益母草碱改善非酒精性脂肪肝和在肝脏脂质代谢中的用途的制作方法

1.本发明涉及药物制剂技术领域，具体地，涉及一种益母草碱改善非酒精性脂肪肝和在肝脏脂质代谢中的用途。


背景技术：

2.益母草碱(leonurine)是传统中药益母草中的主要活性成分，具有活血化淤、利水消肿的功效。非酒精性脂肪肝是一种由环境因素、遗传因素和代谢应激等多种病因引起肝损伤，并以肝细胞脂肪变性和脂肪堆积为特征的脂质代谢临床综合征。随着生活水平的提高及膳食结构的改变，非酒精性脂肪肝的发病率逐年上升。随着科学研究的不断进行，关于脂质代谢新的机制和新的可能药物也不断发现。本发明专利发现在非酒精性脂肪肝疾病中pparα是一个重要的靶点蛋白，接着探究发现pparα受到上游pi3k-akt-mtor-ampkα-acc系统的调控影响，而pparα可以通过调控srebp-1c、ucp-2、hif-1α、pgc-1α和cpt-1a影响代谢紊乱、胰岛素抵抗、肝细胞坏死、缺氧损伤和脂肪酸氧化等。同时发现益母草的有效单体化合物益母草碱，可以通过调节pi3k-pparα系统对非酒精性脂肪肝和脂质代谢产生一定的保护和治疗作用。目前，已经确定高脂血症、肥胖、代谢综合征、心血管疾病和非酒精性脂肪肝之间都具有相关联系。


技术实现要素：

3.有鉴于此，有必要提供一种益母草碱改善非酒精性脂肪肝和在肝脏脂质代谢中的用途。
4.一种益母草碱改善非酒精性脂肪肝和在肝脏脂质代谢中的用途，益母草碱用于调节pi3k-akt-pparα信号通路，从而产生降脂、抗炎、抗氧化，减少肝细胞凋亡和肝脏纤维化，达到保护肝脏的作用。其中，pparα和pi3k-akt-pparα信号通路分别为非酒精性脂肪肝的发生发展过程中重要的蛋白靶点和病理机制信号通路。
5.优选的，所述益母草碱为源自传统中草药益母草的提取物或提取物组合物。
6.优选的，所述提取物及提取物组合物包含任意比例益母草碱或若干种可接受的载体或稀释剂。
7.优选的，所述组合物包含与pparα蛋白及其受体和其所介导的信号通路相互作用的含有益母草碱任意混合比例的化合物混合物。
8.优选的，每日一次，早上给药，不禁食不禁水，用0.5％的cmc-na混悬液配制药物，益母草碱的剂量为5mg/kg、10mg/kg或20mg/kg。
9.优选的，益母草碱改善非酒精性脂肪肝和在肝脏脂质代谢的细胞给药浓度为：益母草碱5μmol/l、10μmol/l或20μmol/l。
10.结合益母草碱的长期研究结果和本发明结果发现：益母草碱产生多重药理作用如降脂、抗炎、抗氧化，减少肝细胞凋亡和肝脏纤维化，达到保护肝脏；对非酒精性脂肪肝大鼠的降脂和肝脏保护作用的分子机制与pi3k-pparα信号通路的激活与表达的调控有关。本发
明提供了非酒精性脂肪肝和脂质代谢性疾病所面临的当前问题的解决方案。发现了在非酒精性脂肪肝的发生发展过程中重要的蛋白靶点pparα和病理机制信号通路，同时发现一种源自传统中草药益母草的提取物益母草碱可以在动物实验和细胞实验中去调节pi3k-akt-pparα信号通路，从而产生降脂、抗炎、抗氧化，减少肝细胞凋亡和肝脏纤维化，达到保护肝脏的作用。这为非酒精性脂肪肝等脂质代谢性疾病的未来临床治疗提供了新的思路和治疗方案。
附图说明
11.图1为源于益母草提取物中益母草碱化合物结构示意图；
12.图2为益母草碱对高脂诱导的大鼠的体重、空腹血糖、肝重/体重比和脾重/体重比的影响实验结果对比示意图；
13.图3为益母草碱对非酒精性脂肪肝大鼠的血脂和载脂蛋白的影响实验中tc、tg、ldl-c、hdl-c、apoa1和apob结果对比示意图；
14.图4为益母草碱对非酒精性脂肪肝大鼠的血生化、肝和肾功能的影响实验结果对比示意图；
15.图5为益母草碱对非酒精性脂肪肝大鼠的肝脏氧化应激和炎症的影响实验结果对比示意图；
16.图6为益母草碱对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏组织结构的影响实验结果影像对比示意图；
17.图7为免疫组织化学法观察肝脏pparα、rxr-a和srebp-1c的变化对比示意图；
18.图8为ppars家族蛋白在非酒精性脂肪肝模型大鼠肝脏和高脂诱导的肝细胞模型中的表达情况实验结果对比示意图；；
19.图9益母草碱对高脂饲料诱导的大鼠非酒精性脂肪肝模型肝脏的pi3k-akt系统、pparα及其下游效应器蛋白的影响实验结果对比示意图；
20.图10为益母草碱在高脂诱导的大鼠肝细胞中对pi3k-akt系统的调节作用实验结果对比示意图；
21.图11为明确pi3k-akt的影响的下游通路和观察scm-198的药效强度实验结果对比示意图；
22.图12为益母草碱在肝细胞模型中对pparα及其下游效应器蛋白的表达的调控影响实验结果对比示意图；
23.图13为确定pparα对下游的蛋白的调控作用以及益母草碱对他们的影响实验结果对比示意图；
24.图14为益母草碱和pparα激动剂/拮抗剂对pa和bsa诱导的肝细胞pparα通路因子的mrna的影响实验结果对比示意图；
25.图15为激光共聚焦检测益母草碱对肝细胞中pparα、rxr-a和srebp-1c的表达与分布的影响实验结果对比示意图。
具体实施方式
26.为了使本发明技术方案更容易理解，现结合附图采用具体实施例的方式，对本发
明的技术方案进行清晰、完整的描述。
27.源于中草药益母草的提取物益母草碱化合物的结构如图1所示，益母草碱改善非酒精性脂肪肝和在肝脏脂质代谢中的用途，益母草碱用于调节pi3k-akt-pparα信号通路，从而产生降脂、抗炎、抗氧化，减少肝细胞凋亡和肝脏纤维化，达到保护肝脏的作用，其中，pparα和pi3k-akt-pparα信号通路分别为非酒精性脂肪肝的发生发展过程中重要的蛋白靶点和病理机制信号通路。
28.本技术提供具体实施例来证明。
29.实施例1，益母草碱对高脂诱导的大鼠的体重、空腹血糖、肝重/体重比和脾重/体重比的影响：
