蠕虫治疗的增强作用的制作方法

蠕虫治疗的增强作用
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求2019年12月18日提交的美国临时申请62/949,748的优先权，其内容在本文中以全文引用的方式并入。


背景技术：

3.肝吸虫是蠕虫寄生虫，其主要通过感染肝片吸虫或其热带对应物巨片吸虫而在畜牧业中造成重大经济损失。因为所有已知的对肝片吸虫(f.hepatica)具有活性的药物也对巨片吸虫(f.gigantica)具有活性，下面的讨论将它们统称为片吸虫(fasciola spp)。
4.片吸虫感染的主要影响是对养殖的反刍动物，然而，它们对于最终宿主不具选择性，并且成功地感染大范围的哺乳动物，包括人。在养殖的反刍动物中，片吸虫可能造成全世界数十亿美元的年经济损失。mcveigh等人，《寄生虫学趋势(trends in parasitology)》，2018年3月，第34卷，第3期184-196。
5.肝吸虫具有复杂的生命周期。在其最终宿主中，片吸虫可以分为三个阶段：早期未成熟、未成熟和成熟(通常称为成年阶段)。在绵羊中，早期未成熟形式出现在1至3周龄的吸虫中，未成熟形式出现在4至7周龄的吸虫中，以及成熟形式出现在8周及更大的吸虫中。在家牛中，早期未成熟形式出现在1至5周龄的吸虫中，未成熟形式出现在6至9周龄的吸虫中，以及成熟形式出现在10周及更大的吸虫中。
6.一些抗蠕虫药物仅对通常需要更频繁施用的成虫寄生虫有效，而由于抗药性的发展，许多抗蠕虫药物现在丧失了它们在肝片吸虫病的化学预防中的优势。
7.在澳大利亚，在田间和实验室中已经证明了肝片吸虫对几种抗蠕虫药物的抗药性((1990)肝片吸虫抗药性(drug resistance in fasciola hepatica).在：boray jc，martin pj，roush rt(编著)《寄生虫对抗寄生虫药物的抗性(resistance of parasites to antiparasitic drugs)》msd agvet，新泽西州拉威市(rahway，n.j.)，第51-60页和d.boray j.c.，de bono肝片吸虫抗药性(drug resistance in fasciola hepatica)，outteridge pm，richards rb(编著)《澳大利亚兽医科学的进步(australian advances in veterinary science)》(1989)。澳大利亚兽医协会，第166-169页)。已经显示，在新南威尔士病区，长久和经常使用水杨酰苯胺化合物，特别是在绵羊中使用雷复尼特(rafoxanide)和氯氰碘柳胺(closantel)已经被选择用于肝片吸虫的抗性菌株。这些菌株已经显示在家牛中保持其抵抗状态，并且在绵羊中通过几次传代。在来自不同地理区域的17种分离物中，10种(58.8％)在肝片吸虫中显示对推荐剂量下的雷复尼特的抗性以及对氯氰碘柳胺的副抗性明显。未成熟的肝片吸虫尤其表现出对药物的抗性，但成年吸虫很少表现出。期望具有改善疗效的肝吸虫感染的治疗。
具体实施方式
8.本发明提供了一种在需要治疗肝吸虫感染的哺乳动物中进行此类治疗的方法，该方法包含将有效量的地芬尼泰(diamphenethide)与有效量的氯氰碘柳胺组合施用。地芬尼
泰和氯氰碘柳胺的协同组合在关于抗敏感和抵抗片吸虫的疗效方面具有优势。
9.地芬尼泰的化学名也为n-[4-[2-[2-(4-乙酰氨基苯氧基)乙氧基]乙氧基]苯基]乙酰胺。地芬尼泰的制备是本领域公知的。例如，us3896235。地芬尼泰已经用于抗肝吸虫，并且通过脱酰作用快速代谢为称为damd的化合物。已经发现地芬尼泰对高达6周龄的早期未成熟的吸虫高度有效，但当其发育至成熟时对吸虫的活性逐渐降低。fairweather等人，《兽医杂志(the veterinary journal)》1999，158，81-112。用于治疗绵羊中的肝吸虫感染的地芬尼泰以商品名销售，并且在20世纪80年代早期从市场上去除。推荐的绵羊的口服剂量为80至120mg/kg。
[0010]
氯氰碘柳胺的化学名也为n-[5-氯-4-[(4-氯苯基)氰基甲基]-2-甲基苯基]-2-羟基-3，5-二碘苯甲酰胺。氯氰碘柳胺的制备是本领域公知的。销售的氯氰碘柳胺用于抗绵羊和家牛中的肝吸虫，包括商品名为用于治疗绵羊中的肝吸虫的氯氰碘柳胺与甲苯达唑(mebendazole)的组合以商品名combi销售。
[0011]
术语“肝吸虫感染”是指感染肝片吸虫或巨片吸虫。除非另有说明，该术语包括任何成熟阶段的吸虫感染和成熟阶段的混合物感染。
[0012]
术语“哺乳动物”是指温血脊椎动物，其具有毛发或皮毛并且由雌性分泌乳汁以滋养幼崽，并且包括人。具体的哺乳动物是反刍动物，例如家牛、绵羊、山羊、野牛、非洲水牛、水牛、羚羊、鹿、驼鹿、麋鹿和长颈鹿。此外，在术语哺乳动物中包括所谓的假反刍动物，例如美洲驼和羊驼。此外，在术语哺乳动物中包括马和驴。更具体地，哺乳动物被理解是绵羊、山羊、野牛、非洲水牛、水牛和家牛。甚至更具体地，哺乳动物是绵羊和家牛。
[0013]
熟练的临床医生可以容易地确定需要本治疗的哺乳动物。例如，症状包括发烧、不适、腹痛、嗜酸性粒细胞增多、肝增大和异常肝测试。此外，感染可以通过抗体测试，包括elisa测试，特别是血液和乳汁的测试来检测。还可以通过检查粪便样品，包括通过elisa测试来诊断感染。而且，基于季节、降雨量、温度和其它局部条件的建模可以用于预测肝吸虫感染更可能发生的时间。
