1.本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种含氧化苦参碱的组合物及其在制备治疗心脏病的药物中的应用。
背景技术：
2.缺血性心脏病是由冠状动脉循环改变而导致心肌缺血、缺氧而引起的心脏病。在所有慢性病中，致死病因排名第一的是缺血性心脏病；在治疗缺血性心脏病的药物中，西药起了重大的作用。但是西药毒副作用较大，不宜长期服用；因此，以中药为原料，开发一种治疗缺血性心脏病的药物具有重要的意义。
3.苦参，中药名；为豆科植物苦参的干燥根，具有清热燥湿、杀虫、利尿之功。用于热痢、便血、黄疸尿闭、赤白带下、阴肿阴痒、湿疹、湿疮、皮肤瘙痒、疥癣麻风以及外治滴虫性阴道炎。由于单独使用苦参对心脏病的治疗效果不佳，现有技术通常将苦参和多味其它中药材复配后用于治疗心脏病。因此，以苦参为原料，开发出一种具有对心脏病具有优异治疗效果的组合物具有重要的意义。
技术实现要素：
4.为了克服中药来源的治疗心脏病的药物的种类不足，本发明提供一种含氧化苦参碱的组合物；所述的含氧化苦参碱的组合物具有优异的治疗心脏病的作用。
5.本发明所要解决的上述技术问题，通过以下技术方案予以实现：
6.一种含氧化苦参碱的组合物，其包含苦参提取物以及氧化苦参碱。
7.发明人在研究中惊奇的发现，将按本发明所述方法制备得到的苦参提取物与氧化苦参碱组合后其对缺血性心脏病的治疗作用，要优于单独使用按本发明所述方法制备得到的苦参提取物以及单独使用单体化合物氧化苦参碱，取得了十分优异的治疗缺血性心脏病作用；按本发明所述方法制备得到的苦参提取物中的有效成分与氧化苦参碱发挥了协同治疗缺血性心脏病作用。
8.优选地，苦参提取物与氧化苦参碱的质量比为5～10：1。
9.进一步优选地，苦参提取物与氧化苦参碱的质量比为6～8：1。
10.最优选地，苦参提取物与氧化苦参碱的质量比为7：1。
11.优选地，所述的苦参提取物通过包含如下步骤的方法制备得到：
12.(1)取中药材苦参用乙醇提取得苦参乙醇提取物；
13.(2)将苦参乙醇提取物用水混悬，然后加入乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取物；
14.(3)将乙酸乙酯萃取物上硅胶柱，采用混合有机溶剂进行洗脱，收集洗脱部位，浓缩干燥后即得所述的苦参提取物。
15.优选地，步骤(1)中的提取是指加热回流提取，提取的时间为1～2h；所述的乙醇为体积分数为70％～95％的乙醇。
16.优选地，苦参与乙醇的用量比为1g:5～15ml。
17.优选地，步骤(3)中采用混合有机溶剂进行洗脱的具体方法为：
18.先用体积比为95～90:5～10的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂，然后再用体积比为87～85:13～15的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱；收集体积比为87～85:13～15的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥即得所述的苦参提取物。
19.进一步优选地，步骤(3)中采用混合有机溶剂进行洗脱的具体方法为：
20.先用体积比为93:7的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂，然后再用体积比为86:14的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱；收集体积比为86:14的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥即得所述的苦参提取物。
21.进一步优选地，步骤(3)中采用混合有机溶剂进行洗脱的具体方法为：
22.先用3～5倍柱体积的体积比为95～90:5～10的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂，然后再用5～8倍柱体积的体积比为87～85:13～15的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱；收集体积比为87～85:13～15的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥即得所述的苦参提取物。
23.最优选地，先用4倍柱体积的体积比为93:7的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂，然后再用6倍柱体积的体积比为86:14的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱；收集体积比为86:14的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥即得所述的苦参提取物。
24.发明人研究表明，苦参提取物制备过程中，硅胶柱的洗脱条件对于能否获得具有治疗缺血性心脏病作用的有效成分十分关键；只有将按照本发明上述方法制备得到的苦参提取物与氧化苦参碱组合后得到的组合物其对缺血性心脏病的治疗作用，才优于单独使用苦参提取物或单独使用氧化苦参碱，才能体现出协同治疗缺血性心脏病的作用。采用其它硅胶柱的洗脱条件制备得到的苦参提取物与氧化苦参碱组合后得到的组合物，其对缺血性心脏病的治疗作用，要小于本发明所述的组合物，其也要小于氧化苦参碱；并未体现出协同治疗缺血性心脏病的作用。
25.本发明还提供一种上述含氧化苦参碱的组合物在制备治疗心脏病的药物中的应用。
