一种管花肉苁蓉提取物及其制备方法与流程

1.本发明涉及植物提取领域，具体而言，本发明涉及一种具有润肠通便功效的管花肉苁蓉提取物及其制备方法。本申请是申请日为2016年05月17日、发明名称为“一种管花肉苁蓉提取物及其制备方法”的中国发明专利申请第201610328836.3号的分案申请。


背景技术：

2.随着人们饮食结构的改变及精神心理和社会因素的影响，便秘发病率有增高趋势，困扰着越来越多的人。据统计，便秘在人群中的患病率高达27％，且有增高趋势。便秘患者除会感到身体不适外，还有可能伴有失眠、焦虑、抑郁等心理障碍，严重者会出现腹痛、贫血和消瘦等症状。因便秘发病率高、病因复杂，患者常有许多苦恼，便秘严重时会影响生活质量。因此制备效果较为显著的用于预防或者治疗便秘相关疾病的药物已经成为药物或者保健食品研究领域的热点之一
3.管花肉苁蓉为列当科寄生植物管花肉苁蓉cistanche tubulosa(schenk)r.wight的干燥带磷叶肉质茎，俗称大芸，其味甘、咸、性温，产于我国新疆塔里木盆地，资源比较丰富，《神本草经》将其列为上品。苯乙醇苷类物质为管花肉苁蓉主要活性成分，同时含有有少量的环烯醚萜类以及木质素类物质。管花肉苁蓉作为中草药使用已经有上千年的悠久历史，尤其是作为补肾壮阳药应用十分广泛，在传统滋补方中出现的频率仅次于人参，被称为“沙漠人参”。现代药理研究表明管花肉苁蓉还具有增强免疫功能、抗疲劳、抗衰老、抗动脉粥样硬化、抗氧化、抗病毒、保护肝脏、促进代谢等功效。相关研究表明管花肉苁蓉具有润肠通便的作用，可以用于预防或者治疗便秘等相关疾病。目前用于预防或者治疗老年性便秘和习惯性便秘的管花肉苁蓉提取物的制备方法尤为欠缺。为解决此问题，本专利提供了管花肉苁蓉提取物的制备工艺，并通过药效实验对其润肠通便作用进行了确认。方法操作简便，高收率低成本，产品质量稳定，工艺绿色环保，适合大规模生产。


