/乙酸乙酯重结晶得到灰色固体，糖基修饰多酚化合物xp4.0g，产率为87％。
[0044]
实施例2碘海醇致大鼠急性肾损伤模型
[0045]
本发明实施例1所得的糖基修饰多酚化合物预防碘海醇致大鼠急性肾损伤的在体实验过程，包括如下步骤：
[0046]
分组及造模42只sd大鼠随机分为空白对照组(ctrl)，模型组(ci-aki，碘海醇3g i/kg)，糖基修饰多酚化合物xp治疗组(hxp，碘海醇3gi/kg+糖基修饰多酚化合xp 200mg/kg)，五倍子酸治疗组(ga，碘海醇3g i/kg+五倍子酸ga 200mg/kg)，表没食子儿茶素没食子酸酯治疗组(egcg，碘海醇3g i/kg+egcg 200mg/kg)，葡萄籽多酚治疗组(gspe，碘海醇3g i/kg+葡萄籽多酚gspe 200mg/kg)，单宁酸治疗组(ta，碘海醇3g i/kg+单宁酸ta 200mg/kg)。治疗组口服灌胃相应剂量的药物，空白对照组和模型组口服灌胃相同体积的生理盐水。每日给药一次，连续7天。7天后皮下注射吲哚美辛和亚硝基左旋精氨酸甲酯15分钟后尾静脉注射碘海醇3g i/kg，建立对比剂急性肾损伤模型。
[0047]
标本获取与分析每日称取实验动物体重(见图1)，造模后的第1天处死动物取材，称取脏器重量(见图1-2)。眼球取血，留取血清检测血清肌酐scr、血尿素氮bun、胱抑素cys c、取尿液检测n-乙酰-β-d-葡萄糖苷酶nag(见图3)和谷丙转氨酶alt、谷草转氨酶ast(见图4)。取肾脏，4％中性甲醛固定，观察肾脏组织形态(见图5)，he染色(见图6)，结果肾小管损伤评分。
[0048]
he染色结果：空白对照组大鼠肾组织结构清晰，肾单位完整，肾小管未见明显萎缩，坏死，无水肿表现；模型组大鼠肾组织疏松，肾小管中度扩张，管内细胞脱落，细胞水肿，透明化，静脉无明显淤血，细胞边界清晰度欠佳；xp治疗组大鼠的组织整体较前致密，肾小管轻度扩张，细胞水肿程度较前轻微，静脉无明显淤血，细胞边界清晰度尚可。
[0049]
实施例3顺铂致大鼠急性肾损伤模型
[0050]
本发明实施例1所得的糖基修饰多酚化合物预防和治疗顺铂致大鼠急性肾损伤的在体实验结果，包括如下内容：
[0051]
分组及造模30只sd大鼠随机分为空白对照组(control)，模型组(cis，顺铂10mg/kg腹腔注射)，表没食子儿茶素没食子酸酯治疗组(egcg+cis，表没食子儿茶素没食子酸酯400mg/kg+顺铂10mg/kg腹腔注射)，糖基修饰多酚化合物xp治疗组(xp+cis糖基修饰多酚化合物xp 400mg/kg+顺铂10mg/kg腹腔注射)，糖基修饰多酚化合物xp组(糖基修饰多酚化合物xp 400mg/kg)。治疗组口服灌胃相应剂量的药物，空白对照组和模型组口服灌胃相同体积的生理盐水。每日给药一次，连续7天。7天后模型组和治疗组腹腔注射顺铂10mg/kg，建立顺铂致急性肾损伤模型。
[0052]
标本获取与分析每日称取实验动物体重(见图7)，造模后第3天每组随机选取3只大鼠处死动物取材。眼球取血，留取血清检测血清肌酐scr、血尿素氮bun、胱抑素cys c、取尿液检测n-乙酰-β-d-葡萄糖苷酶nag(见图8)。取肾脏，4％中性甲醛固定，观察肾脏组织形
态(见图9)，he染色(图10)和pas染色(图11)，结果肾小管损伤评分。
[0053]
造模后第21天，处死剩余动物并取材。眼球取血，留取血清检测血清肌酐scr、血尿素氮bun、胱抑素cys c、取尿液检测n-乙酰-β-d-葡萄糖苷酶nag(见图12)。取肾脏，4％中性甲醛固定，观察肾脏组织形态，he染色(见图13)和masson染色(见图14)，结果肾小管损伤评分和纤维化面积计算。
[0054]
第3天he和pas染色结果：空白对照组大鼠肾组织结构清晰，肾单位完整，肾小管未见明显萎缩，坏死，无水肿表现；模型组大鼠肾组织组织疏松，肾小管中度扩张，管内细胞脱落，细胞水肿，透明化，静脉无明显淤血，细胞边界清晰度欠佳；各治疗组大鼠的组织整体较前致密，肾小管轻度扩张，细胞水肿程度较前轻微，静脉无明显淤血，细胞边界清晰度尚可。