[0014]
本文所使用的术语“与......组合”以及“组合”和“协同组合”用于意指在施用氯氰碘柳胺之前、期间或之后施用地芬尼泰。即，在本组合中，向哺乳动物顺序或同时施用地芬尼泰和氯氰碘柳胺。典型地，顺序施用意指施用另一种三天后施用地芬尼泰或氯氰碘柳胺。更典型地，地芬尼泰和氯氰碘柳胺彼此在一天内施用，并且甚至更典型地在同一天施用。顺序施用也意指在施用另一种的一小时或甚至数分钟内施用地芬尼泰或氯氰碘柳胺。为方便起见，同时施用地芬尼泰和氯氰碘柳胺。
[0015]
将有效量的地芬尼泰与有效量的氯氰碘柳胺组合向哺乳动物口服或肠道外施用。在一个实施例中，将有效量的地芬尼泰与有效量的氯氰碘柳胺组合向哺乳动物口服施用。在一个实施例中，将有效量的地芬尼泰与有效量的氯氰碘柳胺组合向哺乳动物肠道外施用。
[0016]
口服施用可以包括配制领域中常规使用的佐剂，并且因此可以以已知的方式加工以得到例如溶液、乳剂、可溶性粉末、粉末混合物、颗粒或聚合物质的微囊化。此类单独或一起含有地芬尼泰和氯氰碘柳胺的配制品、制剂或组合物任选地包括固体或液体佐剂，并且以本领域公知的方式制备，例如通过将活性成分与佐剂，
[0017]
例如溶剂、固体载体等，密切混合和/或研磨来制备。口服施用也可以通过灌服、管
饲法、片剂、胶囊或在饲喂中完成。
[0018]
术语“地芬尼泰的有效量”和“氯氰碘柳胺的有效量”用于意指当以本组合施用时，消除、几乎消除、减缓或阻止肝吸虫感染的进展所需的地芬尼泰和氯氰碘柳胺的量。
[0019]
在某些实施例中，本组合中地芬尼泰的有效量为20至120mg/kg(例如，20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、100mg/kg、105mg/kg、110mg/kg、115mg/kg或120mg/kg)，并且本组合中氯氰碘柳胺的有效量为1至10mg/kg(例如，1mg/kg、1.5mg/kg、2mg/kg、2.5mg/kg、3mg/kg、3.5mg/kg、4mg/kg、4.5mg/kg、5mg/kg、5.5mg/kg、6mg/kg、6.5mg/kg、7mg/kg、7.5mg/kg、8mg/kg、8.5mg/kg、9mg/kg、9.5mg/kg或10mg/kg)。在某些实施例中，本组合中地芬尼泰的有效量为20至80mg/kg(例如，20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg或80mg/kg)，并且本组合中氯氰碘柳胺的有效量为1至10mg/kg(例如，1.5mg/kg、3.5mg/kg、5mg/kg、7mg/kg或10mg/kg)。在某些实施例中，本组合中地芬尼泰的有效量30至80mg/kg、40至80mg/kg、50至80mg/kg、60至80mg/kg或70至80mg/kg。在某些实施例中，本组合中氯氰碘柳胺的有效量为1.5至10mg/kg、3至10mg/kg、5至10mg/kg或7至10mg/kg。在某些实施例中，本组合中地芬尼泰的有效量为30至60mg/kg、40至60mg/kg或40至50mg/kg。在某些实施例中，本组合中氯氰碘柳胺的有效量为3至10mg/kg、5至10mg/kg、6至10mg/kg或7至10mg/kg。
[0020]
在某些实施例中，为了治疗绵羊，本组合中地芬尼泰的有效量为20至80mg/kg，并且本组合中氯氰碘柳胺的有效量为3.5至10mg/kg。在某些实施例中，为了治疗绵羊，本组合中地芬尼泰的有效量为20至60mg/kg，并且本组合中氯氰碘柳胺的有效量为5至10mg/kg。在某些实施例中，为了治疗绵羊，本组合中地芬尼泰的有效量为35mg/kg，并且本组合中氯氰碘柳胺的有效量为5mg/kg。
[0021]
在某些实施例中，为了治疗家牛，本组合中地芬尼泰的有效量为40至120mg/kg，并且本组合中氯氰碘柳胺的有效量为3.5至10mg/kg。在某些实施例中，为了治疗家牛，本组合中地芬尼泰的有效量为40至80mg/kg，并且本组合中氯氰碘柳胺的有效量为5至10mg/kg。在某些实施例中，为了治疗家牛，本组合中地芬尼泰的有效量为70mg/kg，并且本组合中氯氰碘柳胺的有效量为10mg/kg。
[0022]
本发明提供了一种在需要治疗肝吸虫感染的哺乳动物中进行此类治疗的方法，该方法包含将有效量的地芬尼泰与有效量的氯氰碘柳胺组合施用。在另一个实施例中，哺乳动物是反刍动物。在另一个实施例中，哺乳动物选自由绵羊和家牛组成的组。在另一个实施例中，哺乳动物是绵羊。在另一个实施例中，哺乳动物是家牛。在另一个实施例中，组合中地芬尼泰的有效量为20至80mg/kg(例如，20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg或80mg/kg)。在另一个实施例中，组合中氯氰碘柳胺的有效剂量为1至10mg/kg(例如，1.5mg/kg、3.5mg/kg、5mg/kg、7mg/kg或10mg/kg)。在某些实施例中，地芬尼泰的有效量为30至80mg/kg、40至80mg/kg、50至80mg/kg、60至80mg/kg或70至80mg/kg。在某些实施例中，氯氰碘柳胺的有效量为1.5至10mg/kg、3至10mg/kg、5至10mg/kg或7至10mg/kg。