30.在整个实验过程中，所有大鼠的体重都处于增加状态。高脂诱导成功的大鼠体重比正常组大鼠有显著性升高，阳性药阿托伐他汀钙从给药第三周开始比模型组体重有明显下降，并一直持续到第八周；益母草碱各治疗组和阿司匹林组对体重均没有显著性改善作用，请参阅图2中的a，模型大鼠的血糖显著性高于正常组，益母草碱中剂量、高剂量和阳性药阿司匹林，阿托伐他汀钙组均具有改善作用，同时，益母草碱的治疗作用和剂量成剂量依赖性关系；虽然模型组和正常组之间有显著性差异，但各组的均值都没有达到糖尿病诊断的标准(小于11.1mmol/l)，请参阅图2中的b。模型组的肝/体比和脾/体比与正常组相比有明显升高，说明高脂诱导的大鼠肝脏与脾脏有异常增大；益母草碱中剂量、高剂量组可以有效降低肝/体比，阳性药阿托伐他汀钙组效果最强，其他各组无明显改变，请参阅图2中的c。对于脾/体比，只有阿司匹林组具有改善作用，请参阅图2中的d。
31.实施例2，益母草碱对非酒精性脂肪肝大鼠的血脂、血生化、肝和肾功能的影响。
32.高脂饲养8周后，除hdl-c显着降低外，模型组大鼠的血清脂质水平(tc、tg和ldl-c)显著升高。益母草碱给药组和阳性药组具有不同程度的改善作用，且益母草碱在一定范围内呈剂量依赖性，益母草碱低剂量组和阿司匹林组对tg的改善作用不明显请同时参阅图3中的a，b，c和d。对于apoa1，模型组显著性降低，仅有阿托伐他汀钙产生改善作用请参阅图3中的e。模型组的apob与正常组相比有升高，益母草碱高剂量组和阿托伐他汀钙组具有改善作用，请参阅图3中的f。
33.血生化检测显示，alt、ast在模型组中显著性的升高，alt、ast指的是谷丙转氨酶和谷草转氨酶，阿托伐他汀钙可以明显改善alt和ast的过表达，益母草碱高剂量组和阿司匹林组可以降低ast水平，请参阅图4中的a和b。total protein,albumin,globulin and albumin/globulin在正常组和模型组之间都具有显著性差异，total protein只有俩个阳性药具有效果，各剂量的益母草碱治疗组和阳性药组能够调整globulin的异常表达；albumin/globulin则随着albumin和globulin的变化而变化，中、高剂量益母草碱和阳性药组对albumin,albumin/globulin表现出改善作用，请参阅图4中c，d，e和f。在模型组中，cpk，dbil和alp的表达显著性的高于正常组，阿托伐他汀可以降低cpk和alp，高剂量的益母草碱和阿司匹林可以有效降低cpk过表达，请参阅图4中g，h和i。
34.bun各组均没有显著性差异，请参阅图4中j。模型组cre表达高于正常组，阿托伐他汀钙可以有效改善，请参阅图4中k。ua模型组和正常组无显著性改变，高剂量益母草碱和阳性药可以降低其表达相对于模型组，请参阅图4中l。
35.实施例3，益母草碱对非酒精性脂肪肝大鼠的肝脏氧化应激和炎症的影响：
36.为了研究益母草碱对高脂饮食诱导的大鼠的抗氧化状态的影响，评估了其对抗氧化防御系统的活化能力。mda在模型组升高明显，益母草碱各治疗组均可以显著抑制过高的表达，请参阅图5b。随着益母草碱剂量的增加，大鼠的sod活性也随之增加，请参阅图5c。高剂量的益母草碱具有很强的抑制vldl功能，请参阅图5a。
37.肝脏炎症反应程度通过以下指标的变化进行评估：肝脏匀浆液使用elisa试剂盒检测可溶性细胞因子。在这里，不同组之间的il-1β、il-6和tnf-α水平存在显著差异。与正常对照组相比，模型组的il-1β、il-6和tnf-α表达水平更高。所有剂量的益母草碱和阳性药均可显著降低il-6和tnf-α水平。中、高剂量益母草碱降低了il-1β水平，而低剂量益母草碱组il-1β水平与模型组相比无显著性差异。益母草碱对于il-1β、il-6和tnf-α的治疗都一定程度的计量相关性，请参阅图5d、e和f。
38.实施例4，益母草碱对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏组织结构的影响：
39.为了验证肝细胞损伤和益母草碱保护作用，对肝脏进行了苏木精和伊红(h&e)染色的组织病理学观察。与正常组相比，高脂诱导的模型组大鼠肝细胞脂滴堆积，细胞边界模糊，脂肪球大者可将细胞核推向一边；肝组织全小叶脂肪变性，气球样变性，属大囊泡性，并有大囊泡融合成形成脂囊；肝小叶排列紊乱，边界不清；肝索结构紊乱，纤维组织轻度增生；单核细胞、淋巴细胞等炎性细胞浸润，可见点状、灶状、碎屑样坏死。
40.中、高剂量益母草碱和阿托伐他汀钙给药八周后，肝脏的病理改变明显改善。肝细胞脂肪变性、脂质积累逐渐减轻，细胞形状开始正常，炎性细胞减少以及炎性细胞的浸润也显著性减少。肝细胞坏死已经缩小到很小范围；肝索结构在高剂量益母草碱和阿托伐他汀钙组中重新出现；阿司匹林组可以减轻部分炎症反应，但对于脂质积累和脂肪变性没有效果；低剂量益母草碱对肝组织损伤没有显著性改善作用，请参阅图6。
41.实施例5，免疫组织化学法观察肝脏pparα、rxr-a和srebp-1c的变化：
42.免疫组化用来观察蛋白在肝组织中的分布和表达。pparα是一种核蛋白，在肝脏组织中分布较广，正常情况下也会释放到细胞质中(黄褐色染色)，产生生理作用；而模型组的肝组织中pparα表达明显受到抑制，各给药组均有不同程度的治疗作用，益母草碱高剂量组效果最强，请参阅图7a和b。
43.rxr-a的细胞定位也主要在细胞核，正常组中可以很明显的观察到细胞核染色很深(深褐色染色)，且在细胞质中也有分布；模型组表达明显减少，分布范围也缩小很多；益母草碱各治疗组和阿托伐他汀钙组都具有显著性的改善作用。
44.正常状态下，肝脏的的srebp-1c的表达很少，高脂诱导的模型组大鼠肝组织srebp-1c的表达显著性升高(黄褐色染色)，分布包含细胞质和细胞核；益母草碱治疗组和阳性药阿托伐他汀钙组都具有显著性的抑制作用。益母草碱对pparα、rxr-a和srebp-1c的治疗效果具有剂量依赖性，对于这三个蛋白而言，scm-198的治疗效果具有统一性，阿司匹林对rxr-a和srebp-1c无明显效果，请参阅图7c，d，e和f。
45.实施例6，ppars家族蛋白在非酒精性脂肪肝模型大鼠肝脏和高脂诱导的肝细胞模型中的表达情况
46.ppars蛋白控制许多细胞内的代谢过程，在本实验中，我们检测了非酒精性脂肪肝大鼠模型的肝脏和正常大鼠肝脏中ppars(pparα、pparβ和pparγ)的表达，发现在体内实验中pparα在模型大鼠中表达减少特别明显；pparγ在正常组和模型组之间也有显著性差异，
