包含左旋多巴胺基酸结合物之液态组合物及其用途的制作方法

包含左旋多巴胺基酸结合物之液态组合物及其用途
【技术领域】
1.本发明系关于左旋多巴(levodopa)胺基酸(ldaa)、其盐、包含其之组合物、制备ldaa之方法及使用其来(例如)治疗特征在于神经退化及/或脑中之多巴胺(dopamine)含量降低之病状(例如帕金森氏病(parkinson's disease))之方法。【先前技术】
2.帕金森氏病系特征在于脑中之神经传递质多巴胺之浓度降低之神经退化性病状。左旋多巴(l-dopa或l-3,4-二羟基苯丙胺酸)系多巴胺之立即代谢前体，与多巴胺不同，其能够穿越血脑障壁且最通常用于恢复脑中之多巴胺浓度。在过去40年，左旋多巴始终系用于治疗帕金森氏病之最有效疗法。
3.然而，已证实，出于医学文献中所记录之许多原因，用于帕金森氏病之习用左旋多巴治疗系不足的。举例而言，一些患者最终变得对左旋多巴之反应性较小，从而先前之有效剂量最终不能产生任一治疗益处。因此，全身性投与左旋多巴尽管最初产生临床有益之效应，但因需要将剂量增加至可产生不良副效应之高剂量而复杂化。出于该等原因，左旋多巴治疗之益处通常在约3或4年疗法之后开始减弱，不论初始治疗反应如何。
4.经周边投与左旋多巴因以下事实而进一步复杂化：仅约1-3％之所投与左旋多巴能够无变化地进入脑中，其中大部分左旋多巴主要藉由左旋多巴至多巴胺之去羧化而发生脑外代谢，多巴胺并不渗透血脑障壁且由此系治疗无效的。左旋多巴至多巴胺之代谢转变由芳香族l-胺基酸去羧酶催化，该酶系在肠黏膜、肝、脑及脑毛细管中之浓度尤其高之普遍存在之酶。因左旋多巴之脑外代谢可能性，需要投与大剂量之左旋多巴，从而产生高脑外浓度之多巴胺。已发现，共投与左旋多巴及周边多巴胺去羧酶(芳香族l-胺基酸去羧酶)抑制剂(例如卡比多巴(carbidopa)或苄丝肼(benserazide))可减少左旋多巴之剂量需求及(各别地)一些副效应；然而，所获得减少通常不足。
5.最后，左旋多巴之临床反应会发生某些波动且愈加需要延长治疗。在一些患者中，该等波动系关于左旋多巴摄入时刻，称为「疗效减退反应」或「剂末运动不能」。在其他情况下，临床状态中之波动与剂量时刻无关且通常称为「开关现象(on-off phenomenon)」。在开关现象中，具有显著运动不能及运动迟缓之「关期(off-period)」与具有改良运动性之「开期(on-period)」(其通常涉及棘手之运动困难)在几小时过程中交替出现。
6.业内公认地，上文所提及之许多缺点源自左旋多巴之不利药物动力学性质且更特定而言源自其较差水溶性、生物可用性及活体内迅速降解性。因此，仍需要用于治疗诸如帕金森氏病等病症之有效治疗调配物。
7.含有胺基及羧酸基团二者之胺基酸系蛋白质之基本单元。通常已知，胺基酸在身体中发挥主要作用，涉及组织蛋白形成及酶激素形成。因此，胺基酸中之任何缺陷会影响蛋白质合成。胺基酸亦已知会调控与基因表现相关之过程且另外，胺基酸调节涉及信使rna转译之蛋白质功能。若干胺基酸(例如酪胺酸)合成于人体中，而其他胺基酸(称为必需胺基酸，例如精胺酸及离胺酸)则由饮食消耗。羊毛硫胺酸胺基酸系天然但非蛋白原性二胺基二酸，且与胺基酸半胱胺酸结构相关。羊毛硫胺酸具有结合至两个丙胺酸残基之中心单硫部
分(r/s构形)，从而容许羊毛硫胺酸可能具有不同立体异构体形式。
8.胺基酸在水溶液中发生离子化，其中溶液之ph影响胺基酸之离子种类且决定了胺基酸将呈两性离子形式、阳离子形式抑或阴离子形式。穿过皮肤之各种化合物之渗透性系数取决于其离子形式，其中非离子化物质之渗透性系数通常高于离子化物质且另外，阳离子之渗透性系数通常高于阴离子。
9.us 3,803,120、us 4,035,507、us 5,686,423及us 2002/099013揭示某些左旋多巴胺基酸及左旋多巴肽结合物；然而，其中未提供关于调配物之细节，且在提供时仅考虑固体口服调配物。制备液态组合物之理论选择简述于us 3,803,120(us
‘
120，第3行，第49-53列)中；然而，该等组合物皆未制得且此外，错误地揭示该等结合物系可溶性的(第3列，第65-66行)。
10.如上文所详述，仍需要用于治疗诸如帕金森氏病等病症之有效调配物及尤其液态调配物。


技术实现要素：

11.本文尤其提供左旋多巴胺基酸(ldaa)、其盐(例如其医药上可接受之盐)及包含其之组合物(例如医药上可接受之组合物，例如液态医药组合物)。本文亦阐述制备ldaa、其医药上可接受之盐及包含其之组合物之方法。亦揭示使用ldaa、其医药上可接受之盐及包含其之组合物来(例如)治疗特征在于神经退化及/或脑中之多巴胺含量降低之病状(例如帕金森氏病)之方法。
12.本文揭示一种液态医药组合物，其包含：通式(i)之左旋多巴胺基酸结合物(ldaa)：其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合，其中：r系胺基酸侧链；r1及r2各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、(c
2-c6)炔基、c
3-c6环烷基、苯基、-o-c(＝o)-r'、-c(＝o)-or'、-c(＝o)-r'、-c(＝s)-r'、-o-c(＝o)-nr'r'、-o-c(＝s)-nr'r'及-o-c(＝o)-r”；r3及r4各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基、苯基及-p(＝o)(or')2；r5系选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基及苯基；r'在每次出现时独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、c
3-c6环烷基、苯基及经由环碳键结至氮之杂芳基；且
r”在每次出现时独立地选自由以下组成之群：(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基及(c
2-c6)炔基；及医药上可接受之赋形剂。
13.在一些实施例中，本文所阐述之液态医药组合物包括通式(i)之ldaa：其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合，其中r系选自由以下组成之群之胺基酸侧链：精胺酸、组胺酸、离胺酸、天门冬胺酸、麸胺酸、丝胺酸、苏胺酸、天门冬酰胺酸、麸酰胺酸、半胱胺酸、硒半胱胺酸、甘胺酸、脯胺酸、丙胺酸、缬胺酸、异白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、酪胺酸、色胺酸及羊毛硫胺酸侧链。举例而言，在本文所阐述之实施例中，r可为：
(其中r亦与式i化合物之肽键之n形成键)；
14.在一些实施例中，本文所阐述之液态医药组合物包括通式(i)之ldaa，其中r系选自精胺酸、酪胺酸或离胺酸之胺基酸侧链。在一些实施例中，r系羊毛硫胺酸-2之胺基酸侧链。
15.本文亦揭示包括通式(i)之ldaa、其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、
两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合之液态医药组合物，其中r1、r2、r3、r4及r5中之每一者系h。举例而言，在一些实施例中，本文所阐述之液态医药组合物包括以下化合物：其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合，其中r系选自由以下组成之群之胺基酸侧链：精胺酸、组胺酸、离胺酸、天门冬胺酸、麸胺酸、丝胺酸、苏胺酸、天门冬酰胺酸、麸酰胺酸、半胱胺酸、硒半胱胺酸、甘胺酸、脯胺酸、丙胺酸、缬胺酸、异白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、酪胺酸、色胺酸及羊毛硫胺酸侧链。
16.在一些实施例中，本文所揭示之液态医药组合物包含介于约10％w/v至约45％w/v之间之一种、两种或更多种ldaa化合物或其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合。
17.在一些实施例中，本文所揭示之液态医药组合物在约25℃下具有在约3至约10范围内之ph。
18.在一些实施例中，本文所揭示之液态医药组合物可包括式i化合物之游离碱及相对离子。
19.在一些实施例中，本文所揭示之液态医药组合物亦可包括去羧酶抑制剂。举例而言，在一些实施例中，去羧酶抑制剂系卡比多巴。在一些实施例中，本文所揭示之液态医药组合物可包括约介于0.25％w/v至约1.5％w/v之间之去羧酶抑制剂。
20.本文所阐述之任一上文所提及液态医药组合物可进一步包括抗氧化剂或两种或更多种抗氧化剂之组合。举例而言，在一些实施例中，本文所阐述之液态医药组合物可包括选自由以下组成之群之抗氧化剂：抗坏血酸或其盐、半胱胺酸、亚硫酸氢盐或其盐、麸胱甘肽、酪胺酸酶抑制剂、cu
2+
螯合剂及其任一组合。在一些实施例中，本文所阐述之液态医药组合物可包括介于约0.05％w/v至约1.5％w/v之间之抗氧化剂或抗氧化剂组合。
21.本文所阐述之任一上文所提及液态医药组合物可进一步包括以下各项中之至少一者：儿茶酚-o-甲基转移酶(comt)抑制剂、单胺氧化酶(mao)抑制剂、表面活性剂、缓冲剂、酸、碱、溶剂或其任一组合。举例而言，在一些实施例中，本文所阐述之液态医药组合物可包括溶剂，其中溶剂可为n-甲基吡咯啶酮(nmp)、参(羟甲基)胺基甲烷(胺丁三醇，tris)、醚(例如四氢呋喃及1,4-二恶烷)、酰胺(例如n,n-二甲基甲酰胺及n-甲基吡咯啶酮)、腈(例如乙腈)、卤化脂肪族烃(例如氯仿及二氯甲烷)、芳香族烃(例如甲苯)或其任一组合。应注意，可将某些材料(例如胺丁三醇(tris))添加至组合物中且用作(例如)碱、缓冲剂、溶剂或其任一组合。在一些实施例中，本文所阐述之液态医药组合物可包括表面活性剂，其中表面活性剂系tween-80。在一些实施例中，本文所阐述之液态医药组合物可包括溶剂及表面活性剂，其中溶剂系nmp且表面活性剂系tween-80。在一些实施例中，液态医药组合物可包括介
于约0.1％w/v至约1.0％w/v之间之表面活性剂(例如0.1％w/v至约1.0％w/v tween-80)。在一些实施例中，液态医药组合物可包括介于约5.0％w/v至约40.0％w/v之间之溶剂(例如介于约5.0％w/v至约40.0％w/v之间之nmp)。
22.本文亦揭示治疗神经退化性病状及/或特征在于脑中之多巴胺含量降低之病状之方法，其中该方法包含投与液态医药组合物，其中液态医药组合物包含通式(i)之左旋多巴胺基酸结合物(ldaa)：其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合，其中r系胺基酸侧链；r1及r2各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、(c
2-c6)炔基、c
3-c6环烷基、苯基、-o-c(＝o)-r'、-c(＝o)-or'、-c(＝o)-r'、-c(＝s)-r'、-o-c(＝o)-nr'r'、-o-c(＝s)-nr'r'及-o-c(＝o)-r”；r3及r4各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基、苯基及-p(＝o)(or')2；r5系选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基及苯基；r'在每次出现时独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、c
3-c6环烷基、苯基及经由环碳键结至氮之杂芳基；且r”在每次出现时独立地选自由以下组成之群：(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基及(c
2-c6)炔基；及医药上可接受之赋形剂。
23.举例而言，本文揭示治疗神经退化性病状及/或特征在于脑中之多巴胺含量降低之病状之方法，其中该方法包含投与液态医药组合物，其中液态医药组合物包含通式(i)之ldaa、其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合，其中r系选自由以下组成之群之胺基酸侧链：精胺酸、组胺酸、离胺酸、天门冬胺酸、麸胺酸、丝胺酸、苏胺酸、天门冬酰胺酸、麸酰胺酸、半胱胺酸、硒半胱胺酸、甘胺酸、脯胺酸、丙胺酸、缬胺酸、异白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、酪胺酸、色胺酸及羊毛硫胺酸侧链。举例而言，在本文所阐述之实施例中，r可为：
(其中r亦与式i化合物之肽键之n形成键)；
24.举例而言，本文揭示治疗神经退化性病状及/或特征在于脑中之多巴胺含量降低之病状之方法，其中神经退化性病状系帕金森氏病。
25.在所揭示治疗方法之一些实施例中，液态医药组合物系与其他活性成分同时投与。举例而言，在一些实施例中，其他活性成分系去羧酶抑制剂、comt抑制剂、mao抑制剂或其任一组合。
26.在本文所揭示之治疗方法之一些实施例中，实质上连续投与液态医药组合物。在一些实施例中，经皮下投与液态医药组合物。
27.本文亦揭示通式(iii)之左旋多巴胺基酸结合物(ldaa)：其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合，其中r
x
系胺基酸侧链；或其o-磷酸化胺基酸侧链。r1及r2各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、(c
2-c6)炔基、c
3-c6环烷基、苯基、-o-c(＝o)-r'、-c(＝o)-or'、-c(＝o)-r'、-c(＝s)-r'、-o-c(＝o)-nr'r'、-o-c(＝s)-nr'r'及-o-c(＝o)-r”；r3及r4各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基、苯基及-p(＝o)(or')2；r5系选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基及苯基；r'在每次出现时独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、c
3-c6环烷基、苯基及经由环碳键结至氮之杂芳基；且r”在每次出现时独立地选自由以下组成之群：(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基及(c
2-c6)炔基。
28.根据一些实施例，r
x
中之胺基酸侧链系选自由以下组成之群：精胺酸、组胺酸、离胺酸、天门冬胺酸、麸胺酸、丝胺酸、苏胺酸、天门冬酰胺酸、麸酰胺酸、半胱胺酸、硒半胱胺酸、甘胺酸、脯胺酸、丙胺酸、缬胺酸、异白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、酪胺酸、色胺酸、鸟胺酸、羊毛硫胺酸及3,4-二羟基苯丙胺酸侧链。
29.根据其他实施例，r
x
中之胺基酸侧链系选自由以下组成之群：精胺酸、离胺酸、丝胺酸、甘胺酸、丙胺酸、缬胺酸、苯丙胺酸、酪胺酸、鸟胺酸及3,4-二羟基苯丙胺酸。根据一些实施例，r1、r2及r5中之每一者系h；r3及r4独立地系h或-p(＝o)(or')2；且r'系h。
30.根据一些实施例，左旋多巴胺基酸结合物(ldaa)选自由以下组成之群：(2s)-2-胺基-3-(3-羟基-4-膦酰基氧基苯基)丙酰胺，2-[[(2s)-2-胺基-3-(3-羟基-4-膦酰基氧基苯基)丙酰基]胺基]乙磺酸，(2s)-2-胺基-6-[[(2s)-2-胺基-3-(3-羟基-4-膦酰基氧基苯基)丙酰基]胺基]己酸，及(2s)-2-胺基-5-[[(2s)-2-胺基-3-(3-羟基-4-膦酰基氧基苯基)丙酰基]胺基]戊酸。
[0031]
本发明实施例进一步系关于治疗有需要之患者之帕金森氏病之方法，其包含向患者经皮下投与有效量之如本文所揭示之化合物。
[0032]
本文亦揭示由下式代表之化合物：其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合，其中：r1及r2各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、(c
2-c6)炔基、c
3-c6环烷基、苯基、-o-c(＝o)-r'、-c(＝o)-or'、-c(＝o)-r'、-c(＝s)-r'、-o-c(＝o)-nr'r'、-o-c(＝s)-nr'r'及-o-c(＝o)-r”；r3及r4各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基、苯基及-p(＝o)(or')2；r5系选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基及苯基；r'在每次出现时独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、c
3-c6环烷基、苯基及经由环碳键结至氮之杂芳基；且r”在每次出现时独立地选自由以下组成之群：(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基及(c
2-c6)炔基。
[0033]
本文亦揭示由下式代表之化合物：其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合，其中：
