人参皂苷Rh2在制备用于治疗化学性肝损伤药物方面的应用的制作方法

人参皂苷rh2在制备用于治疗化学性肝损伤药物方面的应用
技术领域
1.本发明涉及医疗技术领域，具体涉及人参皂苷rh2在制备作为治疗化学性肝损伤药物方面的应用。


背景技术：

2.化学性肝损伤是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。肝脏作为人体的重要解毒器官，具有肝动脉和肝静脉双重血液供应，一些有毒物化学物质可通过胃肠道门静脉或体循环进入肝脏进行转化，因此肝脏容易受到化学物中的毒性物质损害。
3.大自然和人类工业生产过程中均存在一些对肝脏有毒性的物质，称为“亲肝毒物”，这些毒物在人群中普遍易感，潜伏期短，病变的过程与感染的剂量直接相关，可引起肝脏不同程度的肝细胞坏死、脂肪变性、肝硬化和肝癌。
4.酒精是常见的亲肝毒素，由酒精引起的酒精性肝病(alcoholic liver disease，简称ald)是危害我国人民健康的主要肝脏疾病之一，也是生活中常见的化学性肝损伤形式之一。ald是由于长期大量饮酒导致的肝脏疾病，初期通常表现为脂肪肝，进而可发展成酒精性肝炎、肝纤维化和肝硬化。酒精性肝病是我国常见的肝脏疾病之一，严重危害人民健康。现有的ald治疗手段包括戒酒、营养支持及对于肝硬化、肝癌的对症支持治疗，治疗周期太长且效果并不明显；除此之外，现有药物包括激素、n乙酰半胱氨酸等对改善化学性肝损伤患者的预后价值仍存在争议，因此临床亟需探索针对化学性肝损伤的有效治疗药物。


