持续性免疫疗法的制作方法

持续性免疫疗法
1.相关申请
2.本技术要求2020年1月10日提交的美国临时专利申请号62/959,879和2020年6月10日提交的美国临时专利申请号63/037,520的优先权，其每篇的全部内容出于所有目的通过引用并入本文。
3.序列表
4.本技术含有序列表，该序列表已经以ascii格式电子提交，并在此通过引用其整体并入。所述ascii副本创建于2021年1月4日，命名为fpi_009_sequence_listing_st25.txt，并且大小为480字节。


背景技术：

5.已经评估许多治疗剂用于治疗癌症。然而，许多治疗剂在用作单一疗法时表现出有限的治疗功效或展现出不适合治疗的最大耐受剂量。现有的治疗失败包括癌细胞甚至在治疗后持续存在，这是由于细胞毒性治疗剂无法杀伤所有存活的肿瘤细胞，或者在被动或靶向免疫治疗剂的情况下，无法引发和募集足够数量的细胞毒性t细胞。此外，癌细胞可以转移以形成继发性肿瘤和/或进行基因重排，这允许它们抵抗先前导致患者肿瘤体积改善甚至表观完全肿瘤消退的抗癌剂治疗的治疗效果。
6.因此，需要提供持续形式的抗癌疗法的治疗剂和治疗方法，其可以单独使用或联合其他抗癌治疗剂使用以实现完全和/或持久的抗癌治疗效果。还极度需要对所谓的冷肿瘤有效的治疗，这种肿瘤对当前的免疫治疗形态具有抗性。


技术实现要素：

7.可以使用本发明公开的方法以诱导cd8
+
t细胞群浸润到肿瘤的核心中，甚至在通常对免疫疗法不高度响应的肿瘤(诸如冷肿瘤)中。根据本发明公开的方法，向有此需要的患者施用能够结合由肿瘤中至少一些细胞表达的靶标的放射免疫缀合物。在一些实施方案中，浸润到肿瘤中的cd8+t细胞群在患者中持续存在，并且可以因此起防止转移形成和/或降低复发可能性的作用。
8.在一个方面，提供了在有此需要的受试者中诱导cd8+t细胞浸润到肿瘤中的方法，其中该方法包括向受试者施用放射免疫缀合物或其药物组合物的步骤，其中放射免疫缀合物包含以下结构：
9.a-l-b
10.式i-a
11.其中
12.a是螯合部分的金属络合物，其中金属络合物包括actinium-225(
225
ac)或其子体，
13.l是接头，并且
14.b是能够结合由肿瘤中的至少一些细胞表达的第一肿瘤相关抗原的靶向部分；
15.条件是如果a-l-是如下所示的化合物1的金属络合物，则b不是ave1642
[0016][0017]
其中所述放射免疫缀合物的所述施用导致cd8
+
t细胞群浸润到肿瘤的核心中；其中所述cd8
+
t细胞群包含表达t细胞受体(tcr)的cd8+t细胞，该tcr对由肿瘤中的至少一些细胞表达的第二肿瘤相关抗原具有特异性；并且其中cd8+t细胞能够优先杀伤表达第二肿瘤相关抗原的细胞。
[0018]
在一些实施方案中，cd8+t细胞群以高于参考水平，例如，高于参考水平至少两倍、至少三倍、至少四倍或至少五倍的水平在肿瘤核心中可检测。
[0019]
在一些实施方案中，cd8+t细胞群占肿瘤核心中的细胞(例如活细胞)的至少5％、至少7.5％、至少10％、至少12.5％或至少15％。
[0020]
在一些实施方案中，cd8+t细胞占所述cd8+t细胞群的至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％％、至少65％或至少70％。
[0021]
在一些实施方案中，cd8+t细胞在施用步骤后至少10天、至少15天、至少20天、至少25天、至少30天、至少35天或至少40天在受试者中可检测。
[0022]
在一些实施方案中，第一肿瘤相关抗原不同于第二肿瘤相关抗原。在一些实施方案中，第二肿瘤相关抗原是新抗原。
[0023]
在一些实施方案中，肿瘤是原发性肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤是继发性肿瘤。
[0024]
在一些实施方案中，肿瘤不是高免疫原性的。例如，肿瘤可能是中等免疫原性或免疫冷的。
[0025]
在一些实施方案中，肿瘤在施用时的体积为至少100mm3、至少150mm3、或至少或约175mm3。
[0026]
在一些实施方案中，肿瘤是实体肿瘤。
[0027]
例如，实体肿瘤可以是肉瘤，例如选自血管肉瘤或血管内皮瘤、星形细胞瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、纤维肉瘤、胶质瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤(mfh)、间叶瘤或混合中胚层肿瘤、间皮肉瘤或间皮瘤、粘液肉瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤和滑膜肉瘤的肉瘤。在一些实施方案中，肉瘤是骨肉瘤。
[0028]
例如，实体肿瘤可以是癌，例如选自腺样囊性癌、肾上腺皮质癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、子宫内膜癌、胆囊癌、胃癌、头颈癌、肺癌(例如，小细胞肺癌或非小细胞肺癌，或肺腺癌)、神经母细胞瘤、神经内分泌癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、睾丸癌的癌。在一些实施方案中，癌是膀胱癌。在一些实施方案中，癌是胰腺癌。在一些实施方案中，癌是乳腺癌。在一些实施方案中，癌是头颈癌。在一些实施方案中，癌是肝癌。在一些实施方案中，癌是肺癌。在一些实施方案中，癌是脑癌。在一些实施方案中，癌是神经母细胞瘤。在一些实施方案中，癌是黑素瘤。
[0029]
在一些实施方案中，肿瘤是液体肿瘤。
[0030]
在一些实施方案中，施用步骤导致抑制肿瘤核心中的细胞增殖。在一些实施方案中，施用步骤导致减缓或抑制肿瘤的进展。在一些实施方案中，施用步骤导致肿瘤消退。在一些实施方案中，施用步骤导致肿瘤完全消退。在一些实施方案中，施用步骤预防或抑制肿瘤细胞的转移。
[0031]
在一些实施方案中，a-l-是选自下组的化合物的金属络合物：
[0032](i)[0033]
(ii)
[0034]
(iii)
[0035]
(iv)
[0036]
在一些实施方案中，l具有结构-l
1-(l2)
n-，如式i-b中所示：
[0037]
a-l
1-(l2)
n-b
[0038]
式i-b
[0039]
其中
[0040]
a是螯合部分的金属络合物，其中所述金属络合物包括actinium-225(
225
ac)或其子体；
[0041]
b是靶向部分；
[0042]
l1是任选取代的c
1-c6烷基、任选取代的c
1-c6杂烷基，或任选取代的芳基或杂芳基；
[0043]
n是1-5；并且
[0044]
每个l2独立地具有以下结构：
[0045]
(-x
1-l
3-z
1-)
[0046]
式iii
[0047]
其中
[0048]
x1是c＝o(nr1)、c＝s(nr1)、oc＝o(nr1)、nr1c＝o(o)、nr1c＝o(nr1)、-ch2phc＝o(nr1)、-ch2ph(nh)c＝s(nr1)、o或nr1；每个r1独立地是h、任选取代的c
1-c6烷基、任选取代的c
1-c6杂烷基，或任选取代的芳基或杂芳基，其中c
1-c6烷基可以由氧代(＝o)、杂芳基或其组合取代；
[0049]
l3是任选取代的c
1-c
50
烷基或任选取代的c
1-c
50
杂烷基；并且
[0050]
z1是ch2、c＝o、c＝s、oc＝o、nr1c＝o或nr1，其中r1是氢或任选取代的c
1-c6烷基或吡咯烷-2,5-二酮。
[0051]
在一些实施方案中，放射免疫缀合物包含以下结构：
[0052][0053]
其中b是靶向部分。
[0054]
在一些实施方案中，靶向部分包含多肽。
[0055]
在一些实施方案中，靶向部分包含抗体或其抗原结合片段。
[0056]
在一些实施方案中，靶向部分具有至少100kda、至少125kda或至少150kda的分子量。
[0057]
在一些实施方案中，靶向部分是小分子。
[0058]
在一些实施方案中，第一肿瘤相关抗原选自胰岛素样生长因子1受体(igf-1r)、肿瘤上皮标志物-1(tem-1)和成纤维细胞生长因子受体3(fgfr3)。
[0059]
在一些实施方案中，受试者是哺乳动物，例如人。在一些实施方案中，受试者需要治疗或预防癌症。在一些实施方案中，受试者经诊断为患有癌症。在一些实施方案中，受试者需要治疗难治性癌症。
[0060]
在一些实施方案中，施用步骤包括放射免疫缀合物的全身施用。在一些实施方案中，全身施用包括胃肠外施用，例如静脉内施用、动脉内施用、腹膜内施用、皮下施用或皮内施用。在一些实施方案中，全身施用包括肠内施用，例如，经胃肠施用或口服施用。
[0061]
在一些实施方案中，施用步骤包括放射免疫缀合物的局部施用。例如，局部施用可以包括瘤周注射和/或瘤内注射。
[0062]
在一些实施方案中，施用步骤包括使放射免疫缀合物与所述受试者的体液离体接触，其中所述体液包含至少一种癌细胞。
[0063]
在一些实施方案中，放射免疫缀合物不与另一种细胞毒剂联合施用。
[0064]
在一些实施方案中，该方法进一步包括在施用放射免疫缀合物的步骤之后向受试者施用附加治疗剂。例如，附加治疗剂可以是非细胞毒性剂。在一些此类实施方案中，放射免疫缀合物以较低的有效剂量施用和/或附加治疗剂以较低的有效剂量施用。
[0065]
定义
[0066]
如本文所用，向受试者“施用”药剂包括使所述受试者的细胞与该药剂接触。在一些实施方案中，“施用”药剂包括使所述受试者的细胞与该药剂在体内接触。在一些实施方案中，施用药剂，例如施用放射免疫缀合物，包括使含有细胞(例如，癌细胞)的患者的体液与该药剂离体接触。
[0067]
如本文所用，“抗体”指其氨基酸序列包括特异性结合指定抗原或其片段的免疫球蛋白及其片段的多肽。根据本发明的抗体可以是任何类型(例如，iga、igd、ige、igg或igm)或亚型(例如，iga1、iga2、igg1、igg2、igg3或igg4)。本领域普通技术人员将理解抗体的特征序列或部分可以包括在抗体的一个或多个区域(例如，可变区、高变区、恒定区、重链、轻链及其组合)中找到的氨基酸。此外，本领域普通技术人员将理解抗体的特征序列或部分可以包括一条或多条多肽链，并且可以包括在相同多肽链中或在不同多肽链中找到的序列元件。
[0068]
如本文所用，“抗原结合片段”是指保留亲本抗体的结合特征的特异性的抗体的部分。
[0069]
如本文所用，术语“结合(bind或binding)”，例如抗体或其抗原结合片段的结合是指与或对靶抗原的至少暂时相互作用或缔合。例如，“结合(bind或binding)”可以指放射免疫缀合物或cd8
+
t细胞进入与表达肿瘤相关抗原的癌细胞暂时或持续接触的过程。在本文所述的一些实施方案中，放射免疫缀合物的靶向部分能够结合肿瘤相关抗原。在此类实施
方案中，结合经由肿瘤相关抗原和放射免疫缀合物的靶向部分之间的相互作用发生。在本文所述的一些实施方案中，cd8
+
t细胞群的细胞能够结合肿瘤相关抗原。例如，结合包括cd8
+
t细胞经由tcr、cd8和mhc结合抗原之间的相互作用进入与抗原呈递细胞持续接触的过程。
[0070]
术语“双功能螯合物”或“双功能缀合物”可互换使用，并且如本文所用，是指含有螯合基团或其金属络合物、接头基团和靶向部分(诸如特异性结合至肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原的抗体或其抗原结合片段)的放射免疫缀合物化合物。
[0071]
术语“癌症”是指由恶性赘生性细胞，诸如肿瘤、赘生物、癌、肉瘤、白血病和淋巴瘤的增殖引起的任何疾病。
[0072]
如本文所用，术语“cd8
+
t细胞群”是指表达细胞表面糖蛋白cd8(分化簇8)的一个或多个t细胞的组。cd8是跨膜糖蛋白，其充当t细胞受体(tcr)的共同受体并结合主要组织相容性复合物。cd8在介导癌细胞破坏的细胞毒性t细胞的表面上表达，部分地通过识别与癌细胞相关的特定抗原。
[0073]
术语“检查点抑制剂”，也称为“免疫检查点抑制剂”(缩写为“ici”)是指阻断免疫检查点蛋白的作用，例如，阻断此类免疫检查点蛋白结合至其伙伴蛋白(partner protein)的药剂。已知一些癌细胞表达免疫检查点蛋白，导致t细胞无法将此类癌细胞识别为破坏的靶标。通常，检查点抑制剂通过阻断t细胞上的特定免疫检查点蛋白与靶细胞之间的相互作用来促进t细胞破坏癌细胞，否则这种相互作用将作为抑制t细胞破坏靶细胞的信号。检查点抑制剂包括阻断pd-1和pd-l1相互作用或阻断ctla-4和b7-1/b7-2相互作用的药物。具体检查点抑制剂的非限制性实例包括以下基于抗体的药物：伊匹单抗(ipilimumab)、纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维单抗(avelumab)、度伐鲁单抗(durvalumab)及西米普利单抗(cemiplimab)。