[0023]
本发明还涉及地芬尼泰和氯氰碘柳胺的组合在制作用于治疗肝吸虫感染的药剂中的用途。在另一个实施例中，地芬尼泰在组合中的使用为20至80mg/kg(例如，20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg或80mg/kg)。在另一个实施例中，氯氰碘柳胺
在组合中的使用为1至10mg/kg(例如，1.5mg/kg、3.5mg/kg、5mg/kg、7mg/kg或10mg/kg)。在某些实施例中，地芬尼泰的有效量为30至80mg/kg、40至80mg/kg、50至80mg/kg、60至80mg/kg或70至80mg/kg。在某些实施例中，氯氰碘柳胺的有效量为1.5至10mg/kg、3至10mg/kg、5至10mg/kg或7至10mg/kg。
[0024]
本公开的各个方面在以下编号的条款中阐述：
[0025]
条款1.一种在需要治疗肝吸虫感染的哺乳动物中进行此类治疗的方法，所述方法包含将有效量的地芬尼泰与有效量的氯氰碘柳胺组合施用。
[0026]
条款2.根据条款1所述的方法，其中所述哺乳动物选自由绵羊和家牛组成的组。
[0027]
条款3.根据条款1所述的方法，其中所述哺乳动物是绵羊。
[0028]
条款4.根据条款1所述的方法，其中所述哺乳动物是家牛。
[0029]
条款5.根据条款1至4中的任一项所述的方法，其中所述地芬尼泰的有效量为20至80mg/kg、30至80mg/kg、40至80mg/kg、50至80mg/kg、60至80mg/kg或70至80mg/kg。
[0030]
条款6.根据条款1至5中的任一项所述的方法，其中所述地芬尼泰的有效量为20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg或80mg/kg。
[0031]
条款7.根据条款1至6中的任一项所述的方法，其中所述氯氰碘柳胺的有效量为1至10mg/kg、1.5至10mg/kg、3至10mg/kg、5至10mg/kg或7至10mg/kg。
[0032]
条款8.根据条款1至7中的任一项所述的方法，其中所述氯氰碘柳胺的有效量为1.5mg/kg、3.5mg/kg、5mg/kg、7mg/kg或10mg/kg。
[0033]
条款9.根据条款1至8中的任一项所述的方法，其中所述肝吸虫是肝片吸虫。
[0034]
条款10.根据条款1至8中的任一项所述的方法，其中所述肝吸虫是巨片吸虫。
[0035]
条款11.根据条款1至10中的任一项所述的方法，其中所述肝吸虫感染是早期未成熟阶段肝吸虫感染。
[0036]
条款12.根据条款1至10中的任一项所述的方法，其中所述肝吸虫感染是未成熟阶段肝吸虫感染。
[0037]
条款13.根据条款1至10中的任一项所述的方法，其中所述肝吸虫感染是成熟阶段肝吸虫感染。
[0038]
条款14.一种有效量的地芬尼泰和有效量的氯氰碘柳胺的组合用于在需要治疗肝吸虫感染的哺乳动物中进行此类治疗的用途。
[0039]
条款15.根据条款14所述的用途，其中所述哺乳动物选自由绵羊和家牛组成的组。
[0040]
条款16.根据条款14所述的用途，其中所述哺乳动物是绵羊。
[0041]
条款17.根据条款14所述的用途，其中所述哺乳动物是家牛。
[0042]
条款18.根据条款14至17中的任一项所述的用途，其中所述地芬尼泰的有效量为20至80mg/kg、30至80mg/kg、40至80mg/kg、50至80mg/kg、60至80mg/kg或70至80mg/kg。
[0043]
条款19.根据条款14至18中的任一项所述的用途，其中所述地芬尼泰的有效量为20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg或80mg/kg。
[0044]
条款20.根据条款14至19中的任一项所述的用途，其中所述氯氰碘柳胺的有效量为1至10mg/kg、1.5至10mg/kg、3至10mg/kg、5至10mg/kg或7至10mg/kg。
[0045]
条款21.根据条款14至20中的任一项所述的用途，其中所述氯氰碘柳胺的有效量为1.5mg/kg、3.5mg/kg、5mg/kg、7mg/kg或10mg/kg。
[0046]
条款22.根据条款14至21中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫是肝片吸虫。
[0047]
条款23.根据条款14至21中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫是巨片吸虫。
[0048]
条款24.根据条款14至23中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫感染是早期未成熟阶段肝吸虫感染。
[0049]
条款25.根据条款14至23中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫感染是未成熟阶段肝吸虫感染。
[0050]
条款26.根据条款14至23中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫感染是成熟阶段肝吸虫感染。
[0051]
条款27.一种有效量的地芬尼泰和有效量的氯氰碘柳胺的组合在制作用于在需要治疗肝吸虫感染的哺乳动物中进行此类治疗的药剂中的用途。
