一种包含卤虫卵的产品及其制备方法与流程

1.本发明涉及功能食品或医药领域，具体涉及一种包含卤虫卵的产品及其制备方法。


背景技术：

2.卤虫(brine shrimp)也称盐水丰年虫，为甲壳亚门鳃足纲无甲目盐水丰年虫科卤虫属(artemia)水生动物，遍布于全球各地的所有盐田和高盐咸水湖。卤虫的生活方式特殊，可以生成许多休眠卵，其休眠卵能够抵御高盐、高寒、高温及干旱等各类极端不良环境。卤虫休眠卵已作为水产养殖领域各类水产生物幼苗开口饵料在行业内广泛应用，具有营养价值高，使用方便等优势，备受关注。我国学者研究发现卤虫中含有抗炎活性成分【大连轻工业学院学报 (2004)23(2):92
‑
96】。埃及学者发现卤虫无节幼虫中通过复杂工艺制备的甲壳素类化合物，具有体外抗肿瘤以及预防二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌发生的的作用【environmental science and pollution research(2020)27:19016
–
19028】，近来韩国学者发现卤虫卵甲醇提取物的不同极性部位具有体外抑制人结肠癌细胞和小鼠黑色素瘤细胞增殖活性，对绿脓假单胞菌也有明确抑制作用【evidence
‑
based complementary and alternative medicine(2019):9528256】。另外，山东省滨州港友发水产有限公司于2009年登记科技成果“卤虫卵微粉加工工艺技术研究”，公开了采用真空冷冻干燥和超细微粉碎工艺技术加工卤虫卵微粉，具有抗疲劳、提高免疫功能、抗化学性肝损伤、抗辐射等功效，其乙醇提取物具有抑制人肺癌细胞、人红白血病细胞和人宫颈癌细胞生长作用，尽管冷冻干燥能较好保存卤虫卵的活性成分，但超微粉碎过程中的局部高温往往破坏关键功能成分，致其活性下降。另外，已有文献中所述提取工艺繁琐，较难实现规模化量产，影响其产业化推广，以至于目前尚未见含有卤虫卵或其提取物的产品用于抗肿瘤的临床干预。


技术实现要素：

3.本发明的目的在于提供一种包含卤虫卵的产品及其制备方法，能够避免复杂的提取工艺，同时又能够最大程度的发挥卤虫卵的活性，抑制肿瘤生长和转移，改善肿瘤恶液质引起的机体氧化胁迫损伤和免疫功能低下状态，以改善肿瘤患者生存质量。
4.恶性肿瘤严重威胁人类健康，晚期肿瘤患者存在着营养摄入不足、代谢紊乱、免疫功能低下、机体遭受严重氧化胁迫应激等问题。目前尽管各类恶性肿瘤的治疗手段一定程度上可控制肿瘤进展，但往往会进一步加剧肿瘤患者机体营养代谢紊乱、损害患者免疫力。转移是恶性肿瘤致患者死亡的关键因素，控制肿瘤转移可防止肿瘤术后复发，改善肿瘤患者预后和生活质量。
5.卤虫卵含有丰富的蛋白质和多不饱合脂肪酸，以及甲壳素等大量有益健康的成分，目前仅作为水产养殖业活饵料广泛应用，未见有用于肿瘤临床干预的产品报道或上市。
6.本发明发明人对卤虫卵用于抑制肿瘤生长和转移，以及改善肿瘤所致氧化胁迫状态和免疫功能低下进行了研究，经过长期不断的尝试和探索后，发现未破碎卤虫卵不能被
消化吸收，而采用常规工艺直接粉碎后的卤虫卵产品，仅具有较低抑制肿瘤生长和转移，改善荷瘤小鼠氧化胁迫和上调免疫功能的活性，而于加工前于卤虫卵中添加甘草抗氧化物后，再进行加工，所得产品的抗肿瘤活性明显提升，且制备工艺简单，易于工业化生产，具有重要的推广价值。
7.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
8.本发明提供一种包含卤虫卵的产品，它至少包括卤虫卵与甘草抗氧化物。