26.优选地，所述的心脏病为缺血性心脏病。
27.有益效果：本发明提供了一种全新的含氧化苦参碱的组合物；研究表明，按照本发明所述方法制备得到的苦参提取物与氧化苦参碱组合后得到的组合物其具有优异的治疗缺血性心脏病的作用。
具体实施方式
28.以下结合具体实施例对本发明做进一步详细的说明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
29.实施例1含氧化苦参碱的组合物的制备
30.将苦参提取物与氧化苦参碱按质量比7：1混合均匀即得所述的含氧化苦参碱的组
合物；
31.所述的苦参提取物通过如下方法制备得到：
32.(1)取中药材苦参用体积分数为95％的乙醇进行加热回流提取1.5h得提取液，将提取液浓缩干燥后得苦参乙醇提取物；其中，苦参与乙醇的用量比为1g:10ml；
33.(2)将苦参乙醇提取物用水混悬，然后加入乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩干燥后得乙酸乙酯萃取物；其中苦参乙醇提取物与水以及乙酸乙酯的用量比为1g:50ml:50ml；
34.(3)将乙酸乙酯萃取物上硅胶柱(硅胶柱中的硅胶的质量为乙酸乙酯萃取物的30倍；所述的硅胶为200～300目的硅胶)，先用4倍柱体积的体积比为93:7的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂，然后再用6倍柱体积的体积比为86:14的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱；收集体积比为86:14的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥即得所述的苦参提取物。
35.实施例2含氧化苦参碱的组合物的制备
36.将苦参提取物与氧化苦参碱按质量比10：1混合均匀即得所述的含氧化苦参碱的组合物；
37.所述的苦参提取物通过如下方法制备得到：
38.(1)取中药材苦参用体积分数为70％的乙醇进行加热回流提取2h得提取液，将提取液浓缩干燥后得苦参乙醇提取物；其中，苦参与乙醇的用量比为1g:15ml；
39.(2)将苦参乙醇提取物用水混悬，然后加入乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩干燥后得乙酸乙酯萃取物；其中苦参乙醇提取物与水以及乙酸乙酯的用量比为1g:30ml:30ml；
40.(3)将乙酸乙酯萃取物上硅胶柱(硅胶柱中的硅胶的质量为乙酸乙酯萃取物的30倍；所述的硅胶为200～300目的硅胶)，先用5倍柱体积的体积比为95:5的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂，然后再用8倍柱体积的体积比为87:13的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱；收集体积比为87:13的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥即得所述的苦参提取物。
41.实施例3含氧化苦参碱的组合物的制备
42.将苦参提取物与氧化苦参碱按质量比5：1混合均匀即得所述的含氧化苦参碱的组合物；
43.所述的苦参提取物通过如下方法制备得到：
44.(1)取中药材苦参用体积分数为80％的乙醇进行加热回流提取1h得提取液，将提取液浓缩干燥后得苦参乙醇提取物；其中，苦参与乙醇的用量比为1g:8ml；
45.(2)将苦参乙醇提取物用水混悬，然后加入乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩干燥后得乙酸乙酯萃取物；其中苦参乙醇提取物与水以及乙酸乙酯的用量比为1g:40ml:40ml；
46.(3)将乙酸乙酯萃取物上硅胶柱(硅胶柱中的硅胶的质量为乙酸乙酯萃取物的30倍；所述的硅胶为200～300目的硅胶)，先用3倍柱体积的体积比为90:10的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂，然后再用8倍柱体积的体积比为85:15的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱；收集体积比为85:15的环己烷和乙酸乙酯组成的混
合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥即得所述的苦参提取物。
47.对比例1含氧化苦参碱的组合物的制备
48.将苦参提取物与氧化苦参碱按质量比7：1混合均匀即得所述的含氧化苦参碱的组合物；
49.所述的苦参提取物通过如下方法制备得到：
50.(1)取中药材苦参用体积分数为95％的乙醇进行加热回流提取1.5h得提取液，将提取液浓缩干燥后得苦参乙醇提取物；其中，苦参与乙醇的用量比为1g:10ml；
51.(2)将苦参乙醇提取物用水混悬，然后加入乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩干燥后得乙酸乙酯萃取物；其中苦参乙醇提取物与水以及乙酸乙酯的用量比为1g:50ml:50ml；
52.(3)将乙酸乙酯萃取物上硅胶柱(硅胶柱中的硅胶的质量为乙酸乙酯萃取物的30倍；所述的硅胶为200～300目的硅胶)，先用4倍柱体积的体积比为99:1的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂，然后再用6倍柱体积的体积比为96:4的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱；收集体积比为96:4的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥即得所述的苦参提取物。