[0052]
条款28.根据条款27所述的用途，其中所述哺乳动物选自由绵羊和家牛组成的组。
[0053]
条款29.根据条款27所述的用途，其中所述哺乳动物是绵羊。
[0054]
条款30.根据条款27所述的用途，其中所述哺乳动物是家牛。
[0055]
条款31.根据条款27至30中的任一项所述的用途，其中所述地芬尼泰的有效量为20至80mg/kg、30至80mg/kg、40至80mg/kg、50至80mg/kg、60至80mg/kg或70至80mg/kg。
[0056]
条款32.根据条款27至31中的任一项所述的用途，其中所述地芬尼泰的有效量为20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg或80mg/kg。
[0057]
条款33.根据条款27至32中的任一项所述的用途，其中所述氯氰碘柳胺的有效量为1至10mg/kg、1.5至10mg/kg、3至10mg/kg、5至10mg/kg或7至10mg/kg。
[0058]
条款34.根据条款27至33中的任一项所述的用途，其中所述氯氰碘柳胺的有效量为1.5mg/kg、3.5mg/kg、5mg/kg、7mg/kg或10mg/kg。
[0059]
条款35.根据条款27至34中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫是肝片吸虫。
[0060]
条款36.根据条款27至34中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫是巨片吸虫。
[0061]
条款37.根据条款27至36中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫感染是早期未成熟阶段肝吸虫感染。
[0062]
条款38.根据条款27至36中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫感染是未成熟阶段肝吸虫感染。
[0063]
条款39.根据条款27至36中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫感染是成熟阶段肝吸虫感染。
[0064]
条款40.一种用于在需要治疗肝吸虫感染的哺乳动物中进行此类治疗的地芬尼泰和氯氰碘柳胺的协同组合。
[0065]
条款41.根据条款40所述的组合，其中所述哺乳动物选自由绵羊和家牛组成的组。
[0066]
条款42.根据条款40所述的组合，其中所述哺乳动物是绵羊。
[0067]
条款43.根据条款40所述的组合，其中所述哺乳动物是家牛。
[0068]
条款44.根据条款40至43中的任一项所述的组合，其包含20至80mg/kg、30至80mg/kg、40至80mg/kg、50至80mg/kg、60至80mg/kg或70至80mg/kg的地芬尼泰。
[0069]
条款45.根据条款40至44中的任一项所述的组合，其包含20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg或80mg/kg的地芬尼泰。
[0070]
条款46.根据条款40至45中的任一项所述的组合，其包含1至10mg/kg、1.5至10mg/
kg、3至10mg/kg、5至10mg/kg或7至10mg/kg的氯氰碘柳胺。
[0071]
条款47.根据条款40至46中的任一项所述的组合，其包含1.5mg/kg、3.5mg/kg、5mg/kg、7mg/kg或10mg/kg的氯氰碘柳胺。
[0072]
条款48.根据条款40至47中的任一项所述的组合，其中所述肝吸虫是肝片吸虫。
[0073]
条款49.根据条款40至47中的任一项所述的组合，其中所述肝吸虫是巨片吸虫。
[0074]
条款50.根据条款40至49中的任一项所述的组合，其中所述肝吸虫感染是早期未成熟阶段肝吸虫感染。
[0075]
条款51.根据条款40至49中的任一项所述的组合，其中所述肝吸虫感染是未成熟阶段肝吸虫感染。
[0076]
条款52.根据条款40至49中的任一项所述的组合，其中所述肝吸虫感染是成熟阶段肝吸虫感染。
[0077]
条款53.根据条款1至13中的任一项所述的方法、根据条款14至39中的任一项所述的用途，或根据条款40至52中的任一项所述的组合，其中顺序施用所述地芬尼泰和所述氯氰碘柳胺。
[0078]
条款54.根据条款1至13中的任一项所述的方法、根据条款14至39中的任一项所述的用途，或根据条款40至52中的任一项所述的组合，其中同时施用所述地芬尼泰和所述氯氰碘柳胺。
[0079]
条款55.根据条款1至4中的任一项所述的方法，其中，所述地芬尼泰的有效量为30至60mg/kg、40至60mg/kg或40至50mg/kg。
[0080]
条款56.根据条款55所述的方法，其中所述地芬尼泰的有效量为30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg或60mg/kg。
[0081]
条款57.根据条款55或条款56所述的方法，其中所述氯氰碘柳胺的有效量为3至10mg/kg、5至10mg/kg、6至10mg/kg或7至10mg/kg。
[0082]
