石榴提取物及其美容用途的制作方法

石榴提取物及其美容用途
1.本发明涉及美容领域，并且尤其是石榴提取物及其制备方法、包含所述提取物的组合物以及其作为抗氧化剂或抗自由基剂的美容用途。
2.化妆品中使用抗氧化剂来对抗自由基(o-2
、ho
°
等)，这些自由基会导致可能尤其损害角蛋白材料并且更通常地诱导细胞老化的连锁反应。
3.因此抗氧化剂的作用是捕获自由基，并将其转化为对人类角蛋白材料无害的物质。事实上，抗氧化剂中和了新陈代谢不断产生的反应性氧物种。这些反应性氧物种(ros)破坏生物机制(尤其是在蛋白质或脂质水平上)并诱导氧化应激。这反过来又有助于组织老化的发展和加速，特别是通过皱纹的出现。
4.在能够促进反应性氧物种形成的外源性因素之中，可以提及太阳光线。
5.因此，抗氧化剂可用于各种美容领域，诸如抗老化、保护免受氧化应激，并且尤其是由于日晒引起的外源性应激，抑或抗色素沉着(黑色素的合成是一种氧化过程)。
6.因此，反应性氧物种的产生对蛋白质或脂质造成损害，特别地有助于加速角蛋白材料、尤其是皮肤和/或附件的细胞老化。
7.具体地讲，氧化应激的影响是不利地影响细胞呼吸并且尤其导致皮肤加速老化，特别是肤色暗沉和/或灰色、肤色不均、皮肤失去光泽和/或透明度、过早形成皱纹或细纹、皮肤失去柔性、柔软性和弹性、出现色素斑，特别是光化性着色斑。
8.氧化应激的影响还表现为头发活力的降低和/或其外观的恶化，特别是暗沉外观。
9.许多抗氧化剂已经存在，诸如生育酚(维生素e)或其衍生物、维生素c或其衍生物、类胡萝卜素、泛醌、绿茶等。
10.石榴提取物也从现有技术中已知作为抗氧化活性剂，尤其是fr3031901描述了用70％w/w乙醇/30％w/w水的混合物获得的石榴提取物，其包含不超过1.93％的鞣花酸，重量比[鞣花酸/安石榴苷a和b]等于0.2，此种提取物是。
[0011]
然而，需要比现有技术中的那些更有效、使得特别地可以保护人类的角蛋白材料(皮肤和/或其附件)免受氧化应激的有害或令人讨厌的影响的替代抗氧化剂。
[0012]
申请人已经令人惊讶地证明，一种石榴提取物通过保护皮肤脂质免受uva脂质过氧化而具有良好的抗氧化特性并且尤其是自由基清除特性，该提取物包含占干提取物总重量的按重量计至少10％的安石榴苷；和占干提取物总重量的按重量计至少10％的鞣花酸；其中重量比[鞣花酸/安石榴苷]范围为从0.5至2。
[0013]
此外，根据本发明的提取物可用于预防和/或治疗皮肤老化的迹象。
[0014]
另外，根据本发明的提取物可用于预防和/或减少肤色暗沉和/或不均匀外观。
[0015]
根据本发明的如下所述的提取物或制备物的其他优点是尤其在40℃、两个月期间的良好稳定性特性，和/或提取物在化妆品组合物中特别是在25℃下易溶解。
[0016]
因此，本发明的一个主题是一种石榴提取物，其包含：
[0017]
i.占干提取物总重量的按重量计至少10％的安石榴苷；和
[0018]
ii.占干提取物总重量的按重量计至少10％的鞣花酸；并且
[0019]
其中重量比[鞣花酸/安石榴苷]范围为从0.5至2。
[0020]
本发明的另一主题是一种制备根据本发明的石榴提取物的方法，其至少包括以下步骤：
[0021]
i.提供石榴果皮；
[0022]
ii.在从37℃至45℃范围内的温度下，在2至5小时内，用至少99.5％度的乙醇从所述果皮中提取至少安石榴苷和鞣花酸；
[0023]
iii.过滤并再重复步骤ii.至少两次；并且
[0024]
iv.任选地，在从35℃至40℃范围内的温度下真空干燥步骤iii.结束时获得的滤液。
[0025]
本发明的另一主题是一种制备物，其包含根据本发明的提取物和至少一种优选选自含有从2至8个碳原子并且特别地从2至6个原子的低级醇的水混溶性有机溶剂。
[0026]
本发明还涉及一种组合物、特别是化妆品组合物，其包含在生理学上可接受的介质中的根据本发明的提取物或制备物。
[0027]
