[0001]
本发明涉及一种医用海绵，尤其是指一种胶原蛋白海绵及其制备方法。
背景技术：
[0002]
常用医用海绵为胶原蛋白海绵，其在创面止血应用上效果好，且其还能够为创面组织提供营养，具有加速创面愈合速度的效果，所以胶原蛋白海绵在临床上已被广泛应用。传统的制备方法中，需要添加交联剂进行处理后才能制成，无法避免存在一定量的试剂残留。残留的交联剂一般都是有毒的试剂，使得最终形成的产品存在一定的安全隐患。如果不添加交联剂进行处理而直接冷冻干燥，所得的胶原蛋白海绵遇水后容易收缩变薄，复水性差。
技术实现要素：
[0003]
本发明所要解决的技术问题是：得到不易收缩变薄、复水性等理化性能更好的胶原蛋白海绵。
[0004]
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
[0005]
一种胶原蛋白海绵的制备方法，包括胶原蛋白海绵半成品，包括真空热处理程序：将所述胶原蛋白海绵半成品放置在105℃-160℃的真空环境下进行真空热处理12-48h。
[0006]
进一步的，在所述真空热处理程序前，包括冻干程序：胶原蛋白溶液先在-10℃-10℃环境下放置30-120min，然后在-20℃
--
39℃环境下放置60-180min后冷冻干燥得到所述胶原海绵半成品。
[0007]
进一步的，所述冻干程序还包括：将所述胶原蛋白海绵半成品转至0℃-35℃环境下放置1300-1500min。
[0008]
进一步的，在所述冻干程序前，包括胶原蛋白溶液的生产程序：
[0009]
1)提取：往粉碎的牛筋颗粒中加入0.5mol/l的醋酸和胃蛋白酶，在10℃-35℃的条件下搅拌24-72h得到提取液；
[0010]
2)过滤：所述提取液先经过具有50-100目滤网的不锈钢单袋过滤器进行过滤，再经过具有100-200目滤网的不锈钢单袋过滤器进行过滤得到过滤液；
[0011]
3)盐析：往所述过滤液中加入盐进行盐析，然后离心收集沉淀；
[0012]
4)溶解：往所述沉淀中加入0.5mol/l的醋酸，缓慢搅拌至所述沉淀完全溶解得到胶原液。
[0013]
进一步的，所述胶原蛋白溶液生产程序还包括纯化：采用透析或者中空纤维柱超滤系统对所述胶原液进行纯化得到纯化液。
[0014]
进一步的，所述胶原蛋白溶液由所述纯化液或所述胶原液经注射用水稀释得到，所述胶原蛋白溶液冻干前浓度为4-9mg/ml，所述胶原蛋白溶液置于模具托盘中。
[0015]
进一步的，所述粉碎的牛筋颗粒由牛筋片经过温度-40℃～-20℃冷冻粉碎得到，所述冷冻粉碎前包括牛筋片的前处理过程：
[0016]
1)切片：剔除新鲜牛筋上的皮脂、筋膜和碎肉，然后切成2-5mm的牛筋片；
[0017]
2)清洗：交替使用盐溶液或碱溶液和纯化水，对所述牛筋片进行反复浸泡清洗；
[0018]
3)除清洗残留剂：用纯化水浸泡清洗所述牛筋片，反复浸泡清洗。
[0019]
进一步的，所述牛筋片的前处理过程还包括除病毒过程：往所述牛筋片中加入病毒消毒剂消毒10-20min，然后用纯化水反复浸泡-清洗所述牛筋片至除去所述病毒消毒剂。
[0020]
进一步的，所述胶原蛋白溶液为5-8mg/ml；所述冻干程序为：先在-10℃环境下放置60min，然后在-20℃环境下放置180min；所述冻干的胶原蛋白溶液经过冻干后还应当在4℃环境下放置1440min后再进行真空热处理；所述真空热处理在120℃的真空环境下放置24h。
[0021]
一种胶原蛋白海绵，经上述一种胶原蛋白海绵的制备方法制得，完成包装后进行辐照灭菌。
[0022]
本发明的有益效果在于：在真空热处理过程，胶原蛋白发生交联，内部存在的水分汽化消失，余下由胶原蛋白组成的多孔洞海绵状产品；在真空中胶原蛋白海绵经过热处理后，吸水率提高，吸水质量增加，吸水倍数提高，酶消化时间延长，抗拉能力提高，孔隙率增加，即不易收缩变薄、复水性好，且仍具有生物活性。