技术实现要素：

5.为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：
6.本发明实施例提供了人参皂苷rh2在制备用于治疗化学性肝损伤药物方面的应用。
7.优选地，药物的封装单元剂量中人参皂苷rh2的含量8
‑
12mg/d。
8.优选地，药物为口服制剂。
9.与现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：
10.(1)近年来，有研究表明，人参皂苷rh2可改善由代谢相关脂肪性肝病(metabolic associated fatty liver diseases，简称mafld)引起的肝脏脂肪变，但对于化学性肝损伤的有效治疗药物的研究始终没有明显进展。本发明创造性地将人参皂苷rh2首次用于治疗化学性肝损伤尤其是ald中，获得了实质性成果和突破性进展，发现了人参皂苷rh2的一种全新用途，也提供了一种副作用小的、可有效治疗化学性肝损伤的药物的可能，对医学发展和病人健康状况的改善具有重大意义。
11.(2)本发明提供的人参皂苷rh2在制备用于治疗化学性肝损伤药物方面的应用，其药物用于治疗肝脏脂肪变时所用剂量小、生效快、作用明显、对患者无毒副作用，且剂型为口服剂型而非静脉注射或肌肉注射的针剂，使得患者在接受长期治疗的过程中不会感到痛苦。
附图说明
12.为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对本发明实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引申获得其它的附图。
13.以下附图仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，任何形式的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的的前提下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容能涵盖的范围内。
14.图1为本技术实施例实验2
‑
1中小鼠肝脏病理切片图；
15.图2为本技术实施例实验2
‑
2中小鼠肝脏病理切片图。
16.图3为本技术实施例实验2
‑
3中人体hepg2细胞内部图；
具体实施方式
17.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明请进行进一步详细说明。应当理解，此处描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
18.在本发明的描述中，若存在术语“包括”、“具有”以及它们的任何变形，其意图皆在于覆盖不排他的包含，例如，包括了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于已明确列出的那些步骤或单元，而是还可包含虽然并未明确列出的但对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元，或者基于本发明构思进一步的优化方案所增加的步骤或单元。
19.实施例
20.本实施例提供了人参皂苷rh2在制备用于治疗化学性肝损伤药物方面的应用，并设计了一系列实验来验证其有益效果。
21.实验1
22.实验对象：选取2020年6月至2020年12月于某医院就诊的34例mafld患者为实验对象。mafld诊断参照《2020年亚太肝病学会mafld诊疗指南》中相关标准。排除合并酒精性肝病、病毒性肝炎及自身免疫性肝病等其他肝脏疾病患者。
23.实验方法：入组患者收集基线人口学指标(性别、年龄、体重)和丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，简称alt)，完善肝脏瞬时弹性检查。根据患者自身意愿分为rh2组与对照组。对照组患者给予饮食运动指导，并根据患者肝功能酌情给予保肝药物口服治疗。rh2组患者在常规治疗基础上加用以人参皂苷rh2为有效成分制备而成的药物，口服；有效成分人参皂苷rh2摄入量8
‑
12mg/d。治疗3个月后观察患者肝脏弹性检查受控衰减指数(controlled attenuation parameter，简称cap)下降情况。
24.肝脏弹性检查手段：使用无锡海斯凯尔医学技术有限公司提供的fibrotouch型诊断仪，动态宽频多适用探头。在同一位置重复成功测定10次以上，以中位数(四分位间距)[m(iqr)]表示，以iqr/m比值<30％，检测成功率≥60％为有效测量。同时记录肝脏硬度测定(liver stiffness measurement，简称lsm)值，单位为kpa；肝脂肪变测定值以cap值表示，单位为db/m。
[0025]
统计学处理方法：采用spss25.0软件进行统计学分析，年龄、体质量、cap值(基线、
治疗3个月)和基线lsm值为正态分布的计量资料，以x
±
s表示，两组间比较采用独立样本t检验；alt、治疗3个月后lsm值、cap下降值及lsm下降值为非正态分布的计量资料，以m(p25，p75)表示，两组间比较采用wilcoxon秩和检验。性别以例数表示，两组间比较采用fisher检验。以p<0.05为差异有统计学意义。
[0026]
患者资料：本实验共纳入34例mafld患者，其中男性20例，女性14例，年龄(43.9
±
14.9)岁，体质量(75.3
±
12.5)kg，alt为[48(27，83)]u/l，cap值为(289.0
