癌的预防或治疗剂的制作方法

1.本发明涉及用于预防或治疗癌的制剂。


背景技术：

2.在日本厚生劳动省“人口动态统计”中的日本人的按主要死因分类的年龄调节死亡率中，恶性肿瘤(癌)从1981至今一直稳居第一位，由癌导致的死亡率到近年来未显示出降低倾向，而呈平稳或小幅增长。
3.癌细胞的最常见的特征是与正常细胞相比，其显示出快速且不可控制的增殖。利用该特征，实施了使用对增殖性细胞具有毒性的药剂(即，抗癌剂)的癌的化疗法。作为上述药剂，已知有核酸合成抑制剂(例如，环磷酰胺)、抗生素(例如，放线菌素d、博来霉素)、代谢拮抗剂(例如，5
‑
氟尿嘧啶、甲氨蝶呤)、微管解聚抑制剂(例如，紫杉醇)、分子靴向药物(例如，伊马替尼、吉非替尼)等。但是，就这些药剂而言，存在未必能得到对癌的充分的治疗效果这样的问题。
4.另一方面，本技术的发明人报告了，就后述的本技术化合物组而言，对促红细胞生成素表达增强效果及线粒体病的治疗是有用的(专利文献1)，具有抑制胶原蛋白产生的效果，对皮肤纤维化疾病的治疗是有用的(专利文献2)。但是，迄今尚不知道本技术化合物组具有癌的预防或治疗效果。
5.现有技术文献
6.专利文献
7.专利文献1：国际公开第2014/080640号小册子
8.专利文献2：国际公开第2017/073060号小册子


技术实现要素：

9.发明所要解决的课题
10.本发明的课题在于提供具有预防或治疗癌的作用的低分子化合物。
11.用于解决课题的手段
12.本技术的发明人为了解决上述课题而持续进行了深入研究。在其过程中，着眼于专利文献1中的化合物(4
‑
(2,4
‑
二氟苯基)
‑2‑
(1h
‑
吲哚
‑3‑
基)
‑4‑
氧代
‑
丁酸；在专利文献1中记作化合物#5)、化合物(5
‑
(3,5
‑
二甲氧基苄氧基)
‑3‑
吲哚乙酸；在专利文献1中记作化合物#35)而进行研究。其结果发现，特定的吲哚衍生物、即以下的式(1)及式(2)表示的化合物以及其药理学上可接受的盐(以下，有时称为“本技术化合物组”)对癌的预防或治疗有用，从而完成了本发明。
13.[化学式1]
[0014][0015]
(式中，r1、r2可以相同也可以不同，表示卤素原子、c1～c6的烷基、c2～c6的链烯基、c2～c6的炔基、or
x
表示的有机氧基。m1表示0～5的整数，m2表示0～5的整数。)
[0016]
[化学式2]
[0017][0018]
(式中，r3、r4可以相同也可以不同，表示卤素原子、c1～c6的烷基、c2～c6的链烯基、c2～c6的炔基、or
x
表示的有机氧基。m3表示0～5的整数，m4表示0～4的整数。)
[0019]
即，本发明为如下所示。
[0020]
〔1〕癌的预防或治疗剂，其特征在于，含有选自以下的式(1)及以下的式(2)表示的化合物、及其药理学上可接受的盐中的1种或2种以上的化合物。
[0021]
[化学式3]
[0022][0023]
(式中，r1、r2可以相同也可以不同，表示卤素原子、c1～c6的烷基、c2～c6的链烯基、c2～c6的炔基、or
x
表示的有机氧基。m1表示0～5的整数，m2表示0～5的整数。)
[0024]
[化学式4]
[0025][0026]
(式中，r3、r4可以相同也可以不同，表示卤素原子、c1～c6的烷基、c2～c6的链烯基、c2～c6的炔基、or
x
表示的有机氧基。m3表示0～5的整数，m4表示0～4的整数。)
[0027]
〔2〕如上述〔1〕所述的预防或治疗剂，其特征在于，式(1)表示的化合物是以下的式(1’)表示的化合物，式(2)表示的化合物是以下的式(2’)表示的化合物。
[0028]
[化学式5]
[0029][0030]
(式中，r1可以相同也可以不同，表示卤素原子。m1表示1～3的整数。)
[0031]
[化学式6]
[0032][0033]
(式中，r3可以相同也可以不同，表示or
x