[0074]
如本文所用，术语“螯合物”是指可以在两个或更多个点处与中心金属或放射性金属原子键合的有机化合物或其部分。
[0075]
如本文所用，术语“缀合物”是指含有螯合基团或其金属络合物、接头基团并且任选地含有靶向部分(例如，抗体或其抗原结合片段)的分子。
[0076]
如本文所用，术语“化合物”意指包括所描绘结构的所有立体异构体、几何异构体和互变异构体。本文所述的化合物可以是不对称的(例如，具有一个或多个立体中心)。除非另有说明，预期所有立体异构体，诸如对映异构体和非对映异构体。含有不对称取代的碳原子的本公开的化合物可以以光学活性或外消旋形式分离。关于如何从光学活性起始材料制备光学活性形式的方法是本领域已知的，诸如通过外消旋混合物的拆分或通过立体选择性合成。
[0077]
如本文所用，短语“冷”或“免疫冷”，在用于提及肿瘤或癌症时，是指对检查点抑制(至少在不存在除检查点抑制剂之外的治疗剂的情况下)无响应性的肿瘤。通常，在不存在治疗剂的情况下，免疫冷肿瘤的特征在于肿瘤t细胞浸润的缺少或缺乏(paucity)。免疫冷肿瘤的实例包括但不限于以缺少t细胞浸润为特征的胶质母细胞瘤、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌和乳腺癌肿瘤。
[0078]
如本文所用，术语“核心”在用于提及肿瘤时是指肿瘤内距肿瘤的边缘边界(margin boundary)(也称为“边缘”或“边界”)至少约250μm的区域。
[0079]
如本文所用，短语“联合”在用于治疗或治疗剂时是指受试者同时暴露于两种或更
多种治疗剂或形态的那些情况。在一些实施方案中，彼此“联合”施用的疗法或治疗剂同时施用。在一些实施方案中，彼此“联合”施用的疗法或治疗剂贯序施用。在一些实施方案中，彼此“联合”施用的疗法或治疗剂以重叠给药方案施用。
[0080]
如本文所用，短语“细胞毒性”在用于提及药剂或疗法时是指，例如通过直接停止癌细胞分裂和生长来引起直接细胞杀伤的药剂或疗法。如本文所用，“细胞毒性”试剂和疗法不是指对细胞杀伤的仅有贡献是间接的那些试剂和疗法，例如，通过使得细胞更易于由免疫系统杀伤(诸如在免疫检查点抑制时发生)或通过抑制dna损伤修复。
[0081]
如本文所用，短语“在受试者中可检测”是指实体在受试者的组织或其样品(例如，肿瘤样品、血液样品等)中可检测。
[0082]
如本文所用，术语“减少”、“减少的”、“增加”、“增加的”、“降低”、“降低的”以及其他相关术语诸如“较大的”、“较高的”、“较少的”和“较低的”(例如，关于治疗结果或效果)具有相对于参考水平的含义，如本文所述。
[0083]
如本文所用，“检测剂”是指通过定位含有抗原的细胞而可用于诊断疾病的分子或原子。用检测剂标记多肽的各种方法是本领域已知的。检测剂的实例包括但不限于放射性同位素和放射性核素、染料(诸如与生物素-链霉亲和素复合物)、造影剂、发光剂(例如异硫氰酸荧光素或fitc、罗丹明、镧系磷光体、花青和近ir染料)和磁性剂，诸如钆螯合物。
[0084]
术语“dna损伤和修复抑制剂”(ddri)是指阻止由内源性或外源性染色体损伤引起的细胞dna损伤的修复，并且通过抑制维持细胞存活力所必需的正常发生的dna修复机制和相关过程起作用的药剂。
[0085]
如本文所用，术语“有效量”，在用于试剂(例如，放射免疫缀合物)时，是足以实现有益或期望结果，诸如临床结果的量。“有效量”取决于其所应用的环境。
[0086]
如本文所用，术语“免疫缀合物”是指包括靶向部分，诸如抗体(或其抗原结合片段)、纳米抗体、亲和体或来自纤连蛋白iii型域的共有序列的缀合物。在一些实施方案中，免疫缀合物包含平均每个靶向部分至少0.10个缀合物(例如，平均每个靶向部分至少0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、4、5或8个缀合物)。
[0087]
如本文所用，短语“免疫原性”，在用于提及肿瘤时，是指肿瘤在体内引发适应性免疫应答的能力。如本文所用，“高免疫原性”肿瘤是指对免疫检查点抑制具有高响应性的肿瘤，例如，当用免疫检查点抑制剂治疗时表现出肿瘤消退的肿瘤。如本文所用，“中等免疫原性”肿瘤是指对免疫检查点抑制具有中等响应性的肿瘤，例如，响应于免疫检查点抑制展现出至多延迟的肿瘤进展但不消退的肿瘤。
[0088]
如本文所用，术语“浸润”，在用于提及细胞例如免疫细胞时，是指此类细胞从受试者中的一个组织(例如血液或脾脏)移动到受试者中的另一个组织(例如，肿瘤)。因此，短语“肿瘤浸润”或“浸润到肿瘤中”是指细胞从另一个位置移动到肿瘤中，并且短语“肿瘤核心浸润”或“浸润到肿瘤核心中”是指细胞移动到肿瘤核心。
[0089]
如本文所用，短语“较低有效剂量”在与药剂(例如，治疗剂)结合的用作术语时，是指当该药剂在参考实验中用作单一疗法或借助其他治疗指导时，在治疗方案中以相比先前确定为治疗有效更低的剂量为治疗有效的药剂的剂量。
[0090]
如本文所用，短语“边缘区域”在用于提及肿瘤时是指距肿瘤的边缘边界的任一侧约250μm以内的区域。因此，如本文所用，“边缘区域”包括肿瘤内250μm宽的区域和肿瘤外
250μm宽的区域两者。
[0091]
如本文所用，术语“新抗原”是指先前未由免疫系统识别的新形成的抗原。新抗原可以以多种方式产生，例如，从改变的肿瘤或蛋白质(例如，从突变产生)、从病毒蛋白质等产生。
[0092]
如本文所用，术语“药物组合物”表示含有与药学上可接受的赋形剂一起配制的本文所述化合物的组合物。在一些实施方案中，药物组合物在政府监管机构的批准下制造或销售，作为用于治疗哺乳动物疾病的治疗方案的部分。药物组合物可以配制例如，用于以单位剂型(例如片剂、胶囊、囊片(caplet)、明胶胶囊(gelcap)或糖浆)口服施用；用于局部施用(例如，作为乳膏、凝胶、洗剂或软膏)；用于静脉内施用(例如，作为无颗粒栓子并在适用于静脉内使用的溶剂系统中的无菌溶液)；或配制在本文所述的任何其他配制剂中。
[0093]
如本文所用，“药学上可接受的赋形剂”是指除本文所述化合物之外的任何成分(例如，能够悬浮或溶解活性化合物的赋形剂)并具有在患者中无毒性且非炎性的性质。赋形剂可以包括，例如：抗粘附剂、抗氧化剂、粘合剂、包衣剂、压缩助剂、崩解剂、染料(着色剂)、润肤剂、乳化剂、填充剂(稀释剂)、成膜剂或包衣剂、矫味剂、香料、助流剂(流动增强剂)、润滑剂、防腐剂、印刷油墨、辐射防护剂、吸附剂、悬浮剂或分散剂、甜味剂或水合水。示例性赋形剂包括但不限于：抗坏血酸、组氨酸、磷酸盐缓冲液、丁基化羟基甲苯(bht)、碳酸钙、磷酸氢钙(二碱)、硬脂酸钙、交联羧甲基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、柠檬酸、交联聚维酮、半胱氨酸、乙基纤维素、明胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乳糖、硬脂酸镁、麦芽糖醇、甘露醇、甲硫氨酸、甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯、微晶纤维素、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚维酮、预胶化淀粉、对羟基苯甲酸丙酯、棕榈酸视黄酯、虫胶、二氧化硅、羧甲基纤维素钠、柠檬酸钠、羟基乙酸淀粉钠、山梨糖醇、淀粉(玉米)、硬脂酸、硬脂酸、蔗糖、滑石、二氧化钛、维生素a、维生素e、维生素c和木糖醇。
[0094]
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”表示本文所述化合物的那些盐，其在合理的医学判断范围内，适用于与人和动物的组织接触而没有过度毒性，刺激性或过敏反应。药学上可接受的盐是本领域众所周知的。例如，药学上可接受的盐描述于：berge et al.,j.pharmaceutical sciences 66:1-19,1977and in pharmaceutical salts:properties,selection,and use,(eds.p.h.stahl and c.g.wermuth),wiley-vch,2008。可以在本文所述化合物的最终分离和纯化过程中原位制备盐，或者通过使游离碱基基团与合适的有机酸反应单独制备盐。
[0095]
本发明的化合物可以具有可电离的基团以便能够制备成药学上可接受的盐。这些盐可以是涉及无机或有机酸的酸加成盐，或者在本发明化合物的酸性形式的情况下，这些盐可以由无机或有机碱制备。通常，以制备为药学上可接受的酸或碱的加成产物的药学上可接受的盐的形式制备或使用这些化合物。合适的药学上可接受的酸和碱是本领域熟知的，诸如用于形成酸加成盐的盐酸、硫酸、氢溴酸、乙酸、乳酸、柠檬酸或酒石酸，以及用于形成碱性盐的氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化铵、咖啡因、各种胺。制备合适的盐的方法在本领域中是完善建立的。
[0096]
代表性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸
盐、庚酸盐、己酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙和镁，以及无毒性的铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺和乙胺。
[0097]
术语“多肽”和“肽”可互换使用，并且如本文所用，指通过肽键彼此附接的至少两个氨基酸的串。在一些实施方案中，多肽可以包括至少3-5个氨基酸，其每一个通过至少一个肽键附接至其他氨基酸。本领域普通技术人员将理解，多肽可以包括一种或多种“非天然”氨基酸或其他实体，尽管如此其仍能够整合到多肽链中。在一些实施方案中，多肽可以经糖基化，例如，多肽可以含有一个或多个共价连接的糖部分。在一些实施方案中，单一“多肽”(例如，抗体多肽)可以包含两条或更多条个体多肽链，它们在一些情况下可以例如通过一个或多个二硫键或其他方式彼此连接。
[0098]
如本文所用，短语“优先杀伤”或“优先地杀伤”是指实体(例如cd8+t细胞或试剂)以高于另一种类型的水平杀伤一种类型的细胞的能力，例如，杀伤肿瘤细胞超过正常细胞和/或杀伤表达抗原的细胞超过不表达抗原的细胞的能力。在一些实施方案中，实体以比另一种类型大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10倍的水平优先地杀伤一种类型的细胞。
[0099]
如本文所用，短语“cd8
+
t细胞群的产生”是指产生和选择表达cd8并经历tcr dna的v(d)j重组和基因重排以产生识别特定抗原，例如细胞表面抗原，例如肿瘤相关抗原的tcr的细胞毒性t细胞的过程。cd8
+
t细胞群的产生还可以包括cd8
+
t细胞群的细胞增殖的步骤。
[0100]
cd8
+
t细胞群的产生之后可以是cd8
+
t细胞群的活化。如本文所用，“cd8+t细胞群的活化”是指cd8
+
t细胞群的细胞经活化以结合肿瘤相关抗原并破坏癌细胞的过程。cd8+t细胞活化可以包括与抗原呈递细胞，例如成熟的树突细胞的相互作用。在一些实施方案中，本文所述的方法可以包括例如向需要治疗的患者施用放射免疫缀合物，其中该施用导致cd8
+
t细胞群的活化。
[0101]
如本文所用，术语“放射性缀合物”是指包含放射性同位素或放射性核素，诸如本文所述的任何放射性同位素或放射性核素的任何缀合物。
[0102]
如本文所用，术语“放射免疫缀合物”是指包含放射性同位素或放射性核素，诸如本文所述的任何放射性同位素或放射性核素的任何免疫缀合物。
[0103]
术语“放射免疫疗法”或“放射结合免疫疗法”可互换使用。如本文所用，这些术语是指使用放射免疫缀合物以产生治疗效果的方法。在一些实施方案中，放射免疫疗法可以包括向有此需要的受试者施用放射免疫缀合物，其中放射免疫缀合物的施用在受试者中产生治疗效果。在一些实施方案中，放射免疫疗法可以包括将放射免疫缀合物施用于细胞或包括细胞的患者的体液，其中放射免疫缀合物的施用杀伤细胞。其中放射免疫疗法涉及选择性杀伤细胞，在一些实施方案中，所述细胞是患有癌症的受试者中的癌细胞。