r1及r2各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、(c
2-c6)炔基、c
3-c6环烷基、苯基、-o-c(＝o)-r'、-c(＝o)-or'、-c(＝o)-r'、-c(＝s)-r'、-o-c(＝o)-nr'r'、-o-c(＝s)-nr'r'及-o-c(＝o)-r”；r3及r4各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基、苯基及-p(＝o)(or')2；r5系选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基及苯基；r'在每次出现时独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、c
3-c6环烷基、苯基及经由环碳键结至氮之杂芳基；且r”在每次出现时独立地选自由以下组成之群：(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基及(c
2-c6)炔基。
[0034]
本文揭示式ii-1或ii-2之化合物，其中r1、r2、r3、r4及r5中之每一者系h。举例而言，本文揭示下列化合物：本文亦揭示下列化合物：
[0035]
本文亦揭示制备液态医药组合物之制程，其中该制程包含提供式(i)之左旋多巴胺基酸结合物(ldaa)之医药上可接受之盐：
组合医药上可接受之盐与至少一种溶剂，由此形成溶液、凝胶、乳霜、乳液或悬浮液；及将溶液、凝胶、乳霜、乳液或悬浮液之ph调节至生理上可接受之ph值，由此提供液态医药组合物，其中：r系胺基酸侧链；r1及r2各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、(c
2-c6)炔基、c
3-c6环烷基、苯基、-o-c(＝o)-r'、-c(＝o)-or'、-c(＝o)-r'、-c(＝s)-r'、-o-c(＝o)-nr'r'、-o-c(＝s)-nr'r'及-o-c(＝o)-r”；r3及r4各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基、苯基及-p(＝o)(or')2；r5系选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基及苯基；r'在每次出现时独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、c
3-c6环烷基、苯基及经由环碳键结至氮之杂芳基；且r”在每次出现时独立地选自由以下组成之群：(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基及(c
2-c6)炔基。
[0036]
在一些实施例中，制备本文所阐述之液态医药组合物之制程包括提供式(i)ldaa之医药上可接受之盐、其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合，其中r系选自由以下组成之群之胺基酸侧链：精胺酸、组胺酸、离胺酸、天门冬胺酸、麸胺酸、丝胺酸、苏胺酸、天门冬酰胺酸、麸酰胺酸、半胱胺酸、硒半胱胺酸、甘胺酸、脯胺酸、丙胺酸、缬胺酸、异白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、酪胺酸、色胺酸及羊毛硫胺酸侧链。举例而言，在本文所阐述之实施例中，r可为：
(其中r亦与式i化合物之肽键之n形成键)；
[0037]
在本文所阐述制程之一些实施例中，将呈医药上可接受之盐形式之式(i)之ldaa化合物与至少一种溶剂混合，由此形成溶液。在一些实施例中，该制程包括添加碱性溶液之ph调节步骤。举例而言，在一些实施例中，该制程包括添加碱性溶液之ph调节步骤，且碱性溶液包含naoh。
[0038]
在本文所阐述制程之一些实施例中，式(i)之ldaa化合物系呈医药上可接受之固体盐形式。
[0039]
本文亦揭示一种组合物，其包含由下式代表之化合物之医药上可接受之盐：其中：r系胺基酸侧链；r1及r2各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、(c
2-c6)炔基、c
3-c6环烷基、苯基、-o-c(＝o)-r'、-c(＝o)-or'、-c(＝o)-r'、-c(＝s)-r'、-o-c(＝o)-nr'r'、-o-c(＝s)-nr'r'及-o-c(＝o)-r”；r3及r4各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基、苯基及-p(＝o)(or')2；r5系选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基及苯基；r'在每次出现时独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、c
3-c6环烷基、苯基及经由环碳键结至氮之杂芳基；且r”在每次出现时独立地选自由以下组成之群：(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基及(c
2-c6)炔基；及
医药上可接受之赋形剂。
[0040]
在一些实施例中，本文所揭示之医药上可接受之盐系以下化合物之医药上可接受之盐：
[0041]
举例而言，本文揭示包括式(i)化合物之医药上可接受之盐之组合物，其中该盐系三氟乙酸(tfa)盐。
[0042]
本文亦揭示液态医药组合物，其包含下列化合物中之一或多者：其中r系h、c
1-c6烷基或胺基酸；其中n为1、2、3、4或5；其中r系h、c
1-c6烷基或胺基酸；
其中n为1、2、3、4或5；其中r系h或c
1-c6烷基；其中r1系h或c
1-c6烷基，其中r2系h、c
1-c6烷基或胺基酸，且其中n为1、2、3、4或5；其中r1系h或c
1-c6烷基，其中r2系h、c
1-c6烷基或胺基酸，且其中n为1、2、3、4或5；
其中r1系h或c
1-c6烷基，其中r2系胺基酸侧链，且其中r3系h或c
1-c6烷基；或其中r1系h或c
1-c6烷基，且其中r2系h或c
1-c6烷基，及医药上可接受之赋形剂。
[0043]
本文亦揭示治疗神经退化性病状及/或特征在于脑中之多巴胺含量降低之病状之方法，其中该方法包含投与液态医药组合物，其中液态医药组合物包含下列化合物中之一或多者：其中r系h、c
1-c6烷基或胺基酸；其中n为1、2、3、4或5；
其中r系h、c
1-c6烷基或胺基酸；烷基或胺基酸；其中n为1、2、3、4或5；其中r系h或c
1-c6烷基；其中r1系h或c
1-c6烷基，其中r2系h、c
1-c6烷基或胺基酸，且其中n为1、2、3、4或5；
其中r1系h或c
1-c6烷基，其中r2系h、c
1-c6烷基或胺基酸，且其中n为1、2、3、4或5；其中r1系h或c
1-c6烷基，其中r2系胺基酸侧链，且其中r3系h或c
1-c6烷基；或其中r1系h或c
1-c6烷基，且其中r2系h或c
1-c6烷基，及医药上可接受之赋形剂。
[0044]
本文亦揭示制备液态医药组合物之制程，其中该制程包含：提供下列化合物中之一者之医药上可接受之盐：其中r系h、c
1-c6烷基或胺基酸；其中n为1、2、3、4或5；
其中r系h、c
1-c6烷基或胺基酸；烷基或胺基酸；其中n为1、2、3、4或5；其中r系h或c
1-c6烷基；其中r1系h或c
1-c6烷基，其中r2系h、c
1-c6烷基或胺基酸，且其中n为1、2、3、4或5；
其中r1系h或c
1-c6烷基，其中r2系h、c
1-c6烷基或胺基酸，且其中n为1、2、3、4或5；其中r1系h或c
1-c6烷基，其中r2系胺基酸侧链，且其中r3系h或c
1-c6烷基；或其中r1系h或c
1-c6烷基，且其中r2系h或c
1-c6烷基组合医药上可接受之盐与至少一种溶剂，由此形成溶液、凝胶、乳霜、乳液或悬浮液；及将溶液、凝胶、乳霜、乳液或悬浮液之ph调节至生理上可接受之ph值，由此提供液态医药组合物。
【附图说明】
[0045]
图1绘示呈tfa盐形式之各种左旋多巴胺基酸(ldaa)化合物在人类肝微粒体代谢后之剩余百分比，该剩余百分比系在0、15、30、45及60分钟时所测试；
[0046]
图2呈现表26，该表格包括衍生自在哥廷根小型猪(minipig)上实施之皮下浓注研究之药物动力学参数；
[0047]
图3系呈现在向哥廷根小型猪经皮下浓注投与5mg/kg每一所测试ldaa化合物后随时间而变化之ldaa化合物浓度之图形；
[0048]
图4系呈现在向小型猪经皮下浓注投与5mg/kg每一所测试ldaa化合物后随时间而变化之左旋多巴浓度之图形；
[0049]
图5系呈现在向哥廷根小型猪连续经皮下投与ld-tyr游离碱溶液24小时期间及之后随时间而变化之ld-tyr游离碱及左旋多巴浓度之图形；
[0050]
图6a呈现在自向哥廷根小型猪连续经皮下投与ld-tyr游离碱溶液24小时恢复之
后两周获得之组织病理学影像；
[0051]
图6b呈现在自向哥廷根小型猪连续经皮下投与ld-tyr游离碱溶液之媒剂(不含ld-tyr游离碱本身)24小时恢复之后两周获得之组织病理学影像；
[0052]
图6c呈现在向哥廷根小型猪插入假体(仅针)24小时之后获得之组织病理学影像；且
[0053]
图7呈现在自投与ld-tyr游离碱溶液、溶液媒剂及假体24小时恢复两周之后哥廷根小型猪中之皮下发炎发生率。【实施方式】
[0054]
现将更特定地阐述本发明之特征及其他细节。说明书、实例及随附申请专利范围中所采用之某些术语收集于此。该等定义应根据本发明之其他部分来解释且如熟习此项技术者所理解。除非另外定义，否则本文所用之所有技术及科学术语皆具有与熟习此项技术者通常所理解相同之含义。
[0055]
术语「治疗(treat、treatment、treating)」及诸如此类在本文中通常用于系指获得期望药理及/或生理学效应。该效应可在部分地或完全治愈疾病及/或归因于疾病之不良效应方面系治疗性。本文所用之术语「治疗」涵盖哺乳动物、尤其人类之疾病之任何治疗，且包括：(a)抑制疾病，亦即预防疾病之严重程度或范围增加；(b)减轻疾病，亦即部分地或完全改善疾病；或(c)预防疾病复发，亦即在先前成功治疗疾病症状或治疗疾病后预防疾病返回活性状态。
[0056]
「预防」包括延迟发生于受试者中之状态、病症、疾病或病状之临床症状、并发症或生物化学征候之发作，该受试者可患有或易患该状态、病症、疾病或病状但尚未经历或显示该状态、病症、疾病或病状之临床或亚临床症状。「预防」包括防治性治疗存在或发生于受试者中之状态、病症、疾病或病状，包括防治性治疗存在或发生于受试者中之状态、病症、疾病或病状之临床症状、并发症或生物化学征候。
[0057]
本文所用之术语「医药上可接受之载剂」或「医药上可接受之赋形剂」可互换地系指与医药投与兼容之任何及所有溶剂、分散介质、包衣、等渗及吸收延迟剂及诸如此类。
[0058]
本文所用之术语「医药组合物」及「医药调配物」系指包含至少一种生物活性化合物(例如如本文所揭示之左旋多巴胺基酸结合物或其医药上可接受之盐)以及一起调配之一或多种医药上可接受之赋形剂的组合物或调配物。
[0059]
本文所用之术语「医药上可接受之盐」系指可使用本文所揭示组合物中所用结合物形成之酸性或碱性基团之盐。
[0060]
「个体」、「患者」或「受试者」可互换使用且包括任何动物，包括哺乳动物、小鼠、大鼠、其他啮齿类动物、兔、狗、猫、猪、牛、绵羊、马或非人类灵长类动物及人类。在一些实施例中，在本发明方法中治疗之哺乳动物系患有神经退化性病状(例如帕金森氏病)之人类。
[0061]
除非另外具体提及或除非熟习此项技术者另有理解，否则本文所用之术语「约」应视为涵盖
±
10％所列示值之范围。另外应注意，所提供之任一值亦可视为涵盖
±
10％该值之范围，即使不使用术语「约」。此包括实例部分中之值，该等值可根据所用器具及机械、化合物纯度等有所变化。
[0062]
除非另外具体提及或除非熟习此项技术者另有理解，否则本文所用之术语「稳定」或「稳定过夜」系指，某一物质(例如调配物)在物理上稳定至少12小时以便在至少1.75倍放
大率下目测观察该物质时未看到沈淀物。
[0063]
除非另外具体提及或除非熟习此项技术者另有理解，否则本文所用之术语「液态」系指任一类型之流体(包括凝胶、水性及非水性组合物及诸如此类)。
[0064]
除非另外具体提及或除非熟习此项技术者另有理解，否则本文所用之术语「同时」系指两种或更多种活性成分之任一类组合投与，包括以分开或相同之组合物同时投与该等活性成分以及在同一天依序、连续投与两种或更多种活性成分(其中活性成分之彼此投与间隔预定时间段)及诸如此类。
[0065]
除非另外具体提及或除非熟习此项技术者另有理解，否则本文所用之术语「连续」及「实质上连续」系指在整个时间段内以小于约24小时、约12小时、约5小时、约3小时、约1小时、约30分钟、约15分钟、约5分钟或约1分钟之间隔投与组合物之时间段。投与组合物之时间段可为至少约6小时、约8小时、约12小时、约15小时、约18小时、约21小时、约24小时、3天、7天、2周、1个月、3个月、6个月、1年、2年、3年、5年、10年等。
[0066]
除非另外具体提及或除非熟习此项技术者另有理解，否则本文所用之术语「生理上可接受之ph值」及诸如此类系指在约4.5至约10范围内之ph值。另外应注意，在提供ph值时(包括于实例中)，该等值可在所列示值之约
±
0.1及/或
±
10％之范围内，从而若所量测ph为8.1，则可制备ph为约8.0或8.2之相同调配物。该等差异可由温度变化、不同量测器件等所致。
[0067]
本发明实施例系关于一种液态医药组合物，其包含通式(i)之左旋多巴胺基酸结合物(ldaa)：其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合，其中：r系胺基酸侧链；r1及r2各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、(c
2-c6)炔基、c
3-c6环烷基、苯基、-o-c(＝o)-r'、-c(＝o)-or'、-c(＝o)-r'、-c(＝s)-r'、-o-c(＝o)-nr'r'、-o-c(＝s)-nr'r'或-o-c(＝o)-r”；r3及r4各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基、苯基或-p(＝o)(or')2；r5系选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基及苯基；r'各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、c
3-c6环烷基、苯基及经由环碳键结至氮之杂芳基；且r”系选自由以下组成之群：(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基及(c
2-c6)炔基。
[0068]
根据一些实施例，r系任一天然、合成、非天然或非蛋白原性胺基酸之胺基酸侧链，例如以下胺基酸之侧链：精胺酸、组胺酸、离胺酸、天门冬胺酸、麸胺酸、丝胺酸、苏胺酸、天门冬酰胺酸、麸酰胺酸、半胱胺酸、硒半胱胺酸、甘胺酸、脯胺酸、丙胺酸、缬胺酸、异白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、酪胺酸、色胺酸、羊毛硫胺酸、硒半胱胺酸、吡咯离胺酸、adda胺基酸((2s,3s,4e,6e,8s,9s)-3-胺基-9-甲氧基-2,6,8-三甲基-10-苯基癸-4,6-二烯酸)、β-丙胺酸、4-胺基苯甲酸、γ-胺基丁酸、s-胺基乙基-l-半胱胺酸、2-胺基异丁酸、胺基乙酰丙酸、氮杂环丁烷-2-甲酸、刀豆酸、刀豆胺酸、羧基麸胺酸、氯丙胺酸、瓜胺酸、胱胺酸、去氢丙胺酸、二胺基庚二酸、二羟基苯基甘胺酸、持久双杀霉素、高半胱胺酸、高丝胺酸、4-羟基苯基甘胺酸、羟脯胺酸、羟腐胺离胺酸、β-白胺酸、正白胺酸、正缬胺酸、鸟胺酸、青霉胺、普拉克辛霉素(plakohypaphorine)、焦麸胺酸、使君子胺酸、肌胺酸、茶胺酸、胺甲环酸、口蘑胺酸或其任一异构体。此处应注意，r可为羊毛硫胺酸之任一已知异构体，其中一种异构体在本文中称为羊毛硫胺酸-1或羊毛硫胺酸-峰1，而另一异构体在本文中称为羊毛硫胺酸-2或羊毛硫胺酸-峰2。另外，左旋多巴羊毛硫胺酸结合物可在本文中称为ld-la、ld-la 1(第一异构体)、ld-la 2(第二异构体)、ld-羊毛硫胺酸1(第一异构体)、ld-羊毛硫胺酸2(第二异构体)及诸如此类。
[0069]
根据一些实施例，r系精胺酸、酪胺酸、离胺酸、天门冬胺酸、天门冬酰胺酸、色胺酸、麸酰胺酸、麸胺酸、甘胺酸或羊毛硫胺酸之胺基酸侧链。根据一些实施例，r系精胺酸、酪胺酸、离胺酸、羊毛硫胺酸-2、色胺酸、麸胺酸或甘胺酸之胺基酸侧链。根据一些实施例，r系精胺酸、酪胺酸、离胺酸或羊毛硫胺酸-2之胺基酸侧链。根据一些实施例，r系精胺酸、酪胺酸或离胺酸之胺基酸侧链。根据一些实施例，r系羊毛硫胺酸-2之胺基酸侧链。
[0070]
根据一些实施例，r1、r2、r3、r4及r5中之每一者系h。根据一些实施例，r”具有至少10个碳原子。根据一些实施例，液态医药组合物包含两种或更多种ldaa化合物之混合物。
[0071]