表示的有机氧基。m3表示1～3的整数。)
[0034]
〔3〕如上述〔2〕所述的预防或治疗剂，其特征在于，式(1’)表示的化合物是以下的式(1
‑
1)表示的化合物，式(2’)表示的化合物是以下的式(2
‑
1)表示的化合物。
[0035]
[化学式7]
[0036][0037]
[化学式8]
[0038][0039]
〔4〕如上述〔1〕～〔3〕中任一项所述的预防或治疗剂，其特征在于，癌为大肠癌。
[0040]
〔5〕如上述〔1〕～〔4〕中任一项所述的预防或治疗剂，其特征在于，所述预防或治疗剂经口施予。
[0041]
另外，作为本发明的另一个实施方式，可举出下述方式：预防或治疗癌的方法，其包括向需要癌的预防或治疗的对象施予选自本技术化合物组中的1种或2种以上的化合物的步骤；用作癌的预防或治疗剂的、选自本技术化合物组中的1种或2种以上的化合物；用于在癌的预防或治疗中的使用的、选自本技术化合物组中的1种或2种以上的化合物；选自本
申请化合物组中的1种或2种以上的化合物的用于制造癌的预防或治疗剂的用途。
[0042]
发明的效果
[0043]
本技术化合物组具有预防或治疗癌的效果，例如具有抑制伴随癌症发生的癌细胞增殖的效果、改善由癌造成的生存率降低的效果、抑制癌转移的效果。另外，本技术化合物组由于是能够比较简便地制造的低分子化合物，因此在能够比较简便且低廉地制造的方面也是优异的。此外，对于作为低分子化合物的本技术化合物组而言，可期待通过血脑屏障(bbb)，对神经系统的癌也可期待预防或治疗效果。
附图说明
[0044]
[图1]图1a为示出对4种大肠癌组(安慰剂组[图中的
“‑”
；n＝7]本技术化合物#2[1]组[图中的“#2(1)”；n＝7]、本技术化合物#2[10]组[图中的“#2(10)”；n＝7]、及本技术化合物#1[10]组[图中的“#1(10)”；n＝7])的结肠中的肿瘤面积进行解析的结果(平均值
±
标准偏差)的图。图1b为示出将对照组(n＝8)及上述4种大肠癌组的结肠的长度进行解析的结果(平均值
±
标准偏差)的图。图中的“*”及“**”各自表示统计学上有显著性差异(p＜0.05及p＜0.01)。
[0045]
[图2]图2a为示出针对4种大肠癌组(安慰剂组：n＝4、本技术化合物#2[10]组[图中的“#2(10)”；n＝8]、本技术化合物#1[1]组[图中的“#1(1)”；n＝6]、及本技术化合物#1[10]组[图中的“#1(10)”；n＝5])将结肠中的肿瘤面积的比例进行解析的结果(平均值
±
标准偏差)的图。图2b为示出针对上述4种大肠癌组将直径超过2mm的肿瘤数进行解析的结果(平均值
±
标准偏差)的图。图中的“*”表示统计学上有显著性差异(p＜0.05)。
[0046]
[图3]为示出针对2种大肠癌组(安慰剂组[图中的
“‑”
；n＝4]、及本技术化合物#2[10]组；n＝8)对生存率进行解析的结果的图。
[0047]
[图4]图4a为示出对在本技术化合物#2存在下(图中的“#2”；n＝3)或不存在下(图中的
“‑”
；n＝3)培养大肠癌细胞株hct116细胞时的细胞迁移水平进行测定的结果(平均值
±
标准偏差)的图。纵轴的“细胞数”示出由细胞迁移试验确认了迁移能力的细胞的数量。图中的“*”表示统计学上有显著性差异(p＜0.05)。图4b为图4a的测定中使用的显微镜图像。
具体实施方式
[0048]
本发明的癌的预防或治疗剂，是指特定于“用于预防或治疗癌的”这样的用途的、含有选自本技术化合物组中的1种或2种以上的化合物的制剂(以下，有时称为“本技术预防/治疗剂”)，其中，所谓“预防癌”是指预防癌症发生；预防癌的增殖或转移；预防癌的分期(阶段)进展；等等。另外，所谓“治疗癌”，是指通过抑制或者降低癌细胞的增殖或转移、杀死癌细胞等作用抑制生物体中的癌细胞的增殖；使生物体中的癌细胞的比例降低；抑制癌的症状恶化；改善癌的症状；等等。本技术预防/治疗剂可以单独作为医药品(制剂)使用，也可以进一步混合添加剂而以组合物的形态(药物组合物)使用。