具体实施方式
[0023]
本发明最关键的构思在于：利用真空高温下，冻干的胶原蛋白海绵半成品内部存在的水分气化消失，余下的胶原蛋白发生交联。
[0024]
为详细说明本发明构思的可行性，将从本发明的技术内容、构造特征、所实现目的及效果进行论述，并结合实施方式详予说明。
[0025]
一种胶原蛋白海绵的制备方法，包括胶原蛋白海绵半成品，包括真空热处理程序：将所述胶原蛋白海绵半成品放置在105℃-160℃的真空环境下进行真空热处理12-48h。从上述描述可知，本发明的有益效果在于：在真空热处理过程，胶原蛋白发生交联，内部存在的水分汽化消失，余下由胶原蛋白组成的多孔洞海绵状产品，即胶原蛋白海绵；在真空中胶原蛋白海绵经过热处理后，吸水率提高，吸水质量增加，吸水倍数提高，酶消化时间延长，抗拉能力提高，孔隙率增加，即不易收缩变薄、复水性好，且仍具有生物活性。
[0026]
进一步的，在所述真空热处理程序前，包括冻干程序：胶原蛋白溶液先在-10℃-10℃环境下放置30-120min，然后在-20℃
--
39℃环境下放置60-180min后冷冻干燥得到所述胶原海绵半成品。胶原蛋白溶液先逐步降温至-10℃～10℃并保持一段时间，再次降温至-20℃～-39℃并保持一段时间，此过程逐步降温，最后使得胶原蛋白溶液完全被冷冻硬化，内部水分完全形成较粗的冰晶。然后进行冷冻干燥，使得冰晶逐步气化消失。
[0027]
进一步的，所述冻干程序还包括：将所述胶原蛋白海绵半成品转至0℃-35℃环境下放置1300-1500min。将胶原蛋白海绵半成品转至0℃～35℃环境下放置，由于冷冻干燥损失大量水分，胶原蛋白海绵半成品不能完全恢复液体状态。回温后利于后续的真空热处理的进行。
[0028]
进一步的，在所述冻干程序前，包括胶原蛋白溶液的生产程序：
[0029]
1)提取：往粉碎的牛筋颗粒中加入0.5mol/l的醋酸和胃蛋白酶，在10℃-35℃的条件下搅拌24-72h得到提取液；
[0030]
2)过滤：所述提取液先经过具有50-100目滤网的不锈钢单袋过滤器进行过滤，再经过具有100-200目滤网的不锈钢单袋过滤器进行过滤得到过滤液；
[0031]
3)盐析：往所述过滤液中加入盐进行盐析，然后离心收集沉淀；
[0032]
4)溶解：往所述沉淀中加入0.5mol/l的醋酸，缓慢搅拌至所述沉淀完全溶解得到胶原液。
[0033]
胶原蛋白海绵的生产原料为胶原蛋白溶液，而胶原蛋白溶液的生产原料牛筋颗粒在投入生产前需要进行辐照消毒。将胶原蛋白溶液生产程序与冻干程序结合形成胶原蛋白海绵的生产工艺，生产过程连续，避免由于中断而容易造成产品污染。
[0034]
进一步的，所述胶原蛋白溶液生产程序还包括纯化：采用透析或者中空纤维柱超滤系统对所述胶原液进行纯化得到纯化液。胶原蛋白溶液的生产程序中引入纯化步骤，得到高溶度、高纯度的胶原液，避免后续冻干程序中由于胶原蛋白溶液中胶原蛋白含量、纯度较低而影响产品质量。
[0035]
进一步的，所述胶原蛋白溶液由所述纯化液或所述胶原液经注射用水稀释得到，所述胶原蛋白溶液冻干前浓度为4-9mg/ml，所述胶原蛋白溶液置于模具托盘中。利用高浓度的胶原液稀释得到固定浓度的胶原蛋白溶液，使得后续冻干程序中得到的胶原蛋白海绵的各个性能指标稳定。
[0036]
进一步的，所述粉碎的牛筋颗粒由牛筋片经过温度-40℃～-20℃冷冻粉碎得到，所述冷冻粉碎前包括牛筋片的前处理过程：
[0037]
1)切片：剔除新鲜牛筋上的皮脂、筋膜和碎肉，然后切成2-5mm的牛筋片；
[0038]
2)清洗：交替使用盐溶液或碱溶液和纯化水，对所述牛筋片进行反复浸泡清洗；
[0039]
