草氨酸及其盐在制备治疗眼部黑色素瘤的药物中的应用

1.本发明涉及眼部黑色素瘤治疗的技术领域，尤其涉及草氨酸及其盐在制备治疗眼部黑色素瘤的药物中的应用。


背景技术：

2.眼部黑色素瘤包括葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma,um)和结膜黑色素瘤(conjunctival melanoma,cm)。其中，um是成人最常见的眼内恶性肿瘤，恶性程度高，约有50％的um患者发生肝转移，肝转移患者的中位生存时间仅10.2个月。cm起病较为隐匿，早期常不影响视力，发现时常有扩散转移，预后差，严重影响患者生命健康。目前，眼部黑色素瘤的主要治疗手段是手术和放化疗，而其对常规放化疗均不敏感，治疗棘手。因此，探求眼部黑色素瘤新治疗药物，提高治疗有效性，降低患者死亡率和眼球摘除率，是亟待解决的临床难题。
3.草氨酸钠(sodium oxamate)，由草氨酸或草酸酰胺乙酯与氢氧化钠反应制得，广泛用于在生化试剂、有机合成、制药等方面。国外有研究发现草氨酸钠可通过影响乳腺癌mda
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231细胞内的糖代谢活动，而影响该细胞的生长。草氨酸钠(oxamate)是种糖酵解抑制剂，迄今为止尚没有草氨酸钠(oxamate)在眼部黑色素瘤中应用的报道，其对眼部黑色素瘤的疗效和作用机制尚不清楚。


技术实现要素：

4.鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供草氨酸及其盐在制备治疗眼部黑色素瘤的药物中的应用，用于解决现有技术中的问题。
5.为实现上述目的，本发明第一方面提供糖酵解抑制剂在制备治疗眼部黑色素瘤的药物中的应用。
6.优选的，所述糖酵解抑制剂为草氨酸或草氨酸盐，优选的，所述草氨酸盐为草氨酸碱金属盐、草氨酸碱土金属盐或草氨酸氨盐。
7.进一步优选的，所述所述草氨酸盐为草氨酸钠，分子结构式为
8.本发明还提供一种用于治疗眼部黑色素瘤的组合物，其特征在于，所述组合物包含作为活性成分的糖酵解抑制剂。
9.优选的，所述组合物为片剂、粉剂、注射剂、胶囊、混悬剂、糊剂、凝胶、涂布剂、药膜剂、缓释剂或微球。
10.进一步优选的，所述糖酵解抑制剂为草氨酸或草氨酸盐，优选的，所述草氨酸盐为草氨酸碱金属盐、草氨酸碱土金属盐或草氨酸氨盐。
11.进一步优选的，所述糖酵解抑制剂为草氨酸钠。
12.本发明中，草氨酸钠结构式为分子式为nh2cocoona。
13.本发明中，“药学上可接受的”是指当分子本体和组合物适当地给予动物或人时，它们不会产生不利的、过敏的或其它不良反应。
14.本发明中，除非特别说明，药物剂型并无特别限定，可以被制成片剂、粉剂、注射剂、胶囊、混悬剂、糊剂、凝胶、药膜剂、缓释剂或微球等剂型，可通过常规方法进行制备。药物剂型的选择应与给药方式相匹配。
15.本发明的有益效果，针对眼部黑色素肿瘤缺乏有效的药物治疗的情况，本发明提供了一种新的治疗途径，本发明发现作为糖酵解抑制剂的草氨酸钠(oxamate)能够显著抑制眼部黑色素瘤细胞的增殖，具有良好的临床应用价值。
附图说明：
16.图1为本发明实施例1中不同浓度草氨酸钠对眼部黑色素瘤细胞增殖的抑制效果。当草氨酸钠浓度为5mm、10mm、20mm时，能显著抑制ocm1细胞和crmm1细胞的增殖。
17.图2为本发明实施例2中草氨酸钠显著抑制眼部黑色素瘤细胞增殖能力的平板克隆结果图。
具体实施方式
18.下面结合具体的实施例对本发明作进一步地说明，以更好地理解本发明。
19.实施例1细胞增殖实验(cck8)
20.实验材料：眼部黑色素瘤细胞系ocm1由john f.marshall教授(英国伦敦john vane科学中心英国癌症研究临床中心肿瘤生物学实验室)提供，crmm1由martine j.jager教授(荷兰莱顿莱顿大学医学中心)提供，胰蛋白酶购自gibco，cck8购自日本同仁化学，oxamate购自selleck
21.实验步骤：胰蛋白酶消化眼部黑色素瘤细胞系ocm1和crmm1，800rpm离心后，去上清,加入新鲜培养液，用电子细胞计数板计数细胞数量，以3500个/每孔的细胞密度将种植于96孔细胞培养板内，每孔100μl培液，按0,5,10,20mm oxamate设置药物浓度梯度，并设有3个复孔，种植前充分混匀细胞悬液，保证每孔细胞总数和药物浓度相同，设置5个时间点：0h、24h、48h、72h、96h。将所用孔的细胞接种完成的时间点定为0h，加入cck8试剂10ul后，置入37℃，5％co2培养箱避光孵育4h。取出培养板，使用酶标仪测定450nm波长处的吸光度值。每隔24小时检测一次，将培养板放回培养箱内。注意实验过程中不要产生气泡，以免干扰酶标仪读数。使用graphpad软件绘制生长曲线，具体结果如图1所示，结果显示草氨酸钠能显著抑制ocm1细胞和crmm1细胞的增殖，且作用效果随着药物浓度提高而提升，因此草氨酸钠能够用于治疗眼部黑色素瘤。
22.实施例2平板克隆实验
23.实验材料：眼部黑色素瘤细胞系ocm1和crmm1，胰蛋白酶、pbs购自gibco，oxamate购自selleck，结晶紫购自碧云天
24.实验步骤：选择对数生长期、状态良好的细胞眼部黑色素瘤细胞系ocm1和crmm1，
大概长到70
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80％时候用胰蛋白酶消化细胞，消化下来用细胞计数板计数，种植于6孔板内，使每个孔含有2ml培液，1000个细胞，以及分别含0,5,10,20umol oxamate药物浓度。由于此部分实验细胞要求量比较少，会导致加入细胞悬液体积会特别少，可以先将细胞稀释至10000/ml，再从中取10ul细胞悬液加入。后置于37℃，5％co2细胞培养箱内培养至一星期(观察克隆大小，若多数克隆细胞团达到50个细胞以上，则可终止培养)。吸净培养液，pbs清洗，加入结晶紫和染色30min，用pbs洗去多余结晶紫染料。拍照观察统计.每孔一组，每组重复三个孔，具体结果如图2所示，结果显示，草氨酸钠能显著抑制眼部黑色素瘤细胞增殖能力。
25.以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。