一种改良的大柴胡汤汤剂的制备方法与流程

1.本发明属于中药现代化领域，具体涉及一种改良的大柴胡汤汤剂的制备方法。


背景技术：

2.大柴胡汤方出自张仲景的《伤寒杂病论》，由柴胡、黄芩、芍药、半夏、生姜、枳实、大枣、大黄组成，具有和解少阳，内泻热结之功。在中医的理论里，少阳包括胆与三焦，若少阳受邪，枢机不利，肝胆气机郁滞，必然影响三焦气化功能，若肝失疏泄，横逆犯胃，因而出现胸胁苦满，或胁下痞硬，或腹中痛等症，若伤及脾胃，气机壅塞，土壅木郁，燥热与糟粕互结，积于胃肠，阻滞腑气通降，可引起腹胀满而大便秘结等证候。由于少阳三焦为通行元气和运行水谷之要道，若邪热壅滞胆腑，上不得越，下不得泄，胆热木郁，克脾犯胃，胃失和降，可出现呕吐、泛酸、腹胀痛、纳差等病证。
3.方中柴胡专入少阳、疏邪透表为君药，黄芩擅清少阳之郁热，与柴胡同用，能和解少阳，是为少阳病未解、往来寒热、胸胁苦满而设；少用大黄泻热通腑，枳实行气破结，二者相配，可内泻热结，是为“热结在里”之心下痞满硬痛、大便不解、呕不止、郁郁微烦而设；芍药缓急止痛，配大黄可治腹中实痛，伍枳实能调和气血，协柴胡、黄芩清肝胆之热，以防木乘中土；半夏和胃降逆，生姜重用则止呕之功更著，以治呕逆不止；大枣和中益气，合芍药酸甘化阴，既可防热邪入里伤阴之虞，又能缓和枳实、大黄泻下伤阴之弊。总之，本方配伍体现了和解及攻下两法的结合运用，但以和解少阳为主、泻下之力较缓。
4.大柴胡汤在临床应用广泛，疗效稳定清晰，但其具体的功效物质基础尚不明确，并且目前大柴胡汤的制备方法、检测方法均不够完善，没有标准的制备工艺流程，大柴胡汤质量标准也不完善，导致临床上使用的大柴胡汤的质量参差不齐，使得大柴胡汤的临床功效大打折扣。
5.因此，寻找一种能够使得大柴胡汤中主要药效成分的含量增加的改良的大柴胡汤汤剂的制备方法，是目前急需解决的问题。


技术实现要素：

6.为了解决上述技术问题，本发明在改良的大柴胡汤汤剂制备方法的筛选过程中首次引入q-markers概念，筛选出了一种改良的大柴胡汤汤剂的制备方法，通过该方法制备的改良的大柴胡汤汤剂具有显著提高的和解少阳内泻热结功效。
7.具体地，通过以下几个方面的技术方案实现了本发明：
8.在第一个方面中，本发明提供了一种改良的大柴胡汤汤剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
9.取适量制备大柴胡汤所需的各种中药材，加水8-12倍，武火煎煮至沸腾，后文火煎煮20-50min，得适量煎煮液，过滤去渣滓，重复煎煮2-4次，合并滤液后，再文火煎煮20-50min，浓缩煎液，得到改良的大柴胡汤汤剂，所述中药材为柴胡、黄芩、芍药、半夏、枳实、生姜、大枣和大黄。
10.作为可选的方式，在上述制备方法中，所述改良的大柴胡汤汤剂的出膏率为15％-30％。
11.优选地，所述出膏率为25％-30％。
12.作为可选的方式，在上述制备方法中，所述方法制备得到的改良的大柴胡汤汤剂中主要活性物质柴胡皂苷b2、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷和芍药苷的含量显著增加，且所述方法制备得到的改良的大柴胡汤汤剂和解少阳内泻热结的功效显著增强。
13.作为可选的方式，在上述制备方法中，制备大柴胡汤所需的各种中药材以重量计分别为：柴胡22.08g、黄芩8.28g、芍药8.28g、半夏12.00g、枳实11.66g、生姜13.80g、大枣11.04g和大黄5.52g。
14.作为可选的方式，在上述制备方法中，所述制备方法优选包括以下步骤：
15.取适量制备大柴胡汤所需的各种中药材，加水10倍，武火煎煮至沸腾，后文火煎煮40min，得适量煎煮液，过滤去渣滓，重复煎煮3次，合并滤液后，再文火煎煮25min，浓缩煎液，得到改良的大柴胡汤汤剂。
16.在第二个方面中，本发明提供了上述第一个方面所述的改良的大柴胡汤汤剂制备方法的筛选方法，其特征在于：所述筛选方法包括以下步骤：
17.(1)通过大柴胡汤功效q-markers精准分析发现与特定功效对应的一种或多种活性成分；