9.上述产品，其原料包括如下重量份：卤虫卵1份、甘草抗氧化物0.01～1.0 份；
10.进一步地，卤虫卵1份、甘草抗氧化物0.05～0.5份；
11.更进一步地，卤虫卵1份、甘草抗氧化物0.2份。
12.本发明所述卤虫卵为西藏双湖县其香错盐湖采集卤虫休眠冬卵，参考国家标准【gb/t 24858—2010】，加工至含水量低于5％，用于本发明。
13.本发明所述甘草抗氧化物(gb 1886.89
‑
2015)为我国法定标准的食品添加剂，是自药食同源植物甘草(radix glycyrrhizae)根部提取的易溶于二氯甲烷，难溶于水的黄酮类化合物。甘草中黄酮类化合物具有一定抗肿瘤活性，但因其口服生物利用度低，体内抗肿瘤活性不佳，目前尚未见其产品用于肿瘤的临床干预。本发明所用甘草抗氧化物为甘肃亚兰药业有限公司生产产品。
14.本发明还提供一种包含卤虫卵的产品的制备方法，将卤虫卵与甘草抗氧化物混合后，再加工。
15.所述加工可以是本领域内知晓的任意加工方法，如匀浆、粉碎、搅拌、干燥等，只要是将卤虫卵与甘草抗氧化物混合后进行加工的，都属于本发明制备方法的保护范围。
16.本发明所述包含卤虫卵的产品，原料除了卤虫卵、甘草抗氧化物外，还可以包含其他组分；将卤虫卵与甘草抗氧化物混合可以理解为将卤虫卵与甘草抗氧化物混合后，再与其他组分混合后再加工，或者将卤虫卵与甘草抗氧化物、其他组分同时混合后再加工。
17.在本发明的制备方法中，所制备的产品的原料还可以包括其它组分，但其它组分、溶剂的混合方式、加工步骤和方法不限，只要是在加工的时刻，将卤虫卵与甘草抗氧化物混合后进行加工的，都属于本发明制备方法的保护范围。
18.发明人发现，将卤虫卵、甘草抗氧化物直接混合后，用超微粉碎机粉碎后，给予荷瘤小鼠，其抑制体内肿瘤生长和肺转移，以及改善荷瘤小鼠氧化胁迫状态和免疫功能的活性，均明显优于直接给予等剂量的单独粉碎的卤虫卵或直接给予甘草抗氧化物。
19.将卤虫卵、甘草抗氧化物直接混合后，加入一定量玉米油后，胶体磨粉碎后得匀浆，给予荷瘤小鼠，其抑制体内肿瘤生长和肺转移，以及改善荷瘤小鼠氧化胁迫状态和免疫功能的活性，均明显优于直接给予等剂量的单独粉碎的卤虫卵或直接给予甘草抗氧化物。
20.卤虫卵与甘草抗氧化物直接混合后超微粉碎后得到的细小颗粒物，或与液体状食用油脂混匀后，胶体磨粉碎得到的匀浆状物，均是本发明制备的产品之一。采用其他方法使得上述原料被粉碎的方式，也都在本发明所述匀浆范围内。
21.为了满足不同的实际生产生活需求，可以在超微粉碎后再添加药学上可接受的辅料，进行制粒、压片、灌装硬胶等操作，从而获得含卤虫卵和甘草抗氧化物的颗粒剂、片剂、硬胶囊剂等。
22.或在添加食用油脂后胶体磨匀浆后，再添加药学上可接受的辅料，灌装软胶囊等
操作，从而获得含卤虫卵和甘草抗氧化物的软胶囊剂。
23.本发明所述药学上可接受的辅料是药物中除主药以外的一切附加材料的总称，辅料应当具备如下性质：(1)对人体无毒害作用，几无副作用；(2)化学性质稳定，不易受温度、ph、保存时间等的影响；(3)与主药无配伍禁忌，不影响主药的疗效和质量检查；(4)不与包装材料相互发生作用。本发明中辅料包括但不仅限于填充剂(稀释剂)、润滑剂(助流剂或抗粘着剂)、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、崩解剂等。