但差异小于pparα；pparβ则没有显著性差异。同时，也检查了高脂诱导的肝细胞中三个蛋白的表达情况，与动物实验相互验证，结果显示：pparα在模型组中显著性减少，pparβ和pparγ则没有明显差异。综合以上结果，说明pparα在高脂诱导的大鼠动物和肝细胞中具有明显的变化，可能是潜在的重要调控靶点，如图8所示。
47.实施例7，益母草碱对高脂饲料诱导的大鼠非酒精性脂肪肝模型肝脏的pi3k-akt系统的影响
48.免疫印迹法检测益母草碱(5，10和20mg/kg)治疗后肝脏组织中p-pi3k，p-akt，p-mtor，p-ampkα和p-acc的水平变化，请同时参阅图9a，b和d。模型组p-pi3k，p-akt和p-ampkα磷酸化水平与正常组相比较显著性降低。和模型组相比，低剂量组的益母草碱改善效果较弱，中、高剂量组的益母草碱能够明显的上调p-pi3k，p-akt和p-ampkα的磷酸化水平。此外，益母草碱对p-pi3k，p-akt和p-ampkα的磷酸化水平的影响具有剂量依赖性。阿司匹林可以上调p-pi3k和p-akt的磷酸化水平，阿托伐他汀钙对pi3k和ampkα的磷酸化具有改善作用。
49.p-mtor和p-acc的表达在模型组中显著性的升高，益母草碱所有组别都具有抑制作用。益母草碱的治疗作用对p-mtor和p-acc磷酸化在一定范围内仍然随剂量变化而变化。
50.实施例8，益母草碱在非酒精性脂肪肝大鼠肝脏中对pparα及其下游效应器蛋白的影响：
51.为了检测益母草碱的降脂效果是否通过影响pparα产生作用，使用免疫印迹法检测了pparα，rxr-a，hif-1α，cpt-1a，pgc-1α，ucp-2和srebp-1c在大鼠肝脏中的表达。与正常组大鼠相比，pparα，rxr-a，cpt-1a和pgc-1α在非酒精性脂肪肝大鼠的肝脏中的表达受到明显抑制。对于pparα和pgc-1α，高剂量的益母草碱和阿司匹林、阿托伐他汀钙具有明显改善作用；对于rxr-a和cpt-1a，所有益母草碱给药组都具有特别显著性的增加表达作用，而且阿司匹林对rxr-a也具有显著性的提高作用。
52.在模型组大鼠的肝脏中，hif-1α、ucp-2和srebp-1c的表达显著性升高相比于正常组。益母草碱每个治疗组和阳性药组(阿司匹林和阿托伐他汀钙)对hif-1α都具有明显的抑制作用，同时益母草碱对hif-1α抑制作用具有剂量依赖性。低剂量、中剂量的益母草碱治疗组和阿司匹林组对ucp-2和srebp-1c具有显著性的改善作用，请参阅图9c和d。
53.实施例9，益母草碱在高脂诱导的大鼠肝细胞中对pi3k-akt系统的调节作用。
54.在体内实验中我们发现了pi3k-akt系统在非酒精性脂肪肝大鼠肝脏中的表达情况可以受到益母草碱的影响，为了验证益母草碱的效果，我们在高脂诱导(125μm pa+25μm bsa)的大鼠肝细胞中再次检测益母草碱对这些蛋白的表达影响情况，如图10所示。与正常组相比，在高脂诱导的模型肝细胞中，磷酸化的pi3k、akt和ampkα的水平受到显著性的抑制；中、高浓度的益母草碱对三个蛋白的磷酸化水平都有显著性的提高，低浓度的益母草碱只对pi3k磷酸化水平具有改善作用。益母草碱对pi3k、akt和ampkα的磷酸化水平影响具有浓度依赖性。模型组中的mtor和acc的磷酸化水平比正常组的显著性升高，不同浓度的益母草碱都具有显著性的抑制效果。
55.实施例10，明确pi3k-akt的影响的下游通路和观察scm-198的药效强度
56.为了观察益母草碱的药效强度，我们使用pi3k的激动剂740y-p在相同的浓度去刺激模型细胞，观察靶蛋白的变化。同时为了明确mtor、ampkα、acc和pparα是否受到pi3k-akt系统的调控，以及益母草碱也是通过此通路产生降脂作用，我们使用益母草碱(10um)和
pi3k的拮抗剂(ly294002，10um)共同治疗模型细胞。结果如下：首先，pi3k，akt，mtor，ampkα和acc的磷酸化水平和pparα的表达水平在正常组和模型组之间都有显著性的差异，而益母草碱给药组和pi3k激动剂组也都具有明显的改善作用，说明mtor，ampkα和acc的磷酸化水平和pparα的表达水平受到pi3k-akt系统调控。相同浓度下，益母草碱对pi3k、mtor和ampkα的磷酸化调控作用强于pi3k的激动剂。pi3k拮抗剂对pi3k磷酸化的水平没有抑制作用，甚至因为代偿性作用略有升高。在益母草碱和pi3k拮抗剂共同刺激组中，使得mtor和ampkα磷酸化表达和pparα的产生与益母草碱组结果相比都具有显著性的改变，说明pi3k拮抗剂作用对三个蛋白比益母草碱强；而联合刺激组中的akt和acc的磷酸化情况和益母草碱给药组没有显著性的变化，则可能不仅仅只受到pi3k系统的调控或者益母草碱作用强于pi3k拮抗剂，请参阅图11。
57.实施例11，益母草碱在肝细胞模型中对pparα及其下游效应器蛋白的表达的调控影响。
58.在细胞高脂模型中(125μm pa+25μm bsa)，我们再次检测益母草碱对pparα及其效应器蛋白的影响。免疫印迹结果如下：在高脂状态下，pparα，rxr-a，cpt-1a和pgc-1α的表达量严重下降，不同浓度的益母草碱对pparα，cpt-1a和pgc-1α都具有显著性的改善作用；而对于rxr-a，只有中，高浓度的益母草碱具有明显的提升作用。对于pparα，rxr-a，cpt-1a和pgc-1的表达，益母草碱在一定浓度范围内具有浓度-效果的正关系。模型组细胞中的srebp-1c，hif-1α和ucp-2显著性的过表达，所有的益母草碱给药组都具有显著性的抑制作用，请参阅图12。
59.实施例12，确定pparα对下游的蛋白的调控作用以及益母草碱对他们的影响。
60.与正常状态的细胞比较，高脂模型的细胞中pparα，rxr-a，cpt-1a，srebp-1c，hif-1α，pgc-1α和ucp-2的表达都有显著性的改变，益母草碱治疗组(10μm)和pparα激动剂组(fenofibrate，10μm)都具有明显的改善作用；除了hif-1α和ucp-2，对于其他因子，pparα激动剂的效果要强于益母草碱。益母草碱(10μm)和pparα拮抗剂(gw6471，10μm)联合治疗组中，pparα的表达量与益母草碱治疗组没有显著性差异，说明pparα拮抗剂对pparα的表达没有特别的影响。而对于rxr-a，cpt-1a，srebp-1c，hif-1α，pgc-1α和ucp-2的表达与益母草碱组都具有显著性的差异，说明这些蛋白受到pparα的调控，请参阅图13。
