可用于化妆品的羽扇豆针叶樱桃发酵物及其制备方法

文档序号:27432045发布日期:2021-11-17 22:19阅读:220来源:国知局
可用于化妆品的羽扇豆针叶樱桃发酵物及其制备方法

1.本公开属于生物发酵技术领域,具体涉及一种可用于化妆品的羽扇豆针叶樱桃发酵物及其制备方法。


背景技术:

2.羽扇豆(学名:lupinus micranthus guss.)俗称鲁冰花。茎叶主要用于青饲和放牧,也制作优良青贮,为猪和乳牛良好的饲料,种子是含蛋白很高的精饲料,并用作绿肥和覆盖作物,也是蜜源和观赏植物。
3.白羽扇豆为豆科羽扇豆属下的一个种,其种子提取物富含多种蛋白质和氨基酸,富含抗皱植物性胜肽,能抑制肌质金属蛋白酶的活性,从而防止对胶原蛋白、弹力蛋白、纤维粘连蛋白的损害,使这些蛋白有效支撑,防止皮肤松弛、皱纹。但是对其提取方法的披露较少。
4.天然活性物质提取方法有水提取法、有机溶剂提取、超声波提取法、微波提取法、超临界流体萃取法和微生物发酵法等。面对如此众多的提取方法,如何筛选出更利于活性物质提取的方法,仍是本领域研发人员面临的技术难题。发酵指人们借助微生物在有氧或无氧条件下的生命活动来制备微生物菌体本身、或者直接代谢产物或次级代谢产物的过程,在食品工业、生物和化学工业中均有广泛应用。对采用发酵技术提取营养物质已多有报道,但是根据发酵底物和发酵工艺条件的不同,提取效果差别很大。有赖于研究人员继续探索更多发酵底物组合及发酵方法制备出更多、更优功效的产品以满足消费者需求。
5.申请号为202010743613.3,发明名称为《一种益生菌发酵羽扇豆发酵制品的制备方法》,技术方案大致如下:步骤1,对羽扇豆种子进行预处理;步骤2,在羽扇豆种子浆料中添加纤维素酶,水解、过滤、升温后,添加甜味料,用水补足,进行均质、巴氏杀菌、冷却;步骤3,在羽扇豆料液中接种直投式发酵剂并搅拌均匀,恒温发酵后、冷却;步骤4,搅拌均匀,密封并置于6℃以下,或均质、巴氏杀菌后,无菌灌装。该方案采用乳酸菌组成的直投式发酵剂来发酵羽扇豆种子,不仅利用了羽扇豆种子里丰富的蛋白质,还保留了大部分膳食纤维和其他营养成分,转化成营养健康的新型食品,而且工艺相对简单,成本低廉,没有废弃物。但是所得到的产品为食品,其用于化妆品的性能尚未可知。
6.针叶樱桃(acerola cherry)是金虎尾科(malpighiaceae)金虎尾属(malpighia)凹缘金虎尾(m.emarginata)的果实。针叶樱桃提取物以其为原料提取的活性成分,含有蛋白质、糖、果酸及维生素a、b1、b2、维生素c,尼克酸、钙、磷、铁等;具有很好的抗贫血、抗真菌、抗遗传毒性,还有很强的自由基清除能力,可以作为天然的抗氧化剂应用于食品和化妆品行业。
7.目前尚未有羽扇豆、针叶樱桃提取物复合发酵提取物用于化妆品领域的报道。


技术实现要素:

8.在下文中给出了关于本公开的简要概述,以便提供关于本公开的某些方面的基本
理解。应当理解,这个概述并不是关于本公开的穷举性概述。它并不意图确定本公开的关键或重要部分,也不意图限定本公开的范围。其目的仅仅是以简化的形式给出某些概念,以此作为稍后论述的更详细描述的前序。
9.鉴于现有技术的上述缺陷,本公开的目的是提供一种可用于化妆品的羽扇豆针叶樱桃发酵物及其制备方法,该发酵产品具有良好的安全性和抗氧化功效,还具有良好的稳定性。
10.根据本公开的第一个方面,提供了一种可用于化妆品的羽扇豆针叶樱桃发酵物的制备方法,包括:
11.取适量羽扇豆粉和针叶樱桃粉(针叶樱桃提取物)和水混合、灭菌处理、冷却后得到发酵底物,所述羽扇豆粉与水的质量比为0.5~5:100(比如1:100、1.5:100、2:100、2.5:100、3:100、3.5:100、4:100、4.5:100等);所述针叶樱桃粉和水的质量比为0.1~3:100(比如0.3:100、0.5:100、1:100、1.5:100、2:100、2.5:100、2.8:100等);
12.往所述发酵底物接种酵母菌和/或乳酸菌进行发酵处理,然后灭菌、分离处理,得到羽扇豆针叶樱桃发酵液。
13.上述羽扇豆针叶樱桃发酵物的制备方法中,作为一种优选实施方式,所述针叶樱桃粉为针叶樱桃提取物,通过常规的热水浸提法所得。
14.上述羽扇豆针叶樱桃发酵物的制备方法中,作为一种优选实施方式,所述发酵处理包括:先对所述发酵底物接种酵母菌进行第一次发酵培养;灭菌处理后再接种乳酸菌进行第二次发酵培养。
15.上述羽扇豆针叶樱桃发酵物的制备方法中,作为一种优选实施方式,所述羽扇豆粉的粒度为过100目筛。
16.上述羽扇豆针叶樱桃发酵物的制备方法中,作为一种优选实施方式,所述酵母菌为酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)ywy

1,保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称cgmcc),地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,邮编为100101,保藏日期为2019年03月27日,保藏编号为cgmcc no.17452。
17.上述羽扇豆针叶樱桃发酵物的制备方法中,作为一种优选实施方式,所述乳酸菌为下列菌种中的至少一种:德氏乳杆菌保加利亚亚种(lactobacillus delbruechii subsp.bulgaricus),布氏乳杆菌(lactobacillus buchneri),两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)。实践中,乳酸菌可采用下列菌种中的至少一种:德氏乳杆菌保加利亚亚种(lactobacillus delbruechii subsp.bulgaricus),保藏编号为cgmcc 1.16075,可从cgmcc购买;布氏乳杆菌(lactobacillus buchneri),保藏编号为cgmcc 1.15607,可从cgmcc购买;两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum),保藏编号为cgmcc 1.5029,可从cgmcc购买。更优选地,所述乳酸菌为德氏乳杆菌保加利亚亚种(lactobacillus delbruechii subsp.bulgaricus),保藏编号为cgmcc 1.16075。
18.上述羽扇豆针叶樱桃发酵物的制备方法中,作为一种优选实施方式,用于接种的酵母菌菌液的浓度为104‑
109cfu/ml(比如105cfu/ml、106cfu/ml、107cfu/ml、108cfu/ml等),所述酵母菌菌液和所述发酵底物的体积比为5%

20%(比如8%、10%、12%、15%、18%等)。
19.上述羽扇豆针叶樱桃发酵物的制备方法中,作为一种优选实施方式,用于接种的
乳酸菌菌液的浓度为104‑
109cfu/ml(比如105cfu/ml、106cfu/ml、107cfu/ml、108cfu/ml等),所述乳酸菌菌液和所述发酵底物的体积比为5%

20%(比如8%、10%、12%、15%、18%等)。
20.上述羽扇豆针叶樱桃发酵物的制备方法中,作为一种优选实施方式,所述发酵处理时,如果采用酵母菌,则发酵培养的温度为20℃

28℃(比如22℃、24℃、26℃等),时间为30

50h(比如32h、35h、40h、45h、48h等),转速为100

180r/min(比如110r/min、120r/min、130r/min、140r/min、150r/min、160r/min、170r/min等);如采用乳酸菌,则发酵培养的温度为37

45℃(比如38℃、40℃、42℃、44℃等),时间为6

16h(比如7h、8h、10h、12h、14h、15h等),静置培养。
21.上述羽扇豆针叶樱桃发酵物的制备方法中,作为一种优选实施方式,所述灭菌处理的温度是100