根据一些实施例，液态医药组合物包含呈医药上可接受之盐形式之ldaa化合物。根据一些实施例，ldaa盐系选自三氟乙酸(tfa)盐、盐酸盐、富马酸盐、乳酸盐、马来酸盐、葡庚糖酸盐、磷酸盐、硫酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、乙酸盐、丙酸盐、己酸盐、环戊烷丙酸盐、羟乙酸盐、丙酮酸盐、乳酸盐、马尿酸盐、甲磺酸盐、抗坏血酸盐、丙二酸盐、草酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、肉桂酸盐、磺酸盐、月桂基硫酸盐、葡萄糖酸盐、麸胺酸盐、羟基萘甲酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、黏康酸盐、碱金属盐(例如锂盐、钠盐或钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐或镁盐)、铝盐、乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、n-甲基葡萄糖胺盐、二环己基胺盐、己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天门冬胺酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸丁酸盐、樟脑磺酸丁酸盐、二葡萄糖酸丁酸盐、十二烷基硫酸丁酸盐、乙磺酸丁酸盐、葡庚糖酸丁酸盐、甘油磷酸丁酸盐、葡萄糖酸丁酸盐、半硫酸丁酸盐、庚酸丁酸盐、氢碘酸丁酸盐、2-羟基-乙磺酸丁酸盐、乳糖酸丁酸盐、月桂酸丁酸盐、甲磺酸丁酸盐、2-萘磺酸丁酸盐、烟碱酸丁酸盐、油酸丁酸盐、棕榈酸丁酸盐、双羟萘酸丁酸盐、果胶酸丁酸盐、过硫酸丁酸盐、3-苯基丙酸丁酸盐、磷酸丁酸盐、苦味酸丁酸盐、新戊酸丁酸盐、酒石酸丁酸盐、硫氰酸丁酸盐、对甲苯磺酸丁酸盐、十一烷酸丁酸盐、戊酸盐或其任一组合。
[0072]
本发明之液态医药组合物可包含介于约2.5％w/v至约70％w/v之间之ldaa化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合或两种或更多种ldaa化合物、对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、
其医药上可接受之盐或其任一组合之任一组合。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约2.5％w/v至约5％w/v之间、介于约5％w/v至约10％w/v之间、介于约10％w/v至约15％w/v之间、介于约15％w/v至约20％w/v之间、介于约20％w/v至约25％w/v之间、介于约25％w/v至约30％w/v之间、介于约30％w/v至约35％w/v之间、介于约35％w/v至约40％w/v之间、介于约40％w/v至约45％w/v之间、介于约45％w/v至约50％w/v之间、介于约50％w/v至约55％w/v之间、介于约55％w/v至约60％w/v之间、介于约60％w/v至约65％w/v之间、介于约65％w/v至约70％w/v之间、介于约10％w/v至约12.5％w/v之间、介于约12.5％w/v至约17.5％w/v之间、介于约17.5％w/v至约22.5％w/v之间、介于约22.5％w/v至约27.5％w/v之间、介于约27.5％w/v至约32.5％w/v之间、介于约32.5％w/v至约37.5％w/v之间、介于约37.5％w/v至约42.5％w/v之间、介于约42.5％w/v至约45％w/v之间、约10％w/v、约12.5％w/v、约15％w/v、约17.5％w/v、约20％w/v、约22.5％w/v、约25％w/v、约27.5％w/v、约30％w/v、约32.5％w/v、约35％w/v、约37.5％w/v、约40％w/v、约42.5％w/v、约45％w/v、约47.5％w/v、约50％w/v、约52.5％w/v、约55％w/v、约57.5％w/v、约60％w/v、约62.5％w/v、约65％w/v、约67.5％w/v、约70％w/v之ldaa化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合或两种或更多种ldaa化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合之任一组合。
[0073]
本发明之液态医药组合物在约25℃下之ph可介于约4.5至约10之间。根据一些实施例，液态医药组合物在约25℃下之ph介于约4.5至约5之间。根据一些实施例，液态医药组合物在约25℃下之ph介于约5至约6之间。根据一些实施例，液态医药组合物在约25℃下之ph介于约6至约7之间。根据一些实施例，液态医药组合物在约25℃下之ph介于约7至约8之间。根据一些实施例，液态医药组合物在约25℃下之ph介于约8至约9之间。根据一些实施例，液态医药组合物在约25℃下之ph介于约9至约10之间。根据一些实施例，液态医药组合物在约25℃下之ph介于约4.5至约5.5之间。根据一些实施例，液态医药组合物在约25℃下之ph介于约5.5至约6.5之间。根据一些实施例，液态医药组合物在约25℃下之ph介于约6.5至约7.5之间。根据一些实施例，液态医药组合物在约25℃下之ph介于约7.5至约8.5之间。根据一些实施例，液态医药组合物在约25℃下之ph介于约8.5至约9.5之间。根据一些实施例，液态医药组合物在约25℃下之ph介于约9.5至约10之间。
[0074]
根据一些实施例，液态医药组合物进一步包含去羧酶抑制剂。根据一些实施例，去羧酶抑制剂系选自卡比多巴、苄丝肼、甲基多巴(methyldopa)、3',4',5,7-四羟基-8-甲氧基异黄酮、α-二氟甲基多巴或其任一组合。根据一些实施例，去羧酶抑制剂系卡比多巴。
[0075]
本发明之液态医药组合物可包含介于约0.25％w/v至约3.0％w/v之间之去羧酶抑制剂(例如卡比多巴)。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约0.25％w/v至约0.5％w/v之间、介于约0.5％w/v至约0.75％w/v之间、介于约0.75％w/v至约1.0％w/v之间、介于约1.0％w/v至约1.25％w/v之间、介于约1.25％w/v至约1.5％w/v之间、介于约1.5％w/v至约1.75％w/v之间、介于约1.75％w/v至约2.0％w/v之间、介于约2.0％w/v至约2.25％w/v之间、介于约2.25％w/v至约2.5％w/v之间、介于约2.5％w/v至约2.75％w/v之间、介于约2.75％w/v至约3.0％w/v之间、介于约0.5％w/v至约1.0％w/v之间、介于约0.6％w/v至约0.9％w/v之间、介于约0.7％w/v至约0.8％w/v之间、约0.5％w/v、约0.55％w/v、约0.6％w/
v、约0.65％w/v、约0.7％w/v、约0.75％w/v、约0.8％w/v、约0.85％w/v之去羧酶抑制剂(例如卡比多巴)。
[0076]
根据一些实施例，液态医药组合物进一步包含缓冲剂。根据一些实施例，缓冲剂系选自柠檬酸盐缓冲剂、柠檬酸缓冲剂、乙酸钠缓冲剂、乙酸缓冲剂、酒石酸缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、琥珀酸缓冲剂、tris缓冲剂、甘胺酸缓冲剂、盐酸缓冲剂、邻苯二甲酸氢钾缓冲剂、钠缓冲剂、柠檬酸酒石酸钠缓冲剂、氢氧化钠缓冲剂、磷酸二氢钠缓冲剂、磷酸氢二钠缓冲剂、胺丁三醇(tris)或其任一组合。液态医药组合物可包含介于约0.1％w/v至约30.0％w/v之间之缓冲剂。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约0.1％w/v至约1.0％w/v之间、介于约1.0％w/v至约2.0％w/v之间、介于约2.0％w/v至约3.0％w/v之间、介于约3.0％w/v至约4.0％w/v之间、介于约4.0％w/v至约5.0％w/v之间、介于约5.0％w/v至约6.0％w/v之间、介于约6.0％w/v至约7.0％w/v之间、介于约8.0％w/v至约9.0％w/v之间、介于约9.0％w/v至约10.0％w/v之间、介于约10.0％w/v至约15.0％w/v之间、介于约15.0％w/v至约20.0％w/v之间、介于约20.0％w/v至约25.0％w/v之间、介于约25.0％w/v至约30.0％w/v之间之缓冲剂。
[0077]
根据一些实施例，液态医药组合物进一步包含酸或碱以(例如)提供具有预定ph之组合物。根据一些实施例，酸系选自hcl、hbr、甲磺酸、抗坏血酸、乙酸、柠檬酸或其任一组合。根据一些实施例，碱系选自naoh、ca(oh)2、氢氧化铵、精胺酸、氢氧化镁、氢氧化钾、、葡甲胺、胺丁三醇(tris)、三乙胺、二异丙基乙基胺、二氮杂双环十一烯或其任一组合。液态医药组合物可包含介于约0.1％w/v至约30.0％w/v之间之碱或酸。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约0.1％w/v至约1.0％w/v之间、介于约1.0％w/v至约2.0％w/v之间、介于约2.0％w/v至约3.0％w/v之间、介于约3.0％w/v至约4.0％w/v之间、介于约4.0％w/v至约5.0％w/v之间、介于约5.0％w/v至约6.0％w/v之间、介于约6.0％w/v至约7.0％w/v之间、介于约8.0％w/v至约9.0％w/v之间、介于约9.0％w/v至约10.0之间、介于约10.0％w/v至约11.0之间、介于约11.0％w/v至约12.0之间、介于约12.0％w/v至约13.0之间、介于约13.0％w/v至约14.0之间、介于约14.0％w/v至约15.0之间、介于约15.0％w/v至约16.0之间、介于约16.0％w/v至约17.0之间、介于约17.0％w/v至约18.0之间、介于约18.0％w/v至约19.0之间、介于约19.0％w/v至约20.0之间、介于约20.0％w/v至约21.0之间、介于约21.0％w/v至约22.0之间、介于约22.0％w/v至约23.0之间、介于约23.0％w/v至约24.0之间、介于约24.0％w/v至约25.0之间、介于约25.0％w/v至约26.0之间、介于约26.0％w/v至约27.0之间、介于约27.0％w/v至约28.0之间、介于约28.0％w/v至约29.0之间、介于约29.0％w/v至约30.0之间之碱或酸。
[0078]
根据一些实施例，液态医药组合物进一步包含抗氧化剂。根据一些实施例，抗氧化剂系选自抗坏血酸或其盐、半胱胺酸、亚硫酸氢盐或其盐、麸胱甘肽、酪胺酸酶抑制剂、二价阳离子(例如cu
+2
螯合剂)、丁基化羟基甲苯(bht)、β羟基酸(bha)生育酚、龙胆酸、生育酚、生育酚衍生物(例如生育酚乙酸酯或生育酚琥珀酸酯)、硫基甘油或其任一组合。
[0079]
根据一些实施例，抗氧化剂系选自抗坏血酸钠、抗坏血酸钙、抗坏血酸钾或其任一组合之抗坏血酸盐。根据一些实施例，抗氧化剂系选自l-半胱胺酸、n-乙酰基半胱胺酸(nac)或其任一组合之半胱胺酸。根据一些实施例，抗氧化剂系亚硫酸氢盐偏亚硫酸氢钠。根据一些实施例，抗氧化剂系酪胺酸酶抑制剂卡托普利(captopril)。根据一些实施例，抗
氧化剂系系选自na
2-edta及na
2-edta-ca或其任一组合之cu
+2
螯合剂。
[0080]
根据一些实施例，抗氧化剂系选自甲巯咪唑(methimazole)、槲皮素(quercetin)、熊果苷(arbutin)、芦荟苦素(aloesin)、n-乙酰基葡萄糖胺、视黄酸、阿魏酸α-生育酚基酯、抗坏血酸基磷酸镁(map)、受质类似物(例如苯甲酸钠)、l-苯丙胺酸、二巯基琥珀酸、d-青霉胺、曲恩汀(trientine)-hcl、二巯丙醇(dimercaprol)、氯碘羟喹(clioquinol)、硫代硫酸钠、三乙烯四胺、四乙烯五胺、姜黄素(curcumin)、新亚铜试剂(neocuproine)、单宁(tannin)、铜宗(cuprizone)、亚硫酸盐(例如亚硫酸氢钠或偏亚硫酸氢钠)、硫辛酸、cb4(n-乙酰基cysglyprocys酰胺)、cb3(n-乙酰基cysprocys酰胺)、ad4(n-乙酰基半胱胺酸酰胺)、ad6(n-乙酰基glucysgly酰胺)、ad7(n-乙酰基cysgly酰胺)、维他命e、二-第三丁基甲基苯酚、第三丁基-甲氧基苯酚、多酚、生育酚、泛醌、咖啡酸或其任一组合。
[0081]
本发明之液态医药组合物可包含介于约0.05％w/v至约2.0％w/v之间之抗氧化剂或抗氧化剂组合。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约0.05％w/v至约0.1％w/v之间、约0.1％w/v至约0.2％w/v、约0.2％w/v至约0.3％w/v、约0.3％w/v至约0.4％w/v、约0.4％w/v至约0.5％w/v、约0.5％w/v至约0.6％w/v、约0.7％w/v至约0.8％w/v、约0.8％w/v至约0.9％w/v、约0.9％w/v至约1.0％w/v、约1.0％w/v至约1.1％w/v、约1.1％w/v至约1.2％w/v、约1.2％w/v至约1.3％w/v、约1.3％w/v至约1.4％w/v、约1.4％w/v至约1.5％w/v、约1.5％w/v至约1.6％w/v、约1.6％w/v至约1.7％w/v、约1.7％w/v至约1.8％w/v、约1.8％w/v至约1.9％w/v、约1.9％w/v至约2.0％w/v、约0.75％w/v、约0.8％w/v、约0.85％w/v、约0.9％w/v、约0.95％w/v、约1.0％w/v、约1.05％w/v、约1.1％w/v、约1.15％w/v、约1.2％w/v之抗氧化剂或抗氧化剂组合。
[0082]
根据一些实施例，液态医药组合物进一步包含儿茶酚-o-甲基转移酶(comt)抑制剂。根据一些实施例，comt抑制剂系选自恩他卡朋(entacapone)、托卡朋(tolcapone)、奥匹卡朋(opicapone)或其任一组合。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约0.1％w/v至约5.0％w/v之间之comt抑制剂。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约0.1％w/v至约1.0％w/v之间之comt抑制剂。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约1.0％w/v至约2.0％w/v之间之comt抑制剂。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约2.0％w/v至约3.0％w/v之间之comt抑制剂。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约3.0％w/v至约4.0％w/v之间之comt抑制剂。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约4.0％w/v至约5.0％w/v之间之comt抑制剂。根据一些实施例，液态医药组合物可与comt抑制剂同时投与。
[0083]
根据一些实施例，液态医药组合物进一步包含单胺氧化酶(mao)抑制剂。mao抑制剂可为mao-a抑制剂或mao-b抑制剂。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约0.1％w/v至约5.0％w/v之间之mao抑制剂。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约0.1％w/v至约1.0％w/v之间之mao抑制剂。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约1.0％w/v至约2.0％w/v之间之mao抑制剂。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约2.0％w/v至约3.0％w/v之间之mao抑制剂。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约3.0％w/v至约4.0％w/v之间之mao抑制剂。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约4.0％w/v至约5.0％w/v之间之mao抑制剂。根据一些实施例，mao抑制剂系选自吗氯贝胺(moclobemide)、雷沙吉兰(rasagiline)、司立吉林(selegiline)、沙芬酰胺(safinamide)或其任一组合。根
据一些实施例，液态医药组合物可与mao抑制剂同时投与。
[0084]
根据一些实施例，液态医药组合物进一步包含表面活性剂。根据一些实施例，表面活性剂系选自tween-80、tween-60、tween-40、tween-20、tween-65、tween-85、span 20、span 40、span 60、span 80、span 85、聚乙二醇35蓖麻油(cremophor el)、聚氧乙烯-660-羟基硬脂酸酯(macrogol 660)或泊洛沙姆(poloxamer)188(f-68)或其任一组合。本发明之液态医药组合物可包括介于约0.1％w/v至约3.0％w/v之间之表面活性剂或两种或更多种表面活性剂之组合。根据一些实施例，液态医药组合物包含介于约0.1％w/v至约0.2％w/v之间、介于约0.2％w/v至约0.3％w/v之间、介于约0.3％w/v至约0.4％w/v之间、介于约0.4％w/v至约0.5％w/v之间、介于约0.5％w/v至约0.6％w/v之间、介于约0.6％w/v至约0.7％w/v之间、介于约0.7％w/v至约0.8％w/v之间、介于约0.8％w/v至约0.9％w/v之间、介于约0.9％w/v至约1.0％w/v之间、介于约1.0％w/v至约1.5％w/v、之间、介于约1.5％w/v至约2.0％w/v之间、介于约2.0％w/v至约2.5％w/v之间、介于约2.5％w/v至约3.0％w/v之间之表面活性剂或两种或更多种表面活性剂之组合。