[0104]
如本文所用，术语“放射性核素”是指能够经历放射性衰变的原子(例如，3h、
14
c、
15
n、
18
f、
35
s、
47
sc、
55
co、
60
cu、
61
cu、
62
cu、
64
cu、
67
cu、
75
br、
76
br、
77
br、
89
zr、
86
y、
87
y、
90
y、
97
ru,
99
tc、
99m
tc 105
rh、
109
pd、
111
in、
123
i、
124
i、
125
i、
131
i、
149
pm、
149
tb、
153
sm,
166
ho、
177
lu,
186
re、
188
re、
198
au、
199
au、
203
pb、
211
at、
212
pb、
212
bi、
213
bi、
223
ra、
225
ac、
227
th、
229
th、
66
ga、
67
ga、
68
ga、
82
rb、
117m
sn、
201
tl)。术语放射性核素(radioactive nuclide)、放射性同位素(radioisotope)或放射性同位素(radioactive isotope)也可以用于描述放射性核素(radionuclide)。如上所述，放射性核素可以用作检测剂。在一些实施方案中，放射性核素是α发射放射性核素。
[0105]
如本文所用，“参考水平”是指在适当参考条件下观察到的水平。例如，在一些实施方案中，参考水平是通过在实验动物模型或临床试验中使用所述方法用对照确定的水平。在一些实施方案中，参考水平是同一受试者在治疗之前或治疗开始时的水平。在一些实施方案中，参考水平是未通过所述治疗方法治疗的群体中的平均水平。
[0106]
如本文所用，短语“难治性癌症”是指对当前使用的抗癌剂或当前抗癌方案的治疗无响应或可能无响应的癌症的形式。术语“难治性癌症”包括在治疗开始时对治疗有抗性的那些癌症以及最初表现出对用抗癌剂的治疗有响应性并然后对治疗无响应的那些癌症。例如，难治性癌症可以包括以下的癌症的形式：其中癌细胞未能响应于治疗而停止增殖，或者其最初响应于治疗而停止增殖，但是尽管用抗癌剂进一步治疗，仍重新开始增殖。具有高复发率的表观消退也可能被认为是难治的。难治性癌症可能对目前一线、二线甚至三线治疗的特定抗癌治疗无响应。患有难治性癌症的患者在本文中可以称为“难治性癌症患者”。
[0107]
如本文所用，短语“对
……
具有特异性”，当用于对抗原具有特异性的t细胞受体(tcr)的上下文中时，是指当从抗原加工的肽由抗原呈递细胞展示，例如，当该肽由主要组织相容性复合物(mhc)/β-2微球蛋白(β2m)复合物展示时，tcr识别该肽的能力。
[0108]
如本文所用，术语“受试者”和“患者”可互换使用以指人或非人动物(例如，哺乳动物)。在本文所述的一些实施方案中，患者需要治疗难治性癌症。此类患者也可以称为“难治性癌症患者”。
[0109]“基本同一性”或“基本相同”是指多肽序列具有分别与参考序列相同的多肽序列，或者当两个序列最佳比对时，具有分别在参考序列内的相应位置相同的氨基酸残基的特定百分比。例如，与参考序列“基本相同”的氨基酸序列与参考氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。对于多肽，比较序列的长度通常为至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、50、75、90、100、150、200、250、300或350个连续氨基酸(例如，全长序列)。序列同一性可以在默认设置下使用序列分析软件测量(例如，genetics computer group的sequence analysis software package，university of wisconsin biotechnology center，1710university avenue，madison，wi 53705)。此类软件可以通过将同源度分配给各种取代、缺失和其他修饰来匹配相似的序列。
[0110]
如本文所用，术语“靶向部分”是指结合至给定靶标的任何分子或分子的任何部分。在一些实施方案中，靶向部分是小分子、蛋白质或多肽诸如抗体或其抗原结合片段、纳米抗体、亲和体或来自纤连蛋白iii型域的共有序列。
[0111]
如本文所用并且如本领域所熟知，“治疗”状况或状况的“治疗”(例如，本文所述的状况，诸如癌症)是用于获得有益或期望结果，诸如临床结果的方法。有益或期望结果可以包括但不限于一种或多种症状或状况的缓和或改善；疾病、病症或状况的程度的减弱；疾
病、病症或状况的稳定(即不恶化)状态；防止疾病、病症或状况的扩散；延迟或减缓疾病、病症或状况的进展；疾病、病症或状况的改善或减轻；和缓解(无论是部分的还是全部的)，无论是可检测的还是不可检测的。“减轻”疾病、病症或状况是指与在没有治疗的情况下的程度或时间进程相比，减少疾病、病症或状况的程度和/或不良临床表现和/或减缓或延长进展的时间进程。
[0112]
如本文所用，术语“肿瘤相关抗原”是指以显著大于正常细胞上的量在肿瘤细胞上存在的抗原。
[0113]
肿瘤：
[0114]
如本文所用，“原发性肿瘤”是指在起源的原发部位处的原始肿瘤生长并且不是转移的产物。
[0115]
如本文所用，“继发性肿瘤”包括通常通过转移过程已经从起源的原发部位扩散到继发解剖部位的肿瘤生长。在实验动物模型的上下文中，“继发性肿瘤”也可以指在肿瘤再攻击实验中形成的肿瘤，其中动物再次受到与动物先前接受的相同类型的癌细胞的攻击。
[0116]“实体肿瘤”是包含异常组织块的癌症，例如肉瘤、癌和淋巴瘤。
[0117]
如本文所用，“液体肿瘤”是存在于体液中的癌症，例如淋巴瘤和白血病。
[0118]
如本文所用，术语“肿瘤特异性抗原”是指仅内源性存在于肿瘤细胞上的抗原。
附图说明
[0119]
图1a例示了在实施例2中描述的并使用中等免疫原性同基因小鼠模型(ct-26小鼠结肠癌模型)进行的实验。
[0120]
图1b显示了用媒介物、tab-199(人单克隆igf-1r抗体)或100nci或200nci的[
225
ac]-fpi-1792(
‘
tat’)处理的小鼠的肿瘤生长曲线。[
225
ac]-fpi-1792是包含经由fast-clear
tm
接头与dota螯合部分缀合的tab-199放射免疫缀合物，其中
225
ac与dota部分络合。
[0121]
图1c是显示来自实施例2中描述的实验中使用的小鼠的代表性ki67染色的ct-26肿瘤组织的一系列小图。ki67是细胞增殖的标志物。组织切片获得自在施用媒介物对照(d7-对照-未经处理)或200nci的[
225
ac]-fpi-1792(d7-200 nci ac-tab-199)后7天解剖的肿瘤。上方小图，2x放大率。下面板，20x放大率。
[0122]
图1d是显示来自实施例2中描述的实验中使用的小鼠的代表性cd8染色ct-26肿瘤组织的一系列小图。cd8是t细胞的标志物。组织切片获得自在施用媒介物对照(d7-对照-未经处理)或200nci的[
225
ac]-fpi-1792(d7-200nci ac-tab-199)后7天解剖的肿瘤。上方小图，2x放大率。下方小图，20x放大率。
[0123]
图1e是显示来自实施例2中描述的实验中使用的小鼠的代表性颗粒酶b染色的ct-26肿瘤组织的一系列小图。颗粒酶b是在自然杀伤细胞和细胞毒性t细胞的颗粒中发现的丝氨酸蛋白酶。组织切片获得自在施用媒介物对照(d7-对照-未经处理)或200nci的[
225
ac]-fpi-1792(d7-200 nci ac-tab-199)后7天解剖的肿瘤。上方小图，2x放大率。下方小图，20x放大率。
[0124]
图2a例示了在实施例3中描述的并使用中等免疫原性同基因小鼠模型(ct-26小鼠结肠癌模型)进行的实验。
[0125]
图2b显示了实施例3中描述的实验的给药方案。图3b顶部的数字表示天数。
[0126]
图2c显示了用媒介物、tab-199(人单克隆igf-1r抗体)；200nci[
225
ac]-fpi-1792(
‘
tat’)；200nci[
225
ac]-fpi-1792和pd-1抗体的组合；200nci[
225
ac]-fpi-1792和ctla-4抗体的组合；以及200nci[
225
ac]-fpi-1792、pd-1抗体和ctla-4抗体的组合处理的小鼠的肿瘤生长曲线。(参见实施例3。)
[0127]
图2d是显示来自实施例3中描述的实验中使用的小鼠的代表性ki67染色的ct-26肿瘤组织的一系列小图。组织切片获得自在施用媒介物对照、tab-199、[
225
ac]-fpi-1792、[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla-4、[
225
ac]-fpi-1792+抗pd-1，或[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla-4+抗pd-1后12天解剖的肿瘤。
[0128]
图2e是显示来自实施例3中描述的实验中使用的小鼠的代表性cd8染色的ct-26肿瘤组织的一系列小图。组织切片获得自在施用媒介物对照、tab-199、[
225
ac]-fpi-1792、[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla-4、[
225
ac]-fpi-1792+抗pd-1，或[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla-4+抗pd-1后12天解剖的肿瘤。
[0129]
图2f是显示来自实施例3中描述的实验中使用的小鼠的代表性颗粒酶b染色的ct-26肿瘤组织的一系列小图。组织切片获得自在施用媒介物对照、tab-199、[
225
ac]-fpi-1792、[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla-4、[
225
ac]-fpi-1792+抗pd-1或[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla-4+抗pd-1后12天解剖的肿瘤获得的。
[0130]
图2g是描绘来自实施例3中描述的实验的肿瘤组织中ki67阳性细胞的定量的图。在获得自在施用媒介物对照、tab-199、[
225
ac]-fpi-1792、[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla-4、[
225
ac]-fpi-1792+抗pd-1或[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla-4+抗pd-1后12天解剖的肿瘤的组织切片上，对离肿瘤核心的5个不同区域进行总细胞核和ki67阳性细胞的计数。p值：*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。
[0131]
图2h是描绘来自实施例3中描述的实验的肿瘤组织中cd8阳性细胞的定量的图。在获得自在施用媒介物对照、tab-199、[
225
ac]-fpi-1792、[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla-4、[
225
ac]-fpi-1792+抗pd-1或[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla-4+抗pd-1后12天解剖的肿瘤的组织切片上，对离肿瘤核心的5个不同区域进行总细胞核和cd8阳性细胞的计数。*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。
[0132]
图2i是描绘来自实施例3中描述的实验的肿瘤组织中颗粒酶b阳性细胞的定量的图。在获得自在施用媒介物对照、tab-199、[
225
ac]-fpi-1792、[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla-4、[
225
ac]-fpi-1792+抗pd-1或[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla-4+抗pd-1后12天解剖的肿瘤的组织切片上，对离肿瘤核心的5个不同区域进行总细胞核及颗粒酶b阳性细胞的计数。*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。