本发明的另一主题是一种用于角蛋白材料、特别是皮肤的美容处理方法，其包括将包含根据本发明的石榴提取物或根据本发明的制备物的组合物施加到角蛋白材料、特别是皮肤上的步骤。
[0028]
本发明还涉及根据本发明的提取物的美容用途，该提取物在含有生理学上可接受的介质的组合物中：
[0029]-作为抗氧化剂或抗自由基剂；
[0030]-作为预防和/或治疗皮肤老化迹象的剂；
[0031]-预防和/或减少肤色暗沉和/或不均匀外观。
[0032]
定义
[0033]
术语“角蛋白材料”是指皮肤、头发、睫毛和指甲。
[0034]
术语“皮肤”是指全身皮肤，包括头皮、黏膜和半黏膜，及全身皮肤的附件。具体而言，在本发明中考虑胸部、颈部和面部、手部、腋窝的皮肤，并且尤其是面部皮肤。
[0035]
术语“附件”被理解为是指头发、体毛、睫毛、指甲，并且优选头发。
[0036]
如本文所用，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指任何旨在改善个人的舒适度或幸福感的行为。因此，该术语涵盖减弱、缓解或抑制老化皮肤的症状，但仅限于美容处理。
[0037]
出于本发明的目的，术语“预防”是指降低出现某种现象的风险。
[0038]
术语“抗氧化剂”是指减少或预防其他化学化合物氧化的化合物。氧化是将电子从一种物质转移到氧化剂的氧化还原反应的一部分。此反应可以产生自由基。抗氧化剂特别地可以是抗自由基剂。
[0039]“自由基”是在其外层上具有一个或多个不匹配电子的化学物种，例如氧自由基。氧自由基特别地是：
[0040]
a.单线态氧
·
o-o
·
；
[0041]
b.超氧自由基阴离子o2·-；
[0042]
c.羟基自由基ho
·
；
[0043]
d.过氧羟自由基ho2·
；
[0044]
e.过氧化物自由基(roo
·
)和烷氧基自由基(ro
·
)，其中r是碳基链。
[0045]“抗自由基”是指中和所形成的自由基的化合物。
[0046]
如本技术中使用的术语“氧化应激”涵盖了由受试者内氧自由基增加引起的所有损伤。
[0047]
出于本发明的目的，术语“安石榴苷”是指两种非对映异构体安石榴苷a和b的混合物。它们属于多酚家族，并且尤其是复杂的鞣花单宁，由葡萄糖与鞣花酸和没食子酸连接形成，摩尔质量为约1084gmol-1，由具有化学式(i)的2,3-(s)-六羟基二苯甲酰基-4,6-(s,s)-没食子酰基-d-葡萄糖的异构体形成。
[0048][0049][0050]
出于本发明的目的，术语“鞣花酸”是指具有式(ii)的多酚。
[0051][0052]
术语“石榴皮鞣素”是指两种非对映异构体石榴皮鞣素a和b的混合物。它们属于多酚家族，并且尤其是命名为具有化学式(iii)的4,6-(s,s)-没食子酰基-d-葡萄糖的鞣花单宁。
[0053][0054]
石榴是一种结果实的落叶灌木或小乔木，属于千屈菜科(lythraceae)，生长高度在5米与10米之间(16-30英尺)。在多个多刺的树枝上，落叶对生或五或六片轮生，短茎，长圆状披针形，革质，长1-10厘米(0.4-4英寸)。枝尖上有艳丽的红色、白色或杂色花朵，单独地或最多五朵花成簇。近圆形，但底部有突出的花萼成花冠状，石榴果实具有坚韧的革质外皮或果皮，基本上是黄色的，上面覆盖着浅粉色或深粉色或浓郁的红色。内部由膜状壁和白色海绵状组织分隔成隔室，隔室内装满透明囊，里面充满酸味、可口、肉质、多汁的果肉(假种皮)。在每个囊中，有一个白色或红色的、有角的、软的或硬的种子。假种皮占整个果实重量的约52％。
[0055]
出于本发明的目的，更优选石榴的果实，并且特别是果皮。
[0056]
在本发明的优选实施例中，石榴果实是在9月至12月期间从印度查谟和克什米尔邦的ramban区(kanga村)附近采集的，更具体地在北纬32
°
、东经74
°
左右的经纬度上。
具体实施方式
[0057]
石榴提取物
[0058]
优选地，根据本发明的提取物包含：
[0059]