[0055]
第21天he染色结果：空白对照组大鼠肾组织结构清晰，肾单位完整，肾小管未见明显萎缩，坏死，无水肿表现；模型组大鼠肾组织疏松，肾小管严重扩张、坏死，管内细胞脱落，细胞水肿，透明化，静脉无明显淤血，细胞边界清晰度欠佳；各治疗组大鼠的组织整体较前致密，肾小管轻度扩张，细胞水肿程度较前轻微，静脉无明显淤血，细胞边界清晰度尚可。第21天masson染色结果：空白对照组大鼠肾组织结构清晰，肾单位完整，肾小管未见明显萎缩，坏死，无水肿表现；模型组大鼠肾组织疏松，肾小管中度扩张，蓝染胶原纤维广泛分布，胶原蛋白容积评分高于对照组；各治疗组大鼠的组织整体较前致密，肾小管轻度扩张，细胞水肿程度较前轻微，胶原蛋白容积评分较模型组减低。
[0056]
实施例4脂多糖致大鼠急性肾损伤模型
[0057]
本发明实施例1所得的糖基修饰多酚化合物预防和治疗脂多糖致大鼠急性肾损伤的在体实验结果，包括如下内容：
[0058]
分组及造模30只大鼠随机分为空白对照组(control)，模型组(lps，脂多糖10mg/kg腹腔注射)，表没食子儿茶素没食子酸酯治疗组(egcg+lps，表没食子儿茶素没食子酸酯400mg/kg+脂多糖lps 10mg/kg腹腔注射)，糖基修饰多酚化合物xp治疗组(xp+lps，糖基修饰多酚化合物400mg/kg+脂多糖lps 10mg/kg腹腔注射)，糖基修饰多酚化合物xp组(糖基修饰多酚化合物xp 400mg/kg)。治疗组口服灌胃相应剂量的药物，空白对照组和模型组口服灌胃相同体积的生理盐水。每日给药一次，连续7天。7天后模型组和治疗组予脂多糖lps 10mg/kg腹腔注射，建立脂多糖致急性肾损伤模型。
[0059]
标本获取与分析每日称取实验动物体重(见图15)，造模后4小时每组随机选取2只大鼠处死动物取材。眼球取血，血清肌酐scr、血尿素氮bun、胱抑素cys c、取尿液检测n-乙酰-β-d-葡萄糖苷酶nag(见图16)。取肾脏，4％中性甲醛固定，观察肾脏组织形态(见图17)，he染色(图18)和pas染色(图19)，结果肾小管损伤评分。
[0060]
造模后第7天，每组随机选取2只大鼠处死动物取材。眼球取血，留取血清检测血清肌酐scr、血尿素氮bun、胱抑素cys c、取尿液检测n-乙酰-β-d-葡萄糖苷酶nag(见图20)。
[0061]
造模后第21天，处死剩余动物并取材。眼球取血，留取血清检测血清肌酐scr、血尿素氮bun、胱抑素cys c、取尿液检测n-乙酰-β-d-葡萄糖苷酶nag(见图21)。取肾脏，4％中性甲醛固定，观察肾脏组织形态，he染色(见图22)和masson染色(见图23)，结果肾小管损伤评分和纤维化面积计算。
[0062]
4小时he和pas染色结果：空白对照组大鼠肾组织结构清晰，肾单位完整，肾小管未见明显萎缩，坏死，无水肿表现；模型组大鼠肾组织疏松，肾小管中度扩张，管内细胞脱落，
细胞水肿，透明化，静脉无明显淤血，细胞边界清晰度欠佳；各治疗组大鼠的组织整体较前致密，肾小管轻度扩张，细胞水肿程度较前轻微，静脉无明显淤血，细胞边界清晰度尚可。
[0063]
第21天he染色结果：空白对照组大鼠肾组织结构清晰，肾单位完整，肾小管未见明显萎缩，坏死，无水肿表现；模型组大鼠肾组织疏松，肾小管严重扩张、坏死，管内细胞脱落，细胞水肿，透明化，静脉无明显淤血，细胞边界清晰度欠佳；各治疗组大鼠的组织整体较前致密，肾小管轻度扩张，细胞水肿程度较前轻微，静脉无明显淤血，细胞边界清晰度尚可。第21天masson染色结果：空白对照组大鼠肾组织结构清晰，肾单位完整，肾小管未见明显萎缩，坏死，无水肿表现；模型组大鼠肾组织疏松，肾小管中度扩张，蓝染胶原纤维广泛分布，胶原蛋白容积评分高于对照组；各治疗组大鼠的组织整体较前致密，肾小管轻度扩张，细胞水肿程度较前轻微，胶原蛋白容积评分较模型组减低。