[0085]
液态医药组合物可进一步包含其他医药上可接受之赋形剂，例如n-甲基吡咯啶酮(nmp)、聚乙烯基吡咯啶酮(pvp)、丙二醇、防腐剂、医药上可接受之媒剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、胺基糖、钙螯合剂、蛋白酶抑制剂或其任一组合。本发明之液态医药组合物可包含介于约5.0％w/v至约80.0％w/v之间之其他医药上可接受之赋形剂(例如溶剂(例如nmp)或缓冲剂或任一其他共溶剂)。
[0086]
根据一些实施例，本发明之液态医药组合物包含介于约5.0％w/v至约10.0％w/v之间、介于约10.0％w/v至约15.0％w/v之间、介于约15.0％w/v至约20.0％w/v之间、介于约20.0％w/v至约25.0％w/v之间、介于约25.0％w/v至约30.0％w/v之间、介于约30.0％w/v至约35.0％w/v之间、介于约35.0％w/v至约40.0％w/v之间、介于约40.0％w/v至约45.0％w/v之间、介于约45.0％w/v至约50.0％w/v之间、介于约50.0％w/v至约55.0％w/v之间、介于约55.0％w/v至约60.0％w/v之间、介于约60.0％w/v至约65.0％w/v之间、介于约65.0％w/v至约70.0％w/v之间、介于约70.0％w/v至约75.0％w/v之间、介于约75.0％w/v至约80.0％w/v之间之溶剂(例如nmp)、缓冲剂或任一其他共溶剂。
[0087]
应注意，可将本文所揭示之任何组分中之任一者或任一组合添加至本发明之液态医药组合物中。
[0088]
本发明之液态医药组合物可呈溶液、凝胶、乳霜、乳液或悬浮液之形式。根据一些实施例，可(例如)藉由冻干来干燥本发明之液态医药组合物以提供固体，其中可(例如)藉由添加溶剂(例如水)来还原经干燥材料(例如冻干物)以提供液态组合物。在还原经干燥组合物时，亦可添加抗氧化剂、表面活性剂及诸如此类。根据一些实施例，使用包含(例如)溶剂、抗氧化剂、表面活性剂及任何其他所需赋形剂之专用溶液来还原经干燥组合物。根据一些实施例，本发明之液态医药组合物系水性组合物。
[0089]
本发明之液态医药组合物可经调配用于任一适宜投与途径，例如用于非经肠投与(例如藉由浓注投与或连续投与)。本发明之液态医药组合物可经调配以供皮下、经真皮、真皮内、经黏膜、静脉内、动脉内、肌内、腹膜腔内、气管内、鞘内、十二指肠内、胸膜内、鼻内、舌下、经颊、经肠、十二指肠内、直肠、眼内或经口投与。组合物亦可经调配以供吸入或以供经由黏膜组织直接吸收。
disease)、路易氏体矢智症(lewy body dementia，lbd)、运动不能、运动迟缓及运动减少、源自脑损伤之病状(包括一氧化碳或锰中毒)、与神经学疾病或病症有关之病状(包括酒精中毒、鸦片成瘾及勃起功能障碍)。根据一些实施例，神经退化性病状及/或特征在于脑中之多巴胺含量降低之病状系帕金森氏病。
[0097]
根据一些实施例，本发明方法包含同时投与式(i)之ldaa化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合或两种或更多种ldaa化合物、其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合之任一组合与其他活性成分(例如去羧酶抑制剂(例如卡比多巴)、comt抑制剂、mao抑制剂或其任一组合)。根据一些实施例，投与ldaa化合物以及去羧酶抑制剂(例如卡比多巴)，其中ldaa化合物及去羧酶抑制剂系以单一调配物来投与。
[0098]
根据一些实施例，本发明方法包含实质上连续投与液态医药组合物。根据一些实施例，经皮下投与液态医药组合物。根据一些实施例，经由指定帮浦器件来经皮下投与液态医药组合物。
[0099]
指定帮浦之实施例可为(例如)以下中所揭示之任一帮浦实施例：us 62/529784、us 62/576362、pct/ib2018/054962、us 16/027804、us 16/027710、us 16/351072、us 16/351076、us 16/351061、usd 29/655583、usd 29/655587、usd 29/655589、usd 29/655591、usd 29/655592、usd 29/655594、usd 29/655597及us 62/851903，其全部内容皆以引用方式并入本文中。
[0100]
根据一些实施例，本发明方法包含在一个位点、两个位点或三个或更多个位点处投与液态医药组合物，其中可以任何适当(可能预定)之间隔改变位点位置。根据一些实施例，一旦经由特定位点投与，经由相同位点或该位点附近之投与可仅发生于可能预定之时间段之后。根据一些实施例，在12、24、36、48、60或72小时之后改变任一位点之位置。根据一些实施例，在4、5、6或7天之后改变位点位置。根据一些实施例，在两周、三周或四周之后改变位点位置。根据一些实施例，在需要或期望时，根据(例如)自患者接收之主观数据及/或根据(例如)自位于注射位点处或其附近之传感器接收之客观数据来改变位点位置。
[0101]
根据一些实施例，所有或至少两个位点中之投与体积及/或投与速率相同。根据其他实施例，各位点之间之投与速率及/或投与体积不同。可独立控制每一位点，或另外可彼此依赖性地控制所有位点。
[0102]
根据一些实施例，本发明方法包含在24小时过程中经皮下投与介于约1ml至约15ml之间之本发明之液态医药组合物。根据一些实施例，本发明方法包含在24小时过程中经皮下投与约1ml至约2ml、约2ml至约3ml、约3ml至约4ml、约4ml至约5ml、约5ml至约6ml、约6ml至约7ml、约7ml至约8ml、约8ml至约9ml、约9ml至约10ml、约10ml至约11ml、约11ml至约12ml、约12ml至约13ml、约13ml至约14ml、约14ml至约15ml之液态医药组合物。
[0103]
应注意，投与速率可在24小时过程中保持恒定或可在24小时过程中有所变化。举例而言，根据一些实施例，可在高活动性/日间时段中使用某一速率且在低活动性/夜间时段中使用不同速率。分别地，高活动性/日间时段可为(例如)约15、约16、约17、约18或约19小时，而低活动性/夜间时段可为约9、约8、约7、约6或约5小时。根据一些实施例，实施高活动性/日间速率约18小时，而实施低活动性/夜间速率约6小时。根据一些实施例，实施高活动性/日间速率约16小时，而实施低活动性/夜间速率约8小时。
[0104]
投与速率可介于约0.01ml/位点/小时至约1ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.01-0.02ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.02-0.03ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.03-0.04ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.04-0.05ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.05-0.06ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.06-0.07ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.07-0.08ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.08-0.09ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.09-0.1ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.1-0.15ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.15-0.2ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.2-0.25ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.25-0.3ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.3-0.35ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.35-0.4ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.4-0.45ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.45-0.5ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.5-0.55ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.55-0.6ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.6-0.65ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.65-0.7ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.7-0.75ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.75-0.8ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.8-0.85ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.85-0.9ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.9-0.95ml/位点/小时之间。根据一些实施例，投与速率介于约0.95-1.0ml/位点/小时之间。
[0105]
根据一些实施例，低活动性/夜间时段中之投与速率介于约0.01-0.15ml/位点/小时之间。根据一些实施例，低活动性/夜间时段中之投与速率介于约0.01-0.02ml/位点/小时之间。根据一些实施例，低活动性/夜间时段中之投与速率介于约0.02-0.03ml/位点/小时之间。根据一些实施例，低活动性/夜间时段中之投与速率介于约0.03-0.04ml/位点/小时之间。根据一些实施例，低活动性/夜间时段中之投与速率介于约0.04-0.05ml/位点/小时之间。根据一些实施例，低活动性/夜间时段中之投与速率介于约0.05-0.06ml/位点/小时之间。根据一些实施例，低活动性/夜间时段中之投与速率介于约0.06-0.07ml/位点/小时之间。根据一些实施例，低活动性/夜间时段中之投与速率介于约0.07-0.08ml/位点/小时之间。根据一些实施例，低活动性/夜间时段中之投与速率介于约0.08-0.09ml/位点/小时之间。根据一些实施例，低活动性/夜间时段中之投与速率介于约0.09-0.1ml/位点/小时之间。根据一些实施例，低活动性/夜间时段中之投与速率介于约0.1-0.11ml/位点/小时之间。根据一些实施例，低活动性/夜间时段中之投与速率介于约0.11-0.12ml/位点/小时之间。根据一些实施例，低活动性/夜间时段中之投与速率介于约0.12-0.13ml/位点/小时之间。根据一些实施例，低活动性/夜间时段中之投与速率介于约0.13-0.14ml/位点/小时之间。根据一些实施例，低活动性/夜间时段中之投与速率介于约0.14-0.15ml/位点/小时之间。根据一些实施例，低活动性/夜间时段中之投与速率为约0.04ml/位点/小时。
[0106]
根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.15-1.0ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.15-0.2ml/位点/小时
之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.2-0.25ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.25-0.3ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.3-0.35ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.35-0.4ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.4-0.45ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.45-0.5ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.5-0.55ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.55-0.6ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.6-0.65ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.65-0.7ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.7-0.75ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.75-0.8ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.8-0.85ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.85-0.9ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.9-0.95ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率介于约0.95-1.0ml/位点/小时之间。根据一些实施例，高活动性/日间时段中之投与速率为约0.32ml/位点/小时。
[0107]
另外应注意，投与体积及/或投与速率可在整个治疗中保持恒定，或可在不同日时段期间、不同治疗日、周或月之间及诸如此类中有所变化。根据一些实施例，独立地(例如藉由护理人)或以电子方式(例如藉由可发现于专用器件(例如手表样器件、投与帮浦及诸如此类)中之传感器)来监测患者。根据该等实施例，根据自该监测接收之数据来测定投与体积及/或速率。
[0108]
一些实施例系关于投与本发明之液态医药组合物之皮下浓注之方法。根据一些实施例，浓注包含介于约0.5ml/kg至约2.0ml/kg之间之液态医药组合物。根据一些实施例，浓注包含介于约0.5ml/kg至约0.75ml/kg之间之液态医药组合物。根据一些实施例，浓注包含介于约0.75ml/kg至约1.0ml/kg之间之液态医药组合物。根据一些实施例，浓注包含介于约1.0ml/kg至约1.25ml/kg之间之液态医药组合物。根据一些实施例，浓注包含介于约1.25ml/kg至约1.5ml/kg之间之液态医药组合物。根据一些实施例，浓注包含介于约1.5ml/kg至约1.75ml/kg之间之液态医药组合物。根据一些实施例，浓注包含介于约1.75ml/kg至约2.0ml/kg之间之液态医药组合物。根据一些实施例，浓注包含介于约0.75ml/kg至约1.25ml/kg之间之液态医药组合物。根据一些实施例，浓注包含约1.0ml/kg之液态医药组合物。
[0109]
皮下浓注可与任一可能连续皮下投与相关之任一时间点投与，例如在连续投与之前、期间或之后。
[0110]
根据一些实施例，可藉由使用一个以上帮浦、每一帮浦之一个以上注射位点及诸如此类来将投与剂量翻倍、翻三倍或更多。
[0111]
根据一些实施例，投与液态医药组合物界定时间段(例如天、周、月或年)。根据一些实施例，不断投与液态医药组合物以治疗慢性病状。
[0112]
本发明之其他实施例系关于用于治疗神经退化性病状及/或特征在于脑中之多巴
胺含量降低之病状之液态医药组合物，其中液态医药组合物包含通式(i)之左旋多巴胺基酸结合物(ldaa)：其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合，其中r系胺基酸侧链；r1及r2各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、(c
2-c6)炔基、c