18.(2)以步骤(1)中的与特定功效对应的活性成分作为药效标志物(q-markers)，利用高效液相色谱法(hplc)测量采用候选煎煮条件制备得到的大柴胡汤汤剂中所述一种或多种q-markers的含量；和
19.(3)选择所述大柴胡汤汤剂中所述一种或多种q-markers的含量较高和出膏率较高的煎煮条件，将其作为改良的大柴胡汤汤剂的制备方法。
20.作为可选的方式，在上述筛选方法中，所述q-markers为柴胡皂苷b2、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷和芍药苷。
21.作为可选的方式，在上述筛选方法中，所述hplc包括以下步骤：
22.(1)将大柴胡汤制成供试品溶液：
23.将待测大柴胡汤煎液定容于250ml容量瓶中，精密量取1ml，置10ml的容量瓶内，加入一定量有机溶剂，摇匀，超声提取10min，静置，放冷，用有机溶剂定容至刻度线，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶液；
24.(2)制备对照品溶液：
25.精密称取芍药苷对照品11.30mg、柚皮苷对照品11.26mg、橙皮苷11.30mg、新橙皮苷10.90mg、黄芩苷11.55mg、汉黄芩苷5.30mg、柴胡皂苷b
2 5.36mg、黄芩素4.80mg置于10ml容量瓶内，加有机溶剂使溶解并定容摇匀，作为储备液，精密移取上述储备液各1ml，置10ml容量瓶中，有机溶剂定容，摇匀，即得混合对照品溶液；
26.以及，(3)对所述供试品溶液和所述对照品溶液进行hplc检测，以测定大柴胡汤q-markers的含量：
27.其中，hplc检测的色谱条件如下所示：采用ods-c
18
硅胶色谱柱，以a相乙腈和b相0.05％磷酸水溶液作为流动相，紫外检测器，检测波长为230nm-280nm，流速1.0ml
·
min-1
，
柱温：25-35℃，进样体积10μl。
28.优选地，在步骤(1)和步骤(2)中的有机溶剂为甲醇。
29.优选地，在步骤(3)中采用的洗脱方式为梯度洗脱，洗脱条件为：0-5min，3％-3％a；5-10min，3％-10％a；10-15min，10％-12％a；15-25min，12％-16％a；25-30min，16％-16％a；30-50min，16％-20％a；50-55min，20％-20％a；55-75min，20％-25％a；75-85min，25％-46％a；85-90min，46％-85％a；90-100min，85％-85％a。
30.优选地，在步骤(3)中，使用ods-c
18
硅胶色谱柱，规格为4.6
×
250mm，5μm，检测波长如下所示：芍药苷230nm，柴胡皂苷b
2 254nm，柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩苷280nm，柱温为30℃。
31.作为可选的方式，在上述筛选方法中，所述候选煎煮条件是通过单因素分析和正交设计获得的，所述煎煮条件为浸泡时间、加水量、煎煮次数和/或煎煮时间。
32.在第三个方面中，本发明提供了上述第一个方面所述的制备方法制备得到的改良的大柴胡汤汤剂，所述改良的大柴胡汤汤剂中主要活性物质柴胡皂苷b2、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷和芍药苷的含量显著增加，且所述方法制备得到的改良的大柴胡汤汤剂和解少阳、内泻热结的功效显著增强。
33.本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：
34.本发明在改良的大柴胡汤汤剂制备方法的筛选过程中，首次引入q-markers概念，并根据q-markers筛选结果，将与大柴胡汤药效相关的主要活性物质柴胡皂苷b2、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷和芍药苷作为筛选改良的大柴胡汤汤剂的制备方法的主要功效标志物，通过单因素分析和正交设计筛选出了一种改良的大柴胡汤汤剂的制备方法，通过该方法制备的改良的大柴胡汤汤剂具有显著提高的和解少阳、内泻热结功效。
附图说明