61.实施例13，益母草碱和pparα激动剂/拮抗剂对pa和bsa诱导的肝细胞pparα通路因子的mrna的影响。
62.为明确pparα介导的通路相关基因是否受到益母草碱调控，pparα，rxr-a，cpt-1a，srebp-1c，hif-1α，pgc-1α和ucp-2mrna水平将通过qpcr检测。高脂状态下，这些因子的基因表达和正常组都具有显著性差异，益母草碱各浓度治疗组都有不同程度的改善作用。在相同浓度时(10μm)，pparα激动剂对pparα，ucp-2和pgc-1αmrna的表达改善效果强于益母草碱。在益母草碱和pparα拮抗剂共同治疗组中，rxr-a，cpt-1a，srebp-1c，hif-1α和ucp-2的基因表达和益母草碱(10μm)相比有显著性的改变，这证实这些蛋白基因受到益母草碱通过pparα来进行的调控，请参阅图14。
63.实施例14，激光共聚焦检测益母草碱对肝细胞中pparα，rxr-a和srebp-1c的表达与分布的影响：
64.荧光染色的结果显示：高脂诱导的模型组，pparα和rxr-a的荧光强度与正常组相
比较，下降明显具有显著性差异。正常状态下，pparα的绿色荧光主要显现在细胞核及其周围，从而产生生理作用，而当细胞处于高脂状态，pparα的表达受到很严重的抑制(绿色荧光也近乎暗淡)，益母草碱治疗组(10um)则可以显著性提高pparα的水平。rxr-a在正常组中荧光染色主要位于细胞核的膜上和细胞质中，亮度强且范围广；高脂状态下抑制程度很大，益母草碱治疗组可以有效提升rxr-a的表达。srebp-1c的荧光强度在高脂状态下显著性的增强，绿色荧光主要分布在细胞核膜周围,也会在细胞质中高表达；益母草碱处理后的肝细胞荧光强度明显降低，说明益母草碱可显著降低srebp-1c水平，请参阅图15。
65.本发明提供了当前非酒精性脂肪肝和脂质代谢性疾病所面临的问题的解决方案。发现了在非酒精性脂肪肝的发生发展过程中重要的蛋白靶点pparα和病理机制信号通路，同时发现一种源自传统中草药益母草的提取物益母草碱可以在动物实验和细胞实验中去调节pi3k-akt-pparα信号通路，从而产生降脂、抗炎、抗氧化，减少肝细胞凋亡和肝脏纤维化，达到保护肝脏的作用。这为非酒精性脂肪肝等脂质代谢性疾病的未来临床治疗提供了新的思路和治疗方案。
66.在本发明的一些方面，该提取物及提取物组合物还可以包含任意比例益母草碱或更多种可接受的载体或稀释剂。这些载体/稀释剂可以是佐剂、赋形剂或载剂，如防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、甜味剂、调味剂、香料、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂、维生素、聚合物、含硅氧烷的化合物、精油、结构剂和分散剂。每种载体在与制剂的其他成分相容并且不损害对象的意义上是可接受的。在本发明的一些方面，可接受的载体可以包括至少一种亲水性聚合物，其选自树胶、纤维素醚、丙烯酸树脂、碳水化合物载体、滑石、乳糖、甘露醇、葡萄糖、水、胶制剂、蛋白质衍生化合物、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸镁及其任意组合。在本说明书全文中确定稀释剂或载体的非限制性实例，并通过引用并入本部分。这些成分的量可以为以组合物重量或体积计的0.0001％至99.9％，或本说明书其它部分所公开的任何整数或范围内，其通过引用并入本段。稳定化合物可以在室温下储存1至24个月。在本发明的一些方面，组合物被配制成可食用组合物、膳食补充剂、保健品、食品添加剂、食品、复合碳水化合物、面粉、糖、饮料、化妆品、散剂、片剂、胶丸、珠、可食用片剂或阻嚼剂(胶质)、胶制剂、洗剂、透皮贴剂或用于口服施用的液体溶液。
67.在本发明的一些方面，所配制的提取物组合物可以包含在固体纳米颗粒、含脂质的纳米颗粒、基于脂质的载体、密封导管、吸管、密封袋或其任意组合中。还可以包括以下附加成分的任意一种或任意组合或全部：水、药剂、螯合剂、防腐剂、增稠剂、含硅酮的化合物、精油、结构剂、维生素、药物成分、或抗氧化剂、或非天然存在的化合物、或这些成分的任意组合或这些成分混合物。在某些方面，组合物可以包括在前句中确定的附加成分的至少2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种或全部。这些附加成分的非限制性实例在整个说明书中确定，并通过引用并入本部分。这些成分的量可以为以组合物重量或体积计的0.0001％至99.9％，或本说明书其它部分所公开的任何整数或范围内，其通过引用并入本段。
68.本发明还可以包含一种或更多种载体或稀释剂。这些载体/稀释剂可以是佐剂、赋形剂或载剂，如防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、甜味剂、调味剂、香料、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂、维生素、聚合物、含硅氧烷的化合物、精油、结构剂和分散剂。每种载体在与制剂的其他成分相容并且不损害对象的意义上是可接受的。
69.在本发明的一些方面，载体可以包括至少一种亲水性聚合物，其选自树胶、纤维素醚、丙烯酸树脂、碳水化合物载体、滑石、乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、水、胶制剂、蛋白质衍生的化合物、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸镁及其任意组合。在本说明书全文中确定稀释剂或载体的非限制性实例，并通过引用并入本部分。这些成分的量可以为以组合物重量或体积计的0.0001％至99.9％，或本说明书其它部分所公开的任何整数或范围内，其通过引用并入本段。还预期的是包括本发明组合物的试剂盒。在某些实施方案中，组合物包含在容器中。容器可以是瓶、分配器、包装或吸管。容器可以分配预定量的组合物。在一些方面，组合物被分配为丸剂、片剂、胶囊、透皮贴剂、可食用咀嚼剂、霜剂、洗剂、凝胶、喷雾剂、雾剂、块、散剂或液体。容器可以包括在其表面上的标识。标识可以是单词、缩写、图片或符号。