技术实现要素：

4.因此，本发明的目的是提供了一种管花肉苁蓉鲜品或干品的提取物；
5.解决所述技术问题采取的技术方案为：
6.一种管花肉苁蓉提取物，所述提取物包含25～35％多糖，9～12％寡糖，10～15％总黄酮，7～12％苁蓉总苷，5～8％多酚，5～8％蛋白，余量为水分和灰分，以管花肉苁蓉提取物的质量为基准。
7.优选地，所述提取物包含31.35～35％多糖，11.56～12％寡糖，13.25～15％总黄酮，11.12～12％苁蓉总苷，6.77～8％多酚，6.94～8％蛋白，余量为水分和灰分。
8.优选地，所述提取物包含29.44～35％多糖，10.83～12％寡糖，12.31～15％总黄酮，11.03～12％苁蓉总苷，7.13～8％多酚，7.61～8％蛋白，余量为水分和灰分。
9.优选地，所述提取物包含32.22～35％多糖，11.79～12％寡糖，13.04～15％总黄酮，11.90～12％苁蓉总苷，5.80～8％多酚，7.06～8％蛋白，余量为水分和灰分。
10.优选地，所述提取物包含31.3％多糖，11.56％寡糖，13.25％总黄酮，11.12％苁蓉总苷，6.77％多酚，6.94％蛋白，余量为水分和灰分。
11.优选地，所述提取物包含29.44％多糖，10.83％寡糖，12.31％总黄酮，11.03％苁蓉总苷，7.13％多酚，7.61％蛋白，余量为水分和灰分。
12.优选地，所述提取物包含32.22％多糖，11.79％寡糖，13.04％总黄酮，11.90％苁蓉总苷，5.80％多酚，7.06％蛋白，余量为水分和灰分。
13.本发明的另一发明目的是提供了一种制备管花肉苁蓉提取物的方法：
14.(1)管花肉苁蓉的鲜品或干品使用纯化水回流提取2～3次，每次2～5小时；合并提取液，过滤浓缩至40～50℃至密度为1.0～1.2g/ml(或者固含量大于30wt％)；所述纯化水优选去离子水。
15.(2)在步骤(1)所得的浓缩液中加入醇，所得沉淀物为管花肉苁蓉提取物。
16.优选地，(1)取管花肉苁蓉，切片，使用其质量的5～10倍水回流提取2～3次，每次2～5小时；合并水提取液，离心过滤，滤液浓缩至40～50℃密度为1.0～1.2g/ml(或者固含量大于30wt％)，回收水可用于下次提取，浓缩液冷却至30～50℃待用；
17.(2)将步骤(1)中的浓缩液搅拌，加入醇调至醇的体积浓度为60～70％，静置过夜，离心、去除上清液，沉淀物干燥后得到管花肉苁蓉提取物。
18.优选地，管花肉苁蓉的鲜品或干品是其地上或地下部分；
19.优选地，所述醇可以为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇中的一种或几种，更优选地使用食用或者药用级乙醇；
20.更优选地，所述干燥方式可以为真空干燥、常压干燥、冷冻干燥及喷雾干燥中的一种或几种。
21.本发明还提供了一种管花肉苁蓉提取物，其特征在于由上述方法制备得到。优选地，上述方法制备的提取物包含25～35％多糖，9～12％寡糖，10～15％总黄酮，7～12％苁蓉总苷，5～8％多酚，5～8％蛋白，余量为水分和灰分，以管花肉苁蓉提取物的质量为基准。更优选地，所述方法同样可制备上述更优选的含有多糖、寡糖、总黄酮、苁蓉总苷、多酚、蛋白、余量为水分和灰分的提取物。
22.本发明的另一发明目的是提供了含有本发明提取物的药物组合物：
23.一种药物组合物，其含有上述管花肉苁蓉提取物，和可食用或药用辅料。
24.优选地，所述药物组合物是片剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、微丸剂、滴丸剂、糖浆剂、散剂、浸膏剂、煎膏剂、口服液体制剂及其他药学上可以接受的剂型。
25.本发明的另一发明目的是提供了管花肉苁蓉提取物可以制备增加肠道蠕动，用于预防或者治疗老年性便秘和习惯性便秘的药物或保健品方面的用途。
26.具体而言，本发明所述技术问题是通过下述方法实现的：
27.取管花肉苁蓉鲜品或者干品，切片后，用水分次提取，醇沉、离心，去除上清液，沉淀物干燥后得到管花肉苁蓉提取物，收率在10％以上，所述提取物包含25～35％多糖，9～12％寡糖，10～15％总黄酮，7～12％苁蓉总苷，5～8％多酚，5～8％蛋白，余量为水分和灰分，以管花肉苁蓉提取物的质量为基准。并经斑马鱼药效实验确认此提取物可以有效促进肠道蠕动，可以开发为用于预防或者治疗老年性便秘和习惯性便秘的药物或保健品。本发
明工艺简便、经济、绿色环保、适合大规模生产。
28.其具体技术方案如下：
29.(1)取管花肉苁蓉，切片，使用其质量的5～10倍水回流提取2～3次，每次2～5小时；
30.(2)合并步骤(1)水提取液，离心过滤，当温度为40～50℃时，滤液浓缩至密度为1.0～1.2g/ml(或者固含量大于30wt％)，回收水可用于下次提取，浓缩液冷却至30～50℃待用；
31.(3)将步骤(2)中的浓缩液搅拌，加入醇调至醇的体积浓度为60～70％，静置过夜，离心、去除上清液，沉淀物干燥后得到管花肉苁蓉提取物。
32.所述管花肉苁蓉可以为鲜品或干品，也可以为它们的混合物。
33.所述醇可以为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇中的一种或几种，优选地使用食用或者药用级乙醇。
34.所述干燥方式可以为真空干燥、常压干燥、冷冻干燥及喷雾干燥中的一种或几种。
35.所述该专利中制备所得管花肉苁蓉提取物可以与常规预防或治疗便秘的药物如火麻仁，苦杏仁等复配组合。
36.所述该专利中制备所得管花肉苁蓉提取物可以与药用辅料组合，其是片剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、微丸剂、滴丸剂、糖浆剂、散剂、浸膏剂、煎膏剂、口服液体制剂及其他药学上可以接受的剂型。