[0049]
在本发明中，所谓选自本技术化合物组的化合物，是指以下的式(1)及式(2)表示的化合物、以及其药理学上可接受的盐。
[0050]
[化学式9]
[0051][0052]
式(1)中，r1、r2可以相同也可以不同，表示卤素原子、c1～c6的烷基、c2～c6的链烯基、c2～c6的炔基、or
x
表示的有机氧基。m1表示0～5的整数，m2表示0～5的整数。
[0053]
[化学式10]
[0054][0055]
式(2)中，r3、r4可以相同也可以不同，表示卤素原子、c1～c6的烷基、c2～c6的链烯基、c2～c6的炔基、or
x
表示的有机氧基。m3表示0～5的整数，m4表示0～4的整数。
[0056]
作为式(1)及式(2)中的卤素原子，可举出氟原子、氯原子、溴原子、碘原子。
[0057]
式(1)及式(2)中的c1～c6的烷基是指可以具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或支链状的烷基，具体而言，可举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、仲戊基、新戊基、1,1
‑
二甲基丙基、1
‑
乙基丙基、正己基、2
‑
甲基戊基、3
‑
甲基戊基、2,2
‑
二甲基丁基、2,3
‑
二甲基丁基等。
[0058]
式(1)及式(2)中的c2～c6的链烯基是指可以具有取代基的碳原子数为2～6的直链状或支链状的链烯基，具体而言，可举出乙川基(乙烯基)、1
‑
丙烯基、2
‑
丙烯基(烯丙基)、1
‑
丁烯基、2
‑
丁烯基、3
‑
丁烯基、1
‑
戊烯基、2
‑
戊烯基、3
‑
戊烯基、4
‑
戊烯基、1
‑
己烯基、2
‑
己烯基、3
‑
己烯基等。
[0059]
式(1)及式(2)中的c2～c6的炔基是指可以具有取代基的碳原子数为2～6的直链状或支链状的炔基，具体而言，可举出乙炔基、1
‑
丙炔基、1
‑
丁炔基、1
‑
戊炔基、1
‑
己炔基等。
[0060]
式(1)及式(2)的or
x
表示的有机氧基中的r
x
表示c1～c6的烷基、c2～c6的链烯基、c2～c6的炔基。另外，r
x
中的c1～c6的烷基、c2～c6的链烯基、c2～c6的炔基与前述c1～c6的烷基、c2～c6的链烯基、c2～c6的炔基为相同的定义。
[0061]
作为上述“可以具有取代基的”的取代基，可举出卤素原子、羟基、羧基、碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为2～6的链烯基、碳原子数为2～6的炔基、c6～c10的芳基。对于上述卤素原子、碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为2～6的链烯基、碳原子数为2～6的炔基而言，与式(1)及式(2)中的卤素原子、碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为2～6的链烯基、碳原子数为2～6的炔基是相同的。另外，作为上述c6～c10的芳基，可举出苯基、萘基。
[0062]
本技术化合物组中的由式(1)表示的化合物由于含有不对称碳，因此存在光学异构体及外消旋体。光学活性体及外消旋体也全部包含在本发明的范围内。另外，在式(1)表示的本发明的化合物中存在光学异构体以外的异构体(例如，位置异构体、互变异构体等)、
水合物等溶剂合物、晶体多型、及酯体(例如，式(1)表示的本发明的化合物与甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、仲丁醇、或叔丁醇的酯)的情况下，这些化合物均包含在本发明的范围内。
[0063]
