一种家禽肠道耐药虫卵驱除剂的制备方法和产品及其应用

1.本发明属于畜牧养殖技术领域，具体涉及到一种家禽肠道耐药虫卵驱除剂的制备方法和产品及其应用。


背景技术：

2.球虫寄生病是肉鸡肠道病害的主要因素之一。球虫通过侵染并定殖在肉鸡肠道从而发挥腹泻、肠道出血、厌食症和肠道损伤等致命性的危害。发病后的鸡群羽毛松乱、精神萎靡、食欲和采食量显著下降，并伴随消瘦、贫血和脱水现象，致死率在50％以上。
3.目前化学、激素及抗生素类药物被广泛应用于球虫驱除中，但随之而来的是虫体耐药性增加，药物毒性和残留问题日渐严重。因此，安全环保和抗耐药的寄生虫防控药物是目前畜牧养殖业所急需的。
4.天然中药植物提取物是潜在的球虫驱除剂。我国古代《神农本草经》提及常山、贯众、雷丸和糠实是世界上最早记载的驱虫药物。其中常山富含喹唑酮类生物碱被认为是球虫驱除的核心因子。常山粉与氯苯胍可以显著降低艾美球虫和变位艾美球虫的驱除效果。此外，白头翁、芦荟和苦参等复配浸提物展现出较强的耐药虫卵驱除性。因此，一种针对家禽肠道耐药虫卵的天然提取物驱除剂是科学且可行的。


技术实现要素：

5.本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本技术的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
6.鉴于上述和/或现有技术中存在的问题，提出了本发明。
7.因此，本发明的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种家禽肠道耐药虫卵驱除剂的制备方法。
8.为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种家禽肠道耐药虫卵驱除剂的制备方法，包括，
9.制备辣素助食纤维：将含水量为60～80％的新鲜蒜秸搅碎至茎长3～5cm，混入豆粕、麦麸和玉米粉，保温发酵，发酵完成后，冷风干燥，研磨过20目筛，制得辣素助食纤维；
10.构建蒜素稳态骨架：将蒜素、l-抗坏血酸、蔗糖和壳聚糖混入ph＝4～6、0.1mol/l的磷酸缓冲液中，制得复配物，将每份复配物缓慢滴加到3～5份饱和β-环糊精中，冻融析出颗粒，冷风吹干，制得蒜素稳态骨架；
11.制备虫卵裂殖体抑制剂：将常山根粉与乙醇溶液混合，在预浸泡后，微波处理后，将浸提液蒸发浓缩至膏状收集，制得虫卵裂殖体抑制剂；
12.制备淋巴免疫增强剂：将黄芪粉、川穹粉、糯米粉和水混合，煮沸20～40min，分离滤液即得淋巴免疫增强剂，所得滤渣为淋巴免疫增强剂发酵物；
13.制备肠道屏障维系基质：将麦麸、豆粕、常山根渣与淋巴免疫增强剂发酵物混匀，
随后接入中药渣复合发酵菌剂，发酵完成后冷风干燥至含水量10～13％，研磨过筛，制得肠道屏障维系基质；
14.制备肠道共生菌剂：将脆弱拟杆菌、丁酸梭菌、乳杆菌、双歧杆菌复配，制得肠道共生菌剂；
15.按重量份数计，辣素助食纤维130～170份、蒜素稳态骨架30～70份、球虫裂殖体抑制剂1～2份、淋巴免疫增强剂1～2份、肠道屏障维系剂10～30份、肠道共生菌剂0.1～1份复配，即得所述家禽肠道耐药虫卵驱除剂。
16.作为本发明所述家禽肠道耐药虫卵驱除剂的制备方法的一种优选方案，其中：所述制备辣素助食纤维，包括，
17.按重量份数计，将含水量在75％的新鲜蒜秸270份搅碎至3cm混入豆粕20份、麦麸20份和玉米粉30份，向混合物中接入1份黑曲酶、4份乳酸菌和1份酵母菌，以42℃、每天混匀一次的频率发酵10天，发酵完成后10℃冷风干燥至含水量10％，研磨过20目筛。
18.作为本发明所述家禽肠道耐药虫卵驱除剂的制备方法的一种优选方案，其中：蒜素稳态骨架构建构建方法包括，