3)除去清洗残留剂：用纯化水浸泡清洗所述牛筋片，反复浸泡清洗。
[0040]
牛筋利用温度-40℃～-20℃冷冻的方法进行冷冻粉碎，得到细小颗粒的牛筋，有利于缩短胶原蛋白溶液的生产时长，提高生产效率。牛筋粉碎前经过剔除血清和脂肪，有利于后续胶原的提取和纯化，生产出纯度高的胶原蛋白溶液。牛筋颗粒在投入生产前应当进行辐照消毒，防止微生物在胶原蛋白溶液生产过程大量繁衍而影响后续生产以及产品的质量。清洗残留剂包括清洗步骤中所使用的的盐溶液和碱溶液。
[0041]
进一步的，所述牛筋片的前处理过程还包括除病毒过程：往所述牛筋片中加入病毒消毒剂消毒10-20min，然后用纯化水反复浸泡-清洗所述牛筋片至除去所述病毒消毒剂。病毒残留而使胶原蛋白海绵存在使用安全隐患，加入消毒剂可以除去病毒，确保产品安全。消毒剂可以在牛筋片的前处理过程的清洗步骤前加入，也可以在清洗步骤后加入；如果在除清洗残留剂步骤前加入消毒剂，则除消毒剂时可以和牛筋片的前处理过程的除清洗残留剂步骤同时进行。
[0042]
进一步的，所述胶原蛋白溶液为4-9mg/ml；所述冻干程序为：先在-10℃环境下放置60min，然后在-20℃环境下放置180min；所述冻干的胶原蛋白溶液经过冻干后还应当在4℃环境下放置1440min后再进行真空热处理；所述真空热处理在120℃的真空环境下放置24h。
[0043]
一种胶原蛋白海绵，经上述一种胶原蛋白海绵的制备方法制得，完成包装后进行辐照灭菌。胶原蛋白海绵辐照灭菌，将生产过程可能带入的微生物进行杀灭，排除产品发生生物危害的可能。
[0044]
为了进一步论述本发明技术方案的可行性，将从以下实施例进行论述：
[0045]
实施例一：
[0046]
一种胶原蛋白海绵的制备方法，包括：
[0047]
一、牛筋前处理过程：
[0048]
1)切片：剔除新鲜牛筋上的皮脂、筋膜和碎肉，然后切成2mm的牛筋片。
[0049]
2)清洗：交替使用盐溶液或碱溶液和纯化水，对所述牛筋片进行反复浸泡清洗。
[0050]
3)除清洗剂残留：用纯化水浸泡清洗所述牛筋片，反复浸泡清洗。
[0051]
4)往所述牛筋片中加入病毒消毒剂消毒10min。
[0052]
5)用纯化水反复浸泡-清洗所述牛筋片至除去所述病毒消毒剂。
[0053]
二、将牛筋片在温度-40℃下进行粉碎得到牛筋颗粒，然后辐照消毒待用。
[0054]
三、胶原蛋白溶液的生产程序：
[0055]
1)提取：往粉碎的牛筋颗粒中加入0.5mol/l的醋酸和胃蛋白酶，在10℃的条件下搅拌72h得到提取液。
[0056]
2)过滤：所述提取液先经过具有100目滤网的不锈钢单袋过滤器进行过滤，再经过具有200目滤网的不锈钢单袋过滤器进行过滤得到过滤液。
[0057]
3)盐析：往所述过滤液中加入盐进行盐析，然后离心收集沉淀。
[0058]
4)溶解：往所述沉淀中加入0.5mol/l的醋酸，缓慢搅拌至所述沉淀完全溶解得到胶原液。
[0059]
5)纯化：采用透析或者中空纤维柱超滤系统对所述胶原液进行纯化得到纯化液。
[0060]
四、用注射用水将所述纯化液稀释得到浓度为6mg/ml胶原蛋白溶液，然后注入模具托盘中。
[0061]
五、冻干程序：模具托盘中的胶原蛋白溶液先在-10℃环境下放置30min，然后在-20℃环境下放置60min后进行冷冻干燥得到所述胶原海绵半成品，再转至0℃环境下放置1300min。
[0062]
六、真空热处理程序：将所述胶原蛋白海绵半成品放置在110℃的真空环境下进行真空热处理12h。
[0063]
利用上述方法制得的一种胶原蛋白海绵，在完成包装后进行辐照灭菌。
[0064]
实施例二：
[0065]
一种胶原蛋白海绵的制备方法，包括：
[0066]
一、牛筋前处理过程：
[0067]
1)切片：剔除新鲜牛筋上的皮脂、筋膜和碎肉，然后切成5mm的牛筋片。