[0133]
图3a例示了在实施例4中描述的并使用中等免疫原性同基因小鼠模型(ct-26小鼠结肠癌模型)进行的肿瘤再攻击实验。
[0134]
图3b是显示如实施例4所述的在未经处理的小鼠(对照肿瘤)或在实验开始时最初施用200nci放射免疫缀合物的小鼠中(继发性肿瘤)，在第二轮ct-26同种异体移植肿瘤细胞植入后11天植入的ct-26同种异体移植肿瘤组织的cd8免疫染色的一组小图。
[0135]
图3c显示了用媒介物、[
225
ac]-fpi-1792(
‘
tat’)、[
225
ac]-fpi-1792+抗pd1、[
225
ac]-fpi-1792+ctla4或[
225
ac]-fpi-1792+抗pd1+抗ctla4处理的小鼠的继发性肿瘤生长曲线。将肿瘤体积相对于肿瘤再攻击后的天数绘图。实验在实施例4中描述。
[0136]
图4a例示了使用中等免疫原性同基因小鼠模型(ct-26小鼠结肠癌模型)对小鼠进行的肿瘤再攻击实验。实施例5描述了对经受所描绘的再攻击实验的小鼠中的t细胞的分析。
[0137]
图4b描绘了未经处理或用[
225
ac]-fpi-1792+抗pd-1、[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla-4或[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla-4+抗pd-1处理的小鼠的脾脏和肿瘤中cd8+t细胞的频率，如实施例5所述。
[0138]
图4c是描绘在实施例5中描述的实验中使用的四聚体分析的示意图。当已知mhc i类分子和抗原的肽序列时，四聚体分析允许对抗原特异性cd8+t细胞进行计算。该分析中使用的肽抗原是ah1(spsyvyhgf(seq id no:1))，来自ct-26(在生成肿瘤的同基因小鼠模型中使用的结肠癌细胞系)的免疫显性cd8+t细胞表位。
[0139]
图4d描绘了来自未经处理或用[
225
ac]-fpi-1792+抗pd-1、[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla-4或[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla-4+抗pd-1处理的小鼠的脾脏和肿瘤中(ct-26)抗原特异性cd8+t细胞的频率(作为所有cd8+t细胞的百分比)，如实施例5所述。使用四聚体分析确定对ct26肽(ah1)具有特异性的cd8+t细胞的频率。(参见图4c。)
[0140]
图5a是在实施例6中描述的并使用免疫冷同基因小鼠模型(4t1三阴性乳腺癌模型)进行的实验的例示。
[0141]
图5b显示了用媒介物、ctla-4抗体、[
225
ac]-fpi-1792(
‘
tat’)或ctla-4抗体和[
225
ac]-fpi-1792两者的组合处理的小鼠的4t1肿瘤生长曲线，如实施例6中所述。
[0142]
图5c显示了用媒介物、rmp1-14(pd-1抗体)、[
225
ac]-fpi-1792(
‘
tat’)或rmp1-14和[
225
ac]-fpi-1792两者的组合处理的小鼠的4t1肿瘤生长曲线，如实施例6中所述。
[0143]
应当理解，附图不一定按比例绘制，附图中的对象也不一定相对于彼此按比例绘制。附图是旨在使本文公开的设备、系统和方法的各种实施例清楚和理解的描述。在可能的情况下，将在整个附图中使用相同的参考编号来指代相同或相似的部分。此外，应当理解，附图不旨在以任何方式限制本教导的范围。
[0144]
发明详述
[0145]
本文描述了在有此需要的患者中诱导cd8+t细胞浸润到肿瘤中(例如，到肿瘤核心中)的方法。所公开的方法包括向患者施用具有如本文进一步描述的结构的放射免疫缀合物或其药物组合物的步骤。
[0146]
放射免疫缀合物
[0147]
根据本公开使用的放射免疫缀合物通常包含式i-a的结构：
[0148]
a-l-b
[0149]
式i-a
[0150]
其中
[0151]
a是螯合部分的金属络合物，其中金属络合物包括actinium-225(
225
ac)或其子体，
[0152]
l是接头，并且
[0153]
b是能够结合第一肿瘤相关抗原的靶向部分，条件是如果a-l-是如下所示的化合物1的金属络合物，则b不是ave1642。
[0154][0155]
在一些实施方案中，a-l-是选自下组的化合物的金属络合物：
[0156](i)[0157]
(ii)(ii)
[0158]
(iii)
[0159]
(iv)
[0160]
在一些实施方案中，放射免疫缀合物具有或包含式ii所示的结构：
[0161][0162]
其中b是靶向部分并且
225
ac与1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(dota)部分络合。
[0163]
在一些实施方案中，螯合部分与靶向部分的平均比率或中值比率为八或更小、七或更小、六或更小、五或更小、四或更小、三或更小、二或更小，或约一。在一些放射免疫缀合物中，螯合部分与靶向部分的平均比率或中值比率为约1。
[0164]
在一些实施方案中，在将放射免疫缀合物施用于哺乳动物后，通过肠途径、肾途径或两者排泄的放射物的比例(在给予的辐射总量中)大于由已施用参考放射免疫缀合物的可比哺乳动物排泄的放射物的比例。“参考免疫缀合物”是指已知的放射免疫缀合物，其与本文所述的放射免疫缀合物的不同之处至少在于(1)具有不同的接头；(2)具有不同大小的靶向部分和/或(3)缺乏靶向部分。在一些实施方案中，参考放射免疫缀合物选自由[
90
y]-替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)(zevalin(90y))和[
111
in]-替伊莫单抗(zevalin(in-111))组成的组。
[0165]
在一些实施方案中，通过给定途径(或一组途径)排泄的放射物的比例比由已施用参考放射免疫缀合物的可比哺乳动物通过相同途径排泄的放射物的比例大至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％。在一些实施方案中，排泄的放射物的比例比由已施用参考放射免疫缀合物的可比哺乳动物排泄的放射物的比例大至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10倍。排泄程度可以通过本领域已知的方法，例如通过测量尿液和/或粪便中的放射性和/或通过测量一段时间内的全身放射
性来测量。还参见，例如，国际专利公开wo 2018/024869。
[0166]
在一些实施方案中，排泄程度在施用后至少或约12小时、施用后至少或约24小时、施用后至少或约2天、施用后至少或约3天、施用后至少或约4天、施用后至少或约5天、施用后至少或约6天，或施用后至少或约7天的时间段测量。
[0167]
在一些实施方案中，当将根据本公开的放射免疫缀合物施用于小鼠时，(a)到施用后第1天排泄少于15％的所施用的总放射物，和(b)到施用后第7天排泄至少15％的所施用的总放射物。
[0168]
在一些实施方案中，当将根据本公开的放射免疫缀合物施用于小鼠时，到施用后第2天通过肾脏途径排泄少于10％的所施用的总放射物。
[0169]
在一些实施方案中，当将根据本公开的放射免疫缀合物施用于小鼠时，(a)到施用后第1天排泄少于15％的所施用的总放射物；(b)到施用后第2天通过肾脏途径排泄少于10％的所施用的总放射物；(c)到施用后第7天排泄至少15％的所施用的总放射物。
[0170]
在其中靶向部分是小分子和/或具有小于50kda的分子量的一些实施方案中，当将放射免疫缀合物施用于小鼠时，(a)到施用后第1天排泄少于15％的所施用的总放射物，和(b)到施用后第7天排泄至少15％的所施用的总放射物。
[0171]
在其中靶向部分是小分子和/或具有小于50kda的分子量的一些实施方案中，当将放射免疫缀合物施用于小鼠时，(a)到施用后第1天，排泄少于15％的所施用的总放射物；(b)到施用后第2天通过肾脏途径排泄少于10％的总辐射；(b)到施用后第7天排泄至少15％的所施用的总放射物。
[0172]
在一些实施方案中，在已将放射免疫缀合物施用于哺乳动物后，与参考缀合物(例如，参考免疫缀合物诸如参考放射免疫缀合物)相比，放射免疫缀合物表现出降低的脱靶结合效应(例如，毒性)。在一些实施方案中，这种降低的脱靶结合效应是放射免疫缀合物的特征，其还表现出如本文所述的更高的排泄率。
[0173]
螯合部分
[0174]
合适的螯合部分的实例包括但不限于dota(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸)、dotma(1r,4r,7r,10r)-α,α’,α”,α
’”‑
四甲基-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸、dotam(1,4,7,10-四(氨基甲酰基甲基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷)、dotpa(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四丙酸)、do3am-乙酸(2-(4,7,10)-三(2-氨基-2-氧乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1-基)乙酸)、dota-ga酸酐(2,2’,2
”‑
(10-(2,6)-二氧四氢-2h-吡喃-3-基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)三乙酸、dotp(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四(亚甲基膦酸))、dotmp(1,4,6,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四亚甲基膦酸)、dota-4amp(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四(乙酰氨基-亚甲基膦酸))、cb-te2a(1,4,8,11-四氮杂双环[6.6.2]十六烷-4,11-二乙酸)、nota(1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸)、notp(1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三(亚甲基膦酸)、tetpa(1,4,8,11-四氮杂环十四烷-1,4,8,11-四丙酸)、teta(1,4,8,11-四氮杂环十四烷-1,4,8,11-四乙酸))、heha(1,4,7,10,13,16-六氮杂环十六烷-1,4,7,10,13,16-六乙酸)、pepa(1,4,7,10,13-五氮杂环十五烷-n,n’,n”,n
”’
,n
””‑
五乙酸)、h4octapa(n,n
’‑
双(6-羧基-2-吡啶基甲基)-乙二胺-n,n
’‑
二乙酸)、h2dedpa(1,2-[[6-(羧基)-吡啶-2-基]-甲基氨基]乙烷)、h6phospa(n,n
’‑
(亚甲基膦酸酯)-n,n
’‑
[6-(甲氧基羰基)吡啶-2-基]-甲基-1,
2-二氨基乙烷)、ttha(三亚乙基四胺-n,n,n’,n”,n
”’
,n
”’‑
六乙酸)、do2p(四氮杂环十二烷二甲膦酸)、hp-do3a(羟丙基四氮杂环十二烷三乙酸)、edta(乙二胺四乙酸)、去铁胺(deferoxamine)、dtpa(二乙烯三胺五乙酸)、dtpa-bma(二乙烯三胺五乙酸-双甲基酰胺)、hopo(八齿羟基吡啶酮)或卟啉(porphyrin)。
[0175]
接头
[0176]
在一些实施方案中，接头如式i-b的结构内所示，为式i-b的那部分不存在a和b：
[0177]
a-l
1-(l2)
n-b
[0178]
式i-b
[0179]
(a和b如式i-a中所定义)。
[0180]
因此，在一些实施方案中，接头是-l
1-(l2)
n-，其中：
[0181]
l1是任选取代的c
1-c6烷基、任选取代的c
1-c6杂烷基，或任选取代的芳基或杂芳基；
[0182]
n是1-5；和
[0183]