条款58.根据条款55至57中的任一项所述的方法，其中所述氯氰碘柳胺的有效量为3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg或10mg/kg。
[0083]
条款59.根据条款3所述的方法，其中所述地芬尼泰的有效量为20至60mg/kg，并且所述氯氰碘柳胺的有效量为5至10mg/kg。
[0084]
条款60.根据条款4所述的方法，其中所述地芬尼泰的有效量为40至80mg/kg，并且所述氯氰碘柳胺的有效量为5至10mg/kg。
[0085]
条款61.根据条款55至60中的任一项所述的方法，其中所述肝吸虫是肝片吸虫。
[0086]
条款62.根据条款55至60中的任一项所述的方法，其中所述肝吸虫是巨片吸虫。
[0087]
条款63.根据条款55至60中的任一项所述的方法，其中所述肝吸虫感染是早期未成熟阶段肝吸虫感染。
[0088]
条款64.根据条款55至60中的任一项所述的方法，其中所述肝吸虫感染是未成熟阶段肝吸虫感染。
[0089]
条款65.根据条款55至60中的任一项所述的方法，其中所述肝吸虫感染是成熟阶段肝吸虫感染。
[0090]
条款66.根据条款14至17中的任一项所述的用途，其中所述地芬尼泰的有效量为30至60mg/kg、40至60mg/kg或40至50mg/kg。
[0091]
条款67.根据条款66所述的用途，其中所述地芬尼泰的有效量为30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg或60mg/kg。
[0092]
条款68.根据条款66或条款67所述的用途，其中所述氯氰碘柳胺的有效量为3至10mg/kg、5至10mg/kg、6至10mg/kg或7至10mg/kg。
[0093]
条款69.根据条款66至68中的任一项所述的用途，其中所述氯氰碘柳胺的有效量为3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg或10mg/kg。
[0094]
条款70.根据条款16所述的用途，其中所述地芬尼泰的有效量为20至60mg/kg，并且所述氯氰碘柳胺的有效量为5至10mg/kg。
[0095]
条款71.根据条款17所述的用途，其中所述地芬尼泰的有效量为40至80mg/kg，并且所述氯氰碘柳胺的有效量为5至10mg/kg。
[0096]
条款72.根据条款66至71中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫是肝片吸虫。
[0097]
条款73.根据条款66至71中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫是巨片吸虫。
[0098]
条款74.根据条款66至71中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫感染是早期未成熟阶段肝吸虫感染。
[0099]
条款75.根据条款66至71中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫感染是未成熟阶段肝吸虫感染。
[0100]
条款76.根据条款66至71中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫感染是成熟阶段肝吸虫感染。
[0101]
条款77.根据条款27至30中的任一项所述的用途，其中所述地芬尼泰的有效量为30至60mg/kg、40至60mg/kg或40至50mg/kg。
[0102]
条款78.根据条款77所述的用途，其中所述地芬尼泰的有效量为30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg或60mg/kg。
[0103]
条款79.根据条款77或条款78所述的用途，其中所述氯氰碘柳胺的有效量为3至10mg/kg、5至10mg/kg、6至10mg/kg或7至10mg/kg。
[0104]
条款80.根据条款77至79中的任一项所述的用途，其中所述氯氰碘柳胺的有效量为3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg或10mg/kg。
[0105]
条款81.根据条款29所述的用途，其中所述地芬尼泰的有效量为20至60mg/kg，并且所述氯氰碘柳胺的有效量为5至10mg/kg。
[0106]
条款82.根据条款30所述的用途，其中所述地芬尼泰的有效量为40至80mg/kg，并且所述氯氰碘柳胺的有效量为5至10mg/kg。
[0107]
条款83.根据条款77至82中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫是肝片吸虫。
[0108]
条款84.根据条款77至82中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫是巨片吸虫。
[0109]
条款85.根据条款77至82中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫感染是早期未成熟阶段肝吸虫感染。
[0110]
条款86.根据条款77至82中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫感染是未成熟阶段肝吸虫感染。
[0111]