粘合剂包含糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物(如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素或羟丙甲基纤维素等)、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮等；填充剂包含乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐(如硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙等)、山梨醇或甘氨酸等；润滑剂包含微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇等；崩解剂包含淀粉及其衍生物(如羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉等)、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素等；湿润剂包含十二烷基硫酸钠、水或醇等；抗氧剂包含亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酸等；抑菌剂包含0.5％苯酚、0.3％甲酚、0.5％三氯叔丁醇等；调节剂包含盐酸、枸橼酸、氢氧化钾(钠)、枸橼酸钠及缓冲剂(包括磷酸二氢钠和磷酸氢二钠)等；乳化剂包含聚山梨酯
‑
80、没酸山梨坦、普流罗尼克f
‑
68，卵磷酯、豆磷脂等；增溶剂包含吐温
‑
80、胆汁、甘油等。
24.本发明上述的产品或组合物在制备预防和/或治疗原发癌症或转移癌的产品中的用途；
25.进一步地，所述产品是延长肿瘤患者生存期的产品；
26.进一步地，所述癌症选自肺癌、皮肤癌、肝癌、黑色素瘤。
27.本发明上述的产品或组合物在制备抗氧化产品中的用途；
28.进一步地，所述产品是改善肿瘤生长所致氧化胁迫损伤的产品。
29.进一步地，所述产品的剂型选自粉剂、胶囊剂、片剂、冲剂、丸剂，优选粉剂或冲剂。
30.本发明所述产品包括但不限于食品、药品、保健品等。
31.本发明中所述原发癌，是指原来正常组织和器官的正常细胞，在各种内外致癌因素的长期作用下，逐渐转变为恶性肿瘤细胞，进而形成癌细胞团块，即“原发癌”或称“原发性恶性肿瘤”。
32.本发明中所述转移癌，是指肿瘤细胞从原发部位侵入淋巴管，血管或其他途经被带到它处继续生长，形成与原发部位肿瘤相同类型的肿瘤，这个过程称为转移，所形成的肿瘤成为转移瘤或转移癌。转移是恶性肿瘤的特征。
33.本发明的有益效果是：
34.(1)本发明将卤虫卵、甘草抗氧化物混合后在制备成功能性产品的方法，能够提高卤虫卵抗肿瘤的生物活性，为卤虫卵产品的生产提供了有效可行的生产方法，避免了复杂的提取工艺，降低了工业化成本，更利于卤虫卵产品的市场化。
35.(2)本发明制备的卤虫卵内容物具有明显的抗肿瘤活性，能够抑制lewis肺癌移植瘤、hepa 1
‑
6肝癌移植瘤、b16f10黑色素瘤的生长，抑制b16f10黑色素瘤肺转移，延长小鼠生存期，改善荷b16f10黑色素瘤小鼠的氧化胁迫状态。本发明产品可以用于制备辅助治疗肿瘤、抑制肿瘤转移、延长患者生存期和改善肿瘤生长所致氧化胁迫损伤，也可进一步用于
相关产品的制备。
36.(3)本发明实现了卤虫卵的高价值利用，生产工艺简单便捷、绿色环保，产品稳定性好，易贮存和应用。
具体实施方式
37.下面对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
38.实施例1制备含卤虫卵甘草抗氧化物组合物