3-c6环烷基、苯基、-o-c(＝o)-r'、-c(＝o)-or'、-c(＝o)-r'、-c(＝s)-r'、-o-c(＝o)-nr'r'、-o-c(＝s)-nr'r'或-o-c(＝o)-r”；r3及r4各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基、苯基或-p(＝o)(or')2；r5系选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基及苯基；r'各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、c
3-c6环烷基、苯基及经由环碳键结至氮之杂芳基；且r”系选自由以下组成之群：(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基及(c
2-c6)炔基。
[0113]
根据一些实施例，液态医药组合物系用于治疗帕金森氏病、二级帕金森症、亨廷顿氏病、帕金森样症候群、进行性核上性麻痹(psp)、多系统萎缩(msa)、肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症(als)、夏伊-德雷格症候群、肌张力障碍、阿兹海默氏病、路易氏体矢智症(lbd)、运动不能、运动迟缓及运动减少、源自脑损伤之病状(包括一氧化碳或锰中毒)、与神经学疾病或病症有关之病状(包括酒精中毒、鸦片成瘾及勃起功能障碍)。本发明之某些实施例系关于用于治疗帕金森氏病之本发明之液态医药组合物。
[0114]
用于本发明之组合物可包括任一其他材料，任一材料之量如本文关于本发明组合物之实施例所详述。另外，用于本发明之组合物之形式、ph及诸如此类可如本文关于本发明组合物之实施例所详述。另外，本发明组合物可与如本文所详述之comt抑制剂、mao抑制剂或任一其他活性成分一起使用。
[0115]
本发明之其他实施例系关于通式(iii)之左旋多巴胺基酸结合物(ldaa)：
其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合，其中r
x
系胺基酸侧链或其o-磷酸化胺基酸侧链；r1及r2各自独立地选自由以下组成之群：h、(c1-c6)烷基、(c2-c6)烯基、(c2-c6)炔基、c3-c6环烷基、苯基、-o-c(＝o)-r'、-c(＝o)-or'、-c(＝o)-r'、-c(＝s)-r'、-o-c(＝o)-nr'r'、-o-c(＝s)-nr'r'或-o-c(＝o)-r”；r3及r4各自独立地选自由以下组成之群：h、(c1-c3)烷基、c3-c6环烷基、苯基或-p(＝o)(or')2；r5系选自由以下组成之群：h、(c1-c3)烷基、c3-c6环烷基及苯基；r'各自独立地选自由以下组成之群：h、(c1-c6)烷基、(c2-c6)烯基、c3-c6环烷基、苯基及经由环碳键结至氮之杂芳基；且r"系选自由以下组成之群：(c1-c6)烷基、(c2-c6)烯基及(c2-c6)炔基。
[0116]
本发明之其他实施例系关于通式(iii)之左旋多巴胺基酸结合物(ldaa)：其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合，其中r
x
系选自由以下组成之群之胺基酸侧链：精胺酸、组胺酸、离胺酸、天门冬胺酸、麸胺酸、丝胺酸、苏胺酸、天门冬酰胺酸、麸酰胺酸、半胱胺酸、硒半胱胺酸、甘胺酸、脯胺酸、丙胺酸、缬胺酸、异白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、酪胺酸、色胺酸、鸟胺酸、羊毛硫胺酸及3,4-二羟基苯丙胺酸侧链；或其o-磷酸化胺基酸侧链；r1及r2各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、(c
2-c6)炔基、c
3-c6环烷基、苯基、-o-c(＝o)-r'、-c(＝o)-or'、-c(＝o)-r'、-c(＝s)-r'、-o-c(＝o)-nr'r'、-o-c(＝s)-nr'r'或-o-c(＝o)-r”；
r3及r4各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基、苯基或-p(＝o)(or')2；r5系选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基及苯基；r'各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、c
3-c6环烷基、苯基及经由环碳键结至氮之杂芳基；且r”系选自由以下组成之群：(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基及(c
2-c6)炔基。
[0117]
举例而言，在本文所阐述之实施例中，r
x
中之胺基酸侧链可为：
(其中r
x
亦与化合物之肽键之n形成键)；
[0118]
根据通式(iii)之一些实施例，r
x
系选自由以下组成之群之胺基酸侧链：精胺酸、离胺酸、丝胺酸、甘胺酸、丙胺酸、缬胺酸、苯丙胺酸、酪胺酸、鸟胺酸及3,4-二羟基苯丙胺酸；或其o-磷酸化胺基酸侧链。
[0119]
根据通式(iii)之一些实施例，r1、r2及r5中之每一者系h；r3及r4独立地系h或-p(＝o)(or')2；且r'系h。
[0120]
根据通式(iii)之较佳实施例，r
x
系选自由以下组成之群之胺基酸侧链：精胺酸、离胺酸、丝胺酸、甘胺酸、丙胺酸、缬胺酸、苯丙胺酸、酪胺酸、鸟胺酸及3,4-二羟基苯丙胺酸；或其o-磷酸化胺基酸侧链；r1、r2及r5中之每一者系h；r3及r4独立地系h或-p(＝o)(or')2；且r'系h。
[0121]
较佳实施例之实例列示于下文中：表1
[0122]
本发明之其他实施例系关于选自由以下组成之群之左旋多巴胺基酸结合物(ldaa)：(2s)-2-胺基-3-(3-羟基-4-膦酰基氧基苯基)丙酰胺；2-[[(2s)-2-胺基-3-(3-羟基-4-膦酰基氧基苯基)丙酰基]胺基]乙磺酸；(2s)-2-胺基-6-[[(2s)-2-胺基-3-(3-羟基-4-膦酰基氧基苯基)丙酰基]胺基]己酸；或(2s)-2-胺基-5-[[(2s)-2-胺基-3-(3-羟基-4-膦酰基氧基苯基)丙酰基]胺基]戊酸。
[0123]
本发明实施例系关于通式(ii-1)或(ii-2)之左旋多巴-羊毛硫胺酸结合物(ld-la)：
其对映异构体、非对映异构体、外消旋物、离子、两性离子、医药上可接受之盐或其任一组合，其中：r1及r2各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、(c
2-c6)炔基、c
3-c6环烷基、苯基、-o-c(＝o)-r'、-c(＝o)-or'、-c(＝o)-r'、-c(＝s)-r'、-o-c(＝o)-nr'r'、-o-c(＝s)-nr'r'或-o-c(＝o)-r”；r3及r4各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基、苯基或-p(＝o)(or')2；r5系选自由以下组成之群：h、(c
1-c3)烷基、c
3-c6环烷基及苯基；r'各自独立地选自由以下组成之群：h、(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、c
3-c6环烷基、苯基及经由环碳键结至氮之杂芳基；且r”系选自由以下组成之群：(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基及(c
2-c6)炔基。
[0124]
根据一些实施例，r1、r2、r3、r4及r5中之每一者系h。
[0125]
由通式[iii]代表之本发明化合物可(例如)如下所述来产生：合成方法(a)
其中各符号与上文具有相同含义。
[0126]
在本发明之目标化合物[iii]中，可(例如)如下所述来产生由通式[iiia]代表之化合物。对化合物[a]及化合物[b]实施缩合反应以获得化合物[c]，且然后对化合物[c]实施亚磷酸酯酯化及氧化或实施磷酸酯酯化，且由此获得化合物[f]。另一方面，亦可藉由缩合化合物[e]及化合物[b]来获得化合物[f]。可藉由对由此获得之化合物[f]实施去保护来产生化合物[iiia]。步骤1：
[0127]
可根据常用方法于适宜溶剂中在存在或不存在碱下、在存在或不存在缩合剂下且在存在或不存在活化剂下来缩合化合物[a]与化合物[b]或其盐。对于溶剂而言，可使用不影响本发明反应之任一溶剂。溶剂之实例包括：醚，例如四氢呋喃及1,4-二恶烷；酰胺，例如n,n-二甲基甲酰胺及n-甲基吡咯啶酮；腈，例如乙腈；卤化脂肪族烃，例如氯仿及二氯甲烷；芳香族烃，例如甲苯；或该等化合物之混合物。碱之实例包括三乙胺、二异丙基乙基胺、二氮杂双环十一烯及诸如此类。缩合剂之实例包括六氟磷酸o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n',n'-四甲基脲鎓(hatu)、1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐、1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐及诸如此类。活化剂之实例包括1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)、1-羟基苯并三唑(hobt)、4-二甲基胺基吡啶及诸如此类。
[0128]
基于相对于化合物[a]之莫耳比率，拟使用之化合物[b]之量可为1.0-5.0当量、较佳地1.0-2.0当量。
[0129]
基于相对于化合物[a]之莫耳比率，拟使用之碱之量可为1.0-5.0当量、较佳地1.0-2.0当量。
[0130]
基于相对于化合物[a]之莫耳比率，拟使用之缩合剂之量可为1.0-5.0当量、较佳地1.0-2.5当量。
[0131]
基于相对于化合物[a]之莫耳比率，拟使用之活化剂之量可为1.0-5.0当量、较佳地1.0-2.5当量。
[0132]
可在室温-加热下(例如在室温-80℃下、较佳地在室温-50℃下)实施本发明反应。步骤2
[0133]
可根据常用方法于适宜溶剂中在活化剂存在下来缩合化合物[c]及亚磷酸酯酯化剂。对于溶剂而言，可使用不影响本发明反应之任一溶剂。溶剂之实例包括：腈，例如乙腈；卤化脂肪族烃，例如氯仿及二氯甲烷；或该等化合物之混合物。亚磷酸酯酯化剂之一实例系二苄基n,n-二异丙基亚磷酰胺。活化剂之一实例系1-四唑。
[0134]
基于相对于化合物[c]之莫耳比率，拟使用之亚磷酸酯酯化剂之量可为1.0-5.0当量、较佳地1.5-3.0当量。
[0135]
基于相对于化合物[c]之莫耳比率，拟使用之活化剂之量可为1.0-5.0当量、较佳地1.5-3.0当量。
[0136]
可在冰冷却-加热下(例如在0℃-80℃下、较佳地在室温-50℃下)实施本发明反应。步骤3
[0137]
可根据常用方法于适宜溶剂中在氧化剂存在下来氧化化合物[d]。对于溶剂而言，可使用不影响本发明反应之任一溶剂。溶剂之实例包括：腈，例如乙腈；卤化脂肪族烃，例如氯仿及二氯甲烷；或该等化合物之混合物。氧化剂之实例包括过氧化氢溶液、第三丁基过氧化氢、间氯过苯甲酸及诸如此类。
[0138]
基于相对于化合物[d]之莫耳比率，拟使用之氧化剂之量可为1.0-5.0当量、较佳地1.5-3.0当量。
[0139]
可在冰冷却-室温下、较佳地在冰冷却下实施本发明反应。步骤4
[0140]
可根据常用方法于适宜溶剂中在存在或不存在碱下来缩合化合物[c]及磷酸酯酯化剂。对于溶剂而言，可使用不影响本发明反应之任一溶剂。溶剂之实例包括：卤化脂肪族烃，例如氯仿及二氯甲烷；或该等化合物之混合物。磷酸酯酯化剂之实例包括二苄基磷酰氯、焦磷酸四苄基酯及诸如此类。碱之实例包括：碱金属醇盐，例如第三丁醇钠及第三丁醇钾；烷基胺，例如三乙胺及二异丙基乙基胺；及诸如此类。
[0141]
基于相对于化合物[c]之莫耳比率，拟使用之磷酸酯酯化剂之量可为1.0-5.0当量、较佳地1.5-3.0当量。
[0142]
基于相对于化合物[c]之莫耳比率，拟使用之碱之量可为1.0-5.0当量、较佳地1.5-3.0当量。
[0143]
可在室温-加热下(例如在室温-100℃下、较佳地在室温-70℃下)实施本发明反应。步骤5
[0144]
可根据常用方法于适宜溶剂中在存在或不存在碱下、在存在或不存在缩合剂下且在存在或不存在活化剂下来缩合化合物[e]与化合物[b]或其盐。对于溶剂而言，可使用不影响本发明反应之任一溶剂。溶剂之实例包括：醚，例如四氢呋喃及1,4-二恶烷；酰胺，例如n,n-二甲基甲酰胺及n-甲基吡咯啶酮；腈，例如乙腈；卤化脂肪族烃，例如氯仿及二氯甲烷；芳香族烃，例如甲苯；或该等化合物之混合物。碱之实例包括三乙胺、二异丙基乙基胺、二氮杂双环十一烯及诸如此类。缩合剂之实例包括六氟磷酸o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n',n'-四甲基脲鎓(hatu)、1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐、1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐及诸如此类。活化剂之实例包括1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)、1-羟基苯并三唑(hobt)、4-二甲基胺基吡啶及诸如此类。
[0145]
基于相对于化合物[e]之莫耳比率，拟使用之化合物[b]之量可为1.0-5.0当量、较佳地1.0-2.0当量。
[0146]
基于相对于化合物[e]之莫耳比率，拟使用之碱之量可为1.0-5.0当量、较佳地
1.0-2.0当量。
[0147]
基于相对于化合物[e]之莫耳比率，拟使用之缩合剂之量可为1.0-5.0当量、较佳地1.0-2.5当量。
[0148]
基于相对于化合物[e]之莫耳比率，拟使用之活化剂之量可为1.0-5.0当量、较佳地1.0-2.5当量。
[0149]
可在室温-加热下(例如在室温-80℃下、较佳地在室温-50℃下)实施本发明反应。步骤6
[0150]
可根据常用方法藉由使用触媒于适宜溶剂中在氢气氛中进行处理来对化合物[f]实施去保护。
[0151]
对于溶剂而言，可使用不影响本发明反应之任一溶剂。溶剂之实例包括：醚，例如四氢呋喃及1,4-二恶烷；醇，例如甲醇、乙醇及异丙醇；水；或该等化合物之混合物。
[0152]
触媒之实例包括钯碳及诸如此类。
[0153]
可在室温-加热下(例如在室温-80℃下、较佳地在室温-50℃下)实施本发明反应。合成方法(b)
[0154]
其中rx'系胺基酸侧链(例如丝胺酸或酪胺酸)且各符号与上文具有相同含义。
[0155]
在本发明之目标化合物[iii]中，可(例如)如下所述来产生由通式[iiib]代表之化合物。对化合物[g]及化合物[b-1]实施缩合反应以获得化合物[h]。对化合物[h]实施亚磷酸酯酯化以获得化合物[i]，然后实施氧化以获得化合物[j]，或对化合物[h]实施磷酸酯酯化以获得化合物[j]。然后，可藉由对化合物[j]实施去保护来产生化合物[iiib]。步骤1
[0156]
可以与合成方法(a)中化合物[a]及化合物[b]之反应类似之方式来缩合化合物[g]或其盐与化合物[b-1]或其盐。步骤2
[0157]
可以与合成方法(a)中化合物[c]及亚磷酸酯酯化剂之反应类似之方式来缩合化合物[h]及亚磷酸酯酯化剂。步骤3
[0158]
可以与合成方法(a)中化合物[d]之反应类似之方式来氧化化合物[i]。步骤4
[0159]
可以与合成方法(a)中化合物[c]及磷酸酯酯化剂之反应类似之方式来缩合化合物[h]及磷酸酯酯化剂。步骤5
[0160]
可以与合成方法(a)中化合物[f]之反应类似之方式来对化合物[j]实施去保护。
[0161]
除非明确陈述，否则本文所阐述之方法实施例并不限于特定顺序或序列。另外，一些所阐述方法实施例或其要素可同时、在相同时间点或同时发生或并行实施。
[0162]
应了解，本发明之某些特征亦可组合提供于单一实施例中。与之相反，为简便起见在单一实施例背景中阐述之本发明之各个要素亦可单独或以任一适宜子组合或适宜地以本发明之任一其他所阐述实施例来提供。另外，各个实施例之背景中所阐述之某些特征并不视为该等实施例之基本特征，除非实施例在无该等要素下无效。
[0163]
如上文所描述及如下文申请专利范围部分中所主张之本发明之各个实施例及态样可由下列实例支持；然而，其并不限于该等实例。实例实例1-左旋多巴胺基酸(ldaa)之制备
[0164]
制备10种呈三氟乙酸(tfa)盐形式之ldaa结合物以供初始筛选。左旋多巴精胺酸tfa盐(ld-arg tfa盐)之制备左旋多巴甘胺酸tfa盐(ld-gly tfa盐)之制备
左旋多巴离胺酸tfa盐(ld-lys tfa盐)之制备左旋多巴天门冬胺酸(ld-asp)之制备
左旋多巴麸胺酸tfa盐(ld-glu tfa盐)之制备左旋多巴麸酰胺酸tfa盐(ld-gln tfa盐)之制备
左旋多巴天门冬酰胺酸tfa盐(ld-asn tfa盐)之制备左旋多巴酪胺酸tfa盐(ld-tyr tfa盐)之制备
左旋多巴色胺酸(ld-trp)之制备左旋多巴-羊毛硫胺酸tfa盐(ld-la tfa盐)之制备步骤1：卤化步骤2：水解
步骤3：去保护步骤4：偶合步骤5：与经保护左旋多巴偶合步骤6：去保护(fmoc去除)及非对映异构体分离步骤7a：ld去保护及左旋多巴羊毛硫胺酸峰1tfa盐(ld-la 1tfa盐)之分离步骤7b：ld去保护及左旋多巴羊毛硫胺酸峰2tfa盐(ld-la 2tfa盐)之分离
[0165]
