连翘酯苷e在制备抗冠状病毒产品中的应用
技术领域
1.本发明属于医药领域，具体涉及连翘酯苷e在制备抗冠状病毒产品中的应用。
背景技术：
2.冠状病毒是目前已知rna病毒中基因组最大的病毒，由病毒的包膜上的棘突形成的类似日冕的形状而得名。新型冠状病毒covid-19是目前已知的可以感染人的冠状病毒，成为国际关注的突发公共卫生事件，目前针对抗新型冠状病毒的药物的发现是亟待解决的问题。
3.新型冠状病毒主要通过表达spike蛋白rbd结构域与ace2的复合物、3cl水解酶以及rna-dependent rna polymerase等蛋白（ science，2020，368: 779-782；bioceem j，2011，436: 53；science，2020，367: 1444-1448）而侵袭人体。以新型冠状病毒spike蛋白rbd结构域与ace2的复合物、3cl水解酶以及rna-dependent rna polymerase等为靶点进行分子对接发现抑制剂，进一步通过阻断s蛋白与ace2的复合物形成为抑制covid-19对人体的侵袭，并采用细胞实验检测病毒抑制能力，是目前发现新型冠状病毒covid-19抑制剂的重要途径。
4.以新型冠状病毒spike蛋白rbd结构域与ace2的复合物、3cl水解酶以及rna-dependent rna polymerase等为靶点蛋白进行分子对接，采用细胞实验检测病毒抑制能力，从天然植物中发现冠状病毒的抑制剂。发明人发现了具有明显抑制活性的化合物连翘酯苷e。
5.连翘酯苷e，属于咖啡酰基苯乙醇苷类化合物，英文名称forsythoside e，主要存在于木樨科植物中（americam journal of chinese medicine，2017，45：1513；the scientific world journal，2015，2015：731765；molecules，2009，14：1324）。
6.目前，未见连翘酯苷e抗病毒的研究报道。
技术实现要素：
7.本发明以分子对接，亲和力测定以及细胞抑制实验作为发现冠状病毒抑制剂的手段。采用以新型冠状病毒s蛋白与ace2的复合物为靶点蛋白进行分子对接，采用细胞实验检测病毒抑制能力，从天然植物中发现连翘酯苷e对冠状病毒具有显著的抑制作用。
8.本发明的目的是提供连翘酯苷e在制备冠状病毒产品中的应用。
9.连翘酯苷e 是如附图1所示结构式的化合物。
10.连翘酯苷e与s蛋白具有较强亲和力，通过抑制冠状病毒s蛋白与ace2的结合，在制备抑制冠状病毒制剂中的应用。
11.本发明采用分子对接、动力学测定及细胞抗病毒实验评价连翘酯苷e对冠状病毒的抑制作用，连翘酯苷e能剂量依赖地抑制。采用细胞实验评价连翘酯苷e 的抗病毒作用，连翘酯苷e 对冠状病毒有显著的抑制作用。
12.本发明的连翘酯苷e在制备抗病毒产品的应用的优点为作用机制明确，抑制效果
显著。
13.本发明提供用本发明所述的连翘酯苷e及其药物制剂：注射剂、注射乳剂、冻干粉针、气雾剂、片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、泡腾片剂、舌下片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、微胶囊剂、微囊剂、微球剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、膏剂、口服液、混悬液、溶液以及缓释或控释制剂。
附图说明
14.图1：本发明连翘酯苷e结构式图2：本发明实施例1的分子对接图图3：本发明实施例2的分子对接图。
具体实施方式
15.实施例1以新型冠状病毒3cl水解酶为靶点蛋白进行分子对接pdb 数据库下载 新型冠状病毒3cl水解酶为 pdb 格式，去除溶剂，autodocktools-1.5.6 软件加氢、合并非极性氢、计算电荷，保存为 pdbqt 格式的受体参数文件。通过chem3d绘制小分子配体2d结构，使用chem3d软件生成分子3d结构，进行能量最小化，将所用小分子配体都保存为mol2格式，最终生成 pdbqt 格式配体参数文件。autodocktools-1.5.6 软件设置受体蛋白的格点参数，并设置参数文本文件。运用autodockvina软件在linux虚拟环境下批量对接，对接结果显示连翘酯苷e与新型冠状病毒3cl水解酶具有明显的结合，结合自由能为71.75 kcal/mol。
16.实施例2以新型冠状病毒s蛋白与ace2的复合物为靶点蛋白进行分子对接pdb 数据库下载 ace2-rbd结构域结构为pdb 格式，pymol 软件去除受体蛋白中的溶剂，加氢、合并非极性氢、计算电荷，保存为 pdbqt 格式的受体参数文件。通过chem3d绘制小分子配体2d结构，使用chem3d软件生成分子3d结构，进行能量最小化，将所用小分子配体都保存为mol2格式。借助autodocktools-1.5.6 的脚本文件赋予配体原子类型、计算电荷，最终生成 pdbqt 格式配体参数文件。autodocktools-1.5.6 软件设置受体蛋白的格点参数，并设置参数文本文件。运用autodockvina软件在linux虚拟环境下批量对接，对接结果显示连翘酯苷e能够嵌入s蛋白与ace2的复合物的结合口袋，结合自由能为3.43 kcal/mol。
17.实施例1以新型冠状病毒rna-dependent rna polymerase为靶点蛋白进行分子对接pdb 数据库下载rna-dependent rna polymerase为 pdb 格式去除受体蛋白中的溶剂，加氢、合并非极性氢、计算电荷，保存为 pdbqt 格式的受体参数文件。通过chem3d绘制小分子配体2d结构，使用chem3d软件生成分子3d结构，能量最小化，保存为mol2格式。借助autodocktools-1.5.6 的脚本文件赋予配体原子类型、计算电荷，最终生成 pdbqt 格式配体参数文件。autodocktools-1.5.6 软件设置受体蛋白的格点参数，并设置参数文本文件。运用autodockvina软件在linux虚拟环境下批量对接，pymol 1.7 discovery studio 3.5 软件对对接结果进行可视化分析。对接结果显示翘酯苷e与新型冠状病毒rna-dependent rna polymerase具有明显的结合，结合自由能为7.19 kcal/mol。
18.实施例4采用细胞实验检测病毒抑制能力
vero9细胞的96孔板上24小时，每孔接种50微升100 tcid50的病毒液，于37℃吸附90 min，弃病毒上清。根据细胞毒性实验的结果，在无毒浓度范围内，加入不同浓度的药物，并设正常细胞对照组和病毒对照组。然后将抗培养板置37 ℃，5%co2培养，每日观察cpe。cpe记录方法为[1]:-为无cpe；+为25%细胞出现cpe；++为50%细胞出现cpe；+++为75%细胞出现cpe；++++为100%细胞出现cpe。约在病毒对照+++~++++时用mtt法，测各孔570nm波下od值，并按下述公式计算药物对病毒抑制率。病毒抑制率=(药物处理组od值-病毒对照组od值)/(细胞对照组od值-病毒对照组od值)*100%。实验结果显示，连翘酯苷e在1 μm到50 μm范围内对冠状病毒具有显著的抑制作用，效果与剂量呈现量效关系。