一种含表皮生长因子的化妆品组合物及其制备方法与流程

1.本发明属于日化产品领域，具体涉及一种含表皮生长因子的化妆品组合物及其制备方法。


背景技术：

2.皮肤被细分为表浅较薄的表皮，含更多纤维的真皮及皮下组织。表皮由覆盖于胚胎表面的外胚层分化而来，由多层鳞状上皮构成，从厚厚的头皮到全身最薄的眼睑皮肤，其厚度各有所不同。表皮又可以细分为角朊细胞，树枝状细胞和迈克尔细胞；真皮主要由中胚层发育而来，位于表皮之下，与表皮质检靠一层基底膜分开。真皮主要由结缔组织构成，也包括了血管、神经、肌肉、淋巴、汗腺和皮脂腺，浅在较薄的被称为乳头层，而深层较厚的则被称为网状层。真皮的主要成分是胶原，胶原纤维在乳头层含量很少而且排列不规则，但在网络层则呈束状平行于表面排列；皮下组织或称脂膜，是体表的浅筋膜，由疏松结缔组织和脂肪组织构成。真皮向皮下组织内伸出许多大小不等的胶原纤维束，使皮肤与皮下组织牢固连接，两者之间无明显界限。
3.皮肤老化是由自然因素或非自然因素造成的皮肤衰老现象。人出生后皮肤组织日益发达，功能逐渐活跃，当到达某种年龄就会开始退化，这种退化往往在人们不知不觉中慢慢进行。皮肤组织的成长期一般结束于25岁左右，有人称此期为“皮肤的弯角”，自此后生长与老化同时进行，皮肤弹力纤维渐渐变粗，40-50岁初老期，皮肤的老化慢慢明显，但老化程度因人而异。
4.皮肤老化现象主要表现在两个方面：
5.1.皮肤组织衰退。皮肤的厚度随着年龄的增加而有明显改变。人的表皮20岁时最厚，以后逐渐变薄，到老年期颗粒层可萎缩至消失，棘细胞生存期缩短。表皮细胞核分裂增加，故黑色素亦增多，以致老年人的肤色多为棕黑色。由于老化细胞附着于表皮角质层，使皮肤表面变硬，失去光泽。真皮在30岁时最厚，以后渐变薄并伴有萎缩。皮下脂肪减少，并由于弹力纤维与胶原纤维发生变化而渐失皮肤弹性和张力，更进一步导致皮肤松弛与皱纹产生。
6.2.生理功能低下。皮脂腺、汗腺功能衰退，汗液与皮脂排除减少，皮肤逐渐失去昔日光泽而变得干燥。血液循环功能减退以补充皮肤必要的营养，因此老年人皮肤伤口难愈合。
7.细胞生长因子是一类能在骨髓造血微环境中其作用的早期造血刺激因子，具有多种生物活性。其中包括表皮生长因子，含有3个二硫键的小分子丝裂原。参与正常细胞的生长、肿瘤形成、创伤愈合等过程。其序列和功能与tgf-α同源。能刺激表皮和上皮组织增生的多肽类促分裂素。并可抑制胃酸分泌。由53个氨基酸残基组成，其前体分子质量超过100kda。
8.现有技术公开了含有表皮生长因子的化妆品组合物。cn101816620a公开了一种美白化妆品及其制备方法和应用。该化妆品由如下按质量百分数计的组分组成：重组人血管
生成素0.00001～0.001％，金属硫蛋白0.00001～0.001％，人表皮生长因子0.00001～0.001％，il-1ra0.00001～0.001％，超氧化歧化酶0.1～0.5％，低分子肝素钠0.1～0.5％，熊果苷1～5％，稳定剂5～25％，透明质酸0.02～0.3％，甲基丙二醇0.5～5％，乳酸杆菌/绿豆发酵液0.5～3.5％，溶解蛋白酶0.5～5％，维生素c磷酸酯钠0.5～8％，1，2己二醇或1，2辛二醇0.3～0.7％，燕麦β葡聚糖1～5％，大豆异黄酮1～5％，余量为水。该发明美白化妆品可以长期保存，对皮肤无副作用，适合长期使用。
9.cn113813192a公开了一种帮助皮肤修复的化妆品及其制备方法，化妆品配方按照质量百分数包括：0.06～0.12％重组人表皮生长因子，2.5～5.0％芦荟胶，0.1～0.2％平均分子量为3kda～10kda低分子量透明质酸钠，0.2～0.4％海带提取物，94.44～96.98％基料；其中重组人表皮生长因子、芦荟胶、海带提取物在皮肤保湿和修复上具有协同作用，能够最大程度的利用好微量的重组人表皮生长因子，产品能够高效的帮助皮肤修复。
10.cn109674682a公开了一种富含细胞生长因子的化妆品制剂，包括以下组成成分：stp0.01～0.2％、细胞生长因子0.01～0.1％、鱼油1～10％、表面活性剂1～10％、保湿剂1～15％、抗氧化剂0.1～1％、ph调节剂0.1～3％、乳化剂3％～5％、天然植物提取物0.1～5％和去离子水；该专利提出了一种富含细胞生长因子的化妆品制剂，能够不断以新的细胞取代老化的细胞，因此通过皮肤的更新产生防皱、祛皱作用；可预防皮肤皱纹、干燥、松垂、衰老、光损伤，或者改善皮肤的肌理、平滑性；可加强化妆品的乳化效果，提高化妆品的稳定性。