应注意，在本文件通篇中，尽管ld-la 1(亦称为左旋多巴羊毛硫胺酸峰1或左旋多巴羊毛硫胺酸1)显示为(s)(s)(r)异构体且ld-la2(亦称为左旋多巴羊毛硫胺酸峰1或左旋多巴羊毛硫胺酸1)显示为(s)(r)(r)异构体，但两种所制备异构体并未完全鉴别且由此异构体可能与本文件通篇所显示及绘示者相反。实例2-左旋多巴胺基酸(ldaa)游离碱形式之制备l-dopa之cbz保护
[0166]
使用cbz氯化物及naoh(作为碱)实施合成。将l-dopa(200g,1.014mol)在氮下悬浮于水(600ml)中并冷却至0℃。在0℃下添加naoh(81.3g,2.033mol)于水(600ml)中之混合物。在0℃下经1h过程添加于二恶烷(800ml)中之cbz氯化物(211.4g,1.239mol)。将混合物升温至室温。在大约1小时之后，观察到73％之转化率。添加另一部分之于水(60ml)中之naoh(4.9g,0.123mol)及于二恶烷(80ml)中之cbz氯化物(20.8g,0.122mol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。观察到83％之转化率。添加另一部分之于水(50ml)中之naoh(8.1g,0.203mol)及于二恶烷(50ml)中之cbz氯化物(35g,0.205mol)。在获得94％之转化率时(在添加之后1.5h)，使用3m naoh将ph调节至10，且使用mtbe(1l)洗涤混合物。使用6m hcl将水相之ph调节至2，且使用mtbe(2
×
1l)萃取水相。使用水(1l)及25％nacl水溶液(1l)洗涤合并之有机相。藉由硫酸钠干燥有机相，过滤，在减压下蒸发并在真空中干燥以得到448.3g(135％)黏性、褐色物质(纯度(280nm)为82.5％)。cbz-l-dopa-(cbz/bn)-lys之去保护
[0167]
将cbz-l-dopa-(cbz/bn)-lys(93.4g)溶于甲醇(4.2l)中。将气氛换成氮(3次)，然后添加10％pd/c(18.8g)且再次将气氛换成氮(2次)，且随后换成氢(3次)。将反应器抽真空/使用氢填充。在4.5h之后，藉由hplc分析估计，反应已完成。经由过滤反应混合物并在减压下于40℃水浴温度下蒸发。化合物在蒸发期间发生沈淀。在剩余大约400ml时，过滤悬浮液，且使用甲醇(50ml)洗涤滤饼。在25℃下于真空中干燥固体过夜以提供33.1g(75％)灰白色固体形式之ld-lys游离碱(纯度为99.0％)。实例2.2-ld-tyr之游离碱形式之制备与h-tyr-obzl偶合
[0168]
在0℃下，经10min过程将edc-cl(46.3g,242mmol)逐份添加至bno-tyr(64.9g,239mmol)、hobt(36.8g,88w/w％,240mmol)及cbz-l-dopa(363.1g，于dmf中之20.1w/w％溶液，220mmol)于dmf(863.2g,0.9l)中之溶液中。将反应液在0℃下搅拌4小时，然后经30min过程添加水(1.7kg)，且将反应混合物加热至环境温度。将etoac(2.6kg,2.8l)装填至反应器中并分离各相。使用水将有机相洗涤三次(1.5l、1.4l及1.4l)。将(450g)添加至粗制有机相中，且将混合物浓缩至干燥。使用急速管柱层析(硅胶管柱，3.2kg，充填1:1
(v/v)etoac/二氯甲烷)藉由将混合物加载于管柱上并使用1:1(v/v)etoac/二氯甲烷洗脱来纯化粗制残余物。在减压下于温度为45℃之水浴中浓缩所选部分(12l)。将所选部分进一步在真空中干燥过夜。分离出浅褐色固体形式之l-dopa-bnotyr(44.7g,35％)且纯度为96.4％。使用于ch2cl2中之20％meoh(10l)冲洗管柱且收集所有含有l-dopa-bn-otyr之部分，并在减压下于温度为45℃之水浴中浓缩。藉由将混合物加热至75℃来使粗制残余物(60.2g)溶于2-proh(432.1g,550ml)中。热过滤溶液且冷却至环境温度，并搅拌过夜以得到沈淀物。过滤悬浮液，且使用2-proh(166g,211ml)洗涤滤饼并在真空中于30℃下干燥过夜以产生白色固体形式之cbz-l-dopa-tyr(obn)(34.9g,27％，纯度为95.1％)。cbz-l-dopa-tyr(obn)之去保护
[0169]
使用氮将l-dopa-bnotyr(60.4g,103mmol)于meoh(2051g,2.6l)中之溶液吹扫三次(真空(《250毫巴)，随后填充n2)。向反应器中添加10％pd/c(12.0g)，随后使用氢吹扫(真空(》250毫巴)，随后填充h2)。在1小时20分钟之后将反应器抽真空/使用h2填充并再放置30min，然后抽真空/使用n2填充并经由过滤。使用meoh(418.9g,529ml)洗涤滤饼，且在减压下浓缩合并之滤液。在大约500ml体积下，经由0.45μm孔隙过滤器过滤溶液并将滤液在减压下浓缩至干燥。将油性固体在真空下干燥过夜以产生灰白色固体形式之ld-tyr游离碱(36.5g,98％，纯度为95.4％)。实例3-ld-lys hcl、ld-tyr hcl及ld-arg hcl盐之合成实例3.1-ld-arg hcl盐之合成-1号方法与h-精胺酸(no2)-obn偶合
[0170]
将cbz-l-dopa(342.9g，于dmf中之20.1w/w％溶液，208mmol)溶于dmf(690ml)中。添加hobt.h2o(35.2g,228mmol(88％w/w))及h-arg(no2)obn对甲苯磺酸盐(110.0g,228mmol)。将溶液冷却至0℃。添加三乙胺(23.2g,228mmol)，且然后添加edc。逐份添加hcl(43.7g,228mmol)，同时将温度保持于0℃。将偶合混合物搅拌2.5h且然后使用水(1400ml)骤冷。使用etoac将混合物萃取三次(1400ml及2
×
700ml)。合并有机相。
[0171]
在减压及40℃水浴温度下蒸发有机相。将残余物溶于8vol经蒸馏thf中，添加8体积水，从而产生乳液。将乳液施加至反相管柱(26当量phenomenex sepra c-18-t(50μm,)，充填thf且使用700ml20％经蒸馏thf/水条件化)中。使用40％经蒸馏thf/水洗脱管柱。在减压下蒸发纯部分直至主要剩余水为止。冷却悬浮液并过滤。干燥滤饼以提供固体(259g)，不干燥固体；而系将其置于冷冻器中直至进一步处理。cbz-l-dopa-arg(no2)-(obn)
[0172]
将cbz-l-dopa-arg(no2)-(obn)(230.4g湿润，大约68.6g干燥，110mmol)悬浮于甲醇(6.45l)及水(1.29l)中，且添加hcl(36％，水溶液，43ml)。将反应烧瓶抽真空至250毫巴，且将气氛换成氮三次。将混合物加热至40℃。
[0173]
添加10％pd/c(14.0g)且将气氛换成氮(3次)，且然后换成氢(3次)。使反应混合物避光。将气氛换成氢。在3h之后，将气氛换成氮(3次)。经由过滤悬浮液，且使用20％水/甲醇(600ml)洗涤滤饼。使用离子交换树脂(dowex 1x8氯化物形式，使用1m naoh预活化并使用水洗涤至ph 7)将滤液之ph调节至ph 6。分4份调节ph，过滤每一份并使用20％水/甲醇(250ml)洗涤。在减压及50℃水浴温度下将滤液蒸发至体积为大约500ml。使用活性
碳(5.0g)将残余物处理40分钟。藉由过滤悬浮液，使用水(150ml)洗涤滤饼，且将合并之滤液及洗涤液在减压及50℃水浴温度下浓缩至干燥。在真空中将固体残余物干燥过夜以提供48.1g浅褐色固体(纯度为95.6％)。所制备ld-arg hcl盐包含一当量之hcl。实例3.2-ld-arg hcl盐之合成-2号方法n-boc-l-dopa之合成(2s)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-(3,4-二羟基苯基)丙酸2,5-二侧氧基吡咯啶-1-基酯之合成(2s)-2-[(2s)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-(3,4-二羟基苯基)丙烷酰胺基]-5-亚胺基甲酰胺基戊酸之合成ld-arg hcl之合成实例3.2-ld-tyr hcl盐之合成(2s)-2-[(2s)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-(3,4-二羟基苯基)丙烷酰胺基]-3-(4-羟基苯基)丙酸苄基酯之合成
(2s)-2-[(2s)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-(3,4-二羟基苯基)丙烷酰胺基]3-(4-羟基苯基)丙酸之合成ld-tyr hcl之合成实例3.3-ld-lys hcl盐之合成(2s)-6-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-[(2s)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-(3,4-二羟基苯基)丙烷酰胺基]己酸苄基酯之合成(2s)-6-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-[(2s)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-(3,4-二羟基苯基)丙烷酰胺基]己酸之合成
ld-lys hcl之合成实例4(2s)-6-胺基-2-[[(2s)-2-胺基-3-(3-羟基-4-膦酰基氧基苯基)丙酰基]胺基]己酸之产生实例5-18：
[0174]
分别以与实例4中类似之方式来处理相应起始化合物以获得下文表2中所展示之化合物。表2
实例19-(2s)-2-[[(2s)-2-胺基-3-(3-羟基-4-膦酰基氧基苯基)丙酰基]胺基]-3-(3-羟基-4-膦酰基氧基苯基)丙酸之产生
[0175]
(1)将二苄基n,n-二异丙基亚磷酰胺(615ul)及1h-四唑(115mg)于乙腈(3ml)中之
悬浮液添加至(2s)-3-(4-羟基-3-苯基甲氧基苯基)-2-[[(2s)-3-(4-羟基-3-苯基甲氧基苯基)-2-(苯基甲氧基羰基胺基)丙酰基]胺基]丙酸苄基酯(430mg)于二氯甲烷(9ml)中之溶液中，且将混合物在室温下搅拌13.5小时。添加二苄基n,n-二异丙基亚磷酰胺(205ul)及1h-四唑(35mg)，且将混合物在室温下搅拌1小时。冰冷却反应混合物，添加第三丁基过氧化氢水溶液(70％)(0.39ml)，且将混合物在室温下搅拌1小时。使用氯仿稀释反应混合物，使用饱和碳酸氢钠水溶液及饱和氯化钠溶液洗涤有机层，且藉由硫酸钠干燥，且然后在减压下蒸馏掉溶剂。藉由硅胶管柱层析(溶剂：己烷/(乙酸乙酯)＝60/40-35/65)纯化所获得残余物，且由此获得(2s)-3-[4-双(苯基甲氧基)磷酰基氧基-3-苯基甲氧基苯基]-2-[[(2s)-3-[4-双(苯基甲氧基)磷酰基氧基-3-苯基甲氧基苯基]-2-(苯基甲氧基羰基胺基)丙酰基]胺基]丙酸苄基酯之粗产物(565mg)。
[0176]
(2)将(2s)-3-[4-双(苯基甲氧基)磷酰基氧基-3-苯基甲氧基苯基]-2-[[(2s)-3-[4-双(苯基甲氧基)磷酰基氧基-3-苯基甲氧基苯基]-2-(苯基甲氧基羰基胺基)丙酰基]胺基]丙酸苄基酯(290mg)之粗产物溶于四氢呋喃(4ml)、乙酸(1ml)及水(0.5ml)之混合溶剂中，且添加钯/碳(wet)(50mg)，且将混合物在氢气氛及室温下搅拌25.5小时。添加水(10ml)，且将混合物在氢气氛及室温下搅拌1.5小时。经由膜过滤器(乙酸纤维素)过滤反应混合物以去除不溶性物质。使用水(20ml)洗涤不溶性物质。在冷冻-干燥之后，获得标题化合物(112mg)。ms(esi)；m/z 537.3[m+h]+实例20及21
[0177]
分别以与实例4中类似之方式来处理相应起始化合物以获得下文表3中所展示之化合物。表3参考实例1-(2s)-2-[[(2s)-3-[4-双(苯基甲氧基)磷酰基氧基-3-苯基甲氧基苯基]-2-(苯基甲氧基羰基胺基)丙酰基]胺基]-6-(苯基甲氧基羰基胺基)己酸苄基酯之产生
[0178]
在冰冷却下，将二苄基n,n-二异丙基亚磷酰胺(3.28ml)及1h-四唑(0.62g)添加至(2s)-2-[[(2s)-3-(4-羟基-3-苯基甲氧基苯基)-2-(苯基甲氧基羰基胺基)丙酰基]胺基]-6-(苯基甲氧基羰基胺基)己酸苄基酯(4.57g)于二氯甲烷(45ml)及乙腈(18ml)中之悬浮液中，且将混合物在室温下搅拌1小时。冰冷却反应混合物，添加第三丁基过氧化氢水溶液(70％)(1.2ml)，且将混合物在室温下搅拌19小时。在减压下蒸馏掉反应混合物之溶剂，添加饱和碳酸氢钠水溶液及水，且使用乙酸乙酯实施萃取。在减压下蒸馏掉有机层。藉由硅胶管柱层析(溶剂：己烷/(乙酸乙酯)＝67/33-40/60)纯化所获得残余物，且由此获得白色粉末形式之标题化合物(5.38g,85％)。ms(esi)；m/z 1034.4[m+h]+参考实例2-13
[0179]
分别以与参考实例1中类似之方式来处理相应起始化合物以获得下文表4中所展示之化合物。表4
参考实例2
’‑
(2s)-2-[[(2s)-3-[4-双(苯基甲氧基)磷酰基氧基-3-苯基甲氧基苯基]-2-(苯基甲氧基羰基胺基)丙酰基]胺基]-3-(4-苯基甲氧基苯基)丙酸苄基酯之产生
[0180]
将苄基(2s)-2-胺基-3-(4-苄基氧基苯基)丙酸盐酸盐(277mg)、n,n-二异丙基乙基胺(0.35ml)、1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(wsci)(115mg)及1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)(82mg)添加至(2s)-3-[4-双(苯基甲氧基)磷酰基氧基-3-苯基甲氧基苯基]-2-(苯基甲氧基羰基胺基)丙酸(352mg)及n,n-二甲基甲酰胺(4ml)之混合物中，且将混合物在室温下搅拌16小时。使用水及氯化钠饱和溶液洗涤有机层，并藉由硫酸钠干燥，且在减压下蒸馏掉溶剂。藉由硅胶管柱层析(溶剂：己烷/(乙酸乙酯)＝75/25-45/55)纯化所获得残余物，且由此获得白色粉末形式之标题化合物(250mg,52％)。ms(esi)；m/z 1025.6[m+h]+参考实例14-29
[0181]
分别以与参考实例2’中类似之方式来处理相应起始化合物以获得下文表5中所展示之化合物。表5
参考实例30-化合物[a]之产生
[0182]
(1)将化合物1(8.0g,74wt％)溶于二氯甲烷(75ml)中，并在冰冷却下添加n-苄氧羰基-2-膦酰基甘胺酸三甲基(7.98g)及1,1,3,3-四甲基胍(3.6ml)，且将混合物在室温下
搅拌16.5小时。向反应混合物中添加饱和碳酸氢钠水溶液，且使用氯仿实施萃取。藉由硫酸钠干燥有机层，并过滤掉不溶性物质，且然后在减压下蒸馏掉溶剂。藉由硅胶管柱层析(溶剂：己烷/(乙酸乙酯)＝85/15-65/35)纯化所获得残余物，且由此获得白色粉末形式之化合物2(8.58g,82％)。ms(esi)；m/z 476.4[m+h]+
[0183]
(2)将化合物2(5.90g,92wt％)溶于四氢呋喃(80ml)中，并添加(+)-四氟硼酸1,2-双((2s,5s)-2,5-二乙基正膦基)苯(1,5-环辛二烯)铑(i)((s,s)-et-duphos-rh)(295mg)，且将混合物在室温及加压氢气氛(600kpa)下搅拌4小时。在减压下蒸馏掉反应混合物之溶剂。藉由硅胶管柱层析(溶剂：己烷/(乙酸乙酯)＝85/15-55/45)纯化所获得残余物，且由此获得白色粉末形式之化合物3(5.71g,78％)。ms(esi)；m/z 478.4[m+h]+
[0184]
(3)将化合物3(1.73g)溶于四氢呋喃(18ml)、甲醇(9ml)及蒸馏水(7ml)中，并添加单水合氢氧化锂(608mg)，且将将混合物在室温下搅拌30min。将1m盐酸(30ml)添加至反应混合物中，并使用氯仿(50ml)实施萃取。藉由硫酸钠干燥有机层，并过滤掉不溶性物质，且然后在减压下蒸馏掉溶剂，并获得白色粉末形式之化合物[a](1.69g,100％)。ms(esi)；m/z 422.4[m+h]+参考实例31-化合物[e]之产生
[0185]
(1)将化合物1(r＝me,2.30g)溶于四氢呋喃(36ml)及甲醇(4ml)之混合溶剂中，并添加2m氢氧化锂水溶液(4.0ml)，且将混合物在室温下搅拌10min。冰冷却反应混合物，添加0.5m硫酸氢钾水溶液(20ml)，并使用氯仿实施萃取。使用氯化钠饱和溶液洗涤有机层并藉由硫酸钠干燥，且过滤掉不溶性物质，且然后在减压下蒸馏掉溶剂。将残余物悬浮于甲基第三丁基醚中，且藉由过滤收集所沈淀固体并在减压下干燥，且由此获得白色粉末形式之化合物[e](2.30g,100％)。ms(esi)；m/z 682.6[m+h]+
[0186]
(1)’将化合物1(r＝bn,0.57g)溶于甲醇(2ml)中，并添加1m氢氧化钠水溶液(0.37ml)，且将混合物在室温下搅拌2小时。藉由添加1m盐酸来酸化反应混合物，且然后使用乙酸乙酯实施萃取。使用水及氯化钠饱和溶液依次洗涤有机层，并藉由硫酸钠干燥，且过滤掉不溶性物质，并在减压下蒸馏掉溶剂，且由此获得白色粉末形式之化合物[e](0.53g,104％)。ms(esi)；m/z 638.1[m+h-co2]+参考实例32-化合物[b-1]之产生
[0187]