条款87.根据条款77至82中的任一项所述的用途，其中所述肝吸虫感染是成熟阶段肝吸虫感染。
[0112]
条款88.根据条款40至43中的任一项所述的组合，其中所述地芬尼泰的有效量为
30至60mg/kg、40至60mg/kg或40至50mg/kg。
[0113]
条款89.根据条款88所述的组合，其中所述地芬尼泰的有效量为30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg或60mg/kg。
[0114]
条款90.根据条款88或条款89所述的组合，其中所述氯氰碘柳胺的有效量为3至10mg/kg、5至10mg/kg、6至10mg/kg或7至10mg/kg。
[0115]
条款91.根据条款88至90中的任一项所述的组合，其中所述氯氰碘柳胺的有效量为3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg或10mg/kg。
[0116]
条款92.根据条款42所述的组合，其中所述地芬尼泰的有效量为20至60mg/kg(例如，35mg/kg)，并且所述氯氰碘柳胺的有效量为5至10mg/kg(例如，5mg/kg)。
[0117]
条款93.根据条款43所述的组合，其中所述地芬尼泰的有效量为40至80mg/kg(例如，70mg/kg)，并且所述氯氰碘柳胺的有效量为5至10mg/kg(例如，10mg/kg)。
[0118]
条款94.根据条款88至93中的任一项所述的组合，其中所述肝吸虫是肝片吸虫。
[0119]
条款95.根据条款88至93中的任一项所述的组合，其中所述肝吸虫是巨片吸虫。
[0120]
条款96.根据条款88至93中的任一项所述的组合，其中所述肝吸虫感染是早期未成熟阶段肝吸虫感染。
[0121]
条款97.根据条款88至93中的任一项所述的组合，其中所述肝吸虫感染是未成熟阶段肝吸虫感染。
[0122]
条款98.根据条款88至93中的任一项所述的组合，其中所述肝吸虫感染是成熟阶段肝吸虫感染。
[0123]
条款99.根据条款55至60中的任一项所述的方法、根据条款66至71或77至82中的任一项所述的用途，或根据条款88至93中的任一项所述的组合，其中顺序施用所述地芬尼泰和所述氯氰碘柳胺。
[0124]
条款100.根据条款55至60中的任一项所述的方法、根据条款14至39中的任一项所述的用途，或根据条款88至93中的任一项所述的组合，其中同时施用所述地芬尼泰和所述氯氰碘柳胺。
[0125]
条款101.根据条款1所述的方法、根据条款14或条款27所述的用途，或根据条款40所述的组合，其中所述地芬尼泰的有效量为20mg/kg或更大、30mg/kg或更大、40mg/kg或更大、50mg/kg或更大、60mg/kg或更大、70mg/kg或更大、80mg/kg或更大、90mg/kg或更大、100mg/kg或更大、110mg/kg或更大，或120mg/kg或更大。
[0126]
条款102.根据条款1所述的方法、根据条款14或条款27所述的用途，或根据条款40所述的组合，其中所述地芬尼泰的有效量为120mg/kg或更少、110mg/kg或更少、90mg/kg或更少、80mg/kg或更少、70mg/kg或更少、60mg/kg或更少、50mg/kg或更少、40mg/kg或更少、30mg/kg或更少、20mg/kg或更少。
[0127]
条款103.根据条款1、101或102所述的方法、根据条款14、27、101或102所述的用途，或根据条款40、101或102所述的组合，其中所述氯氰碘柳胺的有效量为1mg/kg或更大、1.5mg/kg或更大、2mg/kg或更大、2.5mg/kg或更大、3mg/kg或更大、3.5mg/kg或更大、4mg/kg或更大、4.5mg/kg或更大、5mg/kg或更大、5.5mg/kg或更大、6mg/kg或更大、6.5mg/kg或更大、7mg/kg或更大、7.5mg/kg或更大、8mg/kg或更大、8.5mg/kg或更大、9mg/kg或更大、9.5mg/kg或更大，或10mg/kg或更大。
[0128]
条款104.根据条款1、101或102所述的方法、根据条款14、27、101或102所述的用途，或根据条款40、101或102所述的组合，其中所述氯氰碘柳胺的有效量为10mg/kg或更少、9.5mg/kg或更少、9mg/kg或更少、8.5mg/kg或更少、8mg/kg或更少、7.5mg/kg或更少、7mg/kg或更少、6.5mg/kg或更少、6mg/kg或更少、5.5mg/kg或更少、5mg/kg或更少、4.5mg/kg或更少、4mg/kg或更少、3.5mg/kg或更少、3mg/kg或更少、2.5mg/kg或更少、2mg/kg或更少、1.5mg/kg或更少、或1mg/kg或更少。
[0129]
条款105.根据条款1所述的方法、根据条款14或条款27所述的用途，或根据条款40所述的组合，其中所述地芬尼泰的有效量为20至80mg/kg，并且所述氯氰碘柳胺的有效量为3.5至10mg/kg。
[0130]
条款106.根据条款101至105中的任一项所述的方法、根据条款101至105中的任一项所述的用途，或根据条款101至105中的任一项所述的组合，其中所述哺乳动物是绵羊。
[0131]
条款107.根据条款101至105中的任一项所述的方法、根据条款101至105中的任一项所述的用途，或根据条款101至105中的任一项所述的组合，其中所述哺乳动物是家牛。