另外，本发明中还包括构成式(1)表示的本发明的化合物的1个或者2个以上的原子作为同位素的化合物、该化合物的药学上可接受的盐、该化合物的药学上可接受的酯、及该化合物的水合物、以及它们的光学异构体。作为本发明的化合物中所包含的同位素的例子，可举出氢、碳、氮、氧、氟、溴、及氯的同位素，例如，2h、3h、
11
c、
13
c、
14
c、
13
n、
15
n、
15
o、
17
o、
18
o、
18
f、
75
br、
76
br、
77
br、
82
br、
37
cl等。
[0064]
在本技术化合物组中的式(1)表示的化合物之中，优选为以下的式(1’)表示的化合物或其盐。
[0065]
[化学式11]
[0066][0067]
上述式(1’)中，r1、m1与式(1)中的r1、m1为相同的定义。另外，r1中优选为卤素原子，m1优选为1～3，更优选为2。另外，作为r1的取代位置，相对于相邻的羰基而言，可以是邻位、间位、对位中的任意，优选邻位、对位。
[0068]
在本技术化合物组中的式(2)表示的化合物中存在各种异构体(例如，位置异构体、互变异构体等)、水合物等溶剂合物、晶体多型、及酯体(例如，式(1)表示的本发明的化合物与甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、仲丁醇、或叔丁醇的酯)的情况下，这些化合物均包含在本发明的范围内。
[0069]
另外，本发明中还包括构成式(2)表示的本发明的化合物的1个或者2个以上的原子为同位素的化合物、该化合物的药学上可接受的盐、该化合物的药学上可接受的酯、及该化合物的水合物、以及它们的光学异构体。作为本发明的化合物中所包含的同位素的例子，可举出氢、碳、氮、氧、氟、溴、及氯的同位素，例如，2h、3h、
11
c、
13
c、
14
c、
13
n、
15
n、
15
o、
17
o、
18
o、
18
f、
75
br、
76
br、
77
br、
82
br、及
37
cl等。
[0070]
本技术化合物组中的式(2)表示的化合物中，优选为以下的式(2’)表示的化合物或其盐。
[0071]
[化学式12]
[0072][0073]
上述式(2’)中，r3、m3与式(2)中的r3、m3为相同的定义。另外，在r3中，优选or
x
表示
的有机氧基，更优选甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基。上述m3优选为1～3，更优选为2。另外，作为r3的取代位置，相对于相邻的羰基而言，可以是邻位、间位、对位中的任意，优选间位。
[0074]
对于式(1)表示的化合物而言，具体来说，能够例示出以下所示的化合物。
[0075]
[化学式13]
[0076]
[0077]
[化学式14]
[0078][0079]
在上述化合物中，优选为式(1
‑
1)的化合物(4
‑
(2,4
‑
二氟苯基)
‑2‑
(1h
‑
吲哚
‑3‑
基)
‑4‑
氧代
‑
丁酸)。
[0080]
对于式(2)表示的化合物而言，具体来说，能够例示出以下所示的化合物。
[0081]
[化学式15]
[0082][0083]
在上述化合物中，优选为式(2
‑
1)的化合物(5
‑
(3,5
‑
二甲氧基苄氧基)
‑3‑
吲哚乙酸)。
[0084]
当选自本技术化合物组的化合物具有不对称碳原子及与轴不对称相关的不对称中心时，上述化合物包含所有可能的光学异构体，且这些光学异构体能够以任意的比例使用。例如，某些光学活性化合物能够以对映体、或外消旋、或任意比例的对映体的混合物而使用，且当存在多个不对称中心时，也可以以任意比例的非对映体混合物使用。
[0085]
本技术化合物组中的生理学上可接受的盐包括：由包含铝、钙、锂、镁、钾、钠、锌等金属的碱(例如，这些金属的氢氧化物)所生成的金属盐；由n,n
’‑