39.取卤虫卵干卵1.0kg、甘草抗氧化物0.01kg，混匀后，粉碎至可过100目筛，得1.01kg组合物a。
40.实施例2制备含卤虫卵甘草抗氧化物组合物的玉米油匀浆
41.取卤虫卵干卵1.0kg、甘草抗氧化物0.5kg，混匀后，加入4.0kg玉米油，胶体磨研磨粉碎至可过100目筛，得5.5kg组合物b。
42.实施例3制备含卤虫卵甘草抗氧化物组合物大豆油匀浆
43.取卤虫卵干卵1.0kg、甘草抗氧化物0.2kg，混匀后，加入3.0kg大豆油，胶体磨研磨粉碎至可过100目筛，得4.2kg组合物c。
44.实施例4制备含卤虫卵甘草抗氧化物组合物
45.取卤虫卵干卵1.0kg、甘草抗氧化物0.2kg，混匀后，粉碎至可过100目筛，得1.2kg组合物d。
46.实施例5制备含卤虫卵甘草抗氧化物组合物的片剂
47.1.处方组成
48.实施例4制备的组合物d 100g、乳糖140g、聚维酮k30 20g、微晶纤维素 40g、甘露醇40g、硬脂酸镁2g。
49.2.制备工艺
50.(1)取组合物d、乳糖、聚维酮k30、微晶纤维素和甘露醇至混合机中混合均匀；
51.向步骤(1)中的混合物中加入硬脂酸镁，过80目筛混匀，采用直接压片技术压片，压片环境温度25℃、温度50％rh，压片压力控制在40kn压片机转速控制在12000片/小时，既得。
52.(3)向步骤(2)的混合药物中加入硬脂酸镁，过筛混匀，进行奥氮平含量检测，确定
53.片重后采用直接压片技术压片，压片环境温度25℃、湿度50％rh，压片压力控制在40kn，压片机转速控制在12000片/小时，即得。
54.实施例6含卤虫卵甘草抗氧化物组合物软胶囊的制备
55.1.处方组成
56.实施例3制备组合物c 100份、明胶15份、甘油2份、山梨醇5份、纯化水15份。
57.2.制备工艺
58.(1)将甘油、山梨醇和纯化水加入化胶罐中，升温至70℃预热；加入明胶，溶胶30分钟；
59.(2)抽真空，真空度为
‑
0.07mp，抽真空时间为45分钟，抽真空后，于 50℃下进行保
胶，得胶囊体；
60.(3)将实施例3制备的组合物c和步骤(2)制得的胶囊体进行压丸，设置胶盒温度为60℃，冷凝温度为9℃，喷体温度为40℃，压丸滚模转度3rpm，调整两边胶皮厚度为90μm且一致，开始压丸，控制软胶囊内容物装量500mg, 每半小时检测一次装量差异；
61.(4)压丸完成后，将软胶囊移至转笼进行定型，定型4小时；
62.(5)将定型完的软胶囊在温度26℃，相对湿度≤40％rh下进行干燥，干燥时间为24小时。
63.既得卤虫卵甘草抗氧化物软胶囊，其中每粒含卤虫卵125mg，甘草抗氧化物25mg。
64.实验例1卤虫卵甘草抗氧化物组合物抑制b16f10黑色素瘤的体内验证
65.1.材料与方法
66.1.1材料
67.受试样品：实施例1
‑
4制备的组合物a、b、c和d，参照实施例3制备的仅含卤虫卵、不含甘草抗氧化物的大豆油匀浆作为对照e，参照实施例4制备的仅含卤虫卵的超微粉作为对照f，以及参照实施例3制备的仅含甘草抗氧化物的大豆油匀浆作为对照g，参照实施例4工艺制备的甘草抗氧化物对照h。
68.实验动物：雄性c57bl/6小鼠，体重18
‑
22g，购自山东由济南朋悦实验动物繁育有限公司，实验动物生产许可证号：syxk(鲁)20190003，饲养于烟台大学实验动物中心，使用许可证号：syxk(鲁)20170027，自由摄食饮水。
69.b16f10肿瘤细胞株，购自中国典型培养物保藏中心(武汉)，烟台大学线粒体与健康衰老研究中心于c57bl/6小鼠体内传代保种。