每个l2独立地具有以下结构：
[0184]
(-x
1-l
3-z
1-)
[0185]
式iii
[0186]
其中x1是c＝o(nr1)、c＝s(nr1)、oc＝o(nr1)、nr1c＝o(o)、nr1c＝o(nr1)、-ch2phc＝o(nr1)、-ch2ph(nh)c＝s(nr1)、o或nr1；每个r1独立地是h、任选取代的c
1-c6烷基、任选取代的c
1-c6杂烷基、或任选取代的芳基或杂芳基，其中c
1-c6烷基可以经氧代(＝o)、杂芳基或其组合取代；
[0187]
l3是任选取代的c
1-c
50
烷基或任选取代的c
1-c
50
杂烷基(例如c
5-c
20
聚乙二醇)；
[0188]
z1是ch2、c＝o、c＝s、oc＝o、nr1c＝o或nr1，其中r1是氢或
[0189]
任选取代的c
1-c6烷基或吡咯烷-2,5-二酮。
[0190]
在一些实施方案中，l1是取代的c
1-c6烷基或取代的c
1-c6杂烷基，该取代基包含杂芳基基团(例如，六元含氮杂芳基)。
[0191]
在一些实施方案中，l3是取代的c
1-c
50
烷基或取代的c
1-c
50
杂烷基，该取代基包含杂芳基基团(例如，六元含氮杂芳基)。
[0192]
在一些实施方案中，a是包含一个或多个杂芳基基团(例如，六元含氮杂芳基)的大环螯合部分。
[0193]
交联基团
[0194]
在一些实施方案中，放射免疫缀合物包含代替靶向部分或除靶向部分之外的交联基团(例如，式i中的b包含交联基团)。
[0195]
交联基团是能够通过共价键连接两个或更多个分子的反应性基团。可以使用交联基团以将接头和螯合部分附接至治疗或靶向部分。也可以使用交联基团以在体内将接头和螯合部分附接至靶标。在一些实施方案中，交联基团是氨基反应性、甲硫氨酸反应性或硫醇反应性交联基团，或分选酶介导的偶联。在一些实施方案中，氨基反应性或硫醇反应性交联基团包括活化酯，诸如羟基琥珀酰亚胺酯、2,3,5,6-四氟苯酚酯、4-硝基苯酚酯或亚氨酸酯、酸酐、硫醇、二硫化物、马来酰亚胺、叠氮化物、炔烃、应变炔烃、应变烯烃、卤素、磺酸盐、卤代乙酰基、胺、酰肼、二氮杂环丙烯(diazirine)、膦、四嗪、异硫氰酸酯或氧氮杂环丙烷(oxaziridine)。在一些实施方案中，分选酶识别序列可以包括末端甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸
(ggg)和/或lptxg氨基酸序列，其中x是任何氨基酸。本领域普通技术人员将理解，交联基团的使用不限于本文公开的具体构建体，而是可以包括其他已知的交联基团。
[0196]
靶向部分
[0197]
靶向部分包括能够结合至给定靶标，例如肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原的任何分子或分子的任何部分。在一些实施方案中，靶向部分能够与靶标内的表位结合。在包括向患有肿瘤的患者施用放射免疫缀合物的方法的上下文中，靶标可以是例如由肿瘤中的至少一些细胞表达的抗原(例如，肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原)。
[0198]
在一些实施方案中，靶向部分能够结合至由肿瘤中的至少一些细胞表达的抗原(例如，肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原)。合适的肿瘤相关抗原的实例包括但不限于igf-1r、肿瘤内皮标志物-1(tem-1，也称为内皮唾液酸蛋白)和fgfr3。在其中肿瘤相关抗原是igf-1r的实施方案中，靶向部分不是ave1642(人源化单克隆igf-1r抗体(-aventis/immunogen))。
[0199]
在一些实施方案中，靶向部分具有至少50kda、至少75kda、至少100kda、至少125kda、至少150kda、至少175kda、至少200kda、至少225kda、至少250kda、至少275kda或至少300kda的分子量。在一些实施方案中，靶向部分具有至少100kda、至少125kda或至少150kda的分子量。
[0200]
在一些实施方案中，靶向部分包含小分子。例如，靶向配体(例如高亲和力靶向配体)的小分子或其衍生物可以用作靶向部分。合适的小分子的实例包括但不限于psma-617(前列腺特异性膜抗原配体)和3bp-227(神经降压素受体1型拮抗剂)。
[0201]
在一些实施方案中，部分既是靶向部分又是治疗部分，即，该部分能够结合至给定靶标并且还赋予治疗益处。
[0202]
在一些实施方案中，靶向部分包含蛋白质或多肽(例如，经修饰的多肽)。在一些实施方案中，靶向部分选自下组：抗体或其抗原结合片段、高亲和性多聚体(avimers)、纳米抗体、亲和体和来自纤连蛋白iii型域的共有序列(例如，centyrins或adnectins)，或包含前述任一种的分子。
[0203]
抗体
[0204]
在一些实施方案中，靶向部分包含抗体或其抗原结合片段。抗体通常包含通过二硫键连接在一起的两条相同的轻多肽链和两条相同的重多肽链。位于每条链的氨基端的第一个域在氨基酸序列中是可变的，从而提供每个个体抗体的抗体结合特异性。这些被称为可变重(vh)和可变轻(vl)区域。每条链的其他域在氨基酸序列中相对不变并被称为恒定重(ch)区和恒定轻(cl)区。轻链通常包含一个可变区(vl)和一个恒定区(cl)。igg重链包括可变区(vh)、第一恒定区(ch1)、铰链区、第二恒定区(ch2)和第三恒定区(ch3)。在ige和igm抗体中，重链包含额外的恒定区(ch4)。
[0205]
适用于本公开的抗体可以包括，例如，单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、骆驼抗体、嵌合抗体、单链fvs(scfv)、二硫化物连接的fvs(sdfv)和抗独特型(抗id)抗体，以及以上任一种的抗原结合片段。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是人源化的。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是嵌合的。抗体可以是任何类型(例如，igg、ige、igm、igd、iga和igy)、类别(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)或亚类。
[0206]
如本文所用，术语抗体的“抗原结合片段”是指保留特异性结合至抗原的能力的抗体的一个或多个片段。涵盖在抗体的术语“抗原结合片段”内的结合片段的实例包括fab片段、f(ab’)2片段、fd片段、fv片段、scfv片段、dab片段(ward et al.,(1989)nature 341:544-546)，以及分离的互补决定区(cdr)。在一些实施方案中，“抗原结合片段”包含重链可变区和轻链可变区。这些抗体片段可以使用本领域技术人员已知的常规技术获得，并且可以以与完整抗体相同的方式筛选片段的效用。
[0207]
本文所述的抗体或抗原结合片段可以通过本领域已知的用于合成抗体的任何方法产生(参见例如，harlow et al.,antibodies:a laboratory manual,(cold spring harbor laboratory press,2nd ed.1988)；brinkman et al.,1995,j.immunol.methods 182:41-50；wo 92/22324；wo 98/46645)。嵌合抗体可以使用例如morrison,1985,science 229:1202中描述的方法来产生，并且人源化抗体可以通过例如美国专利号6,180,370中描述的方法来产生。
[0208]
本文所述的其他抗体是，如例如segal et al.,j.immunol.methods 248:1-6(2001)；和tutt et al.,j.immunol.147:60(1991)中描述的双特异性抗体和多价抗体或本文所述的任何分子。
[0209]
在某些实施方案中，考虑了抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列变体；例如，保留与预期靶标结合的能力的变体。例如，可能需要改善抗体或其抗原结合片段的结合亲和力和/或其他生物学特性。可以通过将适当的修饰引入编码抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列中，或通过肽合成来制备抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列变体。此类修饰包括，例如，抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列内的残基的缺失和/或插入和/或取代。可以进行缺失、插入和替换的任何组合以获得最终构建体，前提是最终构建体具有期望的特征，例如抗原结合。
[0210]
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是抑制性抗体(也称为“拮抗性抗体”)或其抗原结合片段，例如，抗体或其抗原结合片段至少部分地抑制靶标的一种或多种功能。
[0211]
在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段具有≤1μm、≤100nm、≤10nm、≤1nm、≤0.1nm、≤0.01nm或≤0.001nm的解离常数(kd)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段具有1nm至10nm之间(包括端点)或0.1nm至1nm之间(包括端点)的解离常数(kd)。
[0212]
在一些实施方案中，通过用感兴趣的抗体或其抗原结合片段的fab型式及其抗原进行的放射性标记的抗原结合测定法(放射免疫测定法，ria)来测量kd。
[0213]
根据一些实施方案，使用具有固定化抗原的表面等离子共振测定法来测量kd。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是针对靶标的表位(例如，肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原)的人单克隆抗体。
[0214]
抗体或其抗原结合片段可以是天然和/或合成来源的任何抗体或其抗原结合片段，例如哺乳动物来源的抗体。在一些实施方案中，恒定域(如果存在)是人恒定域。在一些实施方案中，可变域是哺乳动物可变域，例如人源化或人可变域。
[0215]
在一些实施方案中，根据本公开使用的抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体是重组鼠抗体、嵌合、人源化或完全人抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)或其抗原结合片段。
[0216]
在一些实施方案中，其进一步与用于例如药物靶向和成像应用的其他部分偶联。
[0217]
在一些实施方案中，例如，出于诊断目的，抗体或其抗原结合片段经标记，即与标记基团偶联。合适标记物的非限制性实例包括放射性标记物、荧光标记物、合适的染料基团、酶标记物、色原、化学发光基团、生物素基团、由二级报道分子识别的预定多肽表位等。在一些实施方案中，一种或多种标记物共价结合至抗体或其抗原结合片段。
[0218]
那些经标记的抗体或其抗原结合片段(也称为“抗体缀合物”)可以特别用于免疫组织化学测定法或用于体内分子成像。
[0219]
在一些实施方案中，例如，出于治疗目的，抗体或其抗原结合片段进一步与效应物基团，特别是治疗效应物基团，诸如细胞毒剂或放射性基团剂缀合。
[0220]
多肽
[0221]
多肽包括，例如，多种血液制剂中的任一种(包括，例如，促红细胞生成素、凝血因子等)、干扰素、集落刺激因子、抗体、酶和激素。特定多肽的身份不旨在限制本公开，并且任何感兴趣的多肽可以是本方法中的多肽。
[0222]
本文所述的多肽可以包括能够结合感兴趣的靶标(例如，肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原)的靶标结合域。例如，多肽可以是能够结合至跨膜多肽(例如，受体)或配体(例如，生长因子)。
[0223]
在一些实施方案中，多肽是合成多肽，例如，天然存在的多肽(例如，生长抑素)的类似物。
[0224]