二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、n
‑
甲基葡糖胺、赖氨酸、普鲁卡因等有机碱所生成的有机盐；等等。
[0086]
作为本技术预防/治疗剂的施予对象的癌，例如可以举出大肠癌(结肠癌或直肠癌)；胃癌；肝癌；脑肿瘤；肺癌(腺癌、鳞状细胞癌、腺鳞状细胞癌、未分化癌、大细胞癌、小细胞癌)；食道癌；十二指肠癌；小肠癌；皮肤癌；乳腺癌；前列腺癌；膀胱癌；阴道癌；宫颈癌；子宫体癌；肾癌；胰腺癌；脾癌；气管癌；支气管癌；头颈癌；胆囊癌；胆管癌；睾丸癌；卵巢癌；骨组织、软骨组织、脂肪组织、肌肉组织、神经组织、血管组织、或造血组织中的癌(具体而言，软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、恶性血管内皮瘤、恶性神经鞘瘤、骨肉瘤、软组织肉瘤等肉瘤；肝母细胞瘤、成神经管细胞瘤、肾母细胞瘤、神经母细胞瘤、胰母细胞瘤、胸膜肺母细胞瘤、视网膜母细胞瘤等母细胞瘤；生殖细胞肿瘤；淋巴瘤；白血病)；等等，其中可以优选例示出大肠癌。
[0087]
对于本技术预防/治疗剂而言，根据需要，可以进一步包含药学上可接受的通常的载体、粘合剂、稳定剂、赋形剂、稀释剂、ph缓冲剂、崩解剂、等渗剂、添加剂、包衣剂、增溶剂、润滑剂、助溶剂、光滑剂、风味剂、甜味剂、溶剂、凝胶剂、营养剂等添加剂。作为上述的添加剂，具体而言，可以例示出水、生理盐水、动物性脂肪及油、植物油、乳糖、淀粉、明胶、结晶性纤维素、橡胶、滑石、硬脂酸镁、羟丙基纤维素、聚亚烷基二醇、聚乙烯醇、甘油。
[0088]
作为本技术预防/治疗剂的施予形态，可以举出：以粉末、颗粒、片剂、胶囊剂、糖浆剂、悬浮液等剂型而施予的经口施予；以溶液、乳剂、悬浮液等剂型进行注射(例如，皮下注射、静脉内注射、肌肉内注射)，或以喷雾剂的剂型进行鼻孔内施予的非经口施予，优选经口施予。
[0089]
本技术预防/治疗剂中的本技术化合物组的施予量根据年龄、体重、性别、症状、对药剂的敏感性等而适当决定，例如为0.1(μg/kg体重/天)～200(mg/kg体重/天)的施予量的范围。在后述的本实施例中，基于使用了模型小鼠实验，具体地例示出了1～10(mg/kg体重/天)的式(1
‑
1)化合物(4
‑
(2,4
‑
二氟苯基)
‑2‑
(1h
‑
吲哚
‑3‑
基)
‑4‑
氧代
‑
丁酸)(以下，方便起见有时称为“本技术化合物#1”)的施予量、1～10(mg/kg体重/天)的式(2
‑
1)化合物(5
‑
(3,5
‑
二甲氧基苄氧基)
‑3‑
吲哚乙酸)(以下，方便起见有时称为“本技术化合物#2”)的施予量。在基于小鼠中的人体等效用量(hed)12.3(参见资料“guidance for industry estimating the maximum safe starting dose ininitial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers”)，换算为对人的施予量的情况下，上述施予量为81～810(μg/kg体重/天)。因此，作为本技术预防/治疗剂中的本技术化合物组的施予量，优选为1.0(μg/kg体重/天)～100(mg/kg体重/天)，更优选为10(μg/kg体重/天)～50(mg/kg体重/天)，进一步优选为20(μg/kg体重/天)～10(mg/kg体重/天)，进一步更优选为40(μg/kg体重/天)～5.0(mg/kg体重/天)，最优选为60(μg/kg体重/天)～1.0(mg/kg体重/天)。需要说明的是，本技术预防/治疗剂也可以每一天分单次或多次(例如，2～4次)施予。
[0090]
作为本技术预防/治疗剂，除包含本技术化合物组以外，还可以包含具有预防或治疗癌的作用的成分，为了使本技术化合物组单独发挥预防及/或治疗癌的作用，也可以不包含除本技术化合物组以外的、具有预防或治疗癌的作用的成分(例如，蛋白质、dna、rna、植物来源的提取物、聚合物)。