121℃(比如102℃、105℃、110℃、115℃、118℃等),时间是15

30min(比如18min、20min、22min、25min、28min等)。
22.上述羽扇豆针叶樱桃发酵物的制备方法中,作为一种优选实施方式,所述分离处理采用离心方法;更优选地,离心转速为4500r/min

6000r/min(比如4800r/min、5000r/min、5200r/min、5500r/min、5800r/min等),离心时间为30min

60min(比如35min、40min、45min、50min、55min等)。
23.上述羽扇豆针叶樱桃发酵物的制备方法中,作为一种优选实施方式,还包括:对所述羽扇豆针叶樱桃发酵液进行防腐处理;更优选地,所述防腐处理为在所述羽扇豆针叶樱桃发酵液冷却至45℃以下后添加相对于羽扇豆针叶樱桃发酵液质量比为2.3%乙二醇和质量比为0.5%戊二醇,即添加相对于羽扇豆针叶樱桃发酵液质量百分比2.3%的乙二醇和质量百分比0.5%的戊二醇。
24.上述羽扇豆针叶樱桃发酵物的制备方法中,作为一种优选实施方式,还包括:对所述羽扇豆针叶樱桃发酵液进行干燥处理,最终得到羽扇豆针叶樱桃发酵干粉;更优选地,所述干燥处理可以是喷雾干燥、真空冷冻干燥等。
25.根据本公开的第二方面,还提供了一种采用上述方法制备的发酵产品,包括发酵液、发酵干粉等。
26.根据本公开的第三方面,还提供了上述发酵产品在制备化妆品中的应用;优选地,所述化妆品可以是面膜、精华液、爽肤水、乳液等。
27.按照本公开的方法制得的羽扇豆针叶樱桃发酵物含有多糖、多肽等活性物质,具有抗氧化作用、清除自由基的作用,可以添加到包括但是不限于:面膜、精华液、爽肤水、乳液等化妆品中。发明人通过实验发现,直接往羽扇豆发酵液中添加针叶樱桃粉提取物容易产生沉淀,不稳定,两种原料一起发酵后经过微生物的作用,形成新的物质或分子间物理作用,最终发酵液等产品更稳定。
28.本公开利用酵母菌和/或乳酸菌对适量配比的羽扇豆粉和针叶樱桃粉进行液体发酵,能够提取出并结合羽扇豆中的活性物质,与针叶樱桃提取物的活性物质实现良好融合;先用酵母菌发酵再利用乳酸菌进行第二次发酵,提高了产品的安全性。将按照本公开制备的羽扇豆针叶樱桃发酵物可应用于化妆品中,且能够提高化妆品的抗衰老、抗氧化性能。
29.本发明制得的羽扇豆针叶樱桃发酵物具有优越的安全性,可以直接作为面膜液或精华液或爽肤水等成品化妆品使用,对皮肤无副作用。
具体实施方式
30.在下文中将结合示范性实施例对本公开的技术方案进行描述。
31.下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。
32.下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
33.下述实施例中的羽扇豆粉和针叶樱桃粉都来自市面销售,其中羽扇豆来自陕西斯诺特生物技术有限公司,粉粹后过100目筛所得;针叶樱桃粉购自购于西安优硕生物科技有限公司,为10:1热水浸提所得针叶樱桃提取物。
34.下述实施例中的酵母菌为酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)ywy

