一种包含粗齿绣球叶提取物的组合物及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及化妆品技术领域，具体是涉及一种包含粗齿绣球叶提取物的组合物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.具有美好寓意的花朵深受人们的喜爱，比如：芍药、牡丹、桃花、绣球花等。其中，绣球花又被称为“八仙花”，花型丰满，寓意“希望、健康、美满、团园”，是常见的盆栽观赏花木。随着社会的进步、科学技术的发展以及生活水平的提高，人们追求天然、追求绿色、追求健康与安全的意识日益增强，绿色化以及功能性的化妆品越来越受人们的青睐，因此复合植物提取物在化妆品中的应用也越来越广泛，应用的品种也越来越多。然而，对于粗齿绣球提取物在皮肤上的作用的研究较少。
3.中国专利申请cn111315353公开了包含粗齿绣球提取物作为有效成分的因紫外线引起的人表皮细胞及真皮细胞损伤改善用组合物，该发明声称这种组合物不仅可恢复人表皮细胞及真皮细胞中的因uv b引起的细胞损伤，而且增加透明质酸的分泌，并抑制mmp 1的分泌，由此可改善因uv b引起的细胞损伤。中国专利申请cn111315354中描述一种含有粗齿绣球提取物和陈皮提取物的化妆料组合物，所述化妆料组合物包含含有高浓度的绣球酚及特定成分的粗齿绣球提取物，从而对皮肤抗老化及保湿具有极大改善的效果。但是，目前并未有研究进行粗齿绣球提取物在通过细胞自噬途径改善肌肤机理方面的基础研究，也没有相关的产品。


技术实现要素：

4.本发明为了克服上述背景技术的不足，进行了粗齿绣球提取物诱导细胞自噬、减少细胞炎症因子分泌、改善皮肤弹性方面的研究，提出一种包含粗齿绣球叶提取物的组合物及其制备方法和应用。
5.为达到本发明的目的，本发明包含粗齿绣球叶提取物的组合物包含活性成分、促渗成分和溶剂，其中，所述活性成分和促渗成分的质量比为0.1-20：2-3，所述活性成分中包含粗齿绣球叶提取物和赖氨酸。
6.进一步地，在本发明的一些实施例中，所述粗齿绣球叶提取物的制备方法为：将粗齿绣球叶清洗分拣，干燥，加入2-3倍质量的溶剂超声粉碎匀浆，过滤，滤液浓缩至三分之一至五分之一即得。
7.进一步地，在本发明的一些实施例中，所述活性成分和促渗成分的质量比为0.1-10：2-3。
8.进一步地，在本发明的一些实施例中，所述活性成分中粗齿绣球叶提取物和赖氨酸的质量比为1-10：0.1-0.5；优选2-10：0.1-0.5；更优选5-10：0.2-0.5。
9.进一步地，在本发明的一些实施例中，所述促渗成分为1,2-戊二醇、1,2-己二醇和卵磷脂中的一种或多种。
10.进一步地，在本发明的一些实施例中，所述溶剂为去离子水、乙醇、丙二醇、丁二醇、双丙甘醇和甘油中的一种或多种。
11.另一方面，本发明还提供了一种前述包含粗齿绣球叶提取物的组合物的制备方法，所述方法包含以下步骤：
12.(1)将粗齿绣球叶清洗分拣，干燥，加入2-3倍溶剂超声粉碎匀浆，过滤，超声时间30-60min，频率40-80hz，次数2-3次，合并滤液浓缩至五分之一至三分之一备用；
13.(2)在步骤(1)所得粗齿绣球叶提取物中加入赖氨酸(粗齿绣球叶提取物和赖氨酸合称为活性成分)、促渗成分和溶剂，加热搅拌均匀，过滤，再加入余量溶剂，搅拌均匀得到组合物。
14.进一步地，在本发明的一些实施例中，所述步骤(2)中活性成分、促渗成分与溶剂的质量比为0.1-20：2-3：77-97。
15.进一步地，在本发明的一些实施例中，所述步骤(2)中加热搅拌前加入的溶剂和余量溶剂的质量比为35-45：32-62。
16.进一步地，在本发明的一些实施例中，所述步骤(1)中干燥为冷冻干燥。
17.进一步地，在本发明的一些实施例中，所述步骤(2)中过滤是用膜孔径为0.15-0.25微米的滤膜过滤。
18.再一方面，本发明还提供了一种前述包含粗齿绣球叶提取物的组合物的应用，所述应用为将包含粗齿绣球叶提取物的组合物用于制备诱导细胞自噬、降低/治疗炎症反应类病症的化妆品或药物。
19.进一步地，在本发明的一些实施例中，所述化妆品或药物为减少炎症因子分泌修复肌肤屏障的化妆品或药物。
20.更进一步地，在本发明的一些实施例中，所述化妆品为水剂、乳剂、喷雾、膏霜、面膜、洁面泡沫、洁面慕斯、油液、粉饼、眼影或粉底液。
21.再一方面，本发明还提供了一种包含前述粗齿绣球叶提取物的精华乳，所述精华乳中还包含聚甘油-3二硬脂酸酯、硬脂酸乙基己酯、聚二甲基硅氧烷、硬脂酸、甘油、水、黄原胶、对羟基苯乙酮和丙烯酰二甲基牛磺酸铵/vp共聚物。
22.与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：