合适的多肽的非限制性实例包括环状八肽，诸如奥曲肽醋酸盐(octreotate)和奥曲肽(octreotide)。例如，可以将奥曲肽醋酸盐和奥曲肽与dota双功能螯合剂缀合以分别形成dota-tate和dota-toc，其通常用于高sstr2表达的癌症。
[0225]
经修饰的多肽
[0226]
适合与本公开的组合物和方法使用的多肽可以具有经修饰的氨基酸序列。经修饰的多肽可以与相应的参考多肽基本上相同(例如，经修饰的多肽的氨基酸序列可以与参考多肽的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性)。在某些实施方案中，修饰不显著破坏期望的生物活性。修饰可以使原始多肽的生物活性减少(例如，减少至少5％、10％、20％、25％、35％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或95％)，可以没有影响，或可以增加(例如，至少5％、10％、25％、50％、100％、200％、500％或1000％)。经修饰的多肽可以具有或可以优化多肽的特征，诸如体内稳定性、生物可利用度、毒性、免疫学活性、免疫学身份和缀合特性。
[0227]
修饰包括通过自然过程诸如翻译后加工或通过本领域已知的化学修饰技术进行的那些修饰。修饰可以发生在多肽的任何地方，包括多肽主链、氨基酸侧链和氨基端或羧基端。相同类型的修饰可以在给定多肽的几个位点处以相同或不同程度存在，并且多肽可以包含多于一种类型的修饰。多肽可能因泛素化而分支，并且它们可以是环状的，具有或没有分支。环状、分支和分支环状多肽可以由翻译后的天然过程产生或可以合成制备。其他修饰包括聚乙二醇化、乙酰化、酰化、乙酰氨基甲基(acm)基团的添加、adp-核糖基化、烷基化、酰胺化、生物素化、氨基甲酰化、羧乙基化、酯化、共价附接至黄素、共价附接至血红素部分、核苷酸或核苷酸衍生物的共价附接、药物的共价附接、标志物(例如荧光或放射性)的共价附接、脂质或脂质衍生物的共价附接、磷脂酰肌醇的共价附接、交联、环化、二硫键形成、脱甲基化、共价交联的形成、胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、甲酰化、γ-羧化、糖基化、gpi锚形
成、羟基化、碘化、甲基化、豆蔻酰化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊二烯化、消旋化、硒化、硫酸化、转移-rna介导的添加氨基酸至蛋白质，诸如精氨酸化和泛素化。
[0228]
经修饰的多肽还可以包括在多肽序列中的氨基酸插入、缺失或取代，无论是保守的还是非保守的(例如，d-氨基酸、脱氨基酸)(例如，其中此类变化基本上不改变多肽的生物活性)。特别地，将一个或多个半胱氨酸残基添加到本文多肽的氨基或羧基端可以促进这些多肽通过例如二硫键合的缀合。例如，可以修饰多肽以在氨基端包含单个半胱氨酸残基或在羧基端包含单个半胱氨酸残基。氨基酸取代可以是保守的(即，其中残基由相同的一般类型的另一个或基团替换)或非保守的(即，其中残基由另一个类型的氨基酸替换)。此外，天然存在的氨基酸可以经取代为非天然存在的氨基酸(即，非天然存在的保守氨基酸取代或非天然存在的非保守氨基酸取代)。
[0229]
合成制备的多肽可以包括非由dna天然编码的氨基酸(例如，非天然存在或非天然氨基酸)的取代。非天然存在的氨基酸的实例包括d-氨基酸、n-保护的氨基酸、具有附接至半胱氨酸的硫原子的乙酰氨基甲基的氨基酸、聚乙二醇化氨基酸、式nh2(ch2)ncooh的ω氨基酸，其中n为2-6、中性非极性氨基酸，诸如肌氨酸、叔丁基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、n-甲基异亮氨酸和正亮氨酸。苯基甘氨酸可以取代trp、tyr或phe；瓜氨酸和甲硫氨酸亚砜是中性非极性的，半胱氨酸是酸性的，以及鸟氨酸是碱性的。脯氨酸可以经羟脯氨酸取代并保留赋予性质的构象。
[0230]
类似物可以通过取代诱变生成并且保留原始多肽的生物活性。经鉴定为“保守取代”的取代的实例显示在表1中。如果此类取代导致不期望的变化，则引入在表1中命名为“示例性取代”，或如本文中关于氨基酸类别进一步描述的其他类型的取代，并筛选产物。
[0231]
表1：氨基酸取代
[0232]
原始残基示例性取代保守取代ala(a)val、leu、ilevalarg(r)lys、gln、asnlysasn(n)gln、his、lys、argglnasp(d)gluglucys(c)sersergln(q)asnasnglu(e)aspaspgly(g)proprohis(h)asn、gln、lys、argargile(i)leu、val、met、ala、phe、正亮氨酸leuleu(l)正亮氨酸、ile、val、met、ala、pheilelys(k)arg、gln、asnargmet(m)leu、phe、ileleuphe(f)leu、val、ile、alaleupro(p)glyglyser(s)thrthrthr(t)serser
trp(w)tyrtyrtyr(y)trp、phe、thr、serpheval(v)ile、leu、met、phe、ala、正亮氨酸leu
[0233]
功能或免疫学身份的实质性修饰通过选择其在维持以下的作用上显著不同的取代来实现：(a)取代区域中的多肽主链的结构，例如，为片状或螺旋构象，(b)分子在靶位点的电荷或疏水性，和/或(c)侧链的体积。
[0234]
药物组合物
[0235]
在一些实施方案中，方法包括施用如本文所述的放射免疫缀合物的药物组合物。此类药物组合物可以配制用于多种药物递送系统。一种或多种生理学上可接受的赋形剂或载体也可以包含在药物组合物中以用于适当的配制。与本公开相容使用的合适配制剂的非限制性实例包括在remington’s pharmaceutical sciences,mack publishing company,philadelphia,pa,17th ed.,1985中描述的那些。对于药物递送方法的简要综述，参见，例如，langer(science 249:1527-1533,1990)。
[0236]
药物组合物可以配制用于本文讨论的多种施用途径中的任一种(参见例如本文的“施用和剂量”小节)。考虑通过诸如积存注射法(depot injection)或可侵蚀植入物或组分的方式进行的持续释放施用。因此，本公开提供药物组合物，其包括溶解或悬浮在可接受的载体(优选水性载体，例如水、缓冲水、盐水或pbs等)中的本文公开的试剂(例如，放射免疫缀合物)。在一些实施方案中，药物组合物包含药学上可接受的辅助物质，诸如ph调节剂和缓冲剂、张力调节剂、润湿剂或洗涤剂等以接近生理条件。在一些实施方案中，将药物组合物配制用于口服递送并且可以任选地包含惰性成分，诸如粘合剂或填充剂，以用于配制单位剂型，诸如片剂或胶囊。在一些实施方案中，将药物组合物配制用于局部施用并且可以任选地包含惰性成分，诸如溶剂或乳化剂，以用于配制乳膏、软膏、凝胶、糊剂或滴眼剂。
[0237]
在一些实施方案中，所提供的药物组合物通过常规灭菌技术灭菌，例如，可以经无菌过滤。所得水溶液可以经包装用于按原样使用，或经冻干。冻干制剂可以例如在施用前与无菌水性载体组合。制剂的ph通常为3至11，更优选5至9或6至8，并且最优选6至7，诸如6至6.5。所得固体形式的组合物可以例如包装在多个单剂量单位中(诸如在片剂或胶囊的密封包装中)，每个单位含有固定量的上述一种或多种药剂。固体形式的药物组合物也可以包装在容器中以获得灵活的量，诸如在设计用于局部适用的乳膏或软膏的可挤压管中。
[0238]
功能效果
[0239]
在许多实施方案中，根据所提供的方法施用放射免疫缀合物导致淋巴细胞群浸润到肿瘤中(例如，浸润到肿瘤核心中)。在一些实施方案中，淋巴细胞群包含t细胞(例如，cd8+t细胞)。在一些实施方案中，淋巴细胞群包含细胞毒性淋巴细胞，例如活化的cd8+t细胞和/或自然杀伤细胞。在一些实施方案中，淋巴细胞群包含对细胞毒性和/或活化淋巴细胞的一种或多种标志物(细胞表面标志物和/或细胞内标志物)呈阳性的细胞。在一些实施方案中，淋巴细胞群包含对选自cd3、cd8、cd16、cd25、cd27、cd44、cd45、cd46、cd53、cd56、cd57、cd69、cd137、颗粒酶b或其组合的标志物呈阳性的细胞。
[0240]
在一些实施方案中，淋巴细胞群包含cd8+t细胞群，其包含表达对肿瘤相关抗原具有特异性(例如，识别其)的t细胞受体的cd8+t细胞。在一些实施方案中，肿瘤相关抗原不同于放射免疫缀合物内的靶向部分能够结合的肿瘤相关抗原。在一些实施方案中，cd8+t细胞
表达对为新抗原的肿瘤相关抗原具有特异性的t细胞受体。
[0241]
在一些实施方案中，淋巴细胞群包含能够优先杀伤表达肿瘤相关抗原的细胞的细胞(例如，cd8+t细胞)。
[0242]
在一些实施方案中，淋巴细胞群(例如，cd8+t细胞群)在肿瘤中(例如，在肿瘤的区域中，诸如肿瘤的核心)以高于参考水平至少两倍、至少三倍、至少四倍或至少五倍的水平可检测。
[0243]
在一些实施方案中，淋巴细胞群(例如，cd8+t细胞群)占肿瘤或肿瘤的区域中(例如，肿瘤的核心中)的细胞的至少5％、至少7.5％、至少10％、至少12.5％或至少15％。
[0244]
在一些实施方案中，表达对肿瘤相关抗原具有特异性(例如，识别其)的t细胞受体的cd8+t细胞占已浸润肿瘤或肿瘤的区域(例如，肿瘤的核心)的cd8+t细胞群的至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％或至少70％。
[0245]
在一些实施方案中，cd8+细胞(例如，表达对肿瘤相关抗原具有特异性的t细胞受体的cd8+细胞)在施用步骤后至少15天，至少20天、至少25天、至少30天、至少35天或至少40天在受试者中可检测(例如，在受试者的组织或其样品中可检测)。
[0246]
在某些实施方案中，根据所提供的方法施用放射免疫缀合物导致抑制肿瘤中，例如肿瘤核心中的细胞增殖。例如，在一些实施方案中，来自经施用的受试者的肿瘤组织中的细胞增殖相对于参考水平降低至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少12.5倍、至少15倍、至少17.5倍或至少20倍。可以使用本领域已知的多种方法中的任一种来评估细胞增殖，包括评估细胞中或细胞上的标志物(例如，ki67)。
[0247]
可以使用多种已知方法中的任一种来评估肿瘤中对特定标志物(例如，cd8 t细胞的标志物、细胞增殖的标志物、凋亡的标志物等)呈阳性的细胞的数量和/或比例。例如，在一些方法中，将横截面中对标志物呈染色阳性的细胞数量计算为肿瘤的横截面内的区域中所有细胞核(例如，对活细胞的标志物呈染色阳性的细胞核)的百分比。在某些实施方案中，在横截面内的几个区域(例如，至少三个、至少四个或至少五个区域)中进行计数，并且将百分比计算为来自各个区域的计数的平均。
[0248]
在一些实施方案中，当进行细胞计数时，排除肿瘤内的缺氧区域(例如，通常在肿瘤中心中发现的区域)。在不存在任何治疗剂的情况下，这些缺氧区域倾向于坏死。例如，当评估由于向患有肿瘤的受试者施用药剂而发生的肿瘤细胞死亡(例如，通过凋亡和/或坏死)时，可以选择除此类缺氧区域之外的区域来进行细胞计数。
[0249]
在一些方法中，通过从感兴趣的组织获得或制备单细胞悬液、针对一种或多种标志物染色细胞、以及对染色的细胞进行细胞分选或定量技术，诸如使用流式细胞术，来定量细胞。
[0250]
在某些实施方案中，根据所提供的方法施用放射免疫缀合物导致减缓或抑制肿瘤的进展。在一些实施方案中，施用步骤导致肿瘤消退。在一些实施方案中，施用步骤导致肿瘤完全消退。
[0251]
在某些实施方案中，根据所提供的方法施用放射免疫缀合物导致肿瘤细胞转移的抑制。此类抑制可以包括，例如，转移数量的减少、转移侵袭性的降低和/或转移发展的延
迟。
[0252]
肿瘤
[0253]
需要治疗的患者可能患有一种或多种肿瘤。一种或多种肿瘤可以包括原发性肿瘤、继发性肿瘤或原发性肿瘤和继发性肿瘤两者。
[0254]
在一些实施方案中，肿瘤不是高免疫原性的，例如，肿瘤是中等免疫原性的或免疫冷的。在一些实施方案中，肿瘤对检查点抑制剂治疗无响应或仅部分响应。在一些实施方案中，肿瘤(在没有治疗的情况下)的特征在于淋巴细胞(例如，t细胞，例如cd8+t细胞)不浸润或低浸润，例如，以少于10％、少于7.5％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％、少于1％、少于0.5％的总活细胞或细胞核的水平浸润。