(1)在5℃及氮气氛下，将碘(153mg)添加至活性锌(923mg)于n,n-二甲基甲酰胺(7ml)中之悬浮液中。将温度升至20℃且将混合物搅拌10分钟。将反应混合物再次冷却至6℃，且在20℃或更低温度下逐份添加n-(第三丁氧基羰基)-3-碘-l-丙胺酸苄基酯(1890mg)，且将混合物在20℃下搅拌30分钟，且由此获得化合物2之溶液。
[0188]
依序添加参(二亚苄基丙酮)二钯(0)-氯仿加合物(31mg)、2-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基联苯二环己基(2',6'-二甲氧基-[1,1'-联苯]-2-基)膦(30mg)及化合物1(1309mg)，且将混合物在室温下搅拌16小时。将己烷/(乙酸乙酯)(1:1)添加至反应混合物中，且藉由硅藻土过滤去除不溶性物质。使用己烷/(乙酸乙酯)(1:1)及水洗涤不溶性物质，且依次使用饱和氯化铵水溶液及饱和氯化钠溶液洗涤滤液。藉由无水硫酸镁干燥有机层，并过滤掉不溶性物质，且然后在减压下蒸馏掉溶剂。藉由硅胶管柱层析(溶剂：己烷/(乙酸乙酯)＝80/20-67/33)纯化所获得残余物，且由此获得白色粉末形式之化合物3(1733mg,90％)。ms(esi)；m/z 378.2[m+h-boc]+
[0189]
(2)在3℃下，将4m氯化氢二恶烷溶液(6ml)添加至化合物3(1.625g)于1,4-二恶烷(15ml)中之溶液中，且将混合物在室温下搅拌1小时。添加4m氯化氢二恶烷溶液(6ml)，且将混合物搅拌17小时。在减压下浓缩反应混合物直至其体积为约1/10为止。将残余物悬浮于乙酸乙酯中，且藉由过滤收集所沈淀固体并在减压下干燥，且由此获得白色粉末形式之化合物[b-1](1271mg,90％)。ms(esi)；m/z 378.4[m+h]+实验实例1-溶解度研究实验实例1.1-ld-tyr tfa盐之溶解度研究：
[0190]
将ld-tyr tfa盐(根据实例1制得，且包含1当量之tfa)添加至溶剂(如下文表6中所详述)中，且藉由添加naoh来中和，如下文所指定。在观察到最大溶解度(亦即，添加至溶液中之额外ld-tyr tfa盐不溶解)时，过滤溶液且然后转移至预先称重并使用氮冲洗之瓶中。藉由添加溶剂或去除任一残余溶液来将瓶中之溶液体积调节至5ml，然后密闭瓶且置于25℃下以供稳定性观察。应注意，在整个实例4中，下文各表中之浓度系考虑所添加溶剂或所去除溶液之量所计算，在去除溶液之情形下，考虑5ml+(去除量)作为溶液体积来实施计算。另外应注意，在本文件通篇中，除非另外提及，否则使用手动目测检查bosch装置mih dx在1.75倍放大率下来量测稳定性。表6-ld-tyr tfa盐溶解度结果a溶剂可包括如表格、此处及全文中所列示之其他赋形剂及api(例如cd)b稳定过夜＝在室温下稳定至少12小时(此处及全文)c所有cd溶液皆系根据实例5、此处及全文所详述之程序来制备
[0191]
如表6中所呈现，ld-tyr tfa盐在水中之溶解度为210mg/ml；然而，ph较低。在使用naoh将ph升至约7时，ld-tyr tfa盐发生沈淀。添加共溶剂(例如nmp或dmso)使得ph升至生理上可接受之值。实验实例1.2-ld-tyr游离碱之溶解度研究
[0192]
将ld-tyr游离碱(根据实例2制得)添加至溶剂(如下文表7中所详述)中，且藉由添加naoh来予以中和。在观察到最大溶解度时，过滤溶液且然后转移至预先称重并使用氮冲洗之瓶中。将瓶中之溶液体积调节至5ml，然后密闭瓶且置于25℃下以供稳定性观察。表7-ld-tyr游离碱溶解度结果
*在将ld-tyr游离碱混合至水中之后，向水中添加hcl以溶解在使用一当量hcl时不溶解之ld-tyr游离碱；**过夜沈淀＝在室温下于12小时内沈淀
[0193]
如表7中所呈现，ld-tyr游离碱在水中之溶解度小于20mg/ml，且即使在低ph下亦如此。然而，藉由添加naoh来将ph升至约7可引起沈淀。如表7中所进一步呈现，添加酸(例如盐酸或甲磺酸盐)可在生理学ph值下提供较高溶解度；然而，与其他分子相比，溶解度仍相对有限，如本文中所详述。使用其他溶剂(例如nmp及dmso)可提供较高溶解度。与之相比，添加cd溶液会降低溶解度。实验实例1.3-ld-tyr hcl盐之溶解度研究
[0194]
将ld-tyr hcl盐(根据实例3制得)添加至溶剂(如下文表8中所详述)中，且藉由添加naoh来予以中和。在观察到最大溶解度时，过滤溶液且然后转移至预先称重并使用氮冲洗之瓶中。将瓶中之溶液体积调节至5ml，然后密闭瓶且置于25℃下以供稳定性观察。表8*稳定＝在室温下稳定12小时以上
[0195]
如表8中所展示，ld-tyr hcl盐之稳定性相对高于游离碱及/或tfa盐。此处应注意，向游离碱(如实验实例1.2中所呈现)添加hcl将假设原位提供ld-tyr hcl盐，且由此预计其溶解度至少类似于溶于(例如)水或任一其他溶剂中时之ld-tyr hcl固体盐。然而，在比较表7及8中所呈现之结果时，显而易见，固体ld-tyr hcl盐(表8)之可溶性大于原位制得之ld-tyr hcl盐(表7)，且由此可在较高ph值下溶解较高浓度之固体ld-tyr hcl盐。实验实例1.4-ld-arg tfa盐之溶解度研究
[0196]
将ld-arg tfa盐(根据实例1制得，且包含两当量之tfa)添加至溶剂(如下文表9中所详述)中，且藉由添加naoh来予以中和。在观察到最大溶解度时，过滤溶液且然后转移至预先称重并使用氮冲洗之瓶中。将瓶中之溶液体积调节至5ml，然后密闭瓶且储存于25℃下以供稳定性观察。表9表9
[0197]
如表9中所呈现，ld-arg tfa盐在低ph值下显示高溶解度；然而，在将ph调节至生理学可接受之ph值时，溶解度显著减小。实验实例1.5-ld-arg hcl盐之溶解度研究
[0198]
将ld-arg hcl盐添加至溶剂(如下文表10中所详述)中，且藉由添加naoh来予以中和。在观察到最大溶解度时，过滤溶液且然后转移至预先称重并使用氮冲洗之瓶中。将瓶中之溶液体积调节至5ml，然后密闭瓶且储存于25℃下以供稳定性观察。表10
[0199]
如表10中所呈现，ld-arg hcl盐之溶解度相对高于本文所测试之其他游离碱及/或盐，即使在生理上可接受之ph值下。实验实例1.6-ld-lys tfa盐之溶解度研究
[0200]
将ld-lys tfa盐(根据实例1制得，且包含两当量之tfa)添加至溶剂(如下文表11中所详述)中，且藉由添加naoh来予以中和。在观察到最大溶解度时，过滤溶液且然后转移至预先称重并使用氮冲洗之瓶中。将瓶中之溶液体积调节至5ml，然后密闭瓶且储存于25℃下以供稳定性观察。表11
*在12小时内沈淀
[0201]
如表11中所呈现，ld-lys tfa盐之溶解度相对高于本文所测试之其他游离碱及/或盐；然而，在将ph升至生理上可接受之ph值时，ld-lys tfa盐之溶解度有所减小。实验实例1.7-ld-lys游离碱之溶解度研究
[0202]
将ld-tyr游离碱(根据实例2制得)添加至溶剂(如下文表12中所详述)中；然而，溶液之目测评价展示，ld-tyr不溶解。加热至70℃以改良溶解度；然而，此系不够的，此乃因即使在加热之后亦看到沈淀物。如下文表12中所呈现，在所测试溶液中，仅在添加两当量tfa时，添加naoh直至ph为6.8方可提供稳定过夜(亦即至少12小时)之溶液。如上文关于其他溶液所详述，在使用ld-tyr游离碱且观察到最大溶解度时，过滤溶液且然后转移至预先称重并使用氮冲洗之瓶中。将瓶中之溶液体积调节至5ml，然后密闭瓶且置于25℃下以供稳定性观察。表12
[0203]
如表12中所呈现，ld-lys游离碱显示极低之意外溶解度。应注意，即使在添加酸(据推测会形成原位盐，例如hcl或tfa盐)时，溶解度仍较低。在与本文之表11及13中所呈现之结果比较时，以固体形式制得之ld-lys盐之溶解度似乎实质上不同于彼等在藉由向游离碱溶液中添加酸来原位制备时之盐。举例而言，尽管(如表11中所呈现)ld-lys tfa盐之600mg/ml wfi溶液(包含350mg/ml ld-lys游离碱及两当量tfa)可稳定至少12小时，但不可能溶解相同量之添加两当量tfa之ld-lys游离碱，即使在加热帮助下(参见表12)。此类似于上文关于原位制备ld-tyr盐所详述之发现(藉由比较表7及8中所呈现之结果显而易见)。针对固体ldaa盐及原位ldaa盐所获得之溶解度结果之间之显著差异极为意外。实验实例1.8-ld-lys hcl盐之溶解度研究
[0204]
将ld-lys hcl盐(根据实例3制得)添加至溶剂(如下文表13中所详述)中，且藉由添加naoh来予以中和。在观察到最大溶解度时，过滤溶液且然后转移至预先称重并使用氮冲洗之瓶中。将瓶中之溶液体积调节至5ml，然后密闭瓶且置于25℃下以供稳定性观察。表13*在室温下于12小时内沈淀
[0205]
如表13中所呈现，ld-lys hcl盐显示高溶解度，即使在ph值高于6下；然而，在将ph
升至8.5时，ld-lys hcl盐之溶解度有所减小。实验实例2-ld-arg、ld-lys及ld-tyr调配物实验实例2.1-ld-tyr及卡比多巴(cd)调配物卡比多巴溶液制备
[0206]
首先，藉由混合亚硫酸氢钠、wfi及80来制备卡比多巴(cd)溶液。将所获得澄清溶液加热至60℃。添加卡比多巴，使用氮冲洗烧瓶且搅拌以均匀分散cd。添加naoh直至获得所需ph为止，使用氮再次冲洗烧瓶，密闭，且将其中之混合物在60℃下搅拌10分钟。将烧瓶冷却至室温。量测所获得溶液之ph且视需要加以调节。然后将溶液转移至瓶中以供称重、完成体积及最终重量测定，然后将溶液转移至使用氮吹扫顶部空间之小瓶中，密闭并储存于-20℃下。cd/ld-tyr hcl盐溶液制备
[0207]
将cd/naoh溶液转移至小瓶中并搅拌。将ld-tyr hcl盐(根据实例3制得)在搅拌的同时逐份(大约100-150mg)添加至小瓶中，且持续监测ph。一旦所添加部分之ld-tyr hcl盐发生溶解，立即藉由向溶液中添加naoh来将ph调节至8.4
±
0.1。在所有ld-tyr hcl盐皆溶解之后，将溶液转移至瓶中，藉由添加wfi来将体积调节至瓶大小(例如5ml、10ml、20ml)，记录最终重量及体积，过滤溶液，使用氮吹扫顶部空间，密闭，并储存于25℃下。cd/ld-tyr游离碱溶液制备
[0208]
藉由向nmp中添加80并搅拌来制备80于nmp中之分散液。逐份添加根据实例2制得之ld-tyr游离碱，直至达到最大溶解为止(溶液可在最大溶解时出现浑浊)。在已添加所有ld-tyr游离碱时，添加如上文详述制得之cd溶液，且使用wfi完成体积。量测ph，将溶液转移至瓶中，藉由添加wfi将体积调节至瓶大小，记录最终重量，过滤溶液，且使用氮吹扫顶部空间，密闭，并储存于25℃下。表14
实例2.2-ld-arg及卡比多巴(cd)调配物cd/ld-arg hcl盐溶液制备
[0209]
根据实例5.1中所阐述之程序来制备cd溶液。将cd溶液转移至小瓶中并搅拌。分两份添加ld-arg hcl盐，且持续监测ph。一旦所添加部分之ld-arg hcl盐发生溶解，立即藉由向溶液中添加naoh来将ph调节至7.1
±
0.2。在所有ld-arg hcl盐皆溶解时，将溶液转移至瓶中，藉由添加wfi来将体积调节至瓶大小，记录最终重量，过滤溶液，且使用氮吹扫顶部空间，密闭，并储存于25℃下。表15实验实例2.3-ld-lys及卡比多巴(cd)调配物cd/ld-lys hcl盐溶液制备
[0210]
根据实验实例2.1中所阐述之程序来制备cd/naoh溶液。将cd溶液转移至小瓶中并搅拌。逐份添加根据实例3制得之ld-lys hcl盐，且持续监测ph。一旦所添加部分之ld-lys hcl盐发生溶解，立即藉由向溶液中添加naoh来将ph调节至6.7
±
0.2。在所有ld-lys hcl盐皆溶解时，将溶液转移至瓶中，藉由添加wfi来将体积调节至瓶大小，过滤溶液，使用氮吹扫顶部空间，密闭瓶，并储存于25℃下。表16
实验实例3使用肝微粒体之ldaa化合物之活体外代谢
[0211]
在96孔板时测定测试化合物在所汇集人类肝微粒体中之稳定性，其中在5个时间点藉由hplc-ms/ms分析来量化测试化合物。分析基质包括混合性别及50个人类肝微粒体之集合，其中最终微粒体蛋白浓度为0.1mg/ml。测试浓度为0.1μm且含有0.01％dmso、0.25％乙腈及0.25％甲醇。
[0212]
将每一测试化合物与所汇集肝微粒体一起在37℃振荡水浴中之磷酸盐缓冲剂(ph 7.4)中预培育5分钟。藉由添加烟碱酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐(nadph)生成系统并培育0、15、30、45及60min来引发反应。藉由将培育混合物转移至乙腈/甲醇中来停止反应。然后混合试样并离心，其中使用上清液进行hplc-ms/ms分析。
[0213]
在每一分析中，测试4种参考化合物普萘洛尔(propranolol)、伊米帕明(imipramine)、维拉帕米(verapamil)及特非那定(terfenadine)，其中已知普萘洛尔及伊米帕明相对稳定，而已知维拉帕米及特非那定易于代谢于人类肝微粒体中。
[0214]
藉由hplc-ms/ms使用所选反应监测来分析所有试样。hplc系统由具有自动采样仪之二元lc帮浦、c-18管柱及梯度组成。视需要调节条件。
[0215]
记录对应于测试化合物之峰面积。藉由比较每一时间点与零时下之峰面积来计算每一剩余化合物之量。自剩余化合物(％)对时间之对数曲线之初始线性范围之斜率来计算半衰期，其中假设具有一级动力学。另外，使用下列方程式自半衰期来计算固有清除率(cl
int
)：cl
int
(μl/min/mg蛋白质)＝0.693/(t
1/2
×
蛋白质浓度)
[0216]
呈tfa盐形式之各种ldaa化合物(10-7
m)之活体外人类肝微粒体代谢测试之结果提
供于图1及表17中，其中呈现在时间0、15、30、45及60分钟时之剩余化合物％、两个半衰期量测及cl
int
(如上文所详述来计算)。应注意，尽管图1并不明确提及tfa盐形式，但其中所呈现结果与tfa盐相关，亦即，dopa gly系在本文中称为ld-gly tfa盐者，等等。表17
[0217]
如表17及图1中所呈现，ld-arg tfa盐提供最高固有清除率(cl
int
)，亦即166.3μl/min/mg蛋白质。ld-gly tfa盐提供127.7ul/min/mg之cl
int
。如进一步所呈现，ld-gln及ld-asp tfa盐二者皆未检测。剩余所测试ldaa化合物提供低于115.5μl/min/mg蛋白质之cl
int
值。实验实例4人类肝s9稳定性测试
[0218]
使用市售肝s9测试若干呈tfa盐形式之ldaa化合物在人类肝s9中之稳定性。基质浓度为10μm，s9蛋白质浓度为0.2mg/ml，且培育时间为0、5、15、30及60分钟。
[0219]
结果阐述于表18中，其中该等结果阐述ke(亦即在每一上述时间点时所量测之剩余化合物量之降低百分比之斜率)，从而ke愈高，则代谢愈快。表18化合物kelda(左旋多巴酰胺)-0.0008ld-arg tfa盐0.1268ld-lys tfa盐0.0788ld-asn tfa盐0.0015ld-asp tfa盐0.0008ld-tyr tfa盐0.0217
[0220]
如表18中所展示，ld-arg、ld-lys及ld-tyr之tfa盐快速代谢于人类肝s9中。实验实例5人类血液稳定性测试
[0221]
测试若干ldaa化合物在人类血液中之稳定性。基质浓度为10μm且培育时间为0、5、15、30及60分钟。
[0222]
结果阐述于表19中，其中该等结果阐述ke(亦即在每一上述时间点时所量测之剩余化合物量之降低百分比之斜率)，从而ke愈高，则代谢愈快。表19化合物kelda(左旋多巴酰胺)0.0149ld-arg tfa盐0.0919ld-lys tfa盐0.0655ld-asn tfa盐0.0038ld-asp tfa盐0.0014
ld-tyr tfa盐0.0426ld-la 1tfa盐-0.011ld-la 2tfa盐0.0128
[0223]
如表19中所展示，除ld-asp、ld-la 1及(较小程度地)ld-asn外之所有化合物皆快速代谢。实验实例6蛋白质结合-平衡透析方法
[0224]
在人类血浆中测试呈tfa盐形式之各种ldaa化合物(10-5
m)之蛋白质结合值。使用平衡透析技术来分离未结合之测试化合物部分与在测试期间结合至蛋白质之测试化合物部分。在96孔板上于自teflon
tm
构造之透析块中实施测试。
[0225]
所用含蛋白质基质系人类血浆，其中分析基质系人类血清白蛋白及α-1酸醣蛋白。向蛋白质基质中掺加10μm(预设，n＝2)之每一测试化合物且最终dmso浓度为1％。向透析液腔室中加载磷酸盐缓冲盐水(pbs,ph 7.4)，且向试样腔室中加载等体积之所掺加蛋白质基质。然后密封透析板并在37℃下培育4h。
[0226]
在培育后，自每一腔室获取试样，使用pbs稀释，随后添加乙腈，然后离心试样。收集上清液并藉由hplc-ms/ms分析。hplc测试包括具有自动采样仪之二元lc帮浦、c18管柱(2
×
20mm)及梯度洗脱。视需要调节hplc条件。
[0227]
以相同方式自所掺加蛋白质基质来制备对照试样(n＝2)；然而，并不对对照实施透析。应注意，对照试样用作回收率测定之基础。
[0228]
在每一分析中使用醋丁洛尔(acebutolol)、奎宁定(quinidine)及华法林(warfarin)作为参考化合物，其中已知该等参考化合物提供分别低、中等及高人类血浆蛋白结合值。
[0229]
结合至蛋白质之测试化合物％及回收率值计算如下：蛋白质结合(％)＝100