[0068]
2)清洗：交替使用盐溶液或碱溶液和纯化水，对所述牛筋片进行反复浸泡清洗。
[0069]
3)去除清洗剂残留：用纯化水浸泡清洗所述牛筋片，反复浸泡清洗。
[0070]
4)往所述牛筋片中加入病毒消毒剂消毒20min。
[0071]
5)用纯化水反复浸泡-清洗所述牛筋片至除去所述病毒消毒剂。
[0072]
二、将牛筋片在温度-30℃下进行粉碎得到牛筋颗粒，然后辐照消毒待用。
[0073]
三、胶原蛋白溶液的生产程序：
[0074]
1)提取：往粉碎的牛筋颗粒中加入0.5mol/l的醋酸和胃蛋白酶，在35℃的条件下搅拌24h得到提取液。
[0075]
2)过滤：所述提取液先经过具有50目滤网的不锈钢单袋过滤器进行过滤，再经过具有100目滤网的不锈钢单袋过滤器进行过滤得到过滤液。
[0076]
3)盐析：往所述过滤液中加入盐进行盐析，然后离心收集沉淀。
[0077]
4)溶解：往所述沉淀中加入0.5mol/l的醋酸，缓慢搅拌至所述沉淀完全溶解得到胶原液。
[0078]
5)纯化：采用透析或者中空纤维柱超滤系统对所述胶原液进行纯化得到纯化液。
[0079]
四、用注射用水将所述纯化液稀释得到浓度为8mg/ml胶原蛋白溶液，然后注入模具托盘中。
[0080]
五、冻干程序：模具托盘中的胶原蛋白溶液先在10℃环境下放置30min，然后在-20℃环境下放置180min后进行冷冻干燥得到所述胶原海绵半成品，再转至35℃环境下放置1300min。
[0081]
六、真空热处理程序：将所述胶原蛋白海绵半成品放置在125℃的真空环境下进行真空热处理24h。
[0082]
利用上述方法制得的一种胶原蛋白海绵，在完成包装后进行辐照灭菌。
[0083]
实施例三：
[0084]
一种胶原蛋白海绵的制备方法，包括：
[0085]
一、牛筋前处理过程：
[0086]
1)切片：剔除新鲜牛筋上的皮脂、筋膜和碎肉，然后切成2mm的牛筋片。
[0087]
2)清洗：交替使用盐溶液或碱溶液和纯化水，对所述牛筋片进行反复浸泡清洗。
[0088]
3)去除清洗剂：用纯化水浸泡清洗所述牛筋片，反复浸泡清洗。
[0089]
4)往所述牛筋片中加入病毒消毒剂消毒20min。
[0090]
5)用纯化水反复浸泡-清洗所述牛筋片至除去所述病毒消毒剂。
[0091]
二、将牛筋片在温度-20℃下进行粉碎得到牛筋颗粒，然后辐照消毒待用。
[0092]
三、胶原蛋白溶液的生产程序：
[0093]
1)提取：往粉碎的牛筋颗粒中加入0.5mol/l的醋酸和胃蛋白酶，在30℃的条件下搅拌72h得到提取液。
[0094]
2)过滤：所述提取液先经过具有100目滤网的不锈钢单袋过滤器进行过滤，再经过具有200目滤网的不锈钢单袋过滤器进行过滤得到过滤液。
[0095]
3)盐析：往所述过滤液中加入盐进行盐析，然后离心收集沉淀。
[0096]
4)溶解：往所述沉淀中加入0.5mol/l的醋酸，缓慢搅拌至所述沉淀完全溶解得到胶原液。
[0097]
5)纯化：采用透析或者中空纤维柱超滤系统对所述胶原液进行纯化得到纯化液。
[0098]
四、用注射用水将所述胶原液稀释得到浓度为4mg/ml胶原蛋白溶液，然后注入模具托盘中。
[0099]
五、冻干程序：模具托盘中的胶原蛋白溶液先在-10℃环境下放置60min，然后在-39℃环境下放置180min后进行冷冻干燥得到所述胶原海绵半成品，再转至4℃环境下放置1440min。
[0100]
六、真空热处理程序：将所述胶原蛋白海绵半成品放置在120℃的真空环境下进行真空热处理24h。
[0101]
利用上述方法制得的一种胶原蛋白海绵，在完成包装后进行辐照灭菌。
[0102]
实施例四：
[0103]
一种胶原蛋白海绵的制备方法，包括：
[0104]