i.占干提取物总重量的按重量计从10％至15％的安石榴苷，优选从10.5％至15％，更优选从10.8％至14.8％，甚至更优选从11.7％至14.6％；和
[0060]
ii.占干提取物总重量的按重量计从10％至15％的鞣花酸，优选从10.5％至14.5％，更优选从10.8％至14.8％，甚至更优选从11.2％至14.5％。
[0061]
根据本发明的提取物可以进一步包含占干提取物总重量的按重量计1％至5％的石榴皮鞣素，优选2％至4.5％，甚至更优选3％至4％。
[0062]
有利地，重量比[鞣花酸/安石榴苷]范围为从0.6至1.6，更优选从0.7至1.3，甚至更优选从0.7至1。
[0063]
在第一优选实施例中，根据本发明的提取物包含：
[0064]
i.占干提取物总重量的按重量计从11.7％至14.6％的安石榴苷，和
[0065]
ii.占干提取物总重量的按重量计从11.2％至14.5％的鞣花酸，
[0066]
并且其中重量比[鞣花酸/安石榴苷]范围为从0.6至1.6，更优选从0.7至1.3，甚至
更优选从0.7至1。
[0067]
在第二优选实施例中，根据本发明的提取物包含：
[0068]
i.占干提取物总重量的按重量计从11.7％至14.6％的安石榴苷，和
[0069]
ii.占干提取物总重量的按重量计从11.2％至14.5％的鞣花酸，和
[0070]
iii.占干提取物总重量的按重量计从3％至4％的石榴皮鞣素，
[0071]
并且其中重量比[鞣花酸/安石榴苷]范围为从0.6至1.6，更优选从0.7至1.3，甚至更优选从0.7至1。
[0072]
根据本发明的石榴提取物或者作为乙醇提取物的形式或者作为干提取物的形式。
[0073]
术语“干提取物”是指相对于干提取物的总重量包含不超过按重量计7％的溶剂、优选相对于干提取物的总重量不超过按重量计5％、更优选不超过3％的溶剂的提取物。在优选实施例中，干提取物包含相对于干提取物的总重量包含不超过按重量计1％的溶剂。在另一优选实施例中，干提取物不含任何溶剂(即0％)。
[0074]
术语“溶剂”是指含水溶剂、有机溶剂及它们的混合物。
[0075]
作为含水溶剂，可以提及水。
[0076]
作为有机溶剂，可以提及醇溶剂，尤其是c
2-c5中的一元醇，其选自乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇和戊醇，以及它们的混合物。
[0077]
石榴提取物的制备方法
[0078]
本发明的另一目的是制备根据本发明的石榴提取物的方法，其至少包括以下步骤：
[0079]
i.提供石榴果皮；
[0080]
ii.在从37℃至45℃范围内的温度下，在2至5小时内，用至少99.5％度的乙醇从所述果皮中提取至少安石榴苷和鞣花酸；
[0081]
iii.过滤并再重复步骤ii.至少两次；
[0082]
iv.任选地，在从35℃至40℃范围内的温度下真空干燥步骤iii.结束时获得的滤液。
[0083]
有利地，步骤ii.中的乙醇具有小于0.5％、更优选小于0.2％的水分含量。
[0084]
优选地，步骤i.处提供的石榴果皮是作为粉末形式的干燥果皮，其尤其包含占干燥果皮粉末总重量的按重量计从1％至5％的安石榴苷和占干燥果皮粉末总重量的按重量计从1％至5％的鞣花酸，更优选地，占干燥果皮粉末总重量的按重量计从2％至3％的安石榴苷和占干燥果皮粉末总重量的按重量计从1％至4％的鞣花酸。
[0085]
在优选实施例中，重量比[果皮/无水乙醇]为1:5。
[0086]
有利地，提取步骤ii.的温度范围为从40℃至43℃，更优选为42℃。
[0087]
步骤iii.的过滤根据本领域技术人员熟知的常规过滤方法、例如通过布氏漏斗进行。
[0088]
优选地，干燥步骤iv.的温度范围为从37℃至39℃，更优选为38℃。
[0089]
在特定实施例中，制备根据本发明的石榴提取物的方法在于以下步骤：
[0090]
v.提供石榴果皮；
[0091]