70.预期本说明书中讨论的任何实施方案可以针对本发明的任何方法或组合物来实施，反之亦然。此外，本发明的组合物可以用于实现本发明的方法。
71.还预期的是包含本发明中提取物及提取物组合物的产品。在非限制性方面，产品可以是保健品。保健品可以是在本说明书其他章节中描述的或是本领域技术人员已知的那些保健品。产品的非限制性实例包括丸剂、片剂、可食用咀嚼剂、胶囊、霜剂、洗剂、凝胶剂、胶制剂、喷雾剂、雾剂、溶解膜、透皮贴剂、化妆品、保健品、膳食补充剂、食品添加剂、食品、复合碳水化合物、面粉、糖、饮料或液体等、或其任意组合。
72.治疗剂包括含有任意比例益母草碱化合物的混合提取物。其还包括这些化合物及其药学上可接受的盐。有用的盐是本领域技术人员已知的，包括与无机酸、有机酸、无机碱或有机碱的盐。本发明中有用的治疗剂是不论是单独施用还是与其它药物赋形剂或惰性成分组合施用，在施用于人或动物时影响所期望的、有益的、通常为药理作用的那些化合物。
73.本发明中术语“保健品”是本领域认可的，并且旨在描述在可以预防疾病或改善不良病况的食品中发现的具体化合物。保健品可以是膳食补充剂、保健品、食品添加剂、食品、复合碳水化合物、面粉、糖、饮料等或其任意组合的形式。
74.术语“益母草碱化合物”指益母草碱或其任何类似物或其衍生物形式。
75.术语“基本上”及其变体定义为在很大程度上但不必完全是指定为本领域普通技术人员所理解的，在一个非限制性实施方案中，基本上指在10％以内、5％以内、1％以内或0.5％以内。
[0076]“患者”、“对象”或“个体”指哺乳动物(例如人、灵长类动物、狗、猫、牛、羊、猪、马、小鼠、大鼠、仓鼠、兔或豚鼠)。在具体的方面，患者、对象或个体是人。
[0077]“抑制”或“减少”或这些术语的任何变体包括任何可测量的降低或完全抑制以达到期望的结果。
[0078]“有效的”或“治疗”或“预防”或这些术语的任何变体指足以实现期望的、预期的或想要的结果。
[0079]
当指化合物时，“类似物”指其中一个或更多个原子被其它原子取代、或其中一个或更多个原子从化合物中删除、或其中一个或更多个原子添加到化合物中、或这些修饰的任意组合的修饰的化合物。原子的这种添加、删除或取代可以在沿着化合物包含的一级结构的任何点或多个点发生。
[0080]
关于母体化合物的“衍生物”指化学修饰的母体化合物或其类似物，其中至少一个取代基在母体化合物或其类似物中不存在。一个这种非限制性实例是被共价修饰的母体化
合物。典型的修饰是酰胺、碳水化合物、烷基、酰基、酯、聚乙二醇化等。
[0081]“治疗上等同的”药物是与一种或更多种其它药物治疗疾病或病况上具有基本上相同效果的药物。治疗上等同的药物可以是或可以不是化学上等同的、生物等同的或一般等同的。
[0082]“生物利用度”指治疗剂例如益母草碱从制剂中被吸收的程度。
[0083]“全身的”关于向对象递送或施用治疗剂例如益母草碱化合物，该治疗剂在对象血浆中以生物学显著的水平可检测。
[0084]“药学上可接受的”成分、赋形剂或组分是适合用于人和/或动物、但没有不良副作用(如毒性、刺激和过敏反应)具有合理的益处/风险比的物质。
[0085]
术语“哺乳动物”包括鼠科(例如大鼠、小鼠)哺乳动物、兔、猫、狗、猪和灵长类动物(例如猴、猿、人)。在本发明上下文中的具体方面，哺乳动物可以是鼠科哺乳动物或人。
[0086]
术语“约”或“大约”或“基本上未改变的”定义为如本领域普通技术人员所理解的接近于，在一个非限制性实施方案中，该术语定义为10％以内、优选5％以内、更优选1以内、最优选0.5％以内。此外，“基本上无水的”指以重量或体积计小于5％、4％、3％、2％、1％或更少的水。
[0087]
在权利要求和/或说明书中，当与术语“包含”一起使用时，指示物前不使用数量词可以指“一个”，但其也与“一个或更多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的意思一致。
[0088]
如本说明书和权利要求书中使用的，词语“包含”、“具有”、“包括”、“含有”是包含性的或开放的，不排除附加的、未记载的要素或方法步骤。
[0089]
组合物和使用其的方法可以“包括”本说明书全文公开的任意成分或步骤、“基本上由其组成”或“由其组成”。在一个非限制性方面，关于过渡性短语“基本上由...组成”，本说明书中公开的组合物和方法的基本的和新的特征包括组合物通过作用于pi3k-akt-mtor-ampkα-acc-pparα系统的调控影响，通过pparα可以调控rxr-a、srebp-1c、ucp-2、hif-1α、pgc-1α和cpt-1a达到减少、改善、治疗或预防非酒精性脂肪肝等脂质代谢性疾病。
[0090]
由以下的详细描述，本发明的其它目的、特征和优点会变得明显。然而，应当理解的是，详细描述和实施例在表示本发明的具体实施方案的同时，仅以举例说明的方式给出。此外，预期的是在本发明精神和范围内的改变和修改通过该详细描述会对本领域技术人员变得明显。
[0091]
不希望受理论约束，在本发明的一些方面，含有任意比例益母草碱提取物可以从植物的提取物中分离。植物的非限制性实例包括新鲜或者干燥的全草和地上部分提取物。全草和地上部分来源的非限制性实例包括唇形科植物益母草(leonurus japonicus houtt.)：细叶益母草(leonurus sibiricus l.)的叶，或益母草(l.heterophyllus sweet)，艾蒿益母草(l.artemisia)全草。
[0092]
预期的是本发明的提取物及组合物可以包括本说明书中讨论的任何量的成分。组合物还可以包括在整个说明书中描述的附加成分(例如稳定剂、填充剂、保健品、膳食补充剂、食品添加剂、食品、药学上可接受的盐和/或其他药物成分)的任意数量的组合。组合物中任何组分的浓度可以变化。在非限制性的实施方案中，例如该组合物在其最终形式中可以包含例如至少约0.0001％、0.0002％、0.0003％、0.0004％、0.0005％、0.0006％、0.0007％、0.0008％、0.0009％、0.0010％,甚至是10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、