×
(面积
p-面积b)/面积
p
回收率(％)＝100
×
(面积
p-面积b)/面积c面积
p
＝蛋白质基质中之分析物之峰面积；面积b＝分析缓冲液中之分析物之峰面积；且面积c＝对照试样中之分析物之峰面积。
[0230]
所测定之回收率％可指示所计算蛋白质结合值之可靠性。低回收率指示，测试化合物在分析过程期间损失。此最可能系由测试化合物之非特异性结合或降解所致。应注意，高于60％之回收率视为可靠，而在低于60％之回收率下，测试结果视为不可靠。
[0231]
蛋白质结合测试之结果呈现于下文之表20中。表20
[0232]
如上文所提及，在回收率％低于60％或高于100％时，测试结果视为不可靠且由此，表20中所呈现关于ld-lys tfa盐及ld-arg tfa盐之结果视为不可靠。鉴于某些结果之低可靠性且鉴于一些化合物不能由上述测试检测之事实，实施量测蛋白质结合之第二方法(spe方法)。实验实例7蛋白质结合-固相萃取(spe)方法
[0233]
使用固相萃取(spe)方法来制备用于血浆蛋白结合分析中之若干化合物之试样。遵循下列spe方案：spe方案1-混合模式阳离子交换(针对ld-lys tfa盐及ld-arg tfa盐实施)吸收器：waters oasis mcx 96孔微洗脱板-目录号：186001830ba试样：200μl掺加10μm测试化合物之血浆。使用4％磷酸/水稀释(1:1)试样并混合15分钟1)将oasis板置于真空歧管上并将真空度设定于5”hg；2)使用200μl甲醇条件化；3)使用200μl水平衡；4)加载经稀释血浆试样；5)使用200μl 2％甲酸/水洗涤；6)使用400μl甲醇洗涤；且7)使用100μl 5％nh4oh/甲醇洗脱。spe方案2-混合模式阴离子交换(针对ld-tyr tfa盐、ld-asp tfa盐、ld-glu tfa盐、ld-la 2tfa盐及左旋多巴实施)吸收器：waters oasis max 96孔微洗脱板-目录号：186001829试样：200μl掺加10μm测试化合物之血浆。使用4％磷酸/水稀释(1:1)试样并混合15分钟1)将oasis板置于真空歧管上并将真空度设定于5”hg；
2)使用200μl甲醇条件化；3)使用200μl水平衡；4)加载经稀释血浆试样；5)使用200μl 5％nh4oh/水洗涤；6)使用400μl甲醇洗涤；且7)使用100μl 2％甲酸/甲醇洗脱。
[0234]
蛋白质结合spe测试之结果呈现于下文之表21中。表21实验实例8活体外吸收(使用caco-2细胞)概述
[0235]
p-醣蛋白(pgp)、抗乳癌蛋白(bcrp)及多药物抗性相关蛋白2(mrp2)系尤其位于肠及血-脑障壁组织中之atp结合盒(abc)转运蛋白。作为该等输出帮浦之受质之化合物可分泌回肠腔中，从而引起较差之吸收及生物可用性。另外，靶向中枢神经系统但系pgp或bcrp受质之药物可被脑排除在外，由此引起较差脑渗透。细胞模型
[0236]
caco-2细胞系衍生自结肠直肠腺癌之人类肠上皮细胞。此细胞系高度内源性表现pgp、bcrp及mrp2且可用作活体外模型来评价作为该等转运蛋白之受质之化合物。实验方案
[0237]
在顶端至基底外侧(a-b)及b-a两个方向上实施分析。在hbss-hepes(ph 7.4)中制备10μm测试化合物且最终dmso浓度为1％。离心工作溶液，且将上清液添加至供体侧。将分析板在37℃及轻微振荡下培育60min或40min以分别用于a-b或b-a分析。对于pgp受质评价而言，使用及不使用100μm维拉帕米在a侧及b侧二者处运行分析。对于bcrp受质评价而言，使用及不使用10μm ko143在a侧及b侧二者处运行分析。对于mrp2受质评价而言，使用及不使用100μm mk571在a侧及b侧二者处运行分析。在零时及终点自供体侧等分试样，且在终点自受体侧等分试样。参考化合物
[0238]
在每一分析中包括普萘洛尔(高度渗透)、拉贝洛尔(labetalol)(中度渗透)、雷尼替定(ranitidine)(较差渗透)及秋水仙碱(colchicine)(p-醣蛋白受质)、雌酮-3-硫酸盐(bcrp受质)或cdcf(mrp2受质)。
分析方法
[0239]
藉由hplc-ms/ms使用所选反应监测来分析试样。hplc系统由具有自动采样仪之二元lc帮浦、c-18管柱及梯度组成。可视需要调节条件。细胞单层完整性标记物
[0240]
在渗透性分析之后使用测试化合物在a-b方向上于ph 7.4下在两侧评价荧光黄渗透性。荧光黄渗透性小于1.5
×
10-6
cm/s之细胞单层视为完整。数据分析
[0241]
测试化合物之表观渗透性系数(papp)及其回收率计算如下：测试化合物之表观渗透性系数(papp)及其回收率计算如下：a系细胞单层之表面积(0.11cm2)。c系测试化合物之浓度且表示为峰面积。d表示供体且r系受体。0、mid及终点表示培育之零时、中点及终点。δt系培育时间。v系供体或受体之体积。实验实例8.1-a-b渗透性
[0242]
使用caco-2 a-b方法测定若干呈tfa盐形式之ldaa化合物之渗透性能力。使用及不使用维拉帕米(其系渗透抑制剂)实施测试，且结果呈现于表22(不使用维拉帕米)及34(使用维拉帕米)中。表22经由caco-2(a-b)测得之化合物渗透性(10-6
cm/sec)*blq＝量化下限
表23经由caco-2(a-b)在维拉帕米存在下测得之化合物渗透性(10-6
cm/sec)
[0243]
如表22及23中所展示，ld-la 2 tfa盐在使用及不使用维拉帕米时皆呈现最高平均渗透性。实验实例8.1-b-a渗透性
[0244]
使用caco-2 b-a方法测定若干呈tfa盐形式之ldaa化合物之渗透性能力。使用及不使用维拉帕米实施测试，且结果呈现于表24(不使用维拉帕米)及25(使用维拉帕米)中。表24经由caco-2(b-a)测得之化合物渗透性(10-6
cm/sec)表25经由caco-2(b-a)在维拉帕米存在下测得之化合物渗透性(10-6
cm/sec)
[0245]
如表24及25中所展示且类似于表22及23中所呈现之结果，ld-la 2tfa盐在使用及不使用维拉帕米时皆呈现最高平均渗透性。实验实例9-活体内研究实例9.1-皮下浓注治疗
[0246]
藉由浓注将若干化合物(5mg/kg)经皮下递送至小型猪以检验该等化合物之药物动力学特征且将其彼此比较。所检验化合物系ld-tyr tfa盐、ld-arg tfa盐、ld-asp tfa盐、ld-lys tfa盐及lda(多巴酰胺(dopamide))。浓注剂量进一步包含1.25mg/kg卡比多巴、0.2％80、20mm磷酸盐缓冲剂及137mm nacl，其中在投与之前一小时内制备所投与溶液。每一量测重复三次。所检验药物动力学参数阐述于图2、3及4中。
[0247]
图2呈现表26，其包括衍生自皮下小型猪浓注研究之药物动力学参数。检验测试化合物以及其左旋多巴代谢物并测定其量。所检验参数包括c
max
、t
max
、auc
0-t
、mrt
0-t
、t
1/2
、auc
0-∞
、正规化剂量、mrt
0-∞
及ba。
[0248]
图3系呈现在向小型猪经皮下浓注投与5mg/kg每一所测试ldaa化合物后随时间而变化之ldaa化合物浓度之图形。图4系呈现在向小型猪经皮下浓注投与5mg/kg每一所测试ldaa化合物后随时间而变化之左旋多巴浓度之图形。此处应注意，左旋多巴系ldaa化合物之代谢物且由此，投与ldaa化合物会在血液中提供左旋多巴。另外应注意，因高速离心，本文所呈现之药物动力学测试涉及在全血而非血浆中实施之量测。实例9.2-24小时皮下连续治疗-12.5％ld-tyr游离碱调配物
[0249]
藉由输注帮浦将ld-tyr游离碱(12.5％)溶液连续施加至哥廷根小型猪24小时时段。所施加溶液进一步包含0.75％cd、25％nmp、0.15％na bis、0.1％naoh、0.3％80及wfi(补足至100％)。此调配物在此处与12.5％ld-tyr调配物有关。药物动力学研究
[0250]
在投与12.5％ld-tyr调配物之后，采样时间点始于t＝0且止于t＝32。药物动力学结果阐述于下文表27及图5中，其中在所有时间点量测两种所测试化合物(亦即ld-tyr游离碱及其代谢物左旋多巴)之浓度。表27
局部毒性研究
[0251]
来自在投与12.5％ld-tyr调配物(24小时连续皮下治疗)之哥廷根小型猪中实施之局部毒性研究之初始数据提供了可接受之安全性及局部耐受性特征，亦即无全身性或局部药物相关不良反应(例如皮肤溃疡)之特征。
[0252]
图6a、6b、6c及7部分地绘示自哥廷根小型猪24小时连续投与研究获得之数据。特定而言，图6a呈现在自连续经皮下投与上述ld-tyr游离碱溶液24小时恢复两周之后自哥廷根小型猪获得之组织病理学，图6b呈现在自连续经皮下投与相同溶液之媒剂(亦即不含ld-tyr游离碱本身之溶液)24小时恢复两周之后自哥廷根小型猪获得之组织病理学，且图6c呈现在向哥廷根小型猪插入假体(仅针)24小时之后获得之组织病理学。在评审该等图且彼此比较时发现，尽管在图6a及6b中存在一些极轻/轻度慢性发炎假像(特定而言参见图6a及6b中之所圈区域)，但其严重程度极低，由此展示了所投与溶液之无毒性。
[0253]
另外，在特定地彼此比较图6a及6b时发现，发炎严重程度极为类似且由此可断定，媒剂本身引起了大部分发炎，而非ld-tyr游离碱活性成分引起。
[0254]
最后，图7呈现发炎之发生率％及其严重程度，其中0系最低严重程度且4系最高严重程度。如图7中所展示，仅存在相对较低严重程度之发炎事件(0、1及2，非3或4)且另外，在投与ld-tyr游离碱溶液时及在仅投与媒剂(亦即不含ld-tyr游离碱之相同溶液)时，该等事件类似。可由此再次断定，媒剂本身引起了大部分发炎，而非ld-tyr游离碱活性成分引起。实验实例10-使用人类肝细胞评估活体外转化效率
[0255]
利用代谢测试使用人类肝细胞来评估前药至l-dopa之转化效率。将前药与人类肝细胞一起在37℃下培育4小时。在每一预定时间采样一部分反应溶液并与有机溶剂混合以停止反应。离心反应停止之溶液，且使用lc-ms/ms量测所获得上清液。将至l-dopa之转化效率评估为在开始反应之后4小时所产生之l-dopa量。表28展示一些本发明实例之化合物之l-dopa产生量。表28实例l-dopa产生量(nmol/l)
4652570467858558139321872919126720131321718
[0256]
如上述测试结果中所展示，已证实所有化合物皆产生l-dopa。自该等结果预计具有有效活体内l-dopa产生，且该等化合物尤其可用作帕金森氏病之治疗剂。实验实例11-对比性溶解度及调配物研究-11种ldaa分子实例11.1-对比性溶解度测试
[0257]
表29列表11种包含一当量tfa之ldaa tfa盐，其系根据实例1制得。表29表29
[0258]
制备如表30中所详述之溶液：表30成分最终浓度(w/v％)tween800.30抗坏血酸0.50nac0.50l-精胺酸5.50
胺丁三醇(tris)11.50水(补足)100.00
[0259]
制备11种调配物，其各自包含一种ldaa tfa(其量等效于30％w/v之相应ldaa碱)及70％w/v储备溶液，如表30中所详述。令人吃惊地，并非所有ldaa皆溶解；而系，如表31中所详述，11种中之6种发生溶解，而5种不溶解(其中，5种不溶解者在制备期间不溶解，或在制备调配物一小时内显示沈淀)。表31表31实验实例11.2-对比调配物测试
[0260]
使用6种显示溶解性之ldaa(呈tfa盐形式)来制备下列调配物。应注意，该等调配物类似于上述调配物；然而，添加cd，且另外，以三个不同浓度添加一定量之抗氧化剂(亦即抗坏血酸及nac)，如下文之表32a-c中所详述。另外，向溶液中添加额外量之精胺酸以将ph调节至生理上可接受之ph。表32a-包含约0.1％w/v抗坏血酸及nac之调配物
表32b-包含约0.8％w/v抗坏血酸及nac之调配物
表32c-包含约0.4％w/v抗坏血酸及nac之调配物
[0261]
将如表32a、32b及32c中所详述制得之调配物(a)在室温下保持两天；(b)转移至冰箱(2-8℃)中并保持两天；且(c)自冰箱转移至室温下并再保持两天，在此期间再次评价其沈淀物。然后使调配物返回冰箱(2-8℃中)并在第40天评价沈淀物。在前两天评价每一调配物之物理稳定性且在最后两天再次评价。目测评价调配物之物理稳定性。澄清溶液视为稳定，而包含沈淀物之溶液视为物理不稳定。表32a、32b及32c之调配物之稳定性结果分别详述于表33a、33b及33c中。表33a表33b表33b表33c
[0262]
如表33a-c中所呈现，制备调配物之物理稳定性取决于所用ldaa以及溶液中之抗氧化剂之量。举例而言，ld-la 1溶液(发现其在使用0.1％及0.4％之抗坏血酸及nac时于40天过程中物理稳定)在使用各自0.9％之抗坏血酸及nac时不稳定。应注意，几乎所有调配物在室温下稳定至少48小时。若在前48小时之后调配物仅保持于2-8℃下，则其可能在全部40个测试日或甚至更长时间内保持稳定。亦可能地，若在制备之后立即将调配物置于2-8℃下，则其在全部40个测试日或甚至更长时间内保持稳定。实验实例12-ld-arg、ld-lys及ld-tyr调配物
[0263]
藉由添加cd溶液并一起溶解所有成分来制备如下文各表中所阐述之调配物。如下所述来制备用于ld-arg调配物之cd：将wfi添加至瓶中，然后添加80及亚硫酸氢钠，搅拌至溶解，并加热至60℃。添加cd，搅拌1-2分钟以达成均质化。最后，添加l-精胺酸，使用氮冲洗瓶，密闭并搅拌15min。验证溶解且将制剂冷却至环境温度。量测ph，且将制剂转移至量测瓶中，在此藉由添加wfi来使体积完成至预定最终体积。然后经由无菌0.22μm耐纶(nylon)过滤器过滤制剂，转移至20ml小瓶中，然后将氮吹入顶部空间且在-20℃下冷冻小瓶直至使用。
[0264]
如下所述来制备用于ld-tyr及ld-lys调配物之cd溶液：将wfi添加至瓶中。添加80及亚硫酸氢钠，搅拌至溶解并加热至60℃。添加cd，并搅拌1-2分钟以达成均质化。添加naoh，然后使用氮洗涤瓶，密闭并搅拌15分钟。验证溶解且将制剂冷却至环境温度。量测ph，且将制剂转移至量测瓶中，在此藉由添加wfi来使体积完成至预定最终体积。然后经由无菌0.22μm耐纶过滤器过滤制剂，转移至20ml小瓶中，然后将氮吹入顶部空间且在-20℃下冷冻小瓶直至使用。表34
表35表36
表37
表38表38表39-高ld-tyr浓度调配物表40-上文表39中所呈现调配物及其他调配物之物理稳定性数据
*应注意，某些材料可在本文中称为碱、相对离子或溶剂；然而，该等材料之定义皆等效表41-ld-tyr浓度及精胺酸:tris比率对稳定性之效应ld-tyr(％)arg(％)tris(％)ph莫耳比率物理稳定性*2008.87.941:1.20过夜沈淀304.59.728.001:1.20过夜稳定446.813.88.021:1.20过夜稳定375.811.78.121:1.32过夜稳定447.3314.98.081:1.30过夜稳定*将该等调配物在室温下储存过夜，然后评价物理稳定性实例53-具有不同浓度之cd、tris及l-精胺酸之ld-tyr调配物
[0265]
根据实例12中所详述之程序来制备下列调配物。表42
表43-nb 144-4调配物分析稳定性结果
[0266]
如表43中所展示，f53-1调配物中之ld-tyr及cd高度稳定，即使在储存于高达40℃之温度下时。表44-nb130-145(f1)、nb130-145(f2)及nb130-148(f3)之稳定性结果
*应注意，表44中之所有％皆系相对于30％ld-tyr及1％cd之量测浓度
[0267]
如表44中所展示，在将调配物nb130-145(f1)、nb130-145(f2)及nb130-148(f3)在32℃下储存28h时，活性成分之浓度(如藉由hplc所量测)几乎不改变，亦即，该等调配物在32℃下稳定至少28h。表45a-nb 144-32(f1)-37％ld-tyr/0.5％cd t＝0t＝28h，在32℃下回收率％ld-tyr364.15352.2296.73cd4.784.7799.90表45b-nb 144-34(f2)-44％ld-tyr/0.5％cd t＝0t＝28h，在32℃下回收率％ld-tyr437.98424.0996.83cd4.844.7898.86表45c-nb 144-39(f3)-30％ld-tyr/0.5％cd t＝0t＝28h，在32℃下回收率％ld-tyr295.42291.9498.82％cd4.864.7497.53％
[0268]
如表45a、45b及45c中所展示，在将调配物nb144-32(f1)、nb144-34(f2)、nb144-39(f3)在32℃下储存28h时，活性成分之浓度(如藉由hplc所量测)保持高于96％及甚至高于98％，亦即，该等调配物在32℃下稳定至少28h。应注意，回收率％比较了在t＝28h下量测之任一既定材料之量(或任一其他呈现值)与在t＝0下量测之材料量。等效内容
[0269]
尽管本文阐释并阐述了本发明之某些特征，但熟习此项技术者可构想许多修改、取代、变化及等效内容。因此，应理解，随附申请专利范围意欲涵盖属本发明真正精神内之所有该等修改及变化。本说明书所用之所有表示成份数量、反应条件等之数字在所有情况下皆应理解为由术语「约」修饰，即使并未针对所揭示实施例中之任一者特定地陈述术语「约」。以引用方式并入
[0270]
本文所提及之所有专利、公开专利申请案、网站及其他参考文献之全部内容皆以全文引用方式明确并入本文中。