vi.在从37℃至45℃范围内的温度下，在2至5小时内，用至少99.5％度的乙醇从所述果皮中提取至少安石榴苷和鞣花酸；
[0092]
vii.过滤并再重复步骤ii.至少两次；
[0093]
viii.任选地，在从35℃至40℃范围内的温度下真空干燥步骤iii.结束时获得的滤液。
[0094]
制备物
[0095]
本发明还涉及一种制备物，其包含根据本发明的提取物和至少一种优选选自含有从2至8个碳原子并且特别地从2至6个原子的低级醇的水混溶性有机溶剂。
[0096]
更优选地，所述溶剂选自甘油、乙醇、丁二醇、二丙二醇、乙氧基二甘醇及它们的混合物，甚至更优选地选自丁二醇、二丙二醇、乙氧基二甘醇及它们的混合物。
[0097]
在更优选实施例中，所述溶剂选自丁二醇、二丙二醇及它们的混合物。
[0098]
有利地，重量比[溶剂/干提取物]范围为从95:5至99.9999:0.0001，优选从96:4至99.999:0.001，更优选从97:3至99.99:0.01。
[0099]
所述提取物可占所述制备物的总重量的按干提取物的重量计从0.0001％至5％，并且所述至少一种溶剂可占所述制备物的总重量的按重量计从95％至99.9999％，优选地，所述提取物可占所述制备物的总重量的按干提取物的重量计从0.001％至4％，并且所述至少一种溶剂可占所述制备物的总重量的按重量计从96％至99.999％，更优选地，所述提取物可占所述制备物的总重量的按干提取物的重量计从0.01％至3％，并且所述至少一种溶剂可占所述制备物的总重量的按重量计从97％至99.99％。
[0100]
组合物
[0101]
本发明还涉及一种组合物、特别是化妆品组合物，其包含在生理学上可接受的介质中的根据本发明的提取物或制备物。
[0102]
根据本发明的提取物在所述组合物中的存在量可以为占组合物的总重量的按干提取物的重量计从0.0001％至5％，优选组合物的总重量的按干提取物的重量计0.001％至4％，更优选按干提取物的重量计从0.01％至3％，甚至更优选按干提取物的重量计从0.5％至2.5％。
[0103]
根据本发明的制备物在所述组合物中的存在量可以为占组合物的总重量的按重量计从0.1％至60％，优选占组合物的总重量的按重量计从0.5％至50％，更优选按重量计从1％至40％。
[0104]
所述组合物可以是化妆品组合物，其包含生理学上可接受的介质，尤其是与皮肤和头皮相容的介质。
[0105]
根据特定实施例，化妆品组合物的ph在4与7.5之间，尤其是在4.5与7之间，并且特别是在4.7与6.5之间。
[0106]
组合物的生理学上可接受的介质可以更特别地包含水和任选地生理学上可接受的水溶性有机溶剂，所述有机溶剂选自例如含有从2至8个碳原子并且特别地从2至6个碳原子的低级醇，诸如乙醇、异丙醇、丙醇、丁醇；具有从6至80个亚乙基氧基单元的聚乙二醇和多元醇，诸如丙二醇、异戊二醇、丁二醇、甘油和山梨糖醇。
[0107]
所述水溶性有机溶剂可以占组合物的总重量的按重量计从0.5％至25％，优选组合物的总重量的按重量计从1％至20％，更优选组合物的总重量的按重量计从1.5％至15％。
[0108]
在优选实施例中，组合物包含如上定义的制备物和生理学上可接受的介质，该介
质可以更特别地包含水和任选地另外的生理学上可接受的水溶性有机溶剂。在这样的实施例中，所述另外的水溶性有机溶剂可以占组合物的总重量的按重量计从0.5％至25％，优选组合物的总重量的按重量计从1％至20％，更优选组合物的总重量的按重量计从1.5％至15％。
[0109]
盖仑制剂形式
[0110]
在优选实施例中，根据本发明的组合物是局部施用的。
[0111]
载体根据在考虑中的组合物的类型可以具有多样的性质。
[0112]
更特别地，关于用于外部局部施用的组合物，它们可以是水、水-醇或油溶液，洗剂或精华型的溶液或分散体，乳剂型的液体或半液体稠度的乳液(通过在水相中分散脂肪相(o/w)或反过来(w/o)获得)，或乳膏型、含水或无水凝胶、微乳剂、微囊、微颗粒、或者离子和/或非离子型的囊状分散体的柔软、半固体或固体稠度的悬浮液或乳液。
