1.本发明属于生物医学领域，具体涉及一种能用水光针注射的含黑素细胞的透明质酸钠水凝胶、制备方法及应用。
背景技术：
2.白癜风是一种较为常见的后天性、泛发性或局限性的色素脱失性皮肤疾病，主要由黑素细胞功能受损或丧失导致。目前，白癜风的发病机制尚不清楚，但普遍认为与遗传、自身免疫、炎症诱发、外伤、神经精神及人体微量元素缺乏等有关。当前治疗白癜风的主要方法有药物治疗、光疗和手术治疗，药物治疗和光疗的副作用较大且治疗效果有限，手术治疗被认为是当前治疗白癜风的有效方法。手术治疗的方法依据白癜风皮肤的面积大小而定。对于白癜风皮肤面积较小的患者，手术切除或皮肤磨削法，然后移植黑素细胞就可以实现部分治愈，对于白癜风皮肤面积较大的患者，需要采用自体表皮移植或黑素细胞移植才能达到更高的治愈率。尽管手术治疗的方式取得了良好的效果，但也存在种种弊端，如造成新的创面且新创面的外观与正常皮肤差别较大，移植黑素细胞的过程复杂且细胞易流失或失活，整个治疗过程中患者比较痛苦且费用高昂。因此，开发一种简单有效的白癜风治疗方式去弥补现有治疗技术中存在问题是当前亟待解决的重点问题。
技术实现要素：
3.本发明的目的是，针对以上问题，提供一种能用水光针注射的含黑素细胞的透明质酸钠水凝胶、制备方法及应用，以解决现有技术中手术操作复杂、治疗过程患者比较痛苦且费用高昂的问题。
4.为了实现上述第一方面的目的，本发明采用以下技术方案：
5.一种能用水光针注射的含黑素细胞的透明质酸钠水凝胶，其特征在于，所述水凝胶包含黑素细胞、透明质酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠和麻药。
6.进一步地，所述麻药为盐酸利多卡因，透明质酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠和盐酸利多卡因的比例范围优选为(1％-5％):(0.5％-6.8％):(0.2％-3.3％):(0.8％-1％):(0.1％-0.5％)；黑素细胞的含量为1
×
10
5-1
×
108个/ml。
7.本发明的含黑素细胞的透明质酸钠水凝胶中，除了上述主要成分为黑素细胞、透明质酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠和盐酸利多卡因外，还可含有多肽、寡肽、氨基酸或具有促进细胞生长作用的生物活性物质，也可含有普鲁卡因、苯佐卡因、布比卡因、达克罗宁等具有局部麻醉作用的药物。
8.为了实现上述第二方面的目的，本发明采用以下技术方案：
9.能用水光针注射的含黑素细胞的透明质酸钠水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.s1.将透明质酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠和盐酸利多卡因溶于水，获得
透明质酸钠溶液；
11.s2.将交联剂加入透明质酸钠溶液中，室温搅拌制备透明质酸钠水凝胶；
12.s3.将黑素细胞接种到上述水凝胶中，获得含黑素细胞的透明质酸钠水凝胶。
13.进一步地，注射器的容量为0.1-5.0ml，水光针的针头直径范围为0.06-0.11mm。
14.进一步地，所述步骤s1中制备的透明质酸钠水凝胶中透明质酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠和盐酸利多卡因的质量比为(1-5):(0.5-6.8):(0.2-3.3):(0.8-1):(0.1-0.5)。
15.进一步地，所述步骤s1中透明质酸钠的分子量范围为150-400万道尔顿；所述步骤s2中，所述交联剂为二乙烯基砜，所述交联剂的添加量为透明质酸钠的0.05-0.25％。该优选方案带来的直接技术效果是所制备的水凝胶不至于过硬难以注射，也不至于过软注射时易从注射部位泄露，从而有利于手术的实施。
16.进一步地，所述步骤s3制备的透明质酸钠水凝胶中含黑素细胞的透明质酸钠水凝胶的黑素细胞浓度为1
×
10
5-1
×
108个/ml。
