1.本发明属于渔业病害防治技术领域，具体涉及桃树(prunus persica)皮提取物在防治淡水鱼多子小瓜虫病中的应用。
背景技术：2.多子小瓜虫是一种纤毛类原生动物，广泛寄生于多种淡水鱼类的体表和鳃等部位，能形成肉眼可见的白点，引起的病害俗称白点病。鱼类感染小瓜虫后，病鱼焦躁不安，食欲减退，寄生部位出现组织增生、坏死等病理症状，鳃部严重感染时，鱼类的呼吸功能受损，最终死亡。目前，养殖生产中对多子小瓜虫病的防治主要通过福尔马林，硫酸铜等化学药物，但是这些药物的使用面临耐药性的产生，对鱼类的毒性作用以及污染水环境等诸多问题。因此，寻找安全、有效的替代药物是多子小瓜虫病研究的热点问题。
3.中草药在我国资源丰富，具有天然低毒，对环境友好等优点，是开发绿色药物的重要资源。早在我国北宋时期《物类相感志》中就有“鱼瘦而生白点者，名虱，用枫树皮投水中则愈”的中草药疗法。明朝徐光启在《农政全书》也记载，发现虱，“则以松毛遍池中，浮之则除”。研究已表明，这里所指的“虱”即为多子小瓜虫。近年来，陆续有研究发现多种中草药对多子小瓜虫有杀灭效果，说明中草药在抗多子小瓜虫作用中有巨大应用前景。
4.桃树(prunus persica)是我国传统中草药，但其药效研究相对比较匮乏。近几年有研究发现桃树皮作为配方在治疗儿童顽固性腹泻和人的扁平疣方面有一定效果。在抗虫方面，桃树皮搭配白杨树皮煎浓汁可用于治疗猪虱病。然而目前尚未有桃树皮在水产病害防治中应用的相关报道。
技术实现要素：5.本发明的目的是提供桃树皮提取物在防治淡水鱼多子小瓜虫病中的应用。
6.本发明的目的通过下述方案实现：
7.体外杀虫试验结果表明：桃树皮提取物对多子小瓜虫的掠食体、滋养体和包囊均具有很好的杀灭效果，而且具有量效关系，证明桃树皮提取物能通过杀灭虫体防治淡水鱼多子小瓜虫病。
8.所述桃树皮提取物是桃树皮的无水乙醇提取物。
9.优选地，所述提取物的制备方法是：将桃树皮粉碎成粉末，然后加入无水乙醇温浸提取，提取液经浓缩、干燥即得。
10.进一步优选地，所述无水乙醇的用量是桃树皮粉末重量的5
‑
20倍。
11.进一步优选地，所述温浸的温度是40
‑
70℃。
12.进一步优选地，所述提取的次数是2
‑
5次，每次提取的时间是0.5
‑
3小时。
13.本发明进一步提供一种杀灭多子小瓜虫的方法，该方法包括以下步骤：向多子小瓜虫的虫液中施加桃树皮提取物。
14.优选地，在多子小瓜虫的不同生活史阶段施加不同量的桃树皮提取物，其中，在掠
食体阶段施加终浓度为6.2mg/l的桃树皮提取物；在滋养体阶段施加终浓度为25mg/l的桃树皮提取物；在包囊阶段施加终浓度为100mg/l的桃树皮提取物，可以将虫体完全杀死。
15.本发明相对现有技术，具有以下优点及有益效果：
16.(1)本发明使用的药物原料桃树皮为传统的中草药，在我国资源丰富，且提取过程简单方便，植物提取物易获得。
17.(2)本发明中的桃树皮在林业以及畜牧业中已被广泛使用，是一种安全、无毒的药物原料，相比于化学药物在渔业养殖中更加安全。
18.(3)本发明首次报道了桃树皮提取物对多子小瓜虫具有显著的药物活性，其在有效浓度范围内能将生活史各阶段的多子小瓜虫100％杀灭。
具体实施方式
19.下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
20.下列实施例中使用的材料为：患多子小瓜虫病的鳑鲏(rhodeus ocellatus)采集自华中农业大学水产基地。
21.在试验开始前，申请人首先选择了板蓝根、樟树叶、桃树皮、枫杨皮、鱼腥草等75种中草药，经乙醇提取后观察在离体情况下对小瓜虫掠食体的杀灭效果，从而筛选出桃树皮的杀虫效果最佳，而其它中草药效果均不理想。
22.本发明中桃树皮提取物的具体制备方法：将购买的桃树皮在55℃烘箱内烘至恒重后，使用粉碎机粉碎，经20目筛网后获得药物粉末。准确称取20g药物粉末，按照1:10比例加入无水乙醇200ml，于45℃水浴锅内浸提2次，每次2h。合并2次浸提的上清液，过滤内部残留的药物粉末。使用旋转蒸发浓缩仪对滤液进行减压浓缩，浓缩产物在55℃烘箱内进一步干燥去除剩余乙醇，至恒重后收集获得桃树皮乙醇提取产物。