35.附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
36.图1：大柴胡汤功效q-makers精准分析的流程图。
具体实施方式
37.下面参照具体的实施例对本发明做进一步说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明的范围。
38.实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。
39.下面实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。
40.实施例：
41.1.与大柴胡汤和解少阳内泻热结功效对应的q-markers的筛选
42.采用如图1中所示的流程对与大柴胡汤和解少阳内泻热结功效对应的q-markers
进行筛选，结果如下表1所示。
43.表1：与大柴胡汤和解少阳内泻热结功效对应的q-markers
44.[0045][0046]
注：加粗的药效为关键药效；加粗的成分为q-markers。
[0047]
如表1中所示，根据q-markers筛选结果，将与大柴胡汤药效相关的主要活性物质柴胡皂苷b2、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷和芍药苷作为筛选改良的大柴胡汤汤剂的制备方法的主要功效标志物。
[0048]
因此，通过对上述功效标志物进行含量测定筛选出的改良的大柴胡汤汤剂制备方法制备出的大柴胡汤汤剂应当具有显著提高的和解少阳内泻热结功效。
[0049]
2.改良的大柴胡汤汤剂制备方法的单因素分析
[0050]
在以下研究中，制备大柴胡汤所需的各种中药材以重量计分别为：柴胡22.08g、黄芩8.28g、芍药8.28g、半夏12.00g、枳实11.66g、生姜13.80g、大枣11.04g和大黄5.52g。
[0051]
2.1浸泡时间的考察
[0052]
加5倍量的水，分别浸泡0min、15min、30min、45min、60min，武火煮沸，后改为文火煎煮25min，后去渣滓继续文火浓缩，使每份所得药液体积为120ml，定容于250ml容量瓶中，每份平行两次。汤剂中8种指标性成分测定，结果如表2。
[0053]
取煎煮液50ml，置已干燥至恒重的陶瓷蒸发皿中，于100℃水浴锅上蒸干，再置105℃烘箱中干燥3h后取出，放入干燥器中冷却0.5h，迅速称定质量，计算浸膏得率，结果如表
2。
[0054]
综合考虑，得浸泡时间为30min时，效果较优。
[0055]
表2：不同浸泡时间煎液中功效标志物含量测定结果(mg
·
ml-1
)
[0056][0057]
2.2加水量
[0058]
分别加5倍、7倍、9倍、11倍量的水，无浸泡，武火煮沸，后改为文火，煎煮，使煎液体积为250ml后去渣滓再煎，使每份所得药液均浓缩到120ml，定容于250ml容量瓶中，每份平行两次。汤剂中8种指标性成分测定，结果如表3。
[0059]
取煎煮液50ml，置已干燥至恒重的陶瓷蒸发皿中，于100℃水浴锅上蒸干，再置105℃烘箱中干燥3h后取出，放入干燥器中冷却0.5h，迅速称定质量，计算浸膏得率，结果如表3。
[0060]
综合考虑，加水量为9倍时，效果较优。
[0061]
表3：不同加水量煎液中功效标志物含量测定结果(mg
·
ml-1
)
[0062][0063][0064]
2.3煎煮时间
[0065]
分别加5倍倍量的水，无浸泡，武火煮沸，后改为文火，煎煮15min、25min、35min，后去渣滓再煎，使每份所得药液均浓缩到120ml，定容于250ml容量瓶中，每份平行两次。汤剂中8种指标性成分测定，结果如表4。
[0066]
取煎煮液50ml，置已干燥至恒重的陶瓷蒸发皿中，于100℃水浴锅上蒸干，再置105℃烘箱中干燥3h后取出，放入干燥器中冷却0.5h，迅速称定质量，计算浸膏得率，结果如表
4。
[0067]
综合考虑，煎煮时间为35min时，效果较优。
[0068]
表4：不同煎煮时间煎液中功效标志物含量测定结果(mg
·
ml-1
))
[0069][0070]