19.按重量份数计，蒜素7份、l-抗坏血酸0.5份、蔗糖1份和壳聚糖2份混入50份ph＝6、0.1mol/l的磷酸缓冲液中，每份复配物缓慢滴加到5份饱和β-环糊精中，在-18℃进行6h的冻融析出,析出颗粒以15℃冷风吹干。
20.作为本发明所述家禽肠道耐药虫卵驱除剂的制备方法的一种优选方案，其中：虫卵裂殖体抑制剂，按重量份数计，由常山根粉3份与15份50％的乙醇溶液混合，在预浸泡30min后，以540w功率微波处理40min浸提而得。
21.作为本发明所述家禽肠道耐药虫卵驱除剂的制备方法的一种优选方案，其中：淋巴免疫增强剂，按重量份数计，由黄芪粉1份、川穹粉2份，糯米粉15份，水40份，煮沸40min，分离滤液。
22.作为本发明所述家禽肠道耐药虫卵驱除剂的制备方法的一种优选方案，其中：肠道屏障维系基质，按重量份数计，麦麸10份、豆粕10份、常山根渣20份与黄芪、川穹和糯米渣70份混匀，随后接入0.5份乳酸菌、酵母菌和芽孢杆菌等体积比复合发酵菌剂，保持含水量在70％，进行15天发酵，发酵完成后10℃冷风干燥至含水量10％,研磨过20目筛制得。
23.作为本发明所述家禽肠道耐药虫卵驱除剂的制备方法的一种优选方案，其中：中药渣复合发酵菌剂，其中，
24.乳酸菌由活性大于1
×
109cfu/g的德氏乳杆菌bwcc61722、短乳杆菌bwcc28564和戊糖片球菌bwcc660488菌液等体积比复配而成；
25.酵母菌由活性大于1
×
109cfu/g的酿酒酵母gdmcc2.167和鲁氏酵母bwcc67360菌液等体积比复配而成；
26.芽孢杆菌为活性大于1
×
109cfu/g枯草芽孢杆菌cmcc(b)63501菌液。
27.作为本发明所述家禽肠道耐药虫卵驱除剂的制备方法的一种优选方案，其中：所述肠道共生菌剂，按重量份数计，由活性大于1
×
109cfu/g的3份脆弱拟杆菌atcc 25285、1份丁酸梭菌zkcc-676、1份乳杆菌atcc 8014、3份双歧杆菌cicc 6068复配而成。
28.作为本发明所述家禽肠道耐药虫卵驱除剂的制备方法的一种优选方案，其中：按重量份数计，辣素助食纤维150份、蒜素稳态骨架50份、球虫裂殖体抑制剂1份、淋巴免疫增
强剂2份、肠道屏障维系剂30份、肠道共生菌剂0.1份复配而成。
29.本发明的再一个目的是，克服现有技术中的不足，提供一种家禽肠道耐药虫卵驱除剂的制备方法制得的产品。
30.本发明有益效果：
31.(1)本发明辣素助食纤维和蒜素稳态骨架保证了家禽肠道耐药虫卵驱除剂中蒜素这种核心成分的浓度，由蒜秸秆发酵的辣素助食纤维可以作为蒜素的前体底物，并且其可以促进肉鸡的进食和生长。辣素助食纤维的添加可以分别将每只肉鸡进食量和增重量提升161g/7天和64.46g/7天，而蒜素稳态骨架的构建可以将成品中的大蒜素和乙蒜素含量分别提升3.46和2.90倍。
32.(2)本发明虫卵裂殖体抑制剂和淋巴免疫增强剂分别从外部驱除和内部免疫增强的角度提升耐药虫卵的驱除效率。其二着的添加可以将耐药虫卵的卵囊值降低一个评价等级(10-1)，并且抗球虫指数提高约37。
33.(3)本发明肠道屏障维系基质和肠道共生菌剂的目的是形成预防耐药虫卵二次侵染的肠道屏障。其二者的添加可以可以显著改变肠道的病变值(6-1)，并将耐药虫卵的卵囊值降低一个评价等级(10-1)。
附图说明
34.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：
35.图1为本发明实施例中蒜素含量对比图。
36.图2为本发明实施例中家禽肠道耐药虫卵驱除剂处理下的盲肠表观对比图。
37.图3为本发明实施例中家禽肠道耐药虫卵驱除剂处理下的粪便表观对比图。
具体实施方式
38.为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合说明书实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