23.本发明通过对于粗齿绣球叶提取物影响皮肤作用机制的研究，发现了所述包含粗齿绣球叶提取物的组合物，该组合物可诱导细胞自噬清除受损细胞、抑制细胞炎症因子分泌减少皮肤慢性炎症反应发生，通过提高紧密连接蛋白和丝聚蛋白的合成、促进角质细胞分化修复受损的皮肤屏障，增强皮肤弹力。特别地，本发明所述粗齿绣球提取物和赖氨酸组合可以发挥协同作用，温和无刺激，通过诱导细胞自噬、减少细胞炎症因子分泌，促进角质细胞分化，提升皮肤弹力，提高基因神经酰胺合酶-3的表达修复受损的肌肤屏障。
附图说明
24.图1是本发明实施例1-6、对比例1的lc3ii蛋白的表达率(％)；
25.图2是本发明实施例4对于pge-2分泌水平的影响；
26.图3是本发明实施例4对于mcp-1分泌水平的影响；
27.图4是使用本发明产品四周经表皮水分流失tewl的变化；
28.图5为使用本发明产品四周皮肤血红素含量的变化；
29.图6为使用本发明产品四周皮肤回弹比r2的变化。
具体实施方式
30.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。应当理解，以下描述仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
31.本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
32.当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
33.本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显只指单数形式。
34.此外，下面所描述的术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不是必须针对相同的实施例或示例。而且，本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
35.实施例1
36.一种包含粗齿绣球叶提取物的组合物，制备工艺如下：
37.(1)将粗齿绣球叶清洗分拣干净，冷冻干燥，加入2-3倍去离子水粉碎匀浆，超声频率为65hz，时间45min，重复2-3次，合并滤液浓缩至三分之一得到粗齿绣球叶提取物备用；
38.(2)将粗齿绣球叶提取物加入赖氨酸(粗齿绣球叶提取物和赖氨酸合称为活性成分)、2重量份1,2-己二醇和去离子水(活性成分、1,2-己二醇与去离子水的质量比为6：2：40)中，加热搅拌均匀，0.2微米孔径过滤膜过滤，补足余量去离子水至100重量份，搅拌均匀得到组合物。
39.表1所示为实施例1-6及对比例1-2中各组合物中粗齿绣球叶提取物和赖氨酸的组成比例。根据表1的比例并采用上述方法制备各实施例及对比例的组合物，并对所得组合物进行功效测试。
40.表1实施例1-6及对比例1-2中各组合物组成
41.组别粗齿绣球叶提取物：赖氨酸(质量比)
实施例11:0.1实施例22:0.1实施例35:0.1实施例45:0.2实施例55:0.5实施例610:0.5对比例10:0对比例21:0
42.细胞毒性评价实例
43.组合物细胞毒性评价：mtt assay是通过对活细胞数进行测定，在检测细胞毒性或细胞增殖时广泛使用的实验方法，其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使水溶性的黄色盐mtt(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐)还原为水不溶性的蓝色的甲臜，并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。生成的结晶甲臜一般加入dmso(二甲亚砜)，溶解后测定吸光度。具体的实验方法是在96多孔板中按照1x104个/孔的密度接种含有10％牛血清的dmem培养基和角质形成细胞(hacat)各100μl，培养24小时后换成无血清培养基。在无血清培养基中分别加入不同浓度各实施例及对比例(用去离子水进行稀释)的组合物24小时。之后去除培养基，用20μl的mtt溶液进行处理，在37℃下使其反应2小时。在去除mtt溶液的细胞中加入200μl异丙醇，轻轻地震荡30min，完全溶解结晶甲臜，在570nm处测定吸光度，根据如下公式计算细胞存活率。
[0044][0045]
表2实施例1-6、对比例1-2的细胞毒性结果
[0046]
[0047][0048]
实验结果表明，本发明的组合物温和，没有细胞毒性。
[0049]
细胞自噬实验实例