1,为申请人实验室自有,且已经提交中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称cgmcc)保藏,保藏日期为2019年03月27日,保藏编号为cgmcc no.17452。
35.下述实施例中的乳酸菌为德氏乳杆菌保加利亚亚种(lactobacillus delbruechii subsp.bulgaricus),保藏编号为cgmcc 1.16075,从cgmcc购买。
36.酵母菌和乳酸菌的种子培养基分别为酵母浸出粉胨葡萄糖培养基(ypd培养基)和乳酸细菌培养基(mrs培养基)。将酵母菌在28℃恒温震荡培养箱中150r/min培养48h,得到用于接种的酵母菌菌液,浓度约为108cfu/ml。将乳酸菌在45℃恒温震荡培养箱中静置培养24h,得到用于接种的乳酸菌菌液,浓度约为10
10
cfu/ml。
37.实施例1酵母菌单独发酵
38.1)将羽扇豆粉和针叶樱桃粉按照1:1.5:100的料液比(重量比)与去离子水混合,置于三角瓶中,摇匀后,放入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌,灭菌温度为121℃,灭菌时间20min,冷却后即得羽扇豆针叶樱桃培养基(即发酵底物);
39.2)将酵母菌菌液,按照8%的体积比例接入到羽扇豆针叶樱桃培养基中,在温度为28℃、转速为150r/min的恒温震荡培养箱中发酵48h;
40.3)发酵完成后,离心过滤取上清液,离心转速5500rpm,离心时间45min,然后将上清液放入到高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌,灭菌温度为110℃、灭菌时间30min;
41.4)灭菌完成后,将上清液置于常温下,冷却至45℃以下,添加防腐体系,即2.3wt.%乙二醇和0.5wt.%戊二醇。
42.实施例2乳酸菌单独发酵
43.1)将羽扇豆粉和针叶樱桃粉按照1:1.5:100的料液比与去离子水混合,置于三角瓶中,摇匀后,放入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌,灭菌温度为121℃,灭菌时间20min,冷却后即得羽扇豆针叶樱桃培养基(即发酵底物);
44.2)将乳酸菌菌液按照10%的体积比例接入到羽扇豆针叶樱桃培养基中,在温度为45℃的恒温震荡培养箱中静置发酵8h;
45.3)发酵完成后,离心过滤取上清液,离心转速5500rpm,离心时间45min,然后将上清液放入到高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌,灭菌温度为110℃、灭菌时间30min;
46.3)灭菌完成后置于常温下,冷却至45℃以下,添加防腐体系,即2.3wt.%乙二醇和0.5wt.%戊二醇。
47.实施例3酵母菌和乳酸菌先后发酵
48.1)将羽扇豆粉和针叶樱桃粉按照1:1.5:100的料液比与去离子水混合,置于三角瓶中,摇匀后,放入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌,灭菌温度为121℃,灭菌时间20min,冷却后即
得羽扇豆针叶樱桃培养基(即发酵底物);
49.2)将酵母菌菌液,按照8%的体积比例接入到羽扇豆针叶樱桃培养基中,在温度为28℃、转速为150r/min的恒温震荡培养箱中发酵48h;
50.3)发酵完成后,放入到高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌,灭菌温度为110℃、灭菌时间30min;
51.4)灭菌完成后冷却至45℃以下,再按照10%的体积比例接种乳酸菌菌液,在温度为45℃的恒温震荡培养箱中静置发酵8h;
52.5)发酵完成后,离心过滤取上清液,离心转速5500rpm,离心时间45min,然后将上清液放入到高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌,灭菌温度为110℃、灭菌时间30min;
53.6)灭菌完成后置于常温下,冷却至45℃以下,添加防腐体系,即2.3wt.%乙二醇和0.5wt.%戊二醇。
54.对比例1
55.本对比例与实施例1相比差别仅在于发酵底物中不含针叶樱桃粉,其他步骤和工艺条件皆相同,最终制得羽扇豆发酵液。
56.对比例2
57.本对比例与实施例2相比差别仅在于发酵底物中不含针叶樱桃粉,其他步骤和工艺条件皆相同,最终制得羽扇豆发酵液。
58.对比例3
59.本对比例与实施例3相比差别仅在于发酵底物中不含针叶樱桃粉,其他步骤和工艺条件皆相同,最终制得羽扇豆发酵液。
60.性能实验
61.一、发酵液理化性质分析
62.对实施例1制备所得的羽扇豆针叶樱桃发酵液进行理化性质分析。其外观为淡黄色微透明液体,ph值4.7,固形物含量2.9%,菌落总数小于50cfu/ml,无致病菌检出。
63.对实施例2制备所得的羽扇豆针叶樱桃发酵液进行理化性质分析。其外观为淡黄色微透明液体、ph值5.3,固形物含量3.6%,菌落总数小于50cfu/ml,无致病菌检出。对实施例3制备所得的羽扇豆针叶樱桃发酵液进行理化性质分析。其外观为淡黄色液体,ph值4.8,固形物含量3.5%,菌落总数小于50cfu/ml,无致病菌检出。根据化妆品卫生标准gb7916