±
31.2)db/m，lsm值为(9.8
±
4.0)kpa。rh2组17例，对照组17例，两组患者性别、年龄、体质量、alt和lsm值差异无统计学意义(p均>0.05)，rh2组患者基线cap值显著高于对照组(t＝2.095，p＝0.044)。如表1所示。
[0027]
实验结果：治疗3个月后，rh2组患者cap值下降中位数为27.0db/m，显著优于对照组的2.0db/m，差异有统计学意义(t＝364.5，p＝0.021)。rh2组患者lsm值下降中位数为3.2kpa，显著优于对照组的0.4kpa，差异有统计学意义(t＝398.5，p<0.001)。如表2所示。
[0028]
表1
‑
实验1中实验组与对照组患者的具体情况
[0029][0030]
表2
‑
rh2组合对照组mafld患者治疗3个月后肝脏弹性指标
[0031][0032]
mafld患者的肝脂肪变可采用腹部超声、腹部计算机断层扫描或磁共振、肝组织活检与肝脏弹性cap值等评估。肝脏弹性cap值测定具有无创、检测方便、敏感度较高并能对脂
肪变程度进行定量的优点。本实验以248db/m、268db/m与280db/m分别作为脂肪变程度f1、f2与f3的cap临界值标准，通过上述实验数据可知，rh2组患者cap值由基线的(299.7
±
26.7)db/m下降至(267.4
±
34.2)db/m，即患者平均由f3脂肪变下降至f1
‑
f2；并且，本研究中rh2组患者lsm值较对照组也有显著下降证实了人参皂苷rh2对mafld患者肝脂肪变的治疗作用。
[0033]
实验2
[0034]
实验2
‑1[0035]
分别取：正常饮食的小鼠肝脏切片，记为chow组；高脂饮食喂养18周的小鼠肝脏病理切片，记为hfd组；高脂饮食喂养10周后，在继续喂养高脂饮食的基础上，喂食人参皂苷rh2 25mg/kg
·
d 8周的脂肪肝小鼠肝脏病理切片，记为hfd
‑
rh2组。于100倍显微镜下观察三组切片，后用200倍显微镜进一步观察100倍显微镜下指定区域的图像；两次观察结果如图1所示；100倍显微镜下指定区域如图1中黑色方框所示。
[0036]
通过图1可看出，chow组未观察出肝脂肪变，hfd组观察到明显肝脂肪变现象，hfd
‑
rh2组的肝脂肪变现象与hfd组相比明显改善，进一步说明了人参皂苷rh2对于mafld引起的肝脏脂肪变有明显的改善作用。
[0037]
实验2
‑2[0038]
对象选择：选择c57bl/6j十周龄雌性小鼠12只，体重20
‑
22g，分为对照组和给药组，分别记为ethanol组和rh2组，每组各6只，分别采用慢性酒精喂养加急性酒精灌胃的gao
‑
binge模型对小鼠进行ald造模，造模方式具体为：预先进行5d普通液体饮食，然后开始14d5％酒精液体饮食(更换饲料时间为3:00
‑
5:00pm)，14d酒精液体饮食结束的第二天进行酒精灌胃(7:00
‑
9:00am)，灌胃后9h后处死。对于给药组(rh2组)，在更换饲料的同时需进行25mg/kg的人参皂苷rh2灌胃，对照组(ethanol组)于同时期采用同等体积的清水灌胃。
[0039]
实验操作：取小鼠肝脏组织多聚甲醛固定，石蜡包埋切片，观察肝脏脂肪变情况。通过he染色和油红染色进行观察，结果如图2所示。
[0040]
通过图2可以看出，control组的小鼠肝脏病理切片，几乎未观察到油红染色中代表脂肪的红色区域和he染色中代表alt的粉红色区域，说明未发生肝脏脂肪变，alt水平也较低，代表肝脏未出现炎症；ethanol组的小鼠肝脏病理切片，几乎被油红染色显色的红色区域和he染色显色的粉红色区域覆盖，说明发生了严重的肝脂肪变和炎症；rh2组的小鼠肝脏病理切片，相比ethanol组，绝大多数的红色区域和粉红色区域消失，说明人参皂苷rh2对ald小鼠的肝脏脂肪变和肝内炎症具有非常明显的改善与治疗作用。
[0041]
实验2
‑3[0042]
分对照组、空白对照组和给药组，分别记为ethanol组、control组和rh2组。其中，对照组处理为：将hepg2细胞接种在6孔板中，过夜培养后，显微镜下观察接种后的细胞，当细胞生长状态良好时，加入酒精诱导，48小时后，进行油红染色；给药组处理与对照组相同，区别在于，加入酒精诱导的同时加入浓度为50μm的人参皂苷rh2；空白对照组处理与对照组相比，区别在于，不做酒精诱导。对油红染色结果进行观察，如图3所示。
[0043]
实验结果：通过图3可以看出，control组的hepg2细胞内，油红染色基本不显色，说明未发生脂肪变性；ethanol组的hepg2细胞内，出现大面积红色区域，说明存在明显的脂肪变性；rh2组的hepg2细胞内，红色区域相比ethanol组来说明显缩小，说明人参皂苷rh2对于
酒精引起的hepg2细胞内脂肪变具有明显的改善作用。
[0044]
上述实验数据证明了，本技术提供的人参皂苷rh2在制备用于治疗化学性肝损伤药物方面的应用，具有明显的有益效果，制备的药剂对于化学性肝损伤如ald等具有非常显著的改善与治疗效果。
[0045]
以上实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述；这些未明确写出的实施例，也都应当认为是本说明书记载的范围。
[0046]
上文中通过一般性说明及具体实施例对本发明作了较为具体和详细的描述。应当指出的是，在不脱离本发明构思的前提下，显然还可以对此具体实施例作出若干变形和改进，这些都属于本技术的保护范围。因此，本技术专利的保护范围应以所附权利要求为准。