[0255]
在一些实施方案中，在施用放射免疫缀合物时，肿瘤的体积为至少50mm3、至少75mm3、至少100mm3、至少125mm3、至少150mm3、至少175mm3、或至少200mm3。
[0256]
在一些实施方案中，癌症是实体肿瘤，例如癌、肉瘤、黑素瘤或淋巴瘤。
[0257]
在一些实施方案中，实体肿瘤是癌，例如腺癌、鳞状细胞癌或腺鳞癌。癌的非限制性实例包括腺样囊性癌、肾上腺皮质癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、子宫内膜癌、胆囊癌、胃癌、头颈癌、肺癌(例如，小细胞肺癌或非小细胞肺癌或肺腺癌)、神经母细胞瘤、神经内分泌癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、睾丸癌。
[0258]
在一些实施方案中，实体肿瘤是肉瘤。肉瘤的非限制性实例包括血管肉瘤或血管内皮瘤、星形细胞瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、纤维肉瘤、胶质瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤(mfh)、间叶瘤或混合中胚层肿瘤、间皮肉瘤或间皮瘤、粘液肉瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤和滑膜肉瘤。
[0259]
在一些实施方案中，肿瘤是神经母细胞瘤。
[0260]
在一些实施方案中，肿瘤是脑肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤是胶质瘤。
[0261]
在一些实施方案中，肿瘤是黑素瘤。
[0262]
在一些实施方案中，肿瘤是非实体肿瘤，例如液体肿瘤或血液肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤是骨髓瘤，例如多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，肿瘤是白血病，例如急性髓性白血病。
[0263]
在一些实施方案中，肿瘤是混合型肿瘤，例如混合中胚层肿瘤、癌肉瘤或畸胎癌。
[0264]
受试者
[0265]
在一些实施方案中，受试者是哺乳动物，例如人。
[0266]
在一些实施方案中，受试者患有癌症或处于发展癌症的风险中。例如，受试者可能已诊断患有癌症。例如，癌症可以是原发性癌症或继发性(例如，转移性)癌症。受试者可能患有任何阶段，例如，i期、ii期、iii期或iv期的癌症，有或没有淋巴结受累和有或没有转移。所提供的放射免疫缀合物和组合物可以预防或减少癌症的进一步生长和/或以其他方式改善癌症(例如，预防或减少转移)。在一些实施方案中，受试者未患有癌症，但已确定处于发展癌症的风险，例如，因为存在一种或多种风险因素，诸如环境暴露、存在一种或多种遗传突变或变体、家族史等。在一些实施方案中，受试者尚未诊断患有癌症。
[0267]
在一些实施方案中，受试者需要治疗难治性癌症。
[0268]
施用和剂量
[0269]
本文所述的放射免疫缀合物及其药物组合物可以通过多种施用途径，包括全身和
局部施用途径中的任一种施用。
[0270]
全身施用途径包括胃肠外途径和肠内途径。在一些实施方案中，放射免疫缀合物或其药物组合物通过胃肠外途径施用，例如静脉内、动脉内、腹膜内、皮下或皮内施用。在一些实施方案中，放射免疫缀合物或其药物组合物静脉内施用。在一些实施方案中，放射免疫缀合物或其药物组合物通过肠内施用途径施用，例如，经胃肠或口服施用。
[0271]
局部施用途径包括但不限于瘤周注射和瘤内注射。
[0272]
可以施用药物组合物用于放射治疗计划、诊断性和/或治疗性治疗。当为放射治疗计划或诊断目的施用时，放射免疫缀合物可以以诊断有效剂量和/或有效确定治疗有效剂量的量施用于受试者。在治疗应用中，药物组合物可以以足以治愈或至少部分阻止病症及其并发症的症状的量施用于已经患有状况(例如癌症)的受试者(例如人)。将足以实现该目的的量定义为“治疗有效量”，即足以显著改善与疾病或医学状况相关的至少一种症状的化合物的量。例如，在癌症的治疗中，减少、预防、延迟、抑制或阻止疾病或状况的任何症状的药剂或化合物将是治疗有效的。治疗有效量的药剂或化合物不需要用以治愈疾病或状况，但可以例如提供对疾病或状况的治疗，使得疾病或状况的发作经延迟、阻碍或预防，使得疾病或状况的症状得到改善，或使得疾病或状况的期限改变。例如，疾病或状况可能变得不太严重和/或个体的恢复加快。在一些实施方案中，以对放射治疗计划有效的量向受试者施用第一剂量的放射免疫缀合物或组合物，然后以治疗有效量施用第二剂量或一组剂量的放射免疫缀合物或组合物。
[0273]
有效量可以取决于疾病或状况的严重性和受试者的其他特征(例如，体重)。用于受试者(例如，哺乳动物诸如人)所公开的放射免疫缀合物和组合物的治疗有效量可以由普通技术人员在考虑个体差异(例如，受试者年龄、体重和状况的差异)的情况下确定。
[0274]
在一些实施方案中，放射免疫缀合物表现出增强的靶向癌细胞的能力。在一些实施方案中，所公开的放射性免疫缀合物的有效量低于(例如，小于或等于约90％、75％、50％、40％、30％、20％、15％、12％、10％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的)未缀合的和/或非放射性标记的靶向部分的治疗效果的等效剂量。
[0275]
包括有效量的本文药物组合物的单次或多次施用可以由治疗医师选择剂量水平和模式来进行。可以根据受试者中疾病或状况的严重性来确定和调整剂量和施用方案，可以根据临床医师通常所实践的方法或本文所述的方法在整个治疗过程中进行监测该严重性。
[0276]
治疗方案
[0277]
在某些实施方案中，放射免疫缀合物是作为治疗方案的部分施用的仅有细胞毒剂。例如，在一些实施方案中，放射免疫缀合物不与另一种细胞毒剂组合(无论是同时、贯序或在重叠施用区域中)施用。因此，在这些实施方案中，在包含放射免疫缀合物的治疗方案期间受试者暴露于的仅有细胞毒剂是放射免疫缀合物本身。
[0278]
在一些实施方案中，放射免疫缀合物与另一种药剂例如治疗剂组合施用。在一些实施方案中，其他治疗剂是非细胞毒性剂，例如dna损伤和修复抑制剂(ddri)、检查点抑制剂或其任何组合。
[0279]
检查点抑制剂
[0280]
在一些实施方案中，检查点抑制剂与放射免疫缀合物组合施用。通常，合适的检查
点抑制剂抑制免疫抑制检查点蛋白。在一些实施方案中，检查点抑制剂抑制选自细胞毒性t淋巴细胞相关抗原4(ctla-4)、程序性死亡1(pd-1)、程序性死亡配体-1(pd-l1)、lag-3、t细胞免疫球蛋白粘蛋白3(tim-3)和杀伤细胞免疫球蛋白样受体(kir)的蛋白质。
[0281]
例如，在一些实施方案中，检查点抑制剂能够结合至ctla-4、pd-1或pd-l1。在一些实施方案中，检查点抑制剂干扰pd-1和pd-l1之间的相互作用(例如，干扰结合)。
[0282]
在一些实施方案中，检查点抑制剂是小分子。
[0283]
在一些实施方案中，检查点抑制剂是抗体或其抗原结合片段，例如单克隆抗体。在一些实施方案中，检查点抑制剂是人或人源化抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，检查点抑制剂是小鼠抗体或其抗原结合片段。
[0284]
在一些实施方案中，检查点抑制剂是ctla-4抗体。ctla-4抗体的非限制性实例包括bms-986218、bms-986249、伊匹单抗、曲美木单抗(tremelimumab)(以前称为替西木单抗(ticilimumab)，cp-675,206)、mk-1308和regn-4659。ctla-4抗体的另一个实例是小鼠单克隆抗体4f10-11。
[0285]
在一些实施方案中，检查点抑制剂是pd-1抗体。pd-1抗体的非限制性实例包括卡瑞利珠单抗(camrelizumab)、西米普利单抗、纳武单抗、派姆单抗、信迪利单抗(sintilimab)、替雷利珠单抗(tislelizumab)和特瑞普利单抗(toripalimab)。pd-1抗体的另一个实例是小鼠单克隆抗体rmp1-14。
[0286]
在一些实施方案中，检查点抑制剂是pd-ll抗体。pd-l1抗体的非限制性实例包括阿特珠单抗、阿维单抗和度伐鲁单抗。
[0287]
在一些实施方案中，使用多于一种检查点抑制剂的组合。例如，在一些实施方案中，使用ctla-4抑制剂和pd-1或pd-l1抑制剂两者。
[0288]
无需进一步阐述，相信本领域技术人员可以基于以上描述最大程度地利用本公开。因此，以下具体实施例应被解释为仅仅是说明性的，而不以任何方式限制本公开的其余部分。
实施例
[0289]
实施例1.igf-1r靶向放射免疫缀合物[
225
ac]-fpi-1792的合成
[0290]
tab-199(人单克隆igf-1r抗体，其也识别具有次纳摩尔亲和力的鼠igf-1r，可从creative biolabs商购获得)与双功能螯合物fpi-1397(fusion pharmaceuticals)缀合，该双功能螯合物包含1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(dota)螯合部分和fastclear
tm
接头(fusion pharmaceuticals))。fpi-1397的结构如下所示：
[0291][0292]
将所得缀合物纯化、重配制并用[
225
ac]进行放射性标记。最终的缀合物命名为
[
225
ac]-fpi-1792，包含以下结构，tab-199在右手侧作为抗体。[
225
ac]与dota部分络合。
[0293][0294]
实施例2.在中等免疫原性结肠癌细胞系中施用[
225
ac]-fpi-1792后cd8+t细胞的核心肿瘤浸润
[0295]
[
225
ac]-fpi-1792是放射免疫缀合物，其包含经由fast-clear
tm
接头与1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(dota)螯合部分缀合的tab-199，
225
ac与dota部分络合。
[0296]
在中等免疫原性同基因小鼠模型(结肠癌的ct-26小鼠模型)中评估施用[
225
ac]-fpi-1792对肿瘤细胞增殖和肿瘤生长的影响。ct-26细胞表达鼠igf-1r，并且对抗ctla-4抗体敏感，但对抗pd-1抗体仅部分敏感。
[0297]
图1a描绘了这些实验的示意图。将ct-26细胞植入免疫活性小鼠中。允许植入的ct-26细胞原位增殖4天或直到它们产生体积为约100-150mm3的肿瘤。然后动物经施用媒介物(对照)、tab-199(裸抗体)或[
225
ac]-fpi-1792(100nci或200nci)。
[0298]
在治疗开始后监测ct-26肿瘤体积。经施用媒介物对照或裸抗体的动物中ct-26肿瘤的相对肿瘤体积在施用后0至20天之间增加(图1b)。与施用媒介物对照或裸抗体相比，施用100nci的tat导致在第7天和第20天之间肿瘤生长的增加相对较慢并且肿瘤大小相对较小(图1b)。施用100nci的[
225
ac]-fpi-1792导致在施用后第18天或约第18天时相对肿瘤体积达到平台期(图1b)。与施用媒介物对照、裸抗体或100nci[
225
ac]-fpi-1792相比，施用200nci的[
225
ac]-fpi-1792导致第7天和第20天之间的相对肿瘤尺寸更小(图1b)。此外，与基线相比，施用200nci[
225
ac]-fpi-1792导致肿瘤体积相对减小(图1b)。具体地，在施用后约9天后，用200nci的tat处理的动物的ct-26肿瘤的大小相对于处理开始时ct-26肿瘤的大小开始减小。用200nci的tat处理的动物中ct-26肿瘤体积的减少似乎持续直至施用后约25天，之后肿瘤体积保持相对不变(图1b)。
[0299]
在施用后7天从动物中收获ct-26肿瘤，以通过免疫组织化学评估肿瘤细胞增殖和cd8
+
t细胞到肿瘤核心中的浸润。简而言之，如下制备福尔马林固定石蜡包埋(ffpe)组织用于免疫组织化学：切除肿瘤，固定在甲醛中，包埋石蜡并切片。
[0300]
在横截面中，评估了来自肿瘤核心(距边缘边界》250μm)和远离缺氧/坏死区域的区域。
[0301]