39.在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
40.其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
41.本发明中所用原料：蒜秸：山东省金乡县农田；豆粕、麦麸、玉米粉和糯米：大连晨曦饲料有限公司；德氏乳杆菌bwcc61722、短乳杆菌bwcc28564、戊糖片球菌bwcc660488、酿酒酵母gdmcc2.167、鲁氏酵母bwcc67360、枯草芽孢杆菌cmcc(b)63501、脆弱拟杆菌atcc 25285、丁酸梭菌zkcc-676、乳杆菌atcc 8014、双歧杆菌cicc 6068：北京万佳首化生物科技有限公司；l-抗坏血酸、蔗糖、壳聚糖、β-环糊精：天津希恩思奥普德科技有限公司；常山根
粉、黄芪粉和川穹粉：亳州亳宏药业有限公司；饲料级大蒜素：济南鑫硕化工有限公司；柔嫩艾美耳球虫etwh、毒害艾美耳球虫enys、堆型艾美耳球虫eawy和巨型艾美耳球虫emhl：广东省农业科学院动物卫生研究所寄生虫生物学实验室；岭南黄鸡：广东省农业科学院动物研究所；102全价肉鸡饲料：广东省农业科学院动物研究所饲料厂；其他原料无特殊说明，均为普通市售。
42.实施例1
43.本实施例提供一种家禽肠道耐药虫卵驱除剂的制备方法，包括：
44.(1)辣素助食纤维发酵：按重量份数计，将含水量在60-80％的新鲜蒜秸270份搅碎至3cm混入豆粕20份、麦麸20份和玉米粉30份,向混合物中接入1份黑曲酶、4份乳酸菌和1份酵母菌，以42℃，每天混匀一次的频率进行10天的发酵，发酵完成后10℃冷风干燥至含水量10％,研磨过20目筛。
45.(2)蒜素稳态骨架构建：按重量份数计，蒜素7份、l-抗坏血酸0.5份、蔗糖1份和壳聚糖2份混入50份ph＝6、0.1mol/l的磷酸缓冲液中。每份复配物缓慢滴加到5份饱和β-环糊精中，在-18℃进行6h的冻融析出,析出颗粒以15℃冷风吹。
46.(3)虫卵裂殖体抑制剂：按重量份数计，常山根粉3份与15份50％的乙醇溶液混合，在预浸泡30min后，以540w功率微波处理40min。将浸提液蒸发浓缩至膏状，分离的滤渣用于后续发酵。
47.(4)淋巴免疫增强剂：按重量份数计，黄芪粉1份、川穹粉2份，糯米粉15份，水40份，煮沸40min，分离滤液即得，剩余滤渣用于后续发酵。
48.(5)肠道屏障维系基质：按重量份数计，麦麸10份、豆粕10份、常山根渣20份与黄芪、川穹和糯米渣70份混匀，随后接入0.5份乳酸菌(活性大于1
×
109cfu/g的德氏乳杆菌bwcc61722、短乳杆菌bwcc28564和戊糖片球菌bwcc660488菌液等体积比复配而成)、酵母菌(活性大于1
×
109cfu/g的酿酒酵母gdmcc2.167和鲁氏酵母bwcc67360菌液等体积比复配而成)和芽孢杆菌(活性大于1
×
109cfu/g枯草芽孢杆菌菌液)按照1：1：1(v/v/v)复合发酵菌剂，保持含水量在70％，进行常温15天发酵，发酵完成后10℃冷风干燥至含水量10％,研磨过20目筛。
49.(6)肠道共生菌剂：按重量份数计，脆弱拟杆菌3份、丁酸梭菌1份、乳杆菌1份、双歧杆菌3份复配。
50.(7)按重量份数计，取辣素助食纤维150份、蒜素稳态骨架50份、球虫裂殖体抑制剂1份、淋巴免疫增强剂2份、肠道屏障维系剂30份、肠道共生菌剂0.1份复配，即得家禽肠道耐药虫卵驱除剂。
51.蒜素含量的检测：
52.称取10g家禽球虫病防控饲料伴侣与20ml甲醇混匀，匀浆以80w超声浸提15min。浸提后样品转移至50ml离心管，以4℃，5000r/min离心15min,将上清液以0.45μm微孔滤膜过滤后以高效液相色谱测定蒜素含量。色谱柱：arcus ep c18(150