87,化妆品细菌总数不高于1000cfu/ml,所以上述羽扇豆针叶樱桃发酵液符合化妆品质量要求。
64.作为对比,对比例1至对比例3中制得的羽扇豆发酵液的ph值分别为5.3、5.5、5.4,固形物含量分别为2.9%、3.2%、3.2%。
65.对实施例1至实施例3中制得的羽扇豆针叶樱桃发酵液进行成分分析,所得结果如下表1,作为对比的对比例1至对比例3中制得的羽扇豆发酵液成分也参见表1:
66.表1实施例1

3和对比例1

3制得的发酵液理化性质比较
[0067] 实施例1实施例2实施例3发酵前空白对照多肽含量mg/ml3.953.864.123.78标准差0.150.050.070.05多糖含量mg/ml5.366.749.684.03
标准差0.050.090.190.06 对比例1对比例2对比例3对比例发酵前空白对照多肽含量mg/ml4.554.113.623.43标准差0.270.050.240.38多糖含量mg/ml3.334.253.593.08标准差0.010.130.071.08
[0068]
从表1中可以看出:经过发酵后实施例的多肽含量上升,多糖含量上升,对比例经过发酵后的多糖含量上升,多肽含量上升;且实施例中双菌发酵后的多糖含量和多肽含量均最大。
[0069]
二、发酵液的安全性检测
[0070]
人体斑贴试验主要是用于检测化妆品终产品或原料的刺激性。本发明对实施例1至实施例3获得的羽扇豆针叶樱桃发酵液进行人体封闭式斑贴试验,旨在对其潜在皮肤刺激性进行评估。
[0071]
1、试验对象
[0072]
选择合适的志愿者30人,年龄范围在18

60岁随机选择。
[0073]
2、试验方法
[0074]
将液体样品(即羽扇豆针叶樱桃发酵液)0.02ml到0.025ml滴加在滤纸片上,再将滤纸片置于斑试器内。每个样品均设置空白对照,在对照斑试器孔内加入与样品等量的样品溶剂,如蒸馏水或橄榄油(本实施例采用蒸馏水)。
[0075]
试验部位选为人体背部,利用无刺激性的胶带将斑试器固定贴敷于受试者背部。测试周期持续24h。为了试验结果的准确、可信和科学,在测试期间志愿者按照要求,不能摘掉斑试器,亦不可使受试部位接触水。24h后去除斑试器,静置30min后,等待压痕消失,观察皮肤的反应。如果试验结果为阴性,则需要在斑贴试验后24h和48h分别再观察一次。
[0076]
3、试验结果
[0077]
斑贴试验结果如表2所示,表2中各级别表示的含义如下:0级=阴性反应。1级=可疑反应;仅有微弱红斑。2级=弱阳性反应(红斑反应);红斑、浸润、水肿、可有丘疹。3级=强阳性反应(疱疹反应);红斑、浸润、水肿、丘疹、疱疹;反应可超出受试区。4级=极强阳性反应(融合性疱疹反应);明显红斑、严重浸润、水肿、融合性疱疹;反应超出受试区。
[0078]
表2实施例1

3和对比例1

3制得的发酵液的斑贴试验结果
[0079]
[0080][0081]
从表2中可以看出:实施例1得到的酵母菌单独发酵羽扇豆针叶樱桃发酵液、实施例2得到的乳酸菌单独发酵羽扇豆针叶樱桃发酵液和实施例3所得的酵母菌乳酸菌两步发酵所得的羽扇豆针叶樱桃酵液都未产生可疑反应,说明本发明提供的产品安全性较高,不会给人体带来不良反应;而对比例2中得到的羽扇豆发酵液有可疑反应,其安全性能不如本发明实施例产品。
[0082]
三、发酵液的抗氧化性能检测
[0083]
dpph是一种早期合成的有机自由基,常用来评估抗氧化物的供氢能力,它在有机溶剂中非常稳定,呈紫色,而且在517nm处有一个特征吸收峰,当遇到自由基清除剂时,dpph的孤对电子被配对而使其退色,也就是在最大吸收波长处的吸光值变小。因此,可通过测定吸光值的变化来评价样品对dpph自由基的清除效果。
[0084]
以实施例1