17.本发明上述方法通过将黑素细胞、透明质酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠和盐酸利多卡因复合制备含黑素细胞的透明质酸钠水凝胶，可以避免黑素细胞的流失。通过将含黑素细胞的透明质酸钠水凝胶装入注射器中，利用水光仪通过水光针将水凝胶注射到白癜风患者的白斑皮肤内，此种方法能够极大地简化手术过程，消除手术带来的痛苦，缩减治疗过程产生的费用。
18.在所述制备方法中，多肽、寡肽、氨基酸或具有促细胞生长作用的生物活性物质可以在所述步骤s3中随黑素细胞一起接种到水凝胶中，普鲁卡因、苯佐卡因、布比卡因、达克罗宁等具有局部麻醉作用的药物可以在所述步骤s1中随盐酸利多卡因一起溶于水中。
19.为了实现上述第三方面的目的，即：本发明上述含黑素细胞的透明质酸钠水凝胶在制备治疗白癜风的药物中的应用。所述药物适于水光针注射，注射器的容量为0.1-5.0ml，水光针的针头直径范围为0.06-0.11mm。
20.本发明中利用水光注射含黑素细胞的透明质酸钠水凝胶治疗白癜风的方法具有如下优点：
21.(1)本发明首先制备透明质酸钠水凝胶，然后将黑素细胞接种到水凝胶中，所得水凝胶可以作为黑素细胞的载体，避免细胞流失。
22.(2)本发明利用注射器、水光针和水光仪将含黑素细胞的透明质酸钠凝胶直接注射到白癜风患者的白斑皮肤内，大大简化了手术过程，缩减了治疗费用。
23.(3)本发明将局部麻醉剂盐酸利多卡因结合到透明质酸钠水凝胶中，通过水光注射的形式实施手术，消除了手术带来的痛苦。
具体实施方式
24.以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书提示的内容轻易地了解本发明的其他优点和功效，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
25.以下各实施例采用的原料如下：
26.透明质酸钠：分子量范围为150-400万道尔顿，来自山东华熙生物科技股份有限公司。
27.磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠：来自国药集团化学试剂有限公司。
28.盐酸利多卡因：来自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。
29.黑素细胞：源于男性儿童的包皮，由杭州市儿童医院赠送。
30.实施例1
31.本实施例为一种含黑素细胞的透明质酸钠水凝胶的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
32.s1.按质量份数，分别称取2份透明质酸钠、0.9份磷酸氢二钠、0.4份磷酸二氢钠、0.9份氯化钠、0.3份盐酸利多卡因，溶于95.5份纯化水中，获得透明质酸钠溶液。
33.s2.将0.1份的二乙烯基砜加入s1制备的透明质酸钠溶液中，室温搅拌制备透明质酸钠水凝胶。
34.s3.取1ml s2中制备的水凝胶，加入1
×
105个黑素细胞，获得含黑素细胞的透明质酸钠水凝胶。
35.实施例2
36.本实施例为一种利用水光注射含黑素细胞的透明质酸钠水凝胶治疗白癜风的方法，该方法包括如下步骤：
37.s1.按质量份数，分别称取2份透明质酸钠、0.9份磷酸氢二钠、0.4份磷酸二氢钠、0.9份氯化钠、0.3份盐酸利多卡因，溶于95.5份纯化水中，获得透明质酸钠溶液。
38.s2.将0.1份的二乙烯基砜加入s1制备的透明质酸钠溶液中，室温搅拌制备透明质酸钠水凝胶。
39.s3.取1ml s2中制备的水凝胶，加入1
×
106个黑素细胞，获得含黑素细胞的透明质酸钠水凝胶。
40.s4.将s3中获得的含黑素细胞的透明质酸钠水凝胶装入2ml注射器中，利用水光仪通过针头直径为0.06mm的水光针注射到白癜风患者的白斑皮肤内。
41.其中，注射器(2ml上海碧迪医疗器械有限公司，中国)，水光仪(vital injector2
tm
，北京迪科优品科技有限公司，中国)，水光针(32g，杭州巡航医药有限公司，中国)。
42.虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明做了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对此作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。