×
4.6mm,5μm)；柱温：25℃；大蒜素流动相：乙腈/超纯水＝30/70(v/v)；流速：0.8ml/min；波长：210nm；进样量：20ml。
53.本发明家禽球虫病防控饲料伴侣的效果验证实验：
54.剔除显著瘦弱或超重的雏鸡，将体重差异在5g以内的14天健康雏鸡以每组30只随机分组。实验组每1kg饲料搭配1g本发明家禽肠道耐药虫卵驱除剂饲养两天，对照组以相应
的标准饲料喂养两天。两天后每只雏鸡口服1.5
×
105个球虫孢子化卵囊(柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫等比例复配)，继续提供充足的实验组和对照组饲料和无菌水，以自由采食的方式饲养7天。病变值以盲肠病变现象计分：0分：表示正常，无肉眼病变；
±
1分：盲肠壁有很少量散在淤点，肠壁不增厚，内容物正常；
±
2分：病变数量较多，盲肠内容物明显带血，盲肠壁稍增厚，内容物正常；
±
3分：盲肠内有多量血液或盲肠芯，盲肠壁肥厚明显，盲肠中粪便含量少；
±
4分：因充满大量血液或肠芯而盲肠肿大(死亡鸡记
±
4分)。卵囊值换算方法：粪便排卵囊数＜0.1
×
105对应卵囊值为0；粪便排卵囊数0.1-1.0
×
105对应卵囊值为1；粪便排卵囊数2.0-5.0
×
105对应卵囊值为10；粪便排卵囊数6.0-10.0
×
105对应卵囊值为20；粪便排卵囊数＞11.0
×
105对应卵囊值为40。
55.计算肉鸡的抗球虫指数：
56.抗球虫指数＝(增重率+生存率)
×
100-(病变值+球虫卵数)
57.此外，收集肉鸡肠道和粪便样本以观察病变情况。
58.实施例2
59.本实施例与实施例1相比，按重量份数计，家禽肠道耐药虫卵驱除剂由辣素助食纤维130份、蒜素稳态骨架70份、球虫裂殖体抑制剂1份、淋巴免疫增强剂2份、肠道屏障维系剂30份、肠道共生菌剂0.1份复配，其他制备工艺条件均与实施例1相同。
60.实施例3
61.本实施例与实施例1相比，按重量份数计，家禽肠道耐药虫卵驱除剂由辣素助食纤维140份、蒜素稳态骨架60份、球虫裂殖体抑制剂1份、淋巴免疫增强剂2份、肠道屏障维系剂30份、肠道共生菌剂0.1份复配，其他制备工艺条件均与实施例1相同。
62.实施例4
63.本实施例与实施例1相比，按重量份数计，家禽肠道耐药虫卵驱除剂由辣素助食纤维100份、蒜素稳态骨架50份、球虫裂殖体抑制剂1份、淋巴免疫增强剂2份、肠道屏障维系剂30份、肠道共生菌剂0.1份复配，其他制备工艺条件均与实施例1相同。
64.实施例5
65.本实施例与实施例1相比，按重量份数计，家禽肠道耐药虫卵中药驱除剂由辣素助食纤维200份、蒜素稳态骨架50份、球虫裂殖体抑制剂1份、淋巴免疫增强剂2份、肠道屏障维系剂30份、肠道共生菌剂0.1份复配，其他制备工艺条件均与实施例1相同。
66.表1饲养7天之后的肉鸡进食量和增重量
[0067][0068]
由表1实施例1和2对比可知，由蒜秸发酵而成的辣素助食纤维可以分别将每只肉鸡进食量和增重量提升161g/7天和64.46g/7天。按重量份数计，由辣素助食纤维150份、蒜素稳态骨架50份、球虫裂殖体抑制剂1份、淋巴免疫增强剂2份、肠道屏障维系剂30份、肠道共生菌剂0.1份复配的家禽肠道耐药虫卵中药驱除剂对肉鸡生长的干预效果最佳。当辣素助食纤维添加量低于这一范围肉鸡的进食和生长被削弱，因为蒜秸发酵的辣素助食纤维兼具蒜素驱虫、促进饮食和加强消化的功能；而超过这一范围后，额外的辣素助食纤维会导致饲料营养成分的稀释，并不利于肉鸡的生长。
[0069]
实施例6
[0070]
本实施例提供一种家禽肠道耐药虫卵驱除剂的制备方法，包括：
[0071]