37.所述该专利中制备所得管花肉苁蓉提取物或者其药物组合物可增加肠道蠕动，用于预防或者治疗老年性便秘和习惯性便秘的药物或保健品方面的用途。
38.经研究表明，本发明的管花肉苁蓉提取物与能显著增加斑马鱼肠道蠕动。因此，可以预期本发明的管花肉苁蓉提取物或含有它的药物组合物可以用于预防或者治疗老年性便秘和习惯性便秘的药物或保健品方面的用途。
附图说明
39.图1是提取物g
‑
2的生物活性实验中斑马鱼肠道荧光信号定量评价(n＝15)。(a)斑马鱼肠道荧光信号原始数据；(b)斑马鱼肠蠕动促进率；
40.图2是提取物g
‑
2的生物活性实验中斑马鱼肠道荧光强度图。
实施例
41.下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是，本发明实施例所述方法仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。实施例中用到的所有原料和溶剂，除有特殊说明之外，均购自sigma biochemical and organic compounds for research and diagnostic clinical reagents公司。
42.实施例一：
43.将管花肉苁蓉药材100kg(购自新疆和田天力沙生药物开发有限责任公司)用自来水清洗后，并浸润60min后切片(厚度约5～8mm)，再加入其质量的10倍水回流提取3小时，提取三次，合并提取液，离心过滤，滤液经单效浓缩器浓缩至50℃密度为1.05g/ml，冷却至40
℃后，边搅拌边加入体积浓度为95％的食用乙醇以调至醇的体积浓度为70％，静置过夜，离心、去除上清液，沉淀物经真空干燥后得到管花肉苁蓉提取物，提取物含31.35％多糖，11.56％寡糖，13.25％总黄酮，11.12％苁蓉总苷，6.77％多酚，6.94％蛋白，余量为水分和灰分，提取率为14.8％，批号为g
‑
1。
44.实施例二：
45.将管花肉苁蓉药材100kg(购自新疆和田天力沙生药物开发有限责任公司)用自来水清洗后，并浸润60min后切片(厚度约5～8mm)，再加入其质量的8倍水回流提取2小时，提取二次，合并提取液，离心过滤，滤液经单效浓缩器浓缩至50℃密度为1.10g/ml，冷却至40℃后，边搅拌边加入体积浓度为95％的食用乙醇以调至醇的体积浓度为65％，静置过夜，离心、去除上清液，沉淀物经喷雾后得到管花肉苁蓉提取物，提取物含29.44％多糖，10.83％寡糖，12.31％总黄酮，11.03％苁蓉总苷，7.13％多酚，7.61％蛋白，余量为水分和灰分，提取率为11.2％，批号为g
‑
2。
46.实施例三：
47.将管花肉苁蓉药材100kg(购自新疆和田天力沙生药物开发有限责任公司)用自来水清洗后，并浸润60min后切片(厚度约5～8mm)，再加入其质量的6倍水回流提取5小时，提取二次，合并提取液，离心过滤，滤液经单效浓缩器浓缩至固含为36.2wt％，冷却至40℃后，边搅拌边加入体积浓度为82％的食用乙醇以调至醇的体积浓度为62％，静置过夜，离心、去除上清液，沉淀物经冷冻干燥后得到管花肉苁蓉提取物，提取物含32.22％多糖，11.79％寡糖，13.04％总黄酮，11.90％苁蓉总苷，5.80％多酚，7.06％蛋白，余量为水分和灰分，提取率为14.1％，批号为g
‑
3。
48.实施例四：管花肉苁蓉提取物或含其组合物对肠蠕动影响评价
49.实验动物：ab系斑马鱼，以自然成对交配繁殖方式进行。每实验组为30尾，年龄为受精后3天。
50.实验方法：根据zhou等人(zhou j,guo sy,zhang y,li cq.human prokinetic drugs promote gastrointestinal motility in zebrafish.neurogastroenterol motil.2014,26:589
‑
95)所报道的方法，选择一定生长阶段的斑马鱼饲喂尼罗红，构建评价药物对肠蠕动影响的实验模型：管花肉苁蓉提取物批号g
‑
2浓度均设为：200μg/ml、667μg/ml和2000μg/ml，同时设置模型组(不加入药物的为实验模型组)和阳性对照组(多潘立酮，2000μg/ml)，每个浓度的提取物、模型组以及阳性对照组均处理30尾，处理6h。处理结束后，在荧光显微镜下拍照，每组随机拍摄数量为15尾，利用nis
‑
elements d 3.10高级图像处理软件分析斑马鱼肠道总荧光信号(s，total fluorescent signal)，肠蠕动促进率计算公式为：(1
‑
s
药物
/s
模型
)
×
100％；实验数据用mean
±
se表示。
51.表1管花肉苁蓉提取物对斑马鱼肠道蠕动促进率(％)
52.样品200μg/ml667μg/ml2000μg/mlg
‑
21.72
±
2.04％11.65
±
2.20％23.26
±
0.84％多潘立酮//84.74
±
0.99％模型组
‑‑‑
53.由以上生物活性结果可以看出，实验模型组中斑马鱼没经任何药物处理，其肠道蠕动效果没有得到改善，而经阳性对照药多潘立酮处理之后，斑马鱼肠道蠕动效果明显增
强，促进率达84.74％。管花肉苁蓉提取物在浓度为200μg/ml时，对斑马鱼肠道蠕动促进效果不明显，但当浓度达到667μg/ml时，斑马鱼肠道蠕动作用提高明显，均在10％以上；使用2000μg/ml管花肉苁蓉提取物作用后，对斑马鱼肠道蠕动作用更为显著，蠕动促进率达到20％以上。由此可见，管花肉苁蓉提取物对斑马鱼肠道蠕动的促进作用呈浓度依赖性。总之，此实验结果说明按本发明方法所得的管花肉苁蓉提取物能明显的促进肠道蠕动，具有开发为预防或者治疗老年性便秘和习惯性便秘的巨大潜质。