[0113]
根据通用方法制备这些组合物。
[0114]
当本发明的组合物是乳液时，脂肪相的比例相对于组合物的总重量范围可以为按重量计从5％至80％，并且优选地按重量计从10％至50％。呈乳液形式的组合物中使用的油、乳化剂和助乳化剂选自化妆品和/或皮肤科领域中常规使用的那些。乳化剂和共乳化剂可以以相对于组合物的总重量在按重量计从0.3％至30％并且优选按重量计从0.5％至20％范围内的比例存在于组合物中。
[0115]
当本发明的组合物是油性溶液或凝胶时，脂肪相可占组合物的总重量的超过90％。
[0116]
根据本发明使用的组合物可以构成护肤组合物，并且特别是用于面部、手、脚、主要解剖学褶皱或身体的清洁、保护、处理或护理霜(例如日霜、夜霜、卸妆霜、粉底霜或防晒霜)；流体粉底，卸妆乳，保护或护理身体乳或防晒乳；护肤洗剂，凝胶或摩丝，如清洁洗剂。
[0117]
辅助剂
[0118]
以已知方式，用于局部施用的盖仑制剂形式还可以包含在化妆品、制药和/或皮肤科领域中惯用的辅助剂，诸如亲水或亲脂胶凝剂、亲水或亲脂活性剂、乳化剂、防腐剂、另外的不同于本发明化合物的抗氧化剂、溶剂、香料、填料、紫外线(uv)屏蔽剂、气味吸收剂和着色剂。这些不同的辅助剂的量是在考虑中的领域中通常使用的那些，例如组合物的总重量的从0.01％至20％。取决于它们的性质，可以将这些辅助剂引入脂肪相中和/或引入水相中。
[0119]
组合物还可以包含油类诸如矿物油，例如氢化聚异丁烯和液体凡士林；植物油，例如乳木果油、葵花籽油和杏核仁油的液体部分；动物油，例如全氢角鲨烯、合成油，特别是普希林(purcellin)油、肉豆蔻酸异丙酯和棕榈酸乙基己酯；氟油，例如全氟聚醚。组合物还可以包含不饱和脂肪酸或脂肪醇；蜡；硅酮化合物，例如硅油；树脂；树胶。
[0120]
如先前所述，根据本发明的组合物还可以包含有机或无机化合物形式的在uva和/或uvb光中具有活性的uv屏蔽剂或光保护剂，所述无机化合物任选地被涂覆以使其疏水。
[0121]
在优选实施例中，根据本发明的组合物进一步包含至少一种选自以下的成分：硅酮脂肪，诸如油、树胶和硅酮蜡；非硅酮脂肪物质，诸如植物、矿物、动物和/或合成来源的油、膏和蜡；具有8至32个碳原子的脂肪酸；酯和合成醚，特别地具有式r1coor2和r1or2，其中r1代表含有从8至29个碳原子的脂肪酸的残基，并且r2代表含有从3至30个碳原子的支链
或非支链烃链；矿物或合成来源的直链或支链烃；具有从8至26个碳原子的脂肪醇；一些水；c2-c6醇；二醇，诸如丙二醇，酮；增稠剂、乳化剂、表面活性剂、胶凝剂、化妆品活性成分、香料、填料、染料、保湿剂、维生素、聚合物。
[0122]
美容方法
[0123]
本发明的另一主题是一种用于角蛋白材料、特别是皮肤的美容处理方法，其包括将包含如先前所定义的石榴提取物或制备物的组合物施加到角蛋白材料、特别是皮肤上的步骤。
[0124]
具体地讲，处理方法旨在预防和/或减少氧化应激或自由基(特别是来自uv辐射的那些)对角蛋白材料、特别是皮肤的影响。
[0125]
本发明还涉及用于皮肤的美容处理方法，该方法旨在预防和/或治疗特别是由氧化应激诱导的皮肤老化迹象。
[0126]
在特别是由氧化应激诱导的皮肤老化的迹象中，尤其提及丧失皮肤紧致度和/或弹性和/或张力和/或柔软性，形成皱纹和细纹，表情纹，特别是在前额和在眉毛之间的空间，口周皱纹和细纹，和/或嘴唇周围区域松弛，特别是在上唇区域(上唇和鼻子之间的区域)，肤色的暗淡外观，以及皮肤的纸状外观。
[0127]
该方法还旨在预防皮肤色素沉着，特别是由氧化应激引起的，尤其是由uv辐射引起的，其包括至少一个步骤，该步骤在于将包含如先前定义的石榴提取物的组合物施加到表现出皮肤老化迹象的皮肤上。
[0128]