70.lewis肺癌细胞株，购自中国典型培养物保藏中心，烟台大学线粒体与健康衰老研究中心于小鼠体内传代保种。
71.hepa1
‑
6肝癌细胞株，购自中国典型培养物保藏中心，烟台大学线粒体与健康衰老研究中心于小鼠体内传代保种。
72.取腋下接种传代lewis肿瘤和小鼠，无菌剥取肿瘤组织，加10倍量无菌生理盐水，匀浆后100目筛网过滤，腋下搁于已适应饲养1周的70只小鼠。第二天，参照表2分组，按体重随机分为7组，禁食6小时后，分别灌胃给予不同受试物。受试物中组合物a、d以及对照f和h，分别以0.5％羧甲基纤维素钠混悬至相应浓度后灌胃给予。组合物b、c以及对照e和g，以大豆油调整至相应浓度，灌胃给予，每日给予一次，给予容积20ml/kg体重。另分别设2组模型对照组，分别给予羧甲基纤维素钠和大豆油，连续给予2周。末次给予后，禁食 12小时，脱颈处死小鼠，剥取肿瘤组织，电子分析天平精确称重，并计算体内抑瘤率。
73.取腋下接种传代hepa1
‑
6肿瘤小鼠，无菌剥取肿瘤组织，加10倍量无菌生理盐水，匀浆后100目筛网过滤，腋下搁于已适应饲养1周的70只小鼠。第二天，参照表3分组，按体重随机分为7组，禁食6小时后，分别灌胃给予不同受试物。每日给予一次，受试物采用玉米油混悬，模型组给予玉米油，给予容积 10ml/kg体重，连续给予2周。末次给予后，禁食12小时，脱颈处死，剥取肿瘤组织称重，并计算体内抑瘤率。
74.实验结果见表1、2、3。
75.表1卤虫卵甘草抗氧化物组合物粉对b16f10黑色素瘤生长的影响
[0076][0077]
注：与模型组比较：
*
,p＜0.05；
**
,p＜0.01；
***
,p＜0.001。与高剂量对照f 比较：
##
,p＜0.01。与高剂量对照h比较：
$$
,p＜0.01。
[0078]
表2卤虫卵甘草抗氧化物组合物大豆油匀浆对b16f10黑色素瘤生长的影响
[0079][0080]
注：与模型组比较：
*
,p＜0.05；
**
,p＜0.01；
***
,p＜0.001。与高剂量对照f 比较：
##
,p＜0.01。与高剂量对照h比较：
$$
,p＜0.01。
[0081]
表3高活性卤虫卵内容物对c57bl/6小鼠皮下移植lewis肺癌生长的影响
[0082]
组别受试物剂量(g/kg)瘤重(g)抑瘤率(％)模型组0.5％羧甲基纤维素钠10ml/kg2.48
±
0.450组合物a卤虫卵+甘草抗氧化物500+5.00.96
±
0.26
***##$$
61.21组合物d卤虫卵+甘草抗氧化物500+1000.92
±
0.38
***##$$
62.65对照f卤虫卵5002.11
±
0.5914.77对照f卤虫卵10002.09
±
0.31
*
15.60
对照h甘草抗氧化物1002.27
±
0.658.11对照h甘草抗氧化物5001.80
±
0.67
*
27.46
[0083]
注：与模型组比较：
*
,p＜0.05；
**
,p＜0.01；
***
,p＜0.001。与高剂量对照f 比较：
##
,p＜0.01。与高剂量对照h比较：
$$
,p＜0.01。
[0084]
表4卤虫卵甘草抗氧化物组合物大豆油匀浆对c57bl/6小鼠皮下移植 lewis肺癌生长的影响
[0085][0086]
注：与模型组比较：
*
,p＜0.05；
**
,p＜0.01；
***
,p＜0.001。与高剂量对照f 比较：
##
,p＜0.01。与高剂量对照h比较：
$$
,p＜0.01。
[0087]
表5高活性卤虫卵内容物对c57bl/6小鼠皮下移植hepa1
‑
6肝癌生长的影