[0091]
选自本技术化合物组的化合物的合成方法可以在以下例示，但不限定于这些方法，可以使用通常已知的合成方法。
[0092]
[式(1)表示的化合物的合成]
[0093]
如下所示，式(1)表示的化合物可以通过使式(3)表示的羧酸化合物与式(4)表示的吲哚衍生物进行迈克尔(michael)反应而得到。
[0094]
[化学式16]
[0095][0096]
上述式(3)及式(4)中的r1、r2、m1、m2与式(1)中的r1、r2、m1、m2为相同的定义。
[0097]
如下所示，上述式(3)表示的羧酸化合物可以通过使苯衍生物(5)与马来酸酐基于弗瑞德
‑
克来福特(friedel
‑
crafts)反应而合成。上述弗瑞德
‑
克来福特反应通过使路易斯酸、磷酸、多磷酸等作为催化剂发挥作用而进行，作为催化剂，优选使用氯化铝。
[0098]
[化学式17]
[0099][0100]
上述式(5)及式(3)中的r1、m1与式(1)中的r1、m1为相同的定义。
[0101]
上述式(4)表示的吲哚衍生物可以使用市售品。作为市售的吲哚衍生物，可举出4
‑
氟吲哚、4
‑
氯吲哚、4
‑
溴吲哚、6
‑
氟吲哚、6
‑
氯吲哚、6
‑
溴吲哚、5
‑
甲基吲哚等。
[0102]
另外，上述式(4)表示的吲哚衍生物能够通过使用已知的有机化学反应的有机合成方法而得到。例如，在r2为卤素原子的情况下，能够通过使n
‑
溴代丁二酰亚胺、n
‑
氯代丁二酰亚胺、n
‑
碘代丁二酰亚胺等卤化剂与市售的吲哚发生作用而得到上述式(4)表示的吲哚衍生物。另外，在r2为c1～c6的烷基、c2～c6的链烯基、c2～c6的炔基、or
x
表示的有机氧基的情况下，在如上所述对市售的吲哚进行卤化后，通过与烷基锂等有机锂试剂的反应、铃木
‑
宫浦偶联反应(suzuki
‑
miyaura coupling)等，能够得到上述式(4)表示的吲哚衍生物。
[0103]
[式(2)表示的化合物的合成]
[0104]
式(2)表示的化合物能够将以式(6)表示的5
‑
羟基
‑3‑
吲哚乙酸衍生物作为起始原料而合成。具体而言，通过使式(6)表示的5
‑
羟基
‑3‑
吲哚乙酸在甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇等醇中在酸性条件下进行反应，从而衍生为式(7)表示的酯体。
[0105]
接下来，通过使上述酯体与式(8)表示的卤素化合物在碱的存在下反应，从而可以合成式(9)表示的化合物。作为上述碱，可举出氢化钠、碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯等碱金属的碳酸盐。
[0106]
接着，通过将式(9)表示的化合物的酯部分进行水解，从而合成式(2)表示的化合物。
[0107]
[化学式18]
[0108][0109]
上述式(7)、(9)中，r
y
表示甲基、乙基、正丙基、异丙基等的c1～c3烷基。
[0110]
上述式(8)中，x表示氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等卤素原子。
[0111]
上述式(6)、式(7)、式(8)、式(9)中的r3、r4、m3、m4与式(2)中的r3、r4、m3、m4为相同的定义。
[0112]
上述式(6)表示的5
‑
羟基
‑3‑
吲哚乙酸衍生物可以通过使用市售的5
‑
羟基
‑3‑
吲哚乙酸等，也可以通过使用已知的有机化学反应的有机合成方法而得到。例如，在r4为卤素原子的情况下，通过使n
‑
溴代丁二酰亚胺、n
‑
氯代丁二酰亚胺、n
‑
碘代丁二酰亚胺等卤化剂与市售的5
‑
羟基
‑3‑
吲哚乙酸发生作用，从而可以得到上述式(6)表示的5