53.对比例1与实施例1的区别在于，对比例1中苦参提取物的硅胶洗脱条件不同，其洗脱条件不在本发明所述范围内。对比例1的硅胶洗脱条件为：先用体积比为99:1的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂；再用体积比为96:4的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱，收集体积比为96:4的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥即得所述的苦参提取物；而实施例1则是先用体积比为93:7的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂；再用体积比为86:14的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱，收集体积比为86:14的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥即得所述的苦参提取物。
54.对比例2含氧化苦参碱的组合物的制备
55.将苦参提取物与氧化苦参碱按质量比7：1混合均匀即得所述的含氧化苦参碱的组合物；
56.所述的苦参提取物通过如下方法制备得到：
57.(1)取中药材苦参用体积分数为95％的乙醇进行加热回流提取1.5h得提取液，将提取液浓缩干燥后得苦参乙醇提取物；其中，苦参与乙醇的用量比为1g:10ml；
58.(2)将苦参乙醇提取物用水混悬，然后加入乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩干燥后得乙酸乙酯萃取物；其中苦参乙醇提取物与水以及乙酸乙酯的用量比为1g:50ml:50ml；
59.(3)将乙酸乙酯萃取物上硅胶柱(硅胶柱中的硅胶的质量为乙酸乙酯萃取物的30倍；所述的硅胶为200～300目的硅胶)，先用4倍柱体积的体积比为85:15的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂，然后再用6倍柱体积的体积比为80:20的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱；收集体积比为80:20的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥即得所述的苦参提取物。
60.对比例2与实施例1的区别在于，对比例2中苦参提取物的硅胶洗脱条件不同，其洗脱条件不在本发明所述范围内。对比例2的硅胶洗脱条件为：先用体积比为85:15的环己烷
和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂；再用体积比为80:20的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱，收集体积比为80:20的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥即得所述的苦参提取物；而实施例1则是先用体积比为93:7的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂；再用体积比为86:14的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱，收集体积比为86:14的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥即得所述的苦参提取物。
61.对比例3含氧化苦参碱的组合物的制备
62.将苦参提取物与氧化苦参碱按质量比7：1混合均匀即得所述的含氧化苦参碱的组合物；
63.所述的苦参提取物通过如下方法制备得到：
64.(1)取中药材苦参用体积分数为15％的乙醇进行加热回流提取1.5h得提取液，将提取液浓缩干燥后得苦参乙醇提取物；其中，苦参与乙醇的用量比为1g:10ml；
65.(2)将苦参乙醇提取物用水混悬，然后加入乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩干燥后得乙酸乙酯萃取物；其中苦参乙醇提取物与水以及乙酸乙酯的用量比为1g:50ml:50ml；
66.(3)将乙酸乙酯萃取物上硅胶柱(硅胶柱中的硅胶的质量为乙酸乙酯萃取物的30倍；所述的硅胶为200～300目的硅胶)，先用4倍柱体积的体积比为93:7的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂，然后再用6倍柱体积的体积比为86:14的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行洗脱；收集体积比为86:14的环己烷和乙酸乙酯组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥即得所述的苦参提取物。
67.对比例3与实施例1的区别在于，对比例3中用体积分数为15％的乙醇进行加热回流提取；而实施例1则是用体积分数为95％的乙醇进行加热回流提取。
68.实验例
69.(1)缺血性心脏病大鼠造模