[0088]
组别受试物剂量(g/kg)瘤重(g)抑瘤率(％)模型组0.5％羧甲基纤维素钠10ml/kg2.73
±
0.470组合物a卤虫卵+甘草抗氧化物500+5.01.16
±
0.47
***##$$
57.47组合物d卤虫卵+甘草抗氧化物500+1001.30
±
0.65
***##$$
52.36对照f卤虫卵5002.51
±
0.498.26对照f卤虫卵10002.10
±
0.78
*
23.05对照h甘草抗氧化物1002.20
±
1.2419.51对照h甘草抗氧化物5002.23
±
0.55
*
18.38
[0089]
响
[0090]
注：与模型组比较：
*
,p＜0.05；
**
,p＜0.01；
***
,p＜0.001。与高剂量对照f 比较：
##
,p＜0.01。与高剂量对照h比较：
$$
,p＜0.01。
[0091]
表6卤虫卵甘草抗氧化物组合物大豆油匀浆对c57bl/6小鼠皮下移植 hepa1
‑
6肝癌生长的影响
[0092][0093]
注：与模型组比较：
*
,p＜0.05；
**
,p＜0.01；
***
,p＜0.001。与高剂量对照f 比较：
##
,p＜0.01。与高剂量对照h比较：
$$
,p＜0.01。
[0094]
由表1可知，本发明实施例1～3于匀浆前添加甘草抗氧化物，加工制备得到的卤虫卵制品a、b、c均有明显抑瘤活性，对b16f10体内增殖抑制率均大于 50％，优于对照卤虫卵内容物，表明预先添加甘草抗氧化物保护了卤虫卵功能成分在加工过程中的损失。
[0095]
由表2可知，本发明实施例1～3于匀浆前添加甘草抗氧化物后，加工制备得到的卤虫卵制品a、b、c均有明显抑瘤活性，对lewis体内增殖抑制率均大于 50％，优于对照卤虫卵内容物，表明预先添加甘草抗氧化物保护了卤虫卵功能成分在加工过程中的损失。
[0096]
由表3可知，本发明实施例1～3于匀浆前添加甘草抗氧化物后，加工制备的卤虫卵制品a、b、c均有明显抑瘤活性，对hepa1
‑
6体内增殖抑制率均大于50％，优于对照卤虫卵内容物，表明预先添加甘草抗氧化物保护了卤虫卵功能成分在加工过程中的损失。
[0097]
本发明组合物抑制b16f10黑色素瘤体内肺转移功效的实验测试
[0098]
受试样品：本发明实施例1
‑
3制备的高活性卤虫卵内容物、甘草抗氧化物组合物a、b、c产品。对照用卤虫卵、甘草抗氧化物，分别按实施例方法制备成卤虫卵内容物后，粉碎后制得。
[0099]
实验动物：雄性c57bl/6小鼠，体重18
‑
22g，购自山东由济南朋悦实验动物繁育有限公司，实验动物生产许可证号：scxk(鲁)20190003，饲养于烟台大学实验动物中心，使用许可证号：syxk(鲁)20170027，自由摄食饮水。
[0100]
b16f10肿瘤细胞株，购自中国典型培养物保藏中心，烟台大学线粒体与健康衰老研究中心于小鼠体内传代保种。
[0101]
将于高糖dmem培养基培养，处于对数生长期的b16f10黑色素瘤细胞，胰蛋白酶消化后，无菌pbs混悬，800g离心10min，洗涤两次后，无菌pbs 调整细胞密度至1
×
107细胞/ml。小鼠适应饲养1周后，尾静脉注射b16f10细胞悬液0.2ml。接种后第二天，参照表2，按体重随机分为7组，禁食6小时后，分别灌胃给予不同受试物。每日灌胃给予受试物一次，受试物采用玉米油混悬，模型组给予玉米油，给予容积10ml/kg体重，连续给予3周。末次给予后，
禁食12小时，脱颈处死，解剖取全肺，体视显微镜下计数肺表面可见肿瘤转移灶数量，并计算肺转移抑制率。