技术实现要素：

11.本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种含表皮生长因子的化妆品组合物及其制备方法，该化妆品组合物采用聚乳酸负载表皮生长因子，可均匀分布表皮生长因子，提高表皮生长因子的对人真皮成纤维细胞有促增殖能力，从而具有改进的美容效果。
12.本发明的技术方案如下：
13.一种含有人表皮生长因子的化妆品组合物，其含有如下按质量百分比计的成分：
[0014][0015][0016]
所述wt％以化妆品组合物的总重量为基准计。
[0017]
在一个优选实施方案中，化妆品组合物包括：
[0018][0019]
在另一优选实施方案中，化妆品组合物包括：
[0020][0021]
表皮生长因子纯度可为85-99％。所述的表皮生长因子可为使用基因工程方法制备的重组人表皮生长因子或市售的人表皮生长因子产品。
[0022]
非离子型表面活性剂可以选自聚氧乙烯油基醚、聚氧乙烯硬脂醚、吐温20、吐温40、吐温、60、吐温80、聚氧乙烯单硬脂酸酯、聚氧乙烯甘油三异硬脂酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、硬脂酸硬脂酯、硬脂酸聚氧乙烯月桂基醚、乙二醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯三油酸甘油酯等中的一种或多种。
[0023]
聚乳酸的粒度优选为0.05～1微米，更优选0.1-0.4微米。可以采用市售的医药或化妆品用聚乳酸产品。
[0024]
所述保湿剂优选为透明质酸钠。
[0025]
所述的油脂为角鲨烷、羊毛醇、鲸蜡硬脂醇、聚二甲基硅氧烷中的一种或多种。
[0026]
ph调节剂可以为柠檬酸-柠檬酸钠。
[0027]
所述防腐剂可以为尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯中的一种或多种。
[0028]
基质可包括水和/或多元醇，水与多元醇的质量比可为任意比例，例如1:0.1-10，进一步例如1:0.5-5，取决于具体产品，多元醇可以选自乙二醇、二甘醇、一缩二丙二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、1,3-丁二醇、甘油中的一种或多种。优选使用甘油和/或水。
[0029]
优选地，油脂和保湿剂存在至少一种。
[0030]
所述的化妆品可包括护肤类及抗皱产品、清洁类化妆品、功能性化妆品和美容化
妆品；所述的清洁类化妆品包括清洁霜、洗面乳、沐浴乳和剃须用品。
[0031]
本发明进一步提供了上述化妆品组合物的制备方法，该方法包括：
[0032]
(1)将非离子型表面活性剂、油脂、保湿剂、基质加热混合(例如在60-100℃，优选65-85℃，优选70-80℃下混合)；
[0033]
(2)冷却至37-50℃，优选37-45℃后，加入聚乳酸粉末和表皮生长因子或提前混合的聚乳酸粉末和表皮生长因子、ph调节剂和防腐剂混合均匀，真空脱气。
[0034]
本发明的优点
[0035]
根据本发明化妆品组合物，表皮生长因子均匀分布于组合物中，在长期存放期间活性不降低，延长表皮生长因子的生物效力，对人真皮成纤维细胞有改进的促增殖能力，从而改善衰老，起到改进的美容效果。
附图说明
[0036]
图1是表皮生长因子作用人真皮成纤维细胞的效果图。