具体地讲，根据本发明的方法旨在预防和/或减少皮肤的色素斑，特别是光化性着色斑；使皮肤变亮；预防肤色暗沉和/或灰色肤色，和/或改善肤色的亮度和/或均匀度；改善皮肤的光泽和/或透明度；改善皮肤的柔性、柔软性和/或弹性；和/或预防和/或减少皱纹和/或细纹。
[0129]
美容用途
[0130]
本发明还涉及根据本发明的石榴提取物，尤其在含有生理学上可接受的介质的组合物中，作为抗氧化剂或抗自由基剂的美容用途，具体地讲，所述提取物旨在预防和/或减少氧化应激或自由基对角蛋白材料、特别是皮肤的影响。
[0131]
本发明还涉及根据本发明的石榴提取物，尤其在含有生理学上可接受的介质的组合物中，作为抗老化剂，尤其是作为预防和/或治疗皮肤老化迹象的试剂的美容用途。
[0132]
本发明还涉及根据本发明的石榴提取物，尤其在含有生理学上可接受的介质的组合物中，用于预防和/或减少肤色暗沉和/或不均匀外观的美容用途。
[0133]
在整个描述中，除非另外说明，否则表述“包含一个/一种(comprising a)”或“含有一个/一种(containing a)”是指“包含至少一个/一种”或“含有至少一个/一种”。
[0134]
在该描述中，表述“至少一个/种”意指“一个/种或多个/种”。
[0135]
在该描述和以下实例中，除非另有说明，否则百分比是重量百分比，并且写为“在
……
与
……
之间”或“从
……
至
……”
的值范围包括指定的上限和下限。各种成分在其成形之前按顺序和在技术人员容易确定的条件下加以混合。
[0136]
我们现在将给出说明本发明的具体实例，但这些实例绝不是限制性的。
[0137]
除非另有说明，否则实例中给出的所有百分比均是按质量计，并且除非另有说明，否则温度为环境温度(20℃)并以摄氏度表示，并且除非另有说明，否则压力为大气压。
附图说明
[0138]
图1：根据本发明的石榴提取物的制备方法的示意图。
[0139]
图2：与单独的鞣花酸相比，使用根据本发明的石榴提取物，脂质过氧化减少。注：每个条形(图中)上方所示的以％表示的值是测试的原材料相对于长时间uv a暴露提供的％保护。
[0140]
实例
[0141]
实例1：根据本发明的石榴提取物的制备
[0142]
干燥的石榴果皮(1千克)在42℃用5升乙醇(proof 99.5％)在800rpm的搅拌下提取4小时的短暂时间。获得的乙醇提取物通过含有棉布(网眼大小：20微米)的布氏漏斗过滤。过滤的提取物在38℃真空蒸发，得到棕色无定形粉末。在上述条件下依次地重复提取，连续两次。合并的干燥提取物由主要酚类化合物构成，即：鞣花酸和安石榴苷。根据本发明的石榴提取物的制备方法的示意图在图1中呈现。
[0143]
根据本发明的提取物的规格如下：
[0144]
表1.提取物规格
[0145][0146]
这两种化合物即鞣花酸和安石榴苷的比率随所用有机提取溶剂的不同而不同，所述溶剂即：无水酒精：99.5％和蒸馏酒：95.0-96.0％，甲醇、乙酸乙酯和含水丙酮。因此，提取是用不同的有机溶剂进行的。结果表明，无水酒精(proof：99.5％)提供了具有适当数量和比率的鞣花酸/安石榴苷的提取物。
[0147]
*
[0148]
表2-不同有机溶剂的比较
[0149]
[0150][0151]
此外，这两种化合物即鞣花酸和安石榴苷的比率随提取步骤的温度和干燥步骤的温度而变化。因此，提取步骤和干燥步骤在不同温度(℃)进行。
[0152]
表3-不同提取温度的比较
[0153][0154]
表4-不同干燥温度的比较
[0155][0156]
实例2：实例1中获得的根据本发明的提取物的抗氧化活性
[0157]
a.脂质过氧化测试
[0158]
对根据实例1获得的根据本发明的石榴提取物对uva诱导的脂质过氧化的保护潜力进行评估，并与纯鞣花酸对uva诱导的脂质过氧化的保护进行比较。
[0159]
正常人成纤维细胞用0.001％的根据本发明的石榴提取物或用3μm的纯鞣花酸处理24小时，然后暴露于诱导不超过20％细胞死亡的uva剂量。