一、牛筋前处理过程：
[0105]
1)切片：剔除新鲜牛筋上的皮脂、筋膜和碎肉，然后切成2mm的牛筋片。
[0106]
2)清洗：交替使用盐溶液或碱溶液和纯化水，对所述牛筋片进行反复浸泡清洗。
[0107]
3)除病毒：往所述牛筋片中加入病毒消毒剂消毒10min。
[0108]
4)除清洗残留剂和消毒剂：用纯化水浸泡清洗所述牛筋片，反复浸泡清洗；至除去所述病毒消毒剂及清洗残留剂。
[0109]
二、将牛筋片在温度-20℃下进行粉碎得到牛筋颗粒，然后辐照消毒待用。
[0110]
三、胶原蛋白溶液的生产程序：
[0111]
1)提取：往粉碎的牛筋颗粒中加入0.5mol/l的醋酸和胃蛋白酶，在30℃的条件下搅拌72h得到提取液。
[0112]
2)过滤：所述提取液先经过具有100目滤网的不锈钢单袋过滤器进行过滤，再经过具有200目滤网的不锈钢单袋过滤器进行过滤得到过滤液。
[0113]
3)盐析：往所述过滤液中加入盐进行盐析，然后离心收集沉淀。
[0114]
4)溶解：往所述沉淀中加入0.5mol/l的醋酸，缓慢搅拌至所述沉淀完全溶解得到胶原液。
[0115]
5)纯化：采用透析或者中空纤维柱超滤系统对所述胶原液进行纯化得到纯化液。
[0116]
四、用注射用水将所述纯化液稀释得到浓度为5mg/ml胶原蛋白溶液，然后注入模具托盘中。
[0117]
五、冻干程序：模具托盘中的胶原蛋白溶液先在0℃环境下放置90min，然后在-30℃环境下放置90min后进行冷冻干燥得到所述胶原海绵半成品，再转至4℃环境下放置1300min。
[0118]
六、真空热处理程序：将所述胶原蛋白海绵半成品放置在130℃的真空环境下进行真空热处理24h。
[0119]
利用上述方法制得的一种胶原蛋白海绵，在完成包装后进行辐照灭菌。
[0120]
实施例五：
[0121]
一种胶原蛋白海绵的制备方法，包括：
[0122]
一、牛筋前处理过程：
[0123]
1)切片：剔除新鲜牛筋上的皮脂、筋膜和碎肉，然后切成2mm的牛筋片。
[0124]
2)清洗：交替使用盐溶液或碱溶液和纯化水，对所述牛筋片进行反复浸泡清洗。
[0125]
3)除病毒：往所述牛筋片中加入病毒消毒剂消毒10min。
[0126]
4)除清洗残留剂和消毒剂：用纯化水浸泡清洗所述牛筋片，反复浸泡清洗；至除去所述病毒消毒剂及清洗残留剂。
[0127]
二、将牛筋片在温度-30℃下进行粉碎得到牛筋颗粒，然后辐照消毒待用。
[0128]
三、胶原蛋白溶液的生产程序：
[0129]
1)提取：往粉碎的牛筋颗粒中加入0.5mol/l的醋酸和胃蛋白酶，在30℃的条件下搅拌72h得到提取液。
[0130]
2)过滤：所述提取液先经过具有100目滤网的不锈钢单袋过滤器进行过滤，再经过具有200目滤网的不锈钢单袋过滤器进行过滤得到过滤液。
[0131]
3)盐析：往所述过滤液中加入盐进行盐析，然后离心收集沉淀。
[0132]
4)溶解：往所述沉淀中加入0.5mol/l的醋酸，缓慢搅拌至所述沉淀完全溶解得到胶原液。
[0133]
5)纯化：采用透析或者中空纤维柱超滤系统对所述胶原液进行纯化得到纯化液。
[0134]
四、用注射用水将所述纯化液稀释得到浓度为9mg/ml胶原蛋白溶液，然后注入模具托盘中。
[0135]
五、冻干程序：模具托盘中的胶原蛋白溶液先在0℃环境下放置90min，然后在-30℃环境下放置90min后进行冷冻干燥得到所述胶原海绵半成品，再转至4℃环境下放置1500min。
[0136]
六、真空热处理程序：将所述胶原蛋白海绵半成品放置在160℃的真空环境下进行真空热处理24h。
[0137]
利用上述方法制得的一种胶原蛋白海绵，在完成包装后进行辐照灭菌。
[0138]
实施例六：
[0139]
一种胶原蛋白海绵的制备方法，包括：