综上，得到单因素为浸泡30min、加9倍量水、煎煮35min时得到的煎液较优，在此基础上对正交因素水平数进行设计。
[0071]
3.改良的大柴胡汤汤剂制备方法的正交设计
[0072]
3.1各因素及水平数
[0073]
表5：各因素及水平数
[0074][0075]
3.2综合评价法
[0076]
其评价方法采用aph-critic混合加权方法，得到评价指标(q-markers的含量及出膏率)的权重系数为二者权重系数的乘积占乘积之和的比例，从而对其进行综合评价。将ahp法和critic法分别得到的权重系数进行混合加权，既反映了中药复方君臣佐使的配伍规律，又客观反映了各组分间的相互作用。
[0077]
大柴胡汤中的柴胡为君药，其对应指标成分柴胡皂苷b2作为第一层次；枳实、黄芩为臣药，含有柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素，作为第二层次；白芍为佐药，含有芍药苷为第三层次；浸膏得率为第四层次，获得各项指标的ahp的权重系数，其矩阵图如表6。一致性比例因子cr＝0.0022771＜0.10，表明此判断矩阵具有满意的一致性，权重系数有效。计算柴胡皂苷b2、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、芍药苷、浸膏得率9项指标的权重系数分别为0.2123、0.1146、0.1146、0.1146、0.1146、0.1146、0.1146、0.0611、0.0387。
[0078]
表6：指标成对比较的判断优先矩阵
[0079][0080]
critic法是一种客观权重赋权法，可以客观的计算出各指标的权重系数，可以消除主观确定权重系数的人为因素。首先对数据进行无量纲化处理，即指标性成分无量纲化数据＝(实测值-最低值)/(最高值-最低值)
×
100。用spss 22.0统计软件处理无量纲化数据，得相关系数矩阵，计算相关数据：各指标对比强度(si)、冲突性(δi)、综合权重(ci)与权重(ωi)，结果见表7。
[0081]
表7：critic法相关计算数据
[0082][0083]
ahp-critic混合加权法确定权重系数：大柴胡汤由多味药组成，将ahp法和critic法分别得到的权重系数进行混合加权，既反映了中药复方君臣佐使的配伍规律，又客观反映了各组分间的相互作用，ahp-critic混合加权法较单用ahp法和critic法确定权重系数更加科学合理。即ω综合＝ωahpωcritic/∑ωahpωcritic，ωahp表示ahp法计算的权重系数，ωcritic表示critic法计算的权重系数，通过计算得胡皂苷b2、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、芍药苷、浸膏得率9项指标的权重系数分别为0.2469、0.0791、0.0772、0.0887、0.0781、0.0741、0.1312、0.1937、0.0311。
[0084]
3.3正交实验结果
[0085]
综合评分＝∑(成分含量/成分最大含量)
×
综合权重系数，结果见表8。方差分析见表9。
[0086][0087]
表9：大柴胡汤煎煮工艺方差分析结果
[0088][0089]
直观分析，各因素对提取工艺的影响顺序为b＞a＞c，方差结果得煎煮次数不同其有显著性差异。因此确定最优得煎煮工艺为a3b3c2，即加水量为10倍，煎煮3次，每次40min
[0090]
综上所述，本发明在改良的大柴胡汤汤剂制备方法的筛选过程中，首次引入q-markers概念，并根据q-markers筛选结果，将与大柴胡汤药效相关的主要活性物质柴胡皂苷b2、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷和芍药苷作为筛选改良的大柴胡汤汤剂制备方法的主要功效标志物，通过单因素分析和正交设计筛选出了一种改良的大柴胡汤汤剂的制备方法，通过该方法制备的改良的大柴胡汤汤剂具有显著提高的和解少阳内泻热结功效。
[0091]
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。