一种真海鞘活性干粉及其制备方法和应用

1.本发明属于功能食品制备技术领域，具体涉及一种真海鞘活性干粉及其制备方法和应用，即在预防地塞米松引起的糖/脂代谢紊乱中的应用。


背景技术：

2.地塞米松又名氟美松、氟甲强地松龙、德沙美松，是一类人工合成的糖皮质类激素。可用于治疗多种症状，包含风湿性疾病，某些皮肤病、严重过敏、哮喘、慢性阻塞性肺病、脑水肿等，也可能与抗生素合并用于结核病患者。其药理作用主要是抑制过度激活的免疫反应，以减少器官损伤。地塞米松最近又发现可作为短期治疗重症covid-19的有效药物，在重症患者中使用地塞米松治疗可以有效的降低患者死亡率。
3.然而，地塞米松过量(无论是长期治疗还是高剂量的短期治疗)会导致一定的副作用，主要包括葡萄糖耐受不良、血糖异常和血脂异常。并且，地塞米松引起的这些糖/脂代谢紊乱的副作用又与covid-19不良预后紧密相关。因此，在使用地塞米松治疗重症新冠疾病时，应同时注重血糖和血脂水平的管理；从而更有利于患者恢复，缩短治疗时间。
4.目前，临床对于地塞米松引起的副作用的治疗主要依赖于降血糖药物，比如二甲双胍，或使用外源胰岛素。而这些药物长期服用会引发肝、肾、骨等多方面健康问题，还会产生一定的赖药性。而功能性食品具有副作用小，营养成分多样等优点，然而，预防和缓解地塞米松副作用的功能食品或生物制品的应用目前较少。
5.真海鞘(halocynthia roretzi)属于于脊索动物门(chordates)，尾索动物亚门(urochordata)，海鞘纲(ascidiacea)。真海鞘多分布于多分布于日本太平洋侧的三陆沿海和日本海男鹿半岛以北海域，在韩国多分布于东海岸和南海岸。真海鞘富含多种人体必需的营养物质和活性分子，是一类非常好的海洋保健食品，深受日、韩国民的青睐。近年，山东威海及辽宁等地区引进日本真海鞘并试养成功，现已形成规模化养殖产业。但截止目前，鲜少有涉及对真海鞘营养作为功能性食品的生理活性的相关报道。