(1)辣素助食纤维发酵：按重量份数计，将含水量在60-80％的新鲜蒜秸270份搅碎至3cm混入豆粕20份、麦麸20份和玉米粉30份,向混合物中接入1份黑曲酶、4份乳酸菌和1份酵母菌，进行10天的发酵，发酵完成后10冷风干燥至含水量10％,研磨过20目筛。
[0072]
(2)虫卵裂殖体抑制剂：按重量份数计，常山根粉3份与15份50％的乙醇溶液混合，在预浸泡30min后，以540w功率微波处理40min。将浸提液蒸发浓缩至膏状，分离的滤渣用于后续发酵。
[0073]
(3)淋巴免疫增强剂：按重量份数计，黄芪粉1份、川穹粉2份，糯米粉15份g，水40份，煮沸40min，分离滤液即得，剩余滤渣用于后续发酵。
[0074]
(4)肠道屏障维系基质：按重量份数计，麦麸10份、豆粕10份、常山根渣20份与黄芪、川穹和糯米渣70份混匀，随后接入0.5份乳酸菌(活性大于1
×
109cfu/g的德氏乳杆菌bwcc61722、短乳杆菌bwcc28564和戊糖片球菌bwcc660488菌液等体积比复配而成)、酵母菌(活性大于1
×
109cfu/g的酿酒酵母gdmcc2.167和鲁氏酵母bwcc67360菌液等体积比复配而成)和芽孢杆菌(活性大于1
×
109cfu/g枯草芽孢杆菌菌液)按照1：1：1(v/v/v)复合发酵菌剂，保持含水量在70％，进行15天发酵，发酵完成后10℃冷风干燥至含水量10％,研磨过20目筛。
[0075]
(5)肠道共生菌剂：按重量份数计，脆弱拟杆菌3份、丁酸梭菌1份、乳杆菌1份、双歧杆菌3份复配。
[0076]
(6)按重量份数计，辣素助食纤维150份、蒜素50份、球虫裂殖体抑制剂1份、淋巴免疫增强剂2份、肠道屏障维系剂30份、肠道共生菌剂0.1份复配，即得一种家禽肠道耐药虫卵驱除剂。
[0077]
本发明实施例1～6中蒜素含量对比图，见图1。
[0078]
实施例7
[0079]
本实施例与实施例1相比，未进行(3)中的球虫裂殖体抑制剂的浸提和添加，其他制备工艺条件均与实施例1相同。
[0080]
实施例8
[0081]
本实施例与实施例1相比，未进行(4)中的淋巴免疫增强剂的浸提和添加，其他制备工艺条件均与实施例1相同。
[0082]
实施例9
[0083]
本实施例与实施例1相比，未进行(5)中的肠道屏障维系基质的发酵和添加，其他制备工艺条件均与实施例1相同。
[0084]
实施例10
[0085]
本实施例与实施例1相比，未进行肠道共生菌剂的添加，其他制备工艺条件均与实施例1相同。
[0086]
表2各实施例抗球虫指数对比
[0087][0088]
如表2所示，各实施家禽肠道耐药虫卵驱除剂处理下的肉鸡存活率达到了100％。由实施例1～5可知，辣素助食纤维的主要功能在于促进家禽的进食和生长，同时是核心成分蒜素的前体物质。此外，由实施例1和6对比，蒜素是耐药虫卵驱除的核心，蒜素稳态载体的构建可以通过保证蒜素的有效性从而将抗球虫指数提高50。虫卵裂殖体抑制剂和淋巴免疫增强剂分别从外部驱除和内部免疫增强的角度提升耐药虫卵的驱除效率。其二者的添加可以将耐药虫卵的卵囊值降低一个评价等级(10-1)。肠道屏障维系基质和肠道共生菌剂的目的是形成预防耐药虫卵二次侵染的肠道屏障。其二者的添加可以可以显著降低肠道的病变值(6-1)，并将耐药虫卵的卵囊值降低一个评价等级(10-1)。
[0089]
由图2可知，由虫卵侵害导致的盲肠红色血样或干酪样血凝块，以及肠道屏障和粘膜的脱落可以被家禽肠道耐药虫卵驱除剂显著抑制，并在且侵害后的盲肠可以被家禽肠道耐药虫卵驱除剂修复至健康状态。
[0090]
由图3可知，家禽肠道耐药虫卵驱除剂处理后的肉鸡粪便便血现象明显减轻，并且粪便成型色泽均匀。这意味着肠道粘膜充血、轻度肠炎的特征已经消失，家禽肠道耐药虫卵驱除剂处理后的肉鸡恢复了健康状态。
[0091]
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。