17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％或其中导出的任意范围的本说明书和权利要求全文中提及的成分的至少一种，基本上由其组成，或由其组成。在非限制性的方面，百分比可以按照总组合物的重量或体积计算。本领域普通技术人员会理解，浓度可以根据添加、取代和或减去给定组合物中的成分而变化。
[0093]
组合物，本发明的提取物及组合物可以并入所有类型的载剂中。非限制性实例包括膳食补充剂、保健品、食品添加剂、食品、复合碳水化合物、面粉、糖、饮料及其任意组合，乳剂(例如油包水、水包油包水、水包油、水包硅酮、硅酮包水、油包水包油、硅酮包水包油乳剂)、霜剂、洗剂、溶液(水和水醇)、无水基质(粉末)、凝胶、软膏、丸剂、片剂、胶囊等。变体和其它合适的载剂对于本领域技术人员会是明显的，并且适用于本发明。
[0094]
附加成分，本发明的益母草提取物益母草碱可以配制成施用于人或非人动物的任何合适的组合物形式。
[0095]
组合物可以由益母草提取物单独由组成，或者可以包括和任何合适的附加成分，例如一种或更多种可接受的载体、稀释剂、佐剂、赋形剂或载剂，例如防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂，这取决于施用方式和剂型的性质。在与制剂的其他成分相容且不对对象造成伤害的意义上来说，每种载体必须是可接受的。
[0096]
保健品成分，本发明的制剂还可以包括各种成分以帮助稳定或帮助提高本发明的有益组合物的组分的生物利用度，或作为个体饮食的附加营养。适当的添加剂可以包括维生素和生物学上可接受的矿物质。维生素的非限制性实例包括维生素a、b族维生素、维生素c、维生素d、维生素e、维生素k和叶酸。矿物质的非限制性实例包括铁、钙、镁、钾、铜、铬、锌、钼、碘、硼、硒、锰、其衍生物或其组合。这些维生素和矿物质可以没有限制的来自任何来源或来源的组合。非限制性的示例性b族维生素包括但不限于硫胺素、烟酰胺、吡哆醇、核黄素、氰钴胺素、生物素、泛酸或其组合。
[0097]
各种添加剂可以并入到本发明的组合物中。本发明的组合物的任选的添加剂包括但不限于透明质酸、磷脂、淀粉、糖、脂肪、抗氧化剂、氨基酸、蛋白质、调味剂、着色剂、水解淀粉及其衍生物或其组合。
[0098]
药物成分，组合物可以包含药学上可接受的试剂。药物活性剂的非限制性实例包括止痛剂、麻醉剂、肛门直肠药、抗组胺剂、抗炎剂包括非制本抗炎药、抗生素、抗真菌剂、抗病毒剂、抗微生物剂、抗癌活性物质、抗肿瘤药物、生物活性的蛋白质和肽、酶、止血剂、类固醇包括激素和皮质类固醇等。
[0099]
稳定赋形剂，在一些优选的实施方案中，本文描述的制剂可进一步稳定以确保其中所含的活性成分的稳定性。在一些实施方案中，稳定赋形剂选自糖，淀粉，糖醇及其混合物。用于稳定赋形剂的合适的糖的实例包括但不限于海藻糖、葡萄糖、蔗糖、果糖等。用于稳定赋形剂的合适的淀粉的实例包括但不限于羟乙基淀粉(hes)。用于稳定赋形剂的合适的糖醇的实例包括但不限于甘露醇和山梨糖醇。
[0100]
在一些实施方案中，稳定赋形剂在制剂中以以下量存在:约1％(重量/体积)至约60％(重量/体积)、约1％(重量/体积)至约50％(重量/体积)、约1％(重量/体积)至约40％(重量/体积)、约1％(重量/体积)至约30％(重量/体积)、约1％(重量/体积)至约20％(重
量/体积)、约5％(重量/体积)至约60％(重量/体积)、约5％(重量/体积)至约50％(重量/体积)、约5％(重量/体积)至约40％(重量/体积)、约5％(重量/体积)至约30％(重量/体积)、约5％(重量/体积)至约20％(重量/体积)、约10％(重量/体积)至约60％(重量/体积)、约10％(重量/体积)至约50％(重量/体积)、约10％(重量/体积)至约40％(重量/体积)、约10％(重量/体积)至约30％(重量/体积)、或约10％(重量/体积)至约20％。在一些实施方案中，稳定赋形剂在制剂中以以下量存在：约1％(重量/体积)、约5％(重量/体积)、约10％(重量/体积)、约15％(重量/体积)、约20％(重量/体积)、约25％(重量/体积)、约30％(重量/体积)、约35％(重量/体积)、约40％(重量/体积)、约45％(重量/体积)、约50％(重量/体积)、约55％(重量/体积)或约60％(重量/体积)。
[0101]
在一些实施方案中，制剂还包含附加的稳定剂，包括例如抗氧化剂、螯合剂和防腐剂。合适的抗氧化剂的实例包括但不限于抗坏血酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、一硫代甘油、硫代硫酸钠、亚硫酸盐、bht、bha、抗坏血酸棕榈酸酯、没食子酸丙酯、n-乙酰基-l-半胱氨酸(nac)和维生素e。合适的螯合剂的实例包括但不限于edta、酒石酸及其盐、甘油、和柠檬酸及其盐。合适的防腐剂的实例包括但不限于苄醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯及其混合物。
[0102]
在一些实施方案中，制剂还包含稳定多元醇。
[0103]
赋形剂，在本发明组合物中使用的赋形剂可以是固体、半固体、液体或其组合。优选地，赋形剂是固体。包含赋形剂的本发明的组合物可以通过任何已知技术制备，所述技术包括例如将赋形剂与混合。本发明的组合物每剂量单位含有期望量的益母草碱化合物，如果旨在用于口服施用，可以是例如片剂、囊片剂、丸剂、硬胶囊或软胶囊剂、锭剂、扁囊剂、可分配的散剂、颗粒剂、混悬剂、酏剂、分散体形式或合理地适合于这种施用的任何其它形式。如果旨在用于肠胃外施用，其可以是例如混悬剂或透皮贴剂的形式。如果旨在用于直肠施用，其可以是例如栓剂的形式。目前优选的是口服剂型形式，其为各自含有预定量的分离的剂量单位，如片剂或胶囊。
[0104]
载体/稀释剂，合适的载体或稀释剂示例性地包括但不限于单独或组合的乳糖，包括无水乳糖和一水合乳糖；淀粉、包括直接可压缩淀粉和水解淀粉(例如celutab
tm
和emdex
tm
)、甘露醇、山梨糖醇、木糖醇、葡萄糖(例如cerelose
tm