[0132]
条款108.根据条款106所述的方法、使用或组合，其中所述地芬尼泰的有效量为35mg/kg并且所述氯氰碘柳胺的有效量为5mg/kg。
[0133]
条款109.根据条款107所述的方法、使用或组合，其中所述地芬尼泰的有效量为70mg/kg并且所述氯氰碘柳胺的有效量为10mg/kg。
[0134]
条款110.根据条款101至109中的任一项所述的方法、根据条款101至109中的任一项所述的用途，或根据条款101至109中的任一项所述的组合，其中所述肝吸虫是肝片吸虫。
[0135]
条款111.根据条款101至109中的任一项所述的方法、根据条款101至109中的任一项所述的用途，或根据条款101至109中的任一项所述的组合，其中所述肝吸虫是巨片吸虫。
[0136]
条款112.根据条款101至111中的任一项所述的方法、根据条款101至111中的任一项所述的用途，或根据条款101至111中的任一项所述的组合，其中所述肝吸虫感染是早期未成熟阶段肝吸虫感染。
[0137]
条款113.根据条款101至111中的任一项所述的方法、根据条款101至111中的任一项所述的用途，或根据条款101至111中的任一项所述的组合，其中所述肝吸虫感染是未成熟阶段肝吸虫感染。
[0138]
条款114.根据条款101至111中的任一项所述的方法、根据条款101至111中的任一项所述的用途，或根据条款101至111中的任一项所述的组合，其中所述肝吸虫感染是成熟阶段肝吸虫感染。
[0139]
条款115.根据任何前述条款所述的方法、使用或组合，其中所述方法、使用或组合表现出80％或更大、85％或更大、86％或更大、87％或更大、88％或更大、89％或更大、90％或更大、91％或更大、92％或更大、93％或更大、94％或更大、95％或更大、96％或更大、97％或更大、98％或更大，或99％或更大的治疗肝吸虫感染的疗效。
[0140]
条款116.根据任何前述条款所述的方法、使用或组合，其中所述方法、使用或组合表现出85％至99％的疗效。
[0141]
条款117.根据任何前述条款所述的方法、使用或组合，其中所述方法、使用或组合表现出85％至96％的疗效。
[0142]
条款118.根据条款115至117中的任一项所述的方法、使用或组合，其中疗效的评
估基于与未治疗的对照相比，从所述哺乳动物肝脏中去除的活吸虫的数目。
[0143]
条款119.根据条款118所述的方法、使用或组合，其中评估发生在治疗后40至80天(例如，治疗后40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80天)恢复的具有完整胆囊和胆总管的肝脏上。
[0144]
以下实例说明了地芬尼泰和氯氰碘柳胺的组合在绵羊和家牛中改善的疗效。应当理解，实例是以说明而非限制的方式阐述的。
[0145]
在以下的实施例中，证实所有动物都没有感染肝片吸虫，并且在入组本研究之前由兽医发现临床健康。由适当大小的一次性注射器口服施用剂量。
[0146]
对吸虫数和体重进行对数转换(仅对吸虫数加上常数1后)，并且检查转换数据的分布，以看它们是否满足正态分布的假设。通过方差分析方法(anova)分析治疗组之间的差异，因为对于对数转换的吸虫数和对数转换的体重以及对于(未转换的)吸虫测量满足正态分布的假设。
[0147]
总结了吸虫数、吸虫测量和体重的算术平均值(amean)、几何平均值(gmean)、中位数和范围。常数1
[0148]
应用于计算吸虫数的几何平均值。
[0149]
每个治疗组的疗效百分比计算如下：
[0150]
％疗效＝100x(fc
c-fc
t
)/fcc[0151]
其中fcc是对照组的算术平均吸虫数，以及fc
t
是治疗组的算术平均吸虫数。还应用平均几何吸虫数公式；这些是使用对数转换数据计算的，其中1作为常数加到每个吸虫数上，并且然后在转换后减去。
[0152]
如果为以下情况则得出协同效应：
[0153]
(1-疗效
d+c
)＜(1-疗效d)
×
(1-疗效c)
[0154]
其中d＝地芬尼泰以及c＝氯氰碘柳胺，并且疗效测量为绝对数(不以％计)。
[0155]
注意，预期协同作用定义为：
[0156]
1-疗效(预期无协同作用)＝(1-疗效d)
×
(1-疗效c)。
[0157]
实例1
[0158]
在实例1中提供了地芬尼泰和氯氰碘柳胺的典型配制品。地芬尼泰的悬浮液如下制备：将丙二醇放入玻璃烧杯中。加入两种对羟基苯甲酸酯并且搅拌直至溶解。加入聚山梨酸酯80、消泡乳剂和水并且搅拌直至达到均匀。在搅拌的同时非常缓慢地加入微晶纤维素rc591(avicel rc591)。之后用ultra-匀化几分钟，在搅拌的同时缓慢加入地芬尼泰，并且再用ultra-匀化至少10分钟，以得到具有以下组成的悬浮液：
[0159]
1.地芬尼泰15％(w/v)
[0160]
2.丙二醇5％(w/v)
[0161]
3.对羟基苯甲酸甲酯0.11％(w/v)
[0162]
4.对羟基苯甲酸丙酯0.04％(w/v)
[0163]
5.聚山梨酸酯80 0.5％(w/v)
[0164]
6.微晶纤维素rc 591 1.2％(w/v)
[0165]
7.消泡乳剂0.6％(w/v)
[0166]
8.软化水加至100。
[0167]