70.造模方法如下：将sd大鼠麻醉后进行固定，将胸前的鼠毛剔除，连接动物呼吸机(控制潮气量3ml/kg，呼吸频率100次/min，吸呼比1:1)，在大鼠左侧第4、5肋间开胸暴露出心脏，将左心耳下的左冠状动脉用无菌带线缝合针进行结扎，结扎后关闭胸腔，缝合皮肤。
71.(2)含氧化苦参碱的组合物对缺血性心脏病大鼠的治疗作用
72.将按上述方法造模得到的缺血性心脏病大鼠分成模型组、实验组1～13；同时取正常的sd大鼠设置正常对照组，每组10只；将实施例1～3以及对比例1～3制备得到的含氧化苦参碱的组合物以及苦参提取物用质量分数为1％cmc
‑
na水溶液进行溶解；对实验组进行灌胃给药7天。其中模型组和正常对照组分别灌胃相同体积的质量分数为1％cmc
‑
na水溶液。给药7天后用超声仪测试左室射血分数(ef％)和短轴缩短率(fs％)，测试结果见表1。各实验组给药种类如下：
73.实验组1：将实施例1所述的含氧化苦参碱的组合物按20mg/kg/d的剂量灌胃给药；
74.实验组2：将按实施例1中方法制备得到的苦参提取物按20mg/kg/d的剂量灌胃给药；
75.实验组3：将实施例2所述的含氧化苦参碱的组合物按20mg/kg/d的剂量灌胃给药；
76.实验组4：将按实施例2中方法制备得到的苦参提取物按20mg/kg/d的剂量灌胃给
药；
77.实验组5：将实施例3所述的含氧化苦参碱的组合物按20mg/kg/d的剂量灌胃给药；
78.实验组6：将按实施例3中方法制备得到的苦参提取物按20mg/kg/d的剂量灌胃给药；
79.实验组7：将对比例1所述的含氧化苦参碱的组合物按20mg/kg/d的剂量灌胃给药；
80.实验组8：将按对比例1中方法制备得到的苦参提取物按20mg/kg/d的剂量灌胃给药；
81.实验组9：将对比例2所述的含氧化苦参碱的组合物按20mg/kg/d的剂量灌胃给药；
82.实验组10：将按对比例2中方法制备得到的苦参提取物按20mg/kg/d的剂量灌胃给药；
83.实验组11：将对比例3所述的含氧化苦参碱的组合物按20mg/kg/d的剂量灌胃给药；
84.实验组12：将按对比例3中方法制备得到的苦参提取物按20mg/kg/d的剂量灌胃给药；
85.实验组13：将氧化苦参碱按20mg/kg/d的剂量灌胃给药。
86.表1.含氧化苦参碱的组合物对缺血性心脏病大鼠的治疗作用
[0087] 给药种类ef％fs％模型组
‑
35.1414.69正常对照组
‑
85.7253.18实验组1实施例1所述的含氧化苦参碱的组合物76.3546.11实验组2按实施例1中方法制备得到的苦参提取物62.2435.45实验组3实施例2所述的含氧化苦参碱的组合物68.7540.52实验组4按实施例2中方法制备得到的苦参提取物54.2830.33实验组5实施例3所述的含氧化苦参碱的组合物72.5444.51实验组6按实施例3中方法制备得到的苦参提取物58.4732.98实验组7对比例1所述的含氧化苦参碱的组合物46.2525.64实验组8按对比例1中方法制备得到的苦参提取物41.2120.68实验组9对比例2所述的含氧化苦参碱的组合物48.9126.37实验组10按对比例2中方法制备得到的苦参提取物44.3524.39实验组11对比例3所述的含氧化苦参碱的组合物43.1622.01实验组12按对比例3中方法制备得到的苦参提取物40.6718.34实验组13氧化苦参碱51.1728.78
[0088]
由表1实验数据可以看出，按实施例1～3方法制备得到的苦参提取物其ef％以及fs％要高于氧化苦参碱；其与正常组接近；这说明按本发明所述方法制备得到的苦参提取物其对缺血性心脏病的治疗作用要好于单体化合物氧化苦参碱。尤其是，将实施例1～3方法制备得到的苦参提取物与氧化苦参碱组合后得到的含氧化苦参碱的组合物其ef％以及fs％要高于单独使用按实施例1～3方法制备得到的苦参提取物以及单独使用氧化苦参碱；这说明：按本发明所述方法制备得到的苦参提取物与氧化苦参碱组合后得到的含氧化苦参碱的组合物其对缺血性心脏病的治疗作用，要优于单独使用按本发明所述方法制备得到的
苦参提取物以及单独使用单体化合物氧化苦参碱；按本发明所述方法制备得到的苦参提取物与氧化苦参碱组合后发挥了协同治疗缺血性心脏病作用。
[0089]
由表1实验数据可以看出，按对比例1～2方法制备得到的苦参提取物，以及对比例1～2所述的含氧化苦参碱的组合物，其ef％以及fs％要小于氧化苦参碱，同样也小于实施例1～3所述的含氧化苦参碱的组合物；这说明苦参提取物制备过程中硅胶柱的洗脱条件对于能否富集到其对缺血性心脏病具有治疗作用的有效成分起着十分关键的作用。只有在本发明所述硅胶洗脱条件下制备得到的苦参提取物其对缺血性心脏病的治疗作用才能高于氧化苦参碱；在其它硅胶洗脱条件下制备得到的苦参提取物其对缺血性心脏病的治疗作用并不能高于氧化苦参碱。并且在其它硅胶洗脱条件下制备得到的苦参提取物与氧化苦参碱组合后得到的组合物也未表现出协同治疗缺血性心脏病的作用。
[0090]
由表1实验数据可以看出，按对比例3方法制备得到的苦参提取物，以及对比例3所述的含氧化苦参碱的组合物，其ef％以及fs％要小于氧化苦参碱，同样也小于实施例1～3所述的含氧化苦参碱的组合物；这说明苦参提取物制备过程中提取溶剂的选择对于能否制备得到对缺血性心脏病具有治疗作用的有效成分起着重要的作用。只有选用体积分数为70％～95％的乙醇制备得到的苦参提取物其对缺血性心脏病的治疗作用才能高于氧化苦参碱；采用其它体积分数的乙醇制备得到的苦参提取物其对缺血性心脏病的治疗作用并不能高于氧化苦参碱。并且采用其它体积分数的乙醇制备得到的苦参提取物与氧化苦参碱组合后得到的组合物也未表现出协同治疗缺血性心脏病的作用。