‑
羟基
‑3‑
吲哚乙酸衍生物。另外，在r4为c1～c6的烷基、c2～c6的链烯基、c2～c6的炔基、or
x
表示的有机氧基的情况下，如上所述将市售的5
‑
羟基
‑3‑
吲哚乙酸卤化后，通过与烷基锂等有机锂试剂的反应、铃木
‑
宫浦偶联反应等，能够得到上述式(6)表示的5
‑
羟基
‑3‑
吲哚乙酸衍生物。
[0113]
上述式(8)表示的卤素化合物可以使用市售的苄基溴、4
‑
甲基苄基溴、2
‑
甲基苄基溴、3
‑
甲基苄基溴、3
‑
氯苄基溴、2
‑
氯苄基溴、2,6
‑
二氯苄基溴、3
‑
氟苄基溴、4
‑
氟苄基溴、3,5
‑
二甲氧基苄基溴等，也可以基于使用了已知的有机化学反应的有机合成方法而得到。例如，在r3为卤素原子的情况下，通过使n
‑
溴代丁二酰亚胺、n
‑
氯代丁二酰亚胺、n
‑
碘代丁二酰亚胺等卤化剂与市售的苄基溴发生作用，可以得到上述式(8)表示的卤素化合物。另外，在r3为c1～c6的烷基、c2～c6的链烯基、c2～c6的炔基、or
x
表示的有机氧基的情况下，使用上述市售的卤化物、或者如上所述将市售的苄基溴进行卤化后，通过与烷基锂等有机锂试剂的反应、铃木
‑
宫浦偶联反应等，能够得到由上述式(8)表示的卤素化合物。
[0114]
上述全部的有机反应可以分别在溶剂中进行，而溶剂可根据反应温度、反应物等适当选择。另外，上述有机反应的反应温度可根据所使用的溶剂的沸点等条件适当选择。在上述有机反应中使用溶剂的情况下，根据需要将所得到的反应溶液浓缩后，可以将残渣直接在接下来的反应中使用，也可以在进行适当的后处理之后，作为由式(1)表示的化合物而使用。作为后处理的具体的方法，可举出提取处理及/或结晶化、重结晶、色谱法等已知的纯化方法。
[0115]
以下，利用实施例对本发明进行更具体地说明，但本发明的技术范围不限定于这些例示。
[0116]
实施例
[0117]
1.材料与方法
[0118]
[本技术化合物组]
[0119]
本技术化合物组中所包含的具体的2种化合物(本技术化合物#1及本技术化合物#2)分别根据专利文献4(国际公开第2014/080640号小册子)记载的化合物#5(相当于本技术化合物#1)及化合物#35(相当于本技术化合物#2)的合成方法而合成。在细胞迁移试验中，将本技术化合物#1及本技术化合物#2溶解于100％dmso而使用。
[0120]
[细胞培养]
[0121]
人大肠癌细胞株hct116细胞(从atcc获得)在包含10％胎牛血清(fbs)(biowest公司制)、1％青霉素
‑
链霉素(thermo fisherscience公司制)的dmem(dulbecco’s modified eagle medium)培养液(sigma
‑
aldrich公司制)中，在5％co2/20％o2、37℃条件下培养
·
维持。
[0122]
[各组的制备]
[0123]
大肠癌模型小鼠使用氧化偶氮甲烷(aom；和光纯药公司制)及葡聚糖硫酸钠(dss，mp biomedicals公司制)而制作。具体而言，首先将5周龄雄性icr小鼠(clea japan公司制)驯化饲养1周。在6周龄时，将小鼠随机分组为对照组及5种大肠癌组(安慰剂组、本技术化合物#1[1]组、本技术化合物#1[10]组、本技术化合物#2[1]组、及本技术化合物#2[10]组)，向大肠癌组腹腔内施予10(mg/kg体重)的aom，从其7天后开始自由饮用1周2.5％(w/v)的dss，之后自由饮用自来水14天。该dss施予进行3个周期(共计70天)，从而制作大肠癌模型小鼠。当在腹腔内施予上述aom时(即，6周龄时)，针对本技术化合物#1(1)组及本技术化合物#1(10)组，分别将包含1(mg/kg体重/天)及10(mg/kg体重/天)的本技术化合物#1的生理盐水在之后70天每天经口施予；针对本技术化合物#2(1)组及本技术化合物#2(10)组，分别将包含1(mg/kg体重/天)及10(mg/kg体重/天)的本技术化合物#2的生理盐水在之后70天每天经口施予；对安慰剂组，将生理盐水在之后70天每天经口施予。