[0140]
一、牛筋前处理过程：
[0141]
1)切片：剔除新鲜牛筋上的皮脂、筋膜和碎肉，然后切成2mm的牛筋片。
[0142]
2)清洗：交替使用盐溶液或碱溶液和纯化水，对所述牛筋片进行反复浸泡清洗。
[0143]
3)除病毒：往所述牛筋片中加入病毒消毒剂消毒10min。
[0144]
4)除清洗残留剂和消毒剂：用纯化水浸泡清洗所述牛筋片，反复浸泡清洗；至除去所述病毒消毒剂及清洗残留剂。
[0145]
二、将牛筋片在温度-40℃下进行粉碎得到牛筋颗粒，然后辐照消毒待用。
[0146]
三、胶原蛋白溶液的生产程序：
[0147]
1)提取：往粉碎的牛筋颗粒中加入0.5mol/l的醋酸和胃蛋白酶，在30℃的条件下搅拌72h得到提取液。
[0148]
2)过滤：所述提取液先经过具有100目滤网的不锈钢单袋过滤器进行过滤，再经过具有200目滤网的不锈钢单袋过滤器进行过滤得到过滤液。
[0149]
3)盐析：往所述过滤液中加入盐进行盐析，然后离心收集沉淀。
[0150]
4)溶解：往所述沉淀中加入0.5mol/l的醋酸，缓慢搅拌至所述沉淀完全溶解得到胶原液。
[0151]
5)纯化：采用透析或者中空纤维柱超滤系统对所述胶原液进行纯化得到纯化液。
[0152]
四、用注射用水将所述纯化液稀释得到浓度为6mg/ml胶原蛋白溶液，然后注入模具托盘中。
[0153]
五、冻干程序：模具托盘中的胶原蛋白溶液先在0℃环境下放置90min，然后在-30℃环境下放置90min后进行冷冻干燥得到所述胶原海绵半成品，再转至4℃环境下放置1300min。
[0154]
六、真空热处理程序：将所述胶原蛋白海绵半成品放置在105℃的真空环境下进行真空热处理48h。
[0155]
利用上述方法制得的一种胶原蛋白海绵，在完成包装后进行辐照灭菌。
[0156]
为了进一步说明发明效果，抽取由胶原蛋白溶液浓度为6mg/ml经本发明方法生产得到的胶原蛋白海绵的理化性质进行测试，测试项目包括吸水率、吸水质量、吸水倍数、酶消化时间、拉力、交联度和孔隙率，以不经过真空热处理的浓度相同的胶原蛋白海绵作为对照，测得经过不同的真空热处理时间和不同的真空热处理温度生产胶原蛋白海绵的理化性质结果详见于表1中。从表1中数据分析得知，经真空高温干燥后，吸水率提高，吸水质量增加，吸水倍数提高，酶消化时间延长，抗拉能力提高，孔隙率增加。
[0157]
为了进一步说明发明的可行性，抽取由胶原蛋白溶液浓度为5mg/ml经本发明方法生产得到的胶原蛋白海绵进行dsc测试，测试结果详见表2。从表2中分析可知，胶原蛋白海绵经过真空高温热处理后，其仍具有生物活性。
[0158]
表1
[0159][0160]
表2
[0161][0162]
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
[0163]
综上所述，本发明提供的胶原蛋白海绵的制备方法，在真空热处理过程，胶原蛋白发生交联，内部存在的水分气化消失，形成由胶原蛋白组成的多孔洞海绵状产品；在真空中胶原蛋白海绵经过热处理后，吸水率提高，吸水质量增加，吸水倍数提高，酶消化时间延长，抗拉能力提高，孔隙率增加，且仍具有生物活性。胶原蛋白溶液先逐步降温至-10℃～10℃并保持一段时间，再次降温至-20℃～-39℃并保持一段时间，最后使得胶原蛋白溶液完全被冷冻硬化，内部水分完全形成较粗的冰晶。冷冻干燥后将胶原蛋白海绵半成品转至0℃～35℃环境下放置，由于胶原蛋白海绵半成品内部冰晶大量消失，不能完全恢复液体状态。在经过真空热处理后，胶原蛋白发生交联形成具有大孔洞的胶原蛋白海绵。胶原蛋白海绵的原料经过除去血清、脂肪和病毒，保证产品质量安全。生产胶原蛋白溶液时，先经过纯化浓缩，后定量稀释，保证产品质量的可控性及稳定性。