实施例3制备得到的羽扇豆针叶樱桃发酵液作为待测液,以维生素c为阳性对照。dpph自由基清除实验的具体实验步骤为:
[0085]
(1)取等体积(3ml)的待测液与2
×
10
‑4mol/l的dpph溶液混匀(a1管);
[0086]
(2)取等体积(3ml)的无水乙醇(待测物溶剂)与2
×
10
‑4mol/l的dpph溶液混匀(a2管);
[0087]
(3)取等体积(3ml)的无水乙醇与待测液混匀(a3管);
[0088]
(4)反应30min后,在517nm下测a1管、a2管、a3管吸光度值。
[0089]
清除率计算公式为:清除率(%)=[(a2+a3)

a1]/a2。具体结果参见表3。
[0090]
表3实施例1至3制得的发酵液的dpph自由基清除实验结果
[0091][0092]
由表3可知,发酵后实施例2、3所得发酵液的dpph自由基清除率上升,发酵后对比例2和3所得发酵液的dpph自由基清除率上升,但对于双菌发酵而言,实施例3制得的发酵液表现较对比例3有大幅提升。
[0093]
四、发酵液的细胞毒性检测
[0094]
人皮肤成纤维细胞(hsf)培养于含10%胎牛血清以及1%双抗(1
×
105u/l青霉素、100mg/l链霉素)的dmem培养基中。细胞生长于37℃、5%co2饱和湿度的培养箱中,当细胞融合达到85%以上时,以0.05%胰酶消化传代。将对数生长期状态良好的人皮肤成纤维细胞接种于细胞培养板中进行实验。
[0095]
利用mtt法检测发酵液对人皮肤成纤维细胞的存活率的影响。具体步骤如下:消化对数生长期细胞,用含血清的dmem终止消化反应。细胞计数板计数,将细胞悬液浓度调整到5
×
104个/ml,将细胞悬液按照每孔100μl的比例接种到96孔板上,37℃、5%co2条件下孵育过夜。去除培养液,加入已过滤除菌的发酵液,每样品做6个复孔,培养24h。培养结束后每孔加入mtt溶液(5mg/ml)和dmem的混合溶液(v/v,1:5)100μl,孵育4h。去除培养基,每孔加入150μl的dmso,37℃孵育10min后读取490nm下实验组的吸光度(记为a)。将无细胞的处理组(细胞悬液用无血清的dmem代替,其余步骤相同)设定为空白对照组,记为b。将细胞对照组(用无血清dmem替代样品溶液,其余步骤相同)记为c。
[0096]
细胞活力的计算公式如下:细胞活力(%)=(a

b)/(c

b)
×
100;
[0097]
具体结果参见表4。
[0098]
表4实施例1至3制得的发酵液的细胞mtt实验结果
[0099] 实施例发酵前空白对照实施例1实施例2实施例3细胞活力%65.8777.6867.14106.84标准差std8.4392855.2300787.2122868.851793 对比例发酵前空白对照对比例1对比例2对比例3细胞活力%55.0273.6981.4984.22标准差std3.2830187.2122863.6054845.230078
[0100]
由表4可知,实施例和对比例所得发酵液比发酵前相比均能够提高细胞活力,其中实施例3双菌发酵所得发酵液细胞活力最高,相对对比例3的双菌发酵所得发酵液也具有明显优势。
[0101]
最后,还需要说明的是,在本公开中,诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来
将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来,而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下,由语句“包括一个
……”
限定的要素,并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
[0102]
尽管上面已经通过本公开的具体实施例的描述对本公开进行了披露,但是,应该理解,本领域技术人员可在所附方案的精神和范围内设计对本公开的各种修改、改进或者等同物。这些修改、改进或者等同物也应当被认为包括在本公开所要求保护的范围内。
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