氯氰碘柳胺的悬浮液可以如下制备：加热水，加入两种对羟基苯甲酸酯并且搅拌直至它们溶解。冷却至环境温度，并且加入sds和消泡乳剂并且搅拌直至达到均匀。在搅拌的同时非常缓慢地加入微晶纤维素rc591。之后用ultra-匀化几分钟
[0168]
在搅拌的同时缓慢加入氯氰碘柳胺，并且再用ultra-匀化至少10分钟，以得到具有以下组成的悬浮液：
[0169]
1.氯氰碘柳胺3.75％(w/v)
[0170]
2.对羟基苯甲酸甲酯0.11％(w/v)
[0171]
3.对羟基苯甲酸丙酯0.04％(w/v)
[0172]
4.sds(月桂基硫酸钠)0.1％(w/v)
[0173]
5.微晶纤维素rc 591 1.2％(w/v)
[0174]
6.消泡乳剂0.5％(w/v)
[0175]
7.软化水加至100。
[0176]
实例2
[0177]
地芬尼泰与氯氰碘柳胺组合的口服配制品对绵羊中早期未成熟阶段肝片吸虫的疗效
[0178]
本研究旨在评估同时给予地芬尼泰(60mg/kg)与氯氰碘柳胺(10mg/kg)、单独给予地芬尼泰(60mg/kg)和单独给予氯氰碘柳胺(10mg/kg)在第14天对治疗的绵羊中肝片吸虫的疗效。这是使用35至6月龄美利奴(merino)羔羊的对照、盲法、随机研究。
[0179]
在第0天，用87个oberon分离物(fashep-65)肝片吸虫囊蚴的靶标对绵羊进行实验性感染。在水和4％羧甲基纤维素溶液中制备用于感染的所需数目的囊蚴。每次感染剂量后口服施用水。
[0180]
根据第11天的体重将绵羊随机分成治疗组，并且如表2.1中所示分配给各组。
[0181]
表2.1
[0182]
组治疗方法剂量(mg/kg)n1未治疗-32地芬尼泰6033氯氰碘柳胺1034地芬尼泰和氯氰碘柳胺60和103
[0183]
在第11天测定体重，并且通过体积测量剂量并且四舍五入至最接近的0.1ml。在第14天，并且在饲喂前，个别动物仅用表2.1中的治疗方法治疗一次。一旦动物被治疗，将它们放回它们的围栏中并且在一小时内饲喂。此时也饲喂未治疗的对照动物。
[0184]
在第91或92天从每只动物回收胆囊和胆总管完整的肝脏并且进行处理用于肝片吸虫计数。疗效的评估基于从肝脏中去除的活吸虫的数目。
[0185]
使用anova模型比较治疗组之间的吸虫数。将该模型应用于对数转换计数。存在一个固定效应，治疗组。
[0186]
组1中的所有对照绵羊的oberon肝片吸虫感染呈阳性，算术平均值为20并且几何平均值为16。将治疗的绵羊的疗效百分比与未治疗的对照组中的绵羊的疗效百分比进行比较，如下表2.2中所显示的。
[0187]
表2.2
[0188]
组治疗方法吸虫数1％疗效2吸虫数3％疗效41未治疗对照19.7-16.3-2地芬尼泰0.398.30.398.43氯氰碘柳胺15.720.314.510.64地芬尼泰和氯氰碘柳胺01000100
[0189]1算术平均值；2使用算术平均值；3几何平均值；4使用几何平均值
[0190]
实例3
[0191]
地芬尼泰与氯氰碘柳胺同时施用对绵羊中未成熟阶段肝片吸虫感染的协同效应的评价
[0192]
本研究旨在评估地芬尼泰(40mg/kg)与氯氰碘柳胺(3.75mg/kg)同时给予、单独给予地芬尼泰(40mg/kg)和单独给予氯氰碘柳胺(3.75mg/kg)在第42天对治疗的绵羊(3至4个月的美利奴羔羊)中的肝片吸虫的疗效。这是对照、盲法、随机研究。
[0193]
在第0天，用约200个sunny corner(fashep-66)分离肝片吸虫囊蚴的单一分离物对绵羊进行实验性感染。所需数目的囊蚴是由羧甲基纤维素制成的。感染后检查注射器是否留有囊蚴。感染是口服施用的，并且每次感染剂量后口服施用水。根据第41天的体重将绵羊随机分成治疗组，并且如表3.1中所示分配给各组。
[0194]
表3.1
[0195]
组治疗方法剂量(mg/kg)n1未治疗-52地芬尼泰4053氯氰碘柳胺3.7554地芬尼泰和氯氰碘柳胺40和3.755
[0196]
在治疗前一天测定体重。所有治疗按体积测量并且四舍五入至最接近的0.1ml。在第42天，并且在饲喂前，个别动物仅用表3.1中的治疗方法治疗一次。一旦动物被治疗，将它们放回它们的围栏中并且在一小时内饲喂。此时也饲喂未治疗的对照动物。
[0197]
在第91天从每只动物回收胆囊和胆管完整的肝脏并且进行处理用于肝片吸虫计数。疗效的评估基于从肝脏中去除的活吸虫的数目。
[0198]
所有对照动物的肝片吸虫感染呈阳性，算术平均值为90.2并且几何平均值为87.02。将治疗的绵羊的疗效百分比与未治疗的对照组中的绵羊的疗效百分比进行比较，如下表3.2中所显示的。
[0199]
表3.2
[0200]
组治疗方法吸虫数1％疗效2吸虫数3％疗效41未治疗对照90.2-87.02-2地芬尼泰57.636.150.941.53氯氰碘柳胺54.040.151.640.74地芬尼泰和氯氰碘柳胺23.474.120.976.0
[0201]1算术平均值；2使用算术平均值；3几何平均值；4使用几何平均值
[0202]
成对比较证明，同时治疗组的吸虫数显著低于未治疗组和单一配制品治疗组，并且单一活性治疗组在吸虫数方面彼此没有显著差异，如表3.3所显示的。
[0203]
表3.3
[0204][0205]
同时治疗对肝片吸虫的预期和观察到的％疗效存在于表3.4中。
[0206]
表3.4
[0207][0208]
观察到的地芬尼泰和氯氰碘柳胺同时治疗的疗效高于预期的累加效应，证明了协同效应。