具体实施方式
[0037]
以下通过具体实施例来进一步说明本发明。另外需要说明的是，本技术中，％按重量计，除非另有规定。
[0038]
实施例1
[0039]
人表皮生长因子的获取
[0040]
从人脐带间充质干细胞中抽提总rna，逆转录为cdna。根据人egf全长基因序列，设计pcr引物。egf上游引物序列：5
’‑
caagagtccagcttaatgcaggcag-3’，下游引物序列：5
’‑
gctagaaggggaactcgcagacgta-3’。以上所获cdna为模板，通过pcr获取egf基因。用nde，bamh1双酶切egf和pet-28a质粒，t4 dna连接酶连接，连接物转化感受态大肠杆菌dh5α,重组质粒pet-28a构建成功后，转化入大肠杆菌bl21表达。表达的重组人细胞生长因子通过镍柱纯化，获得目标重组蛋白，纯度约95％。
[0041]
实施例2
[0042]
一种护肤品，其包括：
[0043]
[0044]
将合成角鲨烷、吐温20、透明质酸钠、甘油、去离子水加热至70℃充分混合，冷却至约40℃，将表皮生长因子加入聚乳酸粉末(粒度0.05-1微米)混合，然后与ph调节剂和防腐剂一起加入合成角鲨烷、吐温20、透明质酸钠、甘油、去离子水的混合物中混合均匀，真空脱气。
[0045]
实施例3
[0046]
一种护肤品，其包括：
[0047][0048]
将合成角鲨烷、吐温20、透明质酸钠、甘油、去离子水加热至70℃充分混合，冷却至约40℃，将表皮生长因子加入聚乳酸粉末(粒度0.05-1微米)混合，然后与ph调节剂和防腐剂一起加入合成角鲨烷、吐温20、透明质酸钠、甘油、去离子水的混合物中混合均匀，真空脱气。
[0049]
实施例4
[0050]
一种护肤品，其包括：
[0051][0052]
将合成角鲨烷、吐温20、透明质酸钠、甘油、去离子水加热至70℃充分混合，冷却至约40℃，将表皮生长因子加入聚乳酸粉末(粒度0.05-1微米)混合，然后与ph调节剂和防腐
剂一起加入合成角鲨烷、吐温20、透明质酸钠、甘油、去离子水的混合物中混合均匀，真空脱气。
[0053]
对比例1
[0054]
一种护肤品，其包括：
[0055][0056]
将合成角鲨烷、吐温20、透明质酸钠、甘油、去离子水加热至70℃充分混合，冷却至约40℃后，加入表皮生长因子、ph调节剂和防腐剂混合均匀，真空脱气。
[0057]
化妆品作用人真皮成纤维细胞的效果试验人真皮成纤维细胞，由16周岁人包皮细胞分离而来，达到80-90％融合，消化，以5*104/ml的细胞密度铺96孔板，每孔100μl，12小时后加化妆品组合物10μl，实验分为实施例2组、实施例4组和对比例1组。每组设4复孔。37℃，5％co2，饱和湿度培养箱孵育48小时，加mtt，继续孵育4小时候加dmso，570nm波长下测吸收光度值，实验重复三次。
[0058]
结果显示，实施例2组和实施例4组与对比例1组相比，吸光度值明显增加，有显著性差异，如图1所示。图1的结果表明，在一定浓度范围内，相比于对比例1组，本发明实施例对人真皮成纤维细胞有明显提高的促增值能力。
[0059]
本发明的实施例2和实施例4化妆品组合物存放半年后，对成纤维细胞的促增殖能力保持基本不变。
[0060]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。