技术实现要素：

6.本发明提供一种真海鞘活性干粉及其制备方法和应用，所提供的真海鞘活性干粉具有预防和缓解地塞米松引起的糖/脂代谢紊乱的功效，可用于制备功能性食品来辅助治疗地塞米松使用时引起的副作用。
7.本发明首先提供真海鞘内囊在制备用于预防或治疗地塞米松引起的糖/脂代谢紊乱的制品中的应用；
8.所述的制品，为功能性食品或药品；
9.本发明还提供一种真海鞘活性组分，是将真海鞘内囊烘干粉碎后制备的。
10.本发明另一个方面还提供一种具有预防或治疗地塞米松引起的糖/脂代谢紊乱的制品，所述的制品中包含有药理有效浓度的上述的真海鞘活性组分。
11.本发明提供了真海鞘活性干粉作为功能性食品对于治疗地塞米松引起的糖/脂代
谢紊乱的应用。实验结果表明食用真海鞘内囊干粉可有效的降低地塞米松引起的高血脂，并且增强连续进行地塞米松注射的大鼠的血糖耐受。本发明方法具有制备过程简便的优势，活性干粉的制备保留了真海鞘在调控血糖和血脂方面的活性，并且干粉的制备提高了活性成分在食品中的浓度。
附图说明
12.图1：真海鞘解剖照片图，其中左侧图为完整真海鞘个体图；右侧图为真海鞘内囊照片图。
13.图2：真海鞘内囊干粉中的降糖降脂成分结构图。
14.图3：真海鞘内囊干粉对正常大鼠血糖水平的影响图。
15.图4：真海鞘内囊干粉对于地塞米松注射引起的糖/脂代谢紊乱模型大鼠的血糖和血脂水平的影响图，其中图4-1每组大鼠的血糖值图；图4-2每组大鼠口服耐糖量图；图4-3.每组大鼠血浆胆固醇含量图；图4-4为每组大鼠血浆甘油三酯含量图，*p《0.05，**p《0.01，n＝15。
具体实施方式
16.申请人在研究中发现地塞米松注射诱导了大鼠血糖和血脂明显升高，而食用真海鞘内囊干粉对正常大鼠血糖水平无影响，但可以显著改善糖/脂代谢紊乱模型大鼠的口服耐糖量；并可显著降低糖/脂代谢紊乱模型大鼠的血清脂质水平。
17.下面结合实施例和附图对本发明的方法进行详细的描述。
18.实施例1：制备真海鞘活性组分
19.制备真海鞘的活性组分，其具体步骤如下：
20.1)真海鞘预处理
21.真海鞘需预先养殖在清洁的海水养殖间内3-5天，吐尽肠道内泥沙，用刷子将海鞘表面的污泥洗净，放置干净的容器中。
22.2)解剖样品
23.将海鞘的硬壳剪开，并剪去其体后根状突起部分。将海鞘内囊团与红色外鞘分开，尤其是在出入水口的部分，仔细的将肉与壳分剥离开，将海鞘肉用纱布过滤出多余的液体，保留柔软的内囊组分(图1)。
24.3)真海鞘组织干粉制备
25.将海鞘内囊至于60℃烘箱去除水分后，研磨机粉碎至粉末状。
26.基于超高分辨率质谱技术发展的代谢组鉴定技术用于分析真海鞘内囊干粉成分，得到的化合物信息利用human metabolome database(http://www.hmdb.ca/)对真海鞘代谢组中鉴定的化合物进行了初步注释，并对其生理特性和营养价值进行评价。然后通过与collection of open natural products database(https://coconut.naturalproducts.net/)、mechemexpress(https://www.medchem express.cn/)及相关发表文献的进行组分的结构比较。
27.经过human metabolome database、collection of open natural products database、mechemexpress三个化合物数据库以及相关文献对代谢组数据进行分析和筛选，
确定制备的真海鞘活性组分中包含有12个具有调控糖/脂代谢的分子，分子结构如图2所示。其中l-arabinose、metformin、trigonelline、nateglinide、allantoin具有抗糖尿病，增强胰岛素敏感，降低血糖水平功效；而pravastatin、clofibrate、astaxanthin、acadesine、hesperetin、daidzein、gemfibrozil具有调节血浆脂质水平，降低血浆胆固醇和甘油三酯含量的活性。
28.实施例2：真海鞘的活性组分的效果检测
29.将制备的真海鞘活性组分来治疗地塞米松诱导的糖/脂代谢紊乱大鼠，具体方法步骤如下：
30.1)真海鞘对正常动物血糖的影响实验。
31.选取健康成年sd大鼠30只，按禁食4小时的血糖水平分组，随机分为对照组和受试样品组，每组15只。受试样品组给予高剂量(250mg/kg)实施例1制备的真海鞘内囊干粉，对照组给予同体积溶剂(蒸馏水)。连续给30天后，禁食4小时测血糖值，比较各组血糖值。
32.2)真海鞘对地塞米松诱导胰岛素抵抗糖/脂代谢紊乱模型大鼠血糖和血脂的影响实验。
33.健康雄性大鼠(150
±
20g)，普通维持料适应饲养5天，禁食4小时，取尾血，测定给葡萄糖前(0小时)血糖值，给2.5g/kg bw葡萄糖后测定0.5、2小时血糖值，作为该批次动物基础值。以0、0.5小时血糖水平分5个组，即1个空白对照组、1个模型对照组和3个剂量组，每组15只。其中空白对照组不做处理，3个剂量组灌胃给予不同剂量的真海鞘内囊干粉，模型对照组给予同体积纯水，连续35天。1周后模型对照组和3个剂量组更换高热能饲料，喂饲2周后，模型对照组和3个剂量组在高热能饲料基础上分别给予地塞米松0.8mg/kg bw腹腔注射(0.008％地塞米松注射量1ml/100g体重)，每日1次，连续12天。试验结束后，各组动物禁食4小时，然后检测血糖值、口服糖耐量、胆固醇及甘油三脂水平。
34.具体的实验结果如下：
35.1)真海鞘对大鼠糖代谢的影响
36.灌胃给予真海鞘内囊干粉30天后，与空白对照组比较，结果如图3所示，两组大鼠血糖值无变化，表明喂饲真海鞘内囊干粉对正常大鼠血糖值无影响。
37.各剂量组灌胃受试样品35天后，与空白对照组比较，如图4-1所示，模型对照组大鼠血糖值上升了43.23％，统计结果显示差异有显著性(p《0.05)；可判定地塞米松引起了大鼠血糖的升高。与模型对照组比较，喂食真海鞘各剂量组大鼠血糖值都有一定程度的降低。
38.各组动物给予葡萄糖后，模型对照组大鼠在0.5h，2小时检测的血糖值明显高于正常大鼠(图4-2)，差异有显著性(p《0.01，p《0.05)，可判定地塞米松引起了大鼠糖代谢紊乱。
39.与模型对照组比较，喂食真海鞘内囊干粉中剂量组(125mg/kg)0.5h时血糖水平降低25.55％，血糖变化曲线对比模型组也处于低位，表明真海鞘内囊干粉提高了地塞米松处理后的大鼠糖耐量(图4-2)，并且能有效的预防地塞米松引起的糖代谢紊乱。
40.2)真海鞘对大鼠脂代谢的影响
41.灌胃给受试样品35天后，与对空白对照组相比，模型对照组血清总胆固醇含量增加了69.43％(图4-3)、血清总甘油三酯含量升高了一倍(图4-4)，差异有显著性(p《0.01)，可判定地塞米松引起了大鼠脂代谢紊乱,。
42.与模型对照组比较，真海鞘内囊干粉125mg/kg、250mg/kg两个剂量组可明显降低
血清总胆固醇、甘油三酯(图4-3；4-4)，且差异有显著性(p《0.05)，表明真海鞘内囊干粉的喂饲有效的预防了地塞米松引起的脂代谢紊乱。