[0102]
实验结果见表7。
[0103]
表7高活性卤虫卵内容物对b16f10黑色素瘤细胞人工肺转移的影响
[0104]
组别受试物剂量(g/kg)肺转移灶数量肺转移抑制率(％)模型组0.5％羧甲基纤维素钠10ml/kg32.6
±
5.020组合物a卤虫卵+甘草抗氧化物500+5.017.2
±
5.37
***##$$
47.24组合物d卤虫卵+甘草抗氧化物500+10018.1
±
5.70
***##$$
44.48对照f卤虫卵50031.8
±
6.168.28对照f卤虫卵100027.2
±
6.07
*
16.56对照h甘草抗氧化物10028.2
±
6.4813.50对照h甘草抗氧化物50028.5
±
3.03
*
12.58
[0105]
注：与模型组比较：
*
,p＜0.05；
**
,p＜0.01；
***
,p＜0.001。与高剂量对照f 比较：
##
,p＜0.01。与高剂量对照h比较：
$$
,p＜0.01。
[0106]
表8卤虫卵甘草抗氧化物组合物大豆油匀浆对b16f10黑色素瘤细胞人工肺转移的影响
[0107][0108][0109]
注：与模型组比较：
*
,p＜0.05；
**
,p＜0.01；
***
,p＜0.001。与高剂量对照f 比较：
##
,p＜0.01。与高剂量对照h比较：
$$
,p＜0.01。
[0110]
由表7、8可知，本发明实施例1～3制备得到的卤虫卵制品a、b、c均发挥了明显的抑制b16f10黑色素瘤肺转移的活性，且优于对照卤虫卵内容物 a、b、c，表明预先添加甘草抗氧化物制备的高活性卤虫卵内容物，保护了卤虫卵中抗肿瘤转移功能性成分在加工过程中的损失，从而发挥明显的抗肿瘤转移活性。
[0111]
本发明组合物延长b16f10黑色素瘤荷瘤小鼠生存期的功能性测试
[0112]
受试样品：本发明实施例1
‑
3制备的高活性卤虫卵内容物、甘草抗氧化物组合物a、
b、c产品。对照品参照前述实验。
[0113]
实验动物：雄性c57bl/6小鼠，体重18
‑
22g，购自山东由济南朋悦实验动物繁育有限公司，实验动物生产许可证号：scxk(鲁)20190003，饲养于烟台大学实验动物中心，使用许可证号：syxk(鲁)20170027，自由摄食饮水。
[0114]
b16f10肿瘤细胞株，购自中国典型培养物保藏中心，烟台大学线粒体与健康衰老研究中心于小鼠体内传代保种。
[0115]
取腋下接种传代b16f10黑色素瘤荷瘤小鼠，无菌剥取肿瘤组织，加10 倍量无菌生理盐水，匀浆后100目筛网过滤，腋下搁于已适应饲养1周的70 只小鼠。第二天，参照表1分组，按体重随机分为7组，禁食6小时后，分别灌胃给予不同受试物。每日给予一次，受试物采用玉米油混悬，模型组给予玉米油，给予容积10ml/kg体重，连续给予2周。记录小鼠存活天数。
[0116]
实验结果见表9、10。
[0117]
表9高活性卤虫卵内容物对c57bl/6小鼠皮下移植b16f10黑色素瘤生存期的影响
[0118][0119][0120]
注：与模型组比较：
*
,p＜0.05；
**
,p＜0.01；
***
,p＜0.001。与高剂量对照f 比较：
##
,p＜0.01。与高剂量对照h比较：
$$
,p＜0.01。
[0121]
表10卤虫卵甘草抗氧化物组合物大豆油匀浆对c57bl/6小鼠皮下移植 b16f10黑色素瘤生存期的影响
[0122][0123]
注：与模型组比较：
*
,p＜0.05；
**
,p＜0.01；
***
,p＜0.001。与高剂量对照f 比较：