2000)和葡萄糖一水合物、磷酸氢钙二水合物、蔗糖基稀释剂、糖果店的糖、硫酸氢钙一水合物、硫酸钙二水合物、粒状乳酸钙三水合物、葡萄糖结合剂、肌醇、水解谷物固形物、直链淀粉，纤维素包括微晶纤维素、食品级来源的纤维素和无定形纤维素(例如rexcelj)、粉末状纤维素、羟丙基纤维素(hpc)和羟丙基甲基纤维素(hpmc)、碳酸钙、甘氨酸、粘土、膨润土、嵌段共聚物、聚乙烯吡咯烷酮等。这些载体或稀释剂如果存在，则总计构成组合物总重量的约5％至约99.999％、约10％至约85％和20％至约80％。所选择的载体或稀释剂优选表现出合适的流动性质，并且在期望是片剂的情况下，表现出可压缩性。
[0105]
崩解剂，本发明的组合物任选地可以包括一种或更多种可接受的崩解剂作为赋形剂，特别是用于片剂制剂。合适的崩解剂包括但不限于，单独地或组合地，淀粉、包括羧甲基淀粉钠和预胶化玉米淀粉，粘土，纤维素如纯化纤维素、微晶纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素和羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠，藻酸盐，交联聚维酮和树胶例如琼脂、瓜尔胶、刺槐角豆胶、刺梧桐树胶、果胶和黄蓍胶。可以在制备组合物期间在任何合适的步骤加
入崩解剂，特别是在造粒之前或在压缩之前的润滑步骤期间。这种崩解剂如果存在，总计构成组合物总重量的约0.2％至约30％，优选约0.2％至约10％，更优选约0.2％至约5％。
[0106]
黏结剂，本发明的组合物可以包括黏结剂或黏合剂，特别是用于片剂制剂。这样的黏结剂和黏合剂优选地赋予待压片的粉末足够的内聚力，以允许正常的加工操作，例如定型、润滑、压缩和包装，但仍允许片剂分解，并且使组合物在摄入时被吸收。当盐溶解在溶液中，这种黏结剂也可以防止或抑制本发明的共晶体的结晶或重结晶。合适的黏结剂和黏合剂包括但不限于，单独地或组合地，阿拉伯树胶；黄蓍胶、鹿糖、胶制剂、葡萄糖、淀粉例如但不限于预胶化淀粉、纤维素例如但不限于甲基纤维素和羧甲纤维素钠、海藻酸和海藻酸的盐；硅酸镁铝、peg、瓜尔胶、多糖酸、膨润土、聚维酮、聚甲基丙烯酸酯、hpmc、羟丙基纤维素和乙基纤维素。这种黏结剂和/或黏合剂如果存在，总计构成组合物总重量的约0.5％至约25％，优选约0.75％至约15％，更优选约1％至约10％。许多黏结剂是包含酰胺基、酯基、醚基、醇基或酮基的聚合物，这样可以包含在本发明的组合物中。聚乙烯吡咯烷酮是用于缓释片剂的黏结剂的非限制性实例。聚合物黏结剂可以具有不同的分子量、交联度和聚合物等级。聚合物黏结剂也可以是共聚物，例如含有亚乙基氧单元和亚丙基氧单元的混合物的嵌段共聚物。给定聚合物中这些单元比例的变化影响性质和性能。
[0107]
润湿剂，润湿剂可以用于本发明的组合物中。可以选择润湿剂以保持晶体与水紧密相结合，这是被认为改善组合物的生物利用度的条件。这种润湿剂也可以用于增溶或增加晶体的溶解度。表面活性剂可以用作润湿剂。可以在本发明组合物中用作润湿剂的表面活性剂的非限制性实例包括季铵化合物，例如苯扎氯铵，苄索氯铵和西吡氯铵，琥珀辛酯磺酸钠，聚氧乙烯烷基苯基醚，泊洛沙姆(聚氧乙烯和聚氧丙烯嵌段共聚物)，聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和油、例如聚氧乙烯(8)辛酸/癸酸甘油单酯和聚氧乙烯(8)辛酸/癸酸甘油二酯、聚氧乙烯(35)蓖麻油和聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油，聚氧乙烯烷基醚、例如聚氧乙烯(20)鲸蜡硬脂基醚，聚氧乙烯脂肪酸酯、例如聚氧乙烯(40)硬脂酸酯，聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯、例如聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80,丙二醇脂肪酸酯、例如丙二醇月桂酸酯，十二烷基硫酸钠，脂肪酸及其盐、例如油酸、油酸钠和油酸三乙醇胺，甘油脂肪酸酯、例如甘油单硬脂酸酯，脱水山梨糖醇酯、例如脱水山梨糖醇单月桂酸酯、脱水山梨糖醇单油酸酯、脱水山梨醇单棕榈酸酯和脱水山梨糖醇单硬脂酸酯，泰洛沙泊及其混合物。这种润湿剂如果存在，总计构成组合物总重量的约0.25％至约15％，优选约0.4％至约10％，更优选约0.5％至约5％。
[0108]
润滑剂，润滑剂可以包含在本发明的组合物中。合适的润滑剂包括但不限于，单独地或组合，甘油山嵛酸酯，硬脂酸及其盐、包括硬脂酸镁、硬脂酸钙和硬脂酸钠；氢化植物油、硅胶、滑石、蜡、硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、富马酸钠、氯化钠、dl-亮氨酸、peg(例如陶氏化学公司的carbowax
tm
4000和carbowax
tm
6000)、油酸钠、月桂基硫酸钠和月桂基硫酸镁。这种润滑剂如果存在，总计构成组合物总重量的约0.1％至约10％，优选约0.2％至约8％，更优选约0.25％至约5％。
[0109]
其他试剂，表面活性剂、乳化剂或泡腾剂可以用于组合物中。乳化剂可以用于帮助成分溶解在软明胶胶囊内。表面活性剂、乳化剂或泡腾剂的非限制性实例包括d-山梨糖醇、乙醇、角叉菜胶、羧基乙烯基聚合物、羧甲基纤维素钠、瓜尔胶、甘油、甘油脂肪酸酯、胆固醇、白蜂蜡、琥珀辛酯磺酸钠、蔗糖脂肪酸酯、硬脂醇、硬脂酸、聚乙二醇40硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯、鲸蜡醇、胶制剂、脱水山梨醇脂肪酸酯、滑石、脱水山梨糖醇三油酸酯、
石蜡、马铃薯淀粉、羟丙基纤维素、丙二醇、丙二醇脂肪酸酯、果胶、聚氧乙烯(105)聚氧丙烯(5)二醇、聚氧乙烯(160)聚氧丙烯(30)二醇、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油40、聚氧乙烯氢化蓖麻油60、聚氧乙烯35蓖麻油、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、聚乙二醇400、辛基十二烷基肉豆蔻酸酯、甲基纤维素、脱水山梨糖醇单油酸酯、甘油单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇单棕榈酸酯、脱水山梨醇单月桂酸酯、十二烷基二甲基氧化胺溶液、月桂基硫酸钠、聚桂醇、干燥碳酸钠、酒石酸、氢氧化钠、纯化大豆卵磷脂、大豆卵磷脂、碳酸钾、碳酸氢钠、中链甘油三酯、柠檬酸酐、棉籽油-大豆油混合物和液体石蜡。