23.准确称取粗提物0.1g，经10ml无水乙醇充分溶解后，加入90ml蒸馏水使得桃树皮提取物最终浓度为1g/l，乙醇含量为10％。
24.多子小瓜虫虫体收集方法：利用细胞刮刀轻轻地从患病鱼体表将多子小瓜虫滋养体刮落至装有无菌曝气水的培养皿中，待滋养体在水中开始游动后，用塑料吸管吸取游动的虫体至干净的培养皿中，反复洗脱2～3次后，收集部分滋养体用于后续药效评价实验，剩余滋养体同培养皿置于25℃培养箱中孵化，约12～14h后，可见皿内有大量游动的掠食体，收集虫液，用于后续药效评价实验。
25.实施例1：桃树皮提取物对多子小瓜虫掠食体的杀灭效果。
26.吸取多子小瓜虫掠食体虫液100μl约60个虫体于96孔板中，共计5个实验组和2个对照组，每组设置3个平行，共计2100ul虫液。稀释药物母液获得浓度梯度为12.5、6.2、3.1、1.6和0.8mg/l的桃树皮提取物，等体积(100μl)加入各实验组中，使各组终浓度分别为6.2、3.1、1.6、0.8和0.4mg/l。乙醇对照组加入100μl 0.125％的无水乙醇，空白对照组加入100μl曝气水。将96孔板置于25℃培养箱中培养，4h后统计各组掠食体死亡率，显微镜观察虫体状态。
27.结果表明：桃树皮乙醇提取物浓度为6.25mg/l时，在4h内可以杀灭100％的多子小瓜虫掠食体；当浓度降低至3.1mg/l时，在4h内可杀灭44.9％的掠食体；当浓度进一步降低至0.4mg/l时，桃树皮乙醇提取物仍可在4h内杀灭4.6％的掠食体。对照组无掠食体死亡。显
微镜观察发现，药物处理后掠食体失去运动能力，细胞质不流动，细胞膜破裂，虫体死亡。
28.实施例2：桃树皮提取物对多子小瓜虫滋养体的杀灭效果。
29.吸取多子小瓜虫滋养体虫液1ml约30个虫体于12孔板中，共计6个实验组和2个对照组，每组设置3个平行，共计24ml虫液。稀释药物母液获得浓度梯度为50、25、12.5、6.25、3.1和1.5mg/l的桃树皮乙醇提取物，等体积(1ml)加入各实验组中，使各组终浓度分别为25、12.5、6.25、3.1、1.5和0.8mg/l。乙醇对照组加入1ml 0.5％的无水乙醇，空白对照组加入1ml曝气水。将12孔板置于25℃培养箱中培养，6h后统计各组滋养体死亡率，显微镜观察虫体状态。
30.结果表明：桃树皮乙醇提取物浓度为25.0mg/l时，在6h内可以杀灭100％的多子小瓜虫滋养体；当浓度降低至6.2mg/l时，在6h内可杀灭6.0％的滋养体；当浓度进一步降低至3.1mg/l时，桃树皮乙醇提取物在6h内对滋养体无效果。对照组无滋养体死亡。显微镜观察发现，药物处理后滋养体失去运动能力，细胞质内出现空泡化，部分虫体细胞膜破裂，虫体死亡。
31.实施例3：桃树皮提取物对多子小瓜虫包囊的杀灭效果。
32.吸取多子小瓜虫滋养体虫液1ml约30个虫体于12孔板中，共计6个实验组和2个对照组，每组设置3个平行，共计24ml虫液。将12孔板置于25℃条件继续孵育6h后至每孔中的滋养体进入包囊阶段。稀释药物母液获得浓度梯度为200、100、50、25、12.5和6.25mg/l的桃树皮乙醇提取物，等体积(1ml)加入各实验组中，使各组终浓度分别为100、50、25、12.5、6.25和3.1mg/l。乙醇对照组加入1ml 2％的无水乙醇，空白对照组加入1ml曝气水。将12孔板置于25℃培养箱中培养，6h后统计各组包囊死亡率，显微镜观察虫体状态。
33.结果表明：桃树皮乙醇提取物浓度为100mg/l时，在6h内可以杀灭100％的多子小瓜虫包囊；浓度为25mg/l时，在6h内可杀灭65.6％的包囊；当浓度降低至12.5mg/l时，桃树皮乙醇提取物在6h内仅可杀灭4.4％的包囊；当浓度为6.25mg/l时对包囊无杀灭效果。对照组无包囊死亡。显微镜观察发现，药物处理后包囊内部虫体失去运动能力死亡，细胞内出现空泡化，包囊分裂停止。
34.表1桃树皮乙醇提取物对多子小瓜虫掠食体、滋养体及包囊的杀灭效果
35.[0036][0037]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。