另外，对于对照组，在6周龄时，将生理盐水在之后70天每天经口施予。所有小鼠在第3个周期刚结束之后立即处死并采集结肠。拍摄结肠的全长外观的照片，并测定结肠的长度(参见图1b)、及结肠中的肿瘤面积(参见图1a)、结肠中的肿瘤面积的比例(参见图2a)、以及直径大于2mm的肿瘤数量(参见图2b)。需要说明的是，肿瘤在结肠(大肠)中呈肉眼可观察到的认为包含癌的隆起性病变，并由nih image j version 1.51(美国国立卫生研究院，md，http://imagej.nih.gov/ij/index.html)计算该隆起性病变(即，肿瘤)的面积、及总结肠面积。结肠中的肿瘤面积的比例基于式“(隆起性病变面积/总结肠面积)
×
100”而算出。
[0124]
[细胞迁移试验]
[0125]
在corning fluoroblok 24孔进样系统(孔径8.0μm)(corning公司制)的各孔中，接种7.5
×
104个大肠癌细胞株hct116，并在不含fbs的dmem培养液或包含50μm的本技术化合物#2的不含fbs的dmem培养液中培养48小时。需要说明的是，在板下部的腔中加入包含作为引诱剂的20％fbs的dmem培养液。使用diff
‑
quik试剂盒(sysmex公司制)对穿过细胞培养插件的下侧表面的膜的迁移细胞进行染色，在将膜风干后，使用相位差显微镜而在3处视野中测定细胞数。
[0126]
[统计解析]
[0127]
对于2组间的比较，使用student’s t
‑
test，对于3组间的比较，使用dunnet’s test或tukey’s test。使用kaplan
‑
meier生存曲线在log
‑
rank test中评价生存率(参照图3)。统计学解析中使用jmp version 14(sas institute公司制)。针对任一测定结果，将p值小于0.05设为是具有统计学意义。
[0128]
2.结果
[0129]
与未施予本技术化合物组的大肠癌组(即，安慰剂组)相比，施予本技术化合物组的大肠癌组(即，本技术化合物#1(10)组、本技术化合物#2(1)组、及本技术化合物#2(10)组)的结肠中的肿瘤面积减少(参见图1a)。另外，就结肠的长度而言，与对照组相比，未施予本技术化合物组的大肠癌组(即，安慰剂组)缩短，相对于此，在施予本技术化合物组的大肠癌组(即，本技术化合物#1(10)组、本技术化合物#2(1)组、及本技术化合物#2(10)组)中，上述缩短得以抑制(参见图1b)。
[0130]
另外，与未施予本技术化合物组的大肠癌组(即，安慰剂组)相比，施予本技术化合物组的大肠癌组(即，本技术化合物#1(1)组、本技术化合物#1(10)组、及本技术化合物#2(10)组)的结肠中的肿瘤面积的比例减少(参见图2a)。另外，与未施予本技术化合物组的大肠癌组(即，安慰剂组)相比，施予本技术化合物组的大肠癌组(即，本技术化合物#1(1)组、本技术化合物#1(10)组、及本技术化合物#2(10)组)的直径大于2mm的肿瘤数量减少(参见图2b)。
[0131]
此外，安慰剂组的8只小鼠中有4只死亡，相对于此，本技术化合物#2(10)组的8只小鼠全部存活(参见图3)。
[0132]
这些结果显示，本技术的化合物组具有抑制伴随癌症发生的癌细胞增殖、改善由癌造成的生存率降低的效果。
[0133]
另外，与在本技术化合物#2不存在下培养大肠癌细胞的情况相比，在本技术化合物#2存在下培养大肠癌细胞时，大肠癌细胞的细胞迁移水平降低(参见图4)。该结果显示出，本技术化合物组使癌细胞的迁移水平降低，具有抑制癌转移的效果。
[0134]
产业上的可利用性
[0135]
本发明有助于癌的预防或治疗。