[0110]
治疗方法，在一些实施方案中，本发明的治疗方法包括通过向患有这种疾病或病况的的对象施用用来治疗疾病、病况或病症有效量的如本文描述的稳定制剂以治疗疾病、病况或病症。在一些实施方案中，向对象施用包含化合物的稳定制剂。疾病、病况或病症可以由非酒精性脂肪肝、高血脂症、高血糖症或肥胖症引起。
[0111]
有效量或剂量的确定在本领域技术人员的能力范围内，特别是根据本文提供的详细公开内容。
[0112]
制剂，组合物可以是例如保健品组合物。根据本发明的保健品组合物包含适于口服或肠胃外途径的制剂。具体途径的非限制性实例包括口服、经直肠、鼻内吸入、吹入、局部(包括透皮、口腔和舌下)、经阴道、经肠胃外和肺部施用。制剂可以方便地以单位剂量的形式存在，并且可以通过保健品领域众所周知的任何方法制备。这些方法包括使活性成分(例如益母草碱化合物)与构成一种或更多种辅助成分的载体相结合的步骤。通常，制剂通过将活性成分与合适的载体如液体载体或细分散的固体载体或两者均匀且紧密地结合，然后如果需要，使产品成型。适用于口服施用的本发明的制剂可以作为分离的单元呈现，例如胶囊、扁囊剂或片剂，每个含有预定量的活性成分，或作为水包油液体乳剂、油包水液体乳剂或作为水溶液例如茶中的补充剂。活性成分也可以作为大丸剂、药糖剂或糊剂呈现。组合物还可以含有配制剂，如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。为此，可以通过任何已知的技术干燥益母草碱化合物组合物，例如冻干，并在使用前重建。
[0113]
适于在口中局部施用的制剂包括包含在调味基质中的活性成分的锭剂，调味基质通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶，包含在惰性基质中的活性成分的锭剂，惰性基质例如明胶和甘油、或蔗糖和阿拉伯胶，包含在合适液体载体中的活性成分的漱口水，和包含活性成分的巧克力。
[0114]
根据本主题发明的适于局部施用的制剂可以配制成软膏、霜剂、混悬剂、洗剂、散剂、溶液、糊剂、凝胶、喷雾剂、气溶胶或油。任选地，制剂可以包含贴片或敷料，例如浸渍有活性成分的绷带或胶布，以及任选的一种或更多种赋形剂或稀释剂。局部制剂优选地包含促进活性成分通过皮肤吸收并进入血流的化合物。
[0115]
适于鼻内施用的制剂，其中载体是固体，包括具有粒度为例如约20至约500微米的粗粉末，其以吸入鼻烟的方式施用，即从靠近鼻子的粉末容器通过鼻腔通道快速吸入。其中载体是用于通过喷雾器施用的液体的合适制剂包括试剂的水溶液或油溶液。制剂优选地可以包括促进活性成分通过皮肤吸收并进入血流的化合物。
[0116]
用于口服施用的液体制剂可以采用例如酏剂、溶液、糖浆或混悬剂的形式，或者其可以作为干产品存在，以在使用之前用水或其它合适的载剂构建。这种液体制剂可以通过常规方法可接受的添加剂制备，添加剂如助悬剂(例如山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化可
食用脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯树胶)；非水介质(例如杏仁油、油酯、乙醇或分馏植物油)；防腐剂(例如甲基或丙基对羟基苯甲酸酯或山梨酸)。制剂还可以根据情况包含缓冲盐、防腐剂、调味剂、着色剂和甜味剂。
[0117]
对于经口腔施用，组合物可以采用以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。
[0118]
为了延长递送，可以将化合物组合物配制成透皮递送体系，其制造为贴盘或贴剂，其缓慢释放用于经皮吸收的化合物组合物。为此，可以使用渗透促进剂以促进化合物组合物的经皮渗透。
[0119]
任选地，可以采用其它的递送系统。脂质体和乳剂是可以用于递送益母草碱化合物组合物的递送载剂。也可以使用一些有机溶剂如二甲基亚砜(dmso)，尽管通常以更大的毒性为代价。
[0120]
应当理解，除了上述具体提及的成分之外，可用于本发明的制剂可以包括现有技术关于所讨论制剂类型的其他常规试剂。例如，适于口服施用的制剂可以包括其它试剂例如甜味剂、增稠剂和调味剂。还旨在将本发明的试剂、组合物和方法与其它合适的组合物和疗法组合。
[0121]
在一个实施方案中，本发明的组合物可以局部施用于需要治疗的区域；这种局部施用可以通过例如口服施用例如包含活性成分的片剂、胶囊或糖浆来实现。
[0122]
试剂盒，在本发明的另一个方面，本文描述了用于治疗本文所述的疾病、病况或病症的试剂盒。例如，本发明的组合物可以包含在试剂盒中。试剂盒可以包括容器。容器可以包括瓶、金属管、层压管、塑料管、分配器、吸管、加压容器、隔离容器、包装、隔室或其它类型的容器，例如注射或吹塑塑料容器，其中保存了分散体或组合物或所期望的瓶、分配器或包装。试剂盒和/或容器可以在其表面上包括标识。例如，标识可以是词语、短语、缩写、图片或符号。
[0123]
容器可以分配预定量的组合物。在其它实施方案中，可以将容器挤压(例如金属管、层压管或塑料管)以分配所期望量的组合物。组合物可以作为喷雾剂、气溶胶、液体、流体、半固体或固体分配。在优选的实施方案中，组合物作为自由流动的粉末或颗粒分配。容器可以具有喷雾、栗或挤压装置。试剂盒还可以包括用于使用该试剂盒组分以及使用包含在容器中的任何其他组合物的说明书。说明书可以包括如何应用、使用和维护该组合物的说明。如果需要，组合物可以存在于可以含有包含化合物组合物的一个或更多个单位剂型的包装或分配装置中。包装可以例如包括金属箱或塑料箱，如泡罩包装。包装或分配装置可以伴有施用说明书。
[0124]
将通过具体实施例详细地描述本发明。提供以下实施例用于说明目的，并不旨在以任何方式限制本发明。本领域技术人员会容易地识别可以改变或修改以产生基本相同结果的各种非关键参数。
[0125]
应当注意，在此所述的实施例仅为本发明的部分实施例，而非本发明的全部实现方式，所述实施例只有示例性，其作用只在于提供理解本发明内容更为直观明了的方式，而不是对本发明所述技术方案的限制。在不脱离本发明构思的前提下，所有本领域普通技术人员没有做出创造性劳动就能想到的其它实施方式，及其它对本发明技术方案的简单替换和各种变化，都属于本发明的保护范围。