通过对细胞增殖标志物ki67进行免疫染色来评估肿瘤细胞增殖。与来自施用媒介物的ct-26注射动物的肿瘤组织相比，来自施用200nci[
225
ac]-fpi-1792的ct-26注射动物的肿瘤组织的ki67染色显示出更低水平的ki67染色(图1c)，这表明[
225
ac]-fpi-1792的施用减少了肿瘤细胞的增殖。
[0302]
通过对cd8的免疫染色评估cd8
+
t细胞到ct-26肿瘤核心中的浸润。与来自施用赋
fpi-1792的所有处理组的切片中观察到显著增加的颗粒酶b染色。这些结果表明cd8+t细胞(包括活化的cd8+t细胞和/或自然杀伤细胞)的显著肿瘤核心浸润。
[0317]
为了定量免疫组织化学结果，从五个单独的区域对ki67、cd8和颗粒酶b阳性细胞的细胞数目进行计数，并对每个处理组进行平均。阳性细胞的百分比计算为所有活细胞核的百分比。
[0318]
图2g描绘了确定％ki67阳性细胞的定量结果。与媒介物和tab-199(冷抗体)对照相比，包含200nci[
225
ac]-fpi-1792的所有处理组显示出显著降低的ki67染色(以及因此降低的细胞增殖)。包含200nci[
225
ac]-fpi-1792的处理组之间未检测到显著差异。
[0319]
图2h描绘了确定％cd8阳性细胞的定量结果。与媒介物和tab-199(冷抗体)对照相比，包含200nci[
225
ac]-fpi-1792的所有处理组显示出显著增加的cd8+细胞百分比。包含200nci[
225
ac]-fpi-1792的处理组之间未检测到显著差异。
[0320]
图2i描绘了确定％颗粒酶b阳性细胞的定量结果。与媒介物和tab-199(冷抗体)对照相比，包含200nci[
225
ac]-fpi-1792的所有处理组显示电弧显著增加的颗粒酶b+细胞百分比。包含200nci[
225
ac]-fpi-1792的处理组之间未检测到显著差异。
[0321]
这些结果表明，在相对于实施例2中描述的实验的施用时间较晚的时间点(并且当肿瘤较大时)施用[
225
ac]-fpi-1792也导致cd8+t细胞和其他表达颗粒酶b的免疫细胞到肿瘤核心中的浸润，降低的肿瘤细胞增殖，降低的相对肿瘤生长(与施用媒介物对照或冷抗体相比)，并逆转整体肿瘤生长。
[0322]
此外，细胞定量分析显示，在处理后12天，对照(媒介物和冷抗体)和处理(单独或联合一种或多种检查点抑制剂的[
225
ac]-fpi-1792)之间的浸润(通过肿瘤核心中cd8+和granzyme b+染色的存在来评估)和细胞增殖差异具有统计学意义。此外，在评估的时间点，没有使用单独[
225
ac]-fpi-1792的处理产生与使用[
225
ac]-fpi-1792联合一种或多种检查点抑制剂的处理所产生的相当的cd8+t细胞浸润和细胞增殖结果。
[0323]
实施例4.如在结直肠癌细胞模型中的肿瘤再攻击实验中所证明的[
225
ac]-fpi-1792施用的持续作用
[0324]
通过评估已用ct-26结肠癌细胞接种、用[
225
ac]-fpi-1792处理并随后用相同的肿瘤细胞系(ct-26)再攻击的小鼠中的肿瘤生长和继发性肿瘤核心中cd8+t细胞的存在来评估肿瘤浸润淋巴细胞的持久性。
[0325]
图3a概述了此再挑战实验的示意图。
[0326]
ct-26肿瘤接种和用[
225
ac]-fpi-1792的处理如实施例2所述进行。另外组的小鼠用：1)[
225
ac]-fpi-1792+抗pd1；2)[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla4；或3)[
225
ac]-fpi-1792+抗pd1+抗ctla4处理。施用治疗30天后，在对侧胁腹用ct-26细胞的同种异体移植物植入来再攻击动物。再攻击后不给予治疗。未经处理的小鼠用作对照。
[0327]
再攻击十一天后，从继发性肿瘤获得组织。如实施例2中所述制备ffpe组织。评估来自肿瘤核心的区域与cd8抗体的反应性。相对于对照，在最初用单独200nci[
225
ac]-fpi-1792处理并随后用ct-26细胞再攻击的动物的继发性肿瘤组织中检测到更高频率的cd8+t细胞(图3b)。这些结果表明，单次施用[
225
ac]-fpi-1792诱导能够浸润继发性肿瘤的核心的cd8+t细胞群。此外，这种cd8+t细胞群以相对于对照更高的水平持续存在。
[0328]
在所有处理组和对照中评估再攻击后的肿瘤生长。如图3c所示，相对于对照，所有
处理组均显示肿瘤生长显著降低。不同处理(用[
225
ac]-fpi-1792单独或联合一种或多种检查点抑制剂处理)组的15只动物中有13只显示没有继发性肿瘤生长。
[0329]
这些结果证明了由[
225
ac]-fpi-1792单独或联合检查点抑制剂的单次施用介导的“疫苗效应”。因此，单独施用[
225
ac]-fpi-1792经由持续存在并最终浸润到继发性肿瘤核心中的cd8+t细胞赋予持续且有益的作用。
[0330]
这些结果表明用[
225
ac]-fpi-1792处理可以促进改善或预防肿瘤复发或继发性转移。
[0331]
实施例5.[
225
ac]-fpi-1792介导的肿瘤抗原特异性cd8+t细胞从脾脏向肿瘤的募集
[0332]
在实施例4中描述的实验中，在呈现ct-26肿瘤再攻击的小鼠中评估t细胞从脾脏向继发性肿瘤的募集。
[0333]
如实施例4中所提及，在肿瘤再攻击后未对小鼠进行治疗。在再攻击后第14天，从以下处理组的小鼠中分离出继发性肿瘤和脾脏：
[0334]
·
未经处理(媒介物)
[0335]
·
[
225
ac]-fpi-1792+抗pd1
[0336]
·
[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla4
[0337]
·
[
225
ac]-fpi-1792+抗pd1+抗ctla4
[0338]
用胶原酶和dnase消化组织以形成单个细胞悬浮液。通过磁选从单个细胞悬浮液中纯化cd45+造血细胞，然后对细胞进行染色并分析cd8的表达。
[0339]
图4b显示了所分析的处理组的脾脏(左小图)和肿瘤(右小图)细胞中的t细胞频率(如通过cd45+纯化细胞中的cd8表达所评估)。相对于来自媒介物对照的对应样品，[
225
ac]-fpi-1792联合疗法组中的脾脏样品表现出降低的cd8+t细胞水平，而[
225
ac]-fpi-1792联合疗法组中的肿瘤样品表现出增加的cd8+t细胞水平。这些结果表明再攻击后cd8+t细胞广泛募集到继发性肿瘤中。
[0340]
为了评估对肿瘤细胞具有特异性的cd8+t细胞的比例，使用来自ct26的免疫显性cd8+t细胞表位ah1(spsyvyhgf(seq id no:1))进行基于mhc i四聚体的分析。图4c是显示这种四聚体技术的示意图。四聚体试剂由四个相同的生物素化mhc i类/β2m单元组装而成，装载有ah1肽抗原并与荧光标记的链霉亲和素保持在一起，以允许通过流式细胞术检测抗原特异性t细胞。因此，四聚体阳性t细胞是表达对ct26表位具有特异性的t细胞受体的t细胞。
[0341]
图4d显示了所分析的处理组中的脾脏(左小图)和肿瘤(右小图)细胞的四聚体分析结果。四聚体细胞的水平表示为cd8+t细胞的百分比。在脾脏中，与未经处理的对照(2-3％)相比，在经处理的小鼠(约11-17％)中检测到ct26表位特异性t细胞的水平增加。在肿瘤中，与未经处理的对照组(1-2％)相比，在经处理的小鼠(约30-70％)的肿瘤中检测到非常高频率的ct26表位特异性t细胞。
[0342]
这些结果表明肿瘤特异性cd8+t细胞在继发性肿瘤中的大量积累。此外，这些结果表明，[
225
ac]-fpi-1792的施用导致cd8+t细胞的产生和浸润，其中t细胞受体对肿瘤细胞表达的肿瘤相关抗原具有特异性。
[0343]
实施例6.免疫冷转移性乳腺癌细胞系中的肿瘤抑制
[0344]
使用同基因4t1三阴性乳腺癌模型在免疫冷肿瘤中评估[
225
ac]-fpi-1792。4t1细胞表达鼠igf-1r并发展为快速进展的肿瘤。4t1细胞具有高度转移性、较差免疫原性，并且对检查点抑制(例如，使用pd1或ctla4阻断)具有抗性。
[0345]
图5a描绘了这些实验的示意图。将4t1细胞植入balb/c免疫活性小鼠中。允许植入的4t1细胞原位增殖4天或直到它们产生体积为约50mm3的肿瘤。然后给动物施用媒介物(对照)、单独的200nci[
225
ac]-fpi-1792、200nci[
225
ac]-fpi-1792+5mg/kg 4f10-11(抗ctla4)或200nci[
225
ac]-fpi-1792+5mg/kg rmp1-14(抗pd1)。
[0346]
治疗开始后评估4t1肿瘤体积。图5b和5c显示了200nci[
225
ac]-fpi-1792相对于其与抗ctla4的组合(图5b)或相对于其与抗pd1的组合(图5c)的相对肿瘤体积。尽管单独的抗ctla4处理对肿瘤生长没有可观察到的作用，但在[
225
ac]-fpi-1792+抗ctla4处理组中观察到显著的肿瘤抑制(图5b)。
[0347]
这些结果表明[
225
ac]-fpi-1792可以使免疫冷肿瘤对免疫检查点抑制易感。实施例7.评估放射免疫缀合物施用的功效和安全性的i期临床试验
[0348]
实施了i期临床试验以评估放射免疫缀合物施用于人患者的安全性和耐受性。[
225
ac]-fpi-1434是放射免疫缀合物，其包含与经由fastclear
tm
接头连接到dota部分的igf-1r(ave1642)结合的人源化单克隆抗体；因此，[
225
ac]-fpi-1434在接头和螯合部分中与[
225
ac]-fpi-1792相似，但所使用的igf-1r抗体不同。
[0349]
[
111
in]-fpi-1547是[
225
ac]-fpi-1434的铟-111类似物，其包含与[
225
ac]-fpi-1434相同的接头和抗体。[
111
in]-fpi-1547用于在用[
225
ac]-fpi-1434治疗之前的患者选择和定量igf-1r表达靶标。
[0350]
将185mbq的[
111
in]-fpi-1547静脉内施用于患者，然后估计吸收的辐射剂量。在6-8天内获得患者的连续前/后闪烁显像图像。从全身扫描中提取计数数据，并按照mird架构使用基于ct的体积来估计正常器官和组织的辐射吸收剂量。然后使用olinda/exm软件(2.0版)对每位患者的[
225
ac]-fpi-1434的计划治疗性施用进行辐射剂量估计，并验证其是否在肾脏(18gy)、肝脏(31gy)和肺(16.5gy)的协议规定辐射剂量限度内。[
225
ac]-fpi-1434的计划治疗性施用遵循10、20、40、80和120kbq/kg体重的5个初始队列直至最大耐受剂量的改良的3+3剂量递增设计。
[0351]
8名患者每人施用185mbq的[
111
in]-fpi-1547，并经历随后的剂量测定(dosimetric)评估。所有8名患者均表现出肿瘤抗体亲抗原性(avidity)，并且基于剂量测定法，所有患者均有资格接受高达120kbq/kg的剂量。以下器官的每单位施用活性的估计平均辐射剂量(
±
sd)为：肾脏，966
±
179mgy-eq/mbq；肝脏，803
±
260mgy-eq/mbq；和肺，672
±
185mgy-eq/mbq。所有患者的平均全身辐射剂量(
±
sd)为146
±
19mgy-eq/mbq(范围为117-170mgy-eq/mbq)。七名(88％)患者接受了范围为0.80至2.3mbq[
225
ac]-fpi-1434的一次治疗性施用。[
225
ac]-fpi-1434通常耐受良好，未报告意外的临床显著不良事件。
[0352]
这些结果表明，将患者特异性剂量的锕-225放射免疫缀合物施用于人患者也耐受良好并且不导致意外的临床显著不良事件。此外，人患者对铟-111放射免疫缀合物的施用耐受良好，并导致患者全身以及诸如肾、肝和肺的关键器官中的辐射水平可接受。
[0353]
因此，铟-111和锕-225放射免疫缀合物均被安全地施用于患者而没有发生意外的临床显著不良事件。这些结果进一步表明，已成功使用铟-111放射免疫缀合物的施用以针
对锕-225放射免疫缀合物的施用估计对患者的潜在风险，并产生患者特异性的治疗计划。
[0354]
等同物/其他实施方案
[0355]
本领域技术人员将认识到或能够仅使用常规实验来确定本文描述的特定实施方案的许多等同物。这些等同物旨在由以下权利要求所涵盖。