[0050]
细胞自噬实验：在细胞自噬机制中，lc3溶于胞浆中，又称lc3
‑ⅰ
，lc3
‑ⅰ
被atg7激活，转移至atg3上，最终结合在pe上，形成lc3-pe,这种脂化的形式的lc3又称为lc3
‑ⅱ
，lc3
‑ⅱ
定位于在细胞自噬体上。lc3
‑ⅱ
在自噬体形成到自噬体与溶酶体结合的整个过程中始终存在，直到自噬体与溶酶体融合后才被溶酶体中的酸性水解酶降解，因此lc3
‑ⅱ
被公认为是监测自噬体和自噬活性的标志。
[0051]
将表皮角质细胞(hacat)接种于含dk－sfm培养液的培养瓶中，置于37℃的co2(co2体积分数为5％)恒温培养箱中培养6d。将细胞培养瓶取出，在其中加入胰蛋白酶消化4min，然后将细胞接种于96孔板，孵育24h，对照组每孔加200μl细胞培养液，加药组每孔加200μl含1％wt实施例1-6组合物，对比例1组合物，阳性对照为1％wt海藻糖，培养箱中培养24h，检测lc3ii蛋白的表达，结果重复三次取平均值。检测结果如图1所示。
[0052]
实验结果表明：
[0053]
(1)实施例1-6的组合物lc3ii蛋白的表达率相比阳性对照海藻糖明显提高，说明组合物具有明显的细胞自噬效果；
[0054]
(2)对比例2和实施例1-6说明粗齿绣球叶提取物具有细胞自噬效果，组合物中加入赖氨酸，lc3ii蛋白的表达率提高，说明组合物中粗齿绣球叶和赖氨酸协同作用，可以提高细胞自噬活性；
[0055]
(3)实施例1-6的组合物细胞自噬活性呈现先上升后变缓的趋势，说明组合物中的绣球叶提取物和赖氨酸的剂量关系影响自噬活性，综合功效、价格、稳定性等因素考虑，本
发明优选例为实施例4。
[0056]
细胞炎性因子抑制实例
[0057]
单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1，mcp-1)又称单核细胞趋化和激活因子，属于c-c亚族(β亚族)成员。单核细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞、b细胞、平滑肌细胞等在pha、lps、poly i-c、il-1、ifn-γ、pdgf、egf或某些病毒刺激下均可被诱导分泌mcp-1。前列腺素e2(prostaglandin e2,pge-2)是由一种环氧合酶催化花生四烯酸产生的一种主要代谢产物，也是一种炎症因子，影响炎症反应。针对本发明优选例实施例4，检测1％质量浓度的实施例4组合物对于炎症因子mcp-1、pge-2分泌是否具有抑制效果，用elisa法检测空白组、脂多糖(lps)诱导的hacat细胞炎症反应后的模型组，用1μg/ml lps刺激hacat细胞后，将待测样品(10x)以每孔100μl加入12孔细胞板，于37℃5％co2恒温培养箱培养72h。每个细胞板均设置阴性对照组(细胞+培养基)，每个浓度组3个复孔。收集细胞培养上清，通过elisa检测试剂盒进行炎性因子评价，测试结果见图2，图3。
[0058]
实验结果表明，实施例4的组合物具有明显的舒缓lps刺激pge-2、mcp-1分泌的作用，说明本发明组合物具有良好的抑制炎症因子的作用。
[0059]
剂型例1
[0060]
一种包含粗齿绣球叶提取物的修复皮肤屏障抗衰老组合物的精华乳，成分如表3所示。
[0061]
表3剂型例1的精华乳成分
[0062][0063]
上述包含粗齿绣球叶提取物的修复皮肤屏障抗衰老组合物的精华乳制备方法：
[0064]
(1)将a相和b相分别加热到接近80℃，搅拌均匀；
[0065]
(2)将a相加入到b相中，均质5-8分钟；
[0066]
(3)加入c相，搅拌均匀，降温到30-50℃，加入d相，搅拌均匀，即得。
[0067]
志愿者效果例1
[0068]
筛选健康志愿者30名，年龄在35-45岁。使用剂型例1的精华乳，每天早晚各1次，连续使用4周，在使用前，使用两周使用四周后利用tewameter测量经表皮失水率(tewl)，利用tewameter测量皮肤血红素含量，利用cutometer测试面部r2值(注：r2：无负压时皮肤的回弹量有有负压时的最大拉伸量之比，比值越接近1，说明皮肤弹力越好)，测试结果见图4、图
5、图6。
[0069]
由实验结果可知，使用产品四周，皮肤的经表皮水分流失tewl值降低了31％，血红素浓度下降了11.50％，皮肤回弹比r2增长17.86％，表明本发明的产品具有明显的降低红血丝修复皮肤屏障增强皮肤弹力的效果，本发明包含粗齿绣球叶提取物具有显著的抗炎修复皮肤屏障增强皮肤弹力的功效。
[0070]
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。