[0160]
执行对照，其包括正常人成纤维细胞暴露于诱导不超过20％细胞死亡的uva剂量。
[0161]
在暴露后2小时30分钟，测定8-异前列腺素的释放。结果在图2中呈现。
[0162]
对照(uv暴露)显示8-异前列腺素的100％的释放，及抗脂质过氧化的0％的保护，而用根据本发明的石榴提取物的处理显示8-异前列腺素的58％的更低释放，及抗脂质过氧
化的42％的更高保护。
[0163]
鞣花酸显示8-异前列腺素的65％的释放，及抗脂质过氧化的35％的保护。
[0164]
因此，根据本发明的石榴提取物显示出比单独的鞣花酸更好的抗脂质过氧化的保护。
[0165]
实例3：与本发明之外的提取物(用95％乙醇进行提取)相比，根据本发明的提取物(用99.5％乙醇进行提取)的抗氧化活性评估
[0166]
用于评估根据本发明使用的化合物的抗氧化活性的技术按照众所周知的方法进行(j.of photochemistry and photobiology b:biology[光化学和光生物学杂志b辑：生物学]57(2000)102-112tobi等人：glutathione modulates the level of free radicals produced in uva-irradiated cells[谷胱甘肽调节受uva照射的细胞中产生的自由基水平])。该技术使用荧光探针，即细胞内总体氧化应激的标志物，2'-7'-二氯荧光素二乙酸酯(dcfh-da)。
[0167]
原理
[0168]
使用dcfh-da作为氧化应激的标志物是基于其物理化学特性。它是非极性和非离子分子，能够扩散通过细胞膜。一旦进入细胞内，dcfh-da将被细胞内酯酶水解，产生非荧光化合物：dcfh或2,7-二氯二氢荧光素。在存在活性氧物种的情况下，dcfh被迅速氧化，产生高荧光化合物：dcf或2,7-二氯荧光素。
[0169]
程序：
[0170]
用实例1中获得的根据本发明的提取物(用99.5％乙醇进行提取)和实例1中获得的本发明之外的提取物(用95％乙醇进行提取)处理角质形成细胞
[0171]
在汇合(confluence)时，将角质形成细胞在存在待测提取物的情况下在培养基中在37℃、5％co2下孵育24小时。
[0172]
掺入dcfh-da
[0173]
将用每种提取物预处理的角质形成细胞进行冲洗，然后在dcfh-da存在下在黑暗中孵育。
[0174]
暴露于uva
[0175]
在此孵育后，去除dcfh-da溶液，然后将细胞暴露于2j/cm2的uva。观察：未暴露的对照板在室温下在黑暗中保存。
[0176]
荧光测量
[0177]
dcf的荧光在暴露于uva后立即通过荧光分光光度法(激发：480nm；发射：530nm)进行评估。
[0178]
结果
[0179]
光保护功效的结果在下表4中表示为相对于暴露于uv a的对照细胞的％荧光降低。对两个样品进行测量并确定平均值。
[0180]
表5.结果
[0181][0182]
上述结果揭示了用99.5％乙醇获得的实例1提取物关于uva诱导的氧化应激的更好的抗氧化活性，其对dcf的荧光抑制高于用95％乙醇提取的实例1提取物获得的荧光抑制。
[0183]
因此，根据本发明的石榴提取物相对于未处理的对照和本发明之外的比较提取物诱导更好的皮肤主动光保护。
[0184]
实例4：包含实例1中获得的根据本发明的提取物的化妆品组合物
[0185]
制备用于皮肤的抗老化含水凝胶，其包含(按重量计％)：
[0186]
卡波普
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
4％
[0187]
根据实例1获得的石榴提取 0.5％
[0188]
物
[0189]
水
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
适量至100％
[0190]
应用于面部后，该组合物可以保护皮肤免受uva诱导的应激。