##
,p＜0.01。与高剂量对照h比较：
$$
,p＜0.01。
[0124]
由表9、10可知，按本发明实施例所制备的高活性卤虫卵内容物a、b、c 均发挥了明显的抑制b16f10黑色素瘤生长的活性，且优于对照品，表明预先添加甘草抗氧化物制备的高活性卤虫卵内容物，保护了卤虫卵中抗肿瘤转移功能性成分在加工过程中的损失，从而发挥明显的延长荷瘤小鼠生存时间。
[0125]
本发明组合物对b16f10黑色素瘤荷瘤小鼠抗氧化能力的功能性测试
[0126]
受试样品：本发明实施例1
‑
3制备的高活性卤虫卵内容物、甘草抗氧化物组合物a、b、c产品。对照品参照前述实验。
[0127]
实验动物：雄性c57bl/6小鼠，体重18
‑
22g，购自山东由济南朋悦实验动物繁育有限公司，实验动物生产许可证号：scxk(鲁)20190003，饲养于烟台大学实验动物中心，使用许可证号：syxk(鲁)20170027，自由摄食饮水。
[0128]
b16f10肿瘤细胞株，购自中国典型培养物保藏中心，烟台大学线粒体与健康衰老研究中心于小鼠体内传代保种。
[0129]
取腋下接种传代b16f10黑色素瘤荷瘤小鼠，无菌剥取肿瘤组织，加10倍量无菌生理盐水，匀浆后100目筛网过滤，腋下搁于已适应饲养1周的70只小鼠。第二天，参照表1分组，按体重随机分为7组，禁食6小时后，分别灌胃给予不同受试物。每日给予一次，受试物采用玉米油混悬，模型组给予玉米油，给予容积10ml/kg体重，连续给予2周。末次给药后禁食12h，眼眶采血，3000g， 10min，分离血清，测定t
‑
aoc试剂盒。
[0130]
实验结果见表11。
[0131]
表11高活性卤虫卵内容物对c57bl/6小鼠腋下移植b16f10黑色素瘤抗氧化活性的影响
[0132]
组别受试物剂量(g/kg)t
‑
aoc(u/ml)
模型组0.5％羧甲基纤维素钠10ml/kg11.38
±
1.40组合物a卤虫卵+甘草抗氧化物500+5.017.69
±
3.19
***##$$
组合物d卤虫卵+甘草抗氧化物500+10017.34
±
2.66
***##$$
对照f卤虫卵50011.64
±
3.93对照f卤虫卵100013.45
±
2.55
*
对照h甘草抗氧化物10011.74
±
2.02对照h甘草抗氧化物50014.14
±
3.64
*
[0133]
注：与模型组比较：
*
,p＜0.05；
**
,p＜0.01；
***
,p＜0.001。与高剂量对照f 比较：
##
,p＜0.01。与高剂量对照h比较：
$$
,p＜0.01。
[0134]
表12卤虫卵甘草抗氧化物组合物大豆油匀浆对c57bl/6小鼠腋下移植 b16f10黑色素瘤抗氧化活性的影响
[0135][0136][0137]
注：与模型组比较：
*
,p＜0.05；
**
,p＜0.01；
***
,p＜0.001。与高剂量对照f 比较：
##
,p＜0.01。与高剂量对照h比较：
$$
,p＜0.01。
[0138]
由表11、12可知，按本发明实施例所制备的高活性卤虫卵内容物a、b、c 均有明显提高小鼠抗氧化能力，优于对照品，说明本发明保护了卤虫卵中抗肿瘤转移功能性成分在加工过程中的损失，从而发挥明显的抗氧化活性。
[0139]
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的保护范围，凡是利用本发明的说明书所作的等效流程或等效结构的变换，或直接、或间接运用在其他相关的技术领